一種預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物，該藥物組合物包含黃芪、太子參、女貞子、枸杞子、水蛭、大黃，該藥物組合物尤其是在治療糖尿病腎病及糖尿病視網(wǎng)膜病變方面療效確切、明顯。
【專利說明】一種預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物
[0001] 本申請是申請日為2011年05月17日，申請?zhí)枮?01110127492. 7,發(fā)明名稱為"一 種預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物"的分案申請。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物。

【背景技術(shù)】
[0003] 糖尿病是嚴(yán)重危害人類健康的常見多發(fā)病，是僅次于癌癥及心血管疾病的第三大 疾病。糖尿病所引起的糖代謝紊亂，導(dǎo)致微血管病變，繼而引起一系列糖尿病并發(fā)癥，包括 視網(wǎng)膜病變，糖尿病腎病和糖尿病病足等。糖尿病微血管病變的機(jī)制尚不完全明確，目前 認(rèn)為非酶性糖基化終末產(chǎn)物形成、蛋白激酶C(PKC)信號通路的激活、氧化應(yīng)激反應(yīng)，其中 PKC可促使血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)表達(dá)，從而促進(jìn)新生血管形成，增加血管通透性；其 中PKC - β主要在視網(wǎng)膜、腎臟、心臟、腦和胰島等組織中表達(dá)，被認(rèn)為是與糖尿病微血管 病變密切相關(guān)的一種主要的亞型[Turtle KR, Bakris GL, Toto RD, et al. The effect of ruboxistaurin on nephropathy in type2diabetes. Diabetes Care, 2005,28(11) :2686- 2690]〇
[0004] 其中糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy, DN)、糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy,DR)是糖尿病常見且嚴(yán)重的并發(fā)癥。糖尿病腎病發(fā)病率為16.8-23.48% [韓 曉亮，池芝盛等，對非胰島素依賴型糖尿病腎病的研究，中華腎臟病雜志，1989 ; (5) : 134和 劉文欽等，糖尿病腎病58例臨床分析，中華腎臟病雜志，1986 ; (2) :304]。糖尿病病人一旦 發(fā)生腎病變，出現(xiàn)持續(xù)性尿蛋白，則病情逐漸發(fā)展，呈進(jìn)行性發(fā)展直至腎功能衰竭，糖尿病 腎病的死亡率為非糖尿病腎病的17倍。糖尿病視網(wǎng)膜病是由于糖尿病患者糖代謝紊亂引 起的視網(wǎng)膜循環(huán)異常而導(dǎo)致的一系列的眼底病變。在病變早期毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的基底膜 增厚、周細(xì)胞喪失、毛細(xì)血管自動調(diào)節(jié)功能失代償，隨后內(nèi)皮細(xì)胞功能損害，血液成分滲出， 毛細(xì)血管閉塞。由于廣泛的視網(wǎng)膜缺血，引起視網(wǎng)膜水腫和新生血管形成，并發(fā)玻璃體出 血、牽托性視網(wǎng)膜脫離等諸多并發(fā)癥，導(dǎo)致視力下降甚至失明[國際眼科雜志，2011年1月， 第11卷，第1期，103-105]。糖尿病視網(wǎng)膜病變一般在糖尿病患者發(fā)病5年后的發(fā)生率為 25%，10年后增至60%，15年后可高達(dá)75%?80%。因此，DR的防治在糖尿病治療中一直 備受關(guān)注[黑龍江醫(yī)學(xué)，2010年，第34卷，第9期，671-673]。
[0005] CN1347714A公開了一種治療糖尿病腎病的藥物組合物，由黃芪、女貞子、水蛭、大 黃、太子參、枸杞子組成。 申請人:在原有處方的基礎(chǔ)上又進(jìn)行大量研究后獲知，通過對其中 的原料藥進(jìn)行重新組方，獲得了能夠治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物，本發(fā)明藥物組合物 尤其在治療糖尿病腎病和糖尿病視網(wǎng)膜病變方面療效確切明顯。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明目的之一在于提供一種預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物，其中活性 成分由以下重量百分比的原料藥組成：黃芪32?40%、太子參10?15 %、女貞子16? 20%、枸杞子12?18%、水蛭11?13 %、大黃5?8% ;優(yōu)選為黃芪36. 14 %、太子參 12. 05%、女貞子 18. 07%、枸杞子 14. 46%、水蛭 12. 05%、大黃 7. 23%。
[0007] 上述所述的糖尿病并發(fā)癥優(yōu)選為糖尿病腎病或糖尿病視網(wǎng)膜病變；所述糖尿病視 網(wǎng)膜病變更優(yōu)選為早期糖尿病視網(wǎng)膜病變。
[0008] 上述藥物組合物可以制成散劑、片劑、膠囊劑、丸劑、口服液、顆粒劑。
[0009] 本發(fā)明還提供了上述藥物組合物的制備方法，具體步驟如下：
[0010] 1.黃芪除去雜質(zhì)，大小分開，洗凈，潤透，切成2-4mm厚片，60-80°C烘干備用；
[0011] 2.太子參除去雜質(zhì)，搶水洗凈，切成2-4mm厚片，60-80°C烘干備用；
[0012] 3.女貞子除去雜質(zhì)及梗葉，洗凈，60-80°C干燥，用時(shí)搗碎；
[0013] 4.枸杞子除去雜質(zhì)，揀去果梗，整潔后備用；
[0014] 5.水蛭，洗凈，切段，60_70°C烘干備用；
[0015] 6.大黃，除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，切直片，厚度為2-4mm，60-8(TC烘干，篩去碎屑備 用；
[0016] 將上述方法炮制后的大黃粉碎，過100目篩，取細(xì)粉進(jìn)行輻射滅菌，2KGY/小時(shí)，輻 照時(shí)間3小時(shí)后備用；取經(jīng)上述方法炮制過的女貞子加6倍量得75%乙醇，回流提取2-4 次，每次1小時(shí)，將醇提回收乙醇；女貞子的藥渣與經(jīng)上述方法炮制過的黃芪、太子參、枸杞 子、水蛭加水6倍量的水，煎煮2-4次，每次2小時(shí)，濾過，合并水提液，去棄藥渣，煎出液與 女貞子回收乙醇后的濃縮液合并，在-〇. 015-0. 030MPa下，減壓濃縮，溫度為80°C，濃縮至 浸膏相對密度為1. 05-1. 15時(shí)，在70°C下噴霧干燥為干膏粉，再與前述備用的大黃混勻即 得。
[0017] 本發(fā)明藥物組合物與現(xiàn)有技術(shù)相比，其優(yōu)點(diǎn)在于：
[0018] 本發(fā)明藥物組合物能夠有效治療或緩解糖尿病引起的并發(fā)癥，特別是對糖尿病腎 病和糖尿病視網(wǎng)膜病變有明顯的療效，療效確切，起效時(shí)間短。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖1、本發(fā)明藥物含藥血清萃取物對高糖誘導(dǎo)的大鼠系膜細(xì)胞PKC-β I蛋白激酶 的影響（與高糖組比：*Ρ〈〇· 05, #Ρ〈0· 01)
[0020] 圖2、本發(fā)明藥物含藥血清萃取物對高糖誘導(dǎo)的大鼠系膜細(xì)胞PKC-β II蛋白激酶 的影響（與高糖組比較，*Ρ〈〇· 05, #Ρ〈0· 01)
[0021] 圖3、本發(fā)明藥物含藥血清萃取物對高糖誘導(dǎo)的HBZY-I細(xì)胞分泌VEGF的影響（與 高糖組比較，*Ρ〈〇. 05, #Ρ〈0. 01)
[0022] 圖4、本發(fā)明藥物含藥血清萃取物對高糖誘導(dǎo)的HBZY-I細(xì)胞分泌TGF-β 1的影響 (與高糖組比較，*Ρ〈〇· 05, #Ρ〈0· 01)
[0023] 對比實(shí)施例
[0024] 對比實(shí)施例1
[0025] 按CN1347714A實(shí)施例1方法制備
[0026] 對比實(shí)施例2
[0027] 按CN1347714A實(shí)施例2方法制備
[0028] 對比實(shí)施例3
[0029] 按CN1347714A實(shí)施例3方法制備

【具體實(shí)施方式】
[0030] 實(shí)施例1
[0031] 黃芪540g、太子參180g、女貞子270g、
[0032] 枸杞子216g、水蛭180g、大黃108g
[0033] 上述藥物首先進(jìn)行中藥材的炮制：
[0034] 1)黃芪除去雜質(zhì)，大小分開，洗凈，潤透，切成2-4mm厚片，60-80°C烘干備用；
[0035] 2)太子參除去雜質(zhì)，搶水洗凈，切成2-4mm厚片，60-80°C烘干備用；
[0036] 3)女貞子除去雜質(zhì)及梗葉，洗凈，60_80°C干燥，用時(shí)搗碎；
[0037] 4)枸杞子除去雜質(zhì)，揀去果梗，整潔后備用；
[0038] 5)水蛭，洗凈，切段，60_70°C烘干備用；
[0039] 6)大黃，除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，切直片，厚度為2-4mm，60-8(TC烘干，篩去碎屑備 用；
[0040] 將上述方法炮制后的大黃粉碎，過100目篩，取細(xì)粉進(jìn)行輻射滅菌，2KGY/小時(shí)，輻 照時(shí)間3小時(shí)后備用；取經(jīng)上述方法炮制過的女貞子加6倍量得75%乙醇，回流提取2-4 次，每次1小時(shí)，將醇提回收乙醇；女貞子的藥渣與經(jīng)上述方法炮制過的黃芪、太子參、枸杞 子、水蛭加水6倍量的水，煎煮2-4次，每次2小時(shí)，濾過，合并水提液，去棄藥渣，煎出液與 女貞子回收乙醇后的濃縮液合并，在-〇. 015-0. 030MPa下，減壓濃縮，溫度為80°C，濃縮至 浸膏相對密度為1. 05-1. 15時(shí)，在70°C下噴霧干燥為干膏粉，再與前述備用的大黃混勻得 藥物組合物。
[0041] 實(shí)施例2
[0042] 取如下重量百分含量的原料藥：
[0043] 黃芪32%、太子參15%、女貞子20%、
[0044] 枸杞子12%、水蛭13%、大黃8%
[0045] 其炮制和制備方法基本與實(shí)施例1相同。
[0046] 實(shí)施例3
[0047] 取如下重量百分含量的原料藥：
[0048] 黃芪40%、太子參10%、女貞子16%、
[0049] 枸杞子18%、水蛭11%、大黃5%
[0050] 其炮制和制備方法基本與實(shí)施例1相同。
[0051] 實(shí)施例4:散劑的制備
[0052] 取實(shí)施例1制得藥物組合物，過100目篩，袋裝封口，2g/袋，為散劑成品。
[0053] 實(shí)施例5 :膠囊的制備
[0054] 取實(shí)施例1制得藥物組合物，制成顆粒，干燥，加預(yù)膠化淀粉、滑石粉適量，混均， 裝入膠囊，制成1000粒。
[0055] 實(shí)施例6 :丸劑的制備
[0056] 取實(shí)施例2制得藥物組合物，在60°C下干燥1小時(shí)，粉碎，過60目篩，用純水泛丸， 水丸每20粒重Ig，包衣，打光，60°C干燥，為丸劑成品。
[0057] 實(shí)施例7 :片劑的制備
[0058] 取實(shí)施例3制得藥物組合物，加輔料淀粉10%，混勻，制成顆粒，在60°C下干燥1 小時(shí)，壓片，片重：〇. 5g/片，包薄膜衣，為片劑成品。
[0059] 實(shí)施例8本發(fā)明藥物對高糖誘導(dǎo)的HBZY-I細(xì)胞PKC- β激酶磷酸化的影響 [0060] 1.實(shí)驗(yàn)方法：
[0061] 將處于對數(shù)生長期HBZY-I細(xì)胞接種于Τ75培養(yǎng)瓶中，接種密度約80%，培養(yǎng) 16 - 20h后，血清饑餓24h，分別將本發(fā)明藥物（按實(shí)施例方法1制備）灌胃給予大鼠 后，分離含藥血清并采用SPE法及水溶法制備含藥血清萃取物（終濃度分別為1 %、2 % 和4 % )、陽性對照組（2 μ mol/L GF109203X (蛋白激酶C抑制劑）），37 °C孵育2h ;洗滌 后，再補(bǔ)加高濃度葡萄糖，終濃度為30mmol/L，培養(yǎng)4h后收集細(xì)胞，加入RIAP裂解液 (50mmol/L Tris-HCl (pH7. 4) U50mmol/L NaClU % NP-40Ummol/L EDTA.O. 25 % sodium deoxycholate、lmmol/L Na3V04>lmmol/L NaF>lmmol/L PMSF和 2ug/mL Leupeptin)冰浴 30min，液氮凍融四次，離心，獲得細(xì)胞裂解物，采用western blot的方法測定HBZY-I細(xì)胞 PKC-β I、PKC-β II蛋白激酶的表達(dá)。方法如下：BCA法測定細(xì)胞總蛋白量，調(diào)整各樣品至 相同濃度，SDS-PAGE分離并轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂奶粉37°C封閉2h后，分別加一抗 (1:200)，37°C孵育2h ;再加入相應(yīng)二抗IgG-HRP (1:3000) 37°C孵育lh。ECL發(fā)光試劑盒，應(yīng) 用凝膠成像系統(tǒng)化學(xué)發(fā)光檢測并用Image Iab系統(tǒng)進(jìn)行灰度分析，以β-actin為內(nèi)參。
[0062] 2、結(jié)果：
[0063] 具體結(jié)果見圖1和2,結(jié)果表明，高濃度葡萄糖刺激可引起大鼠系膜細(xì)胞PKC-β I 和PKC-β II激酶磷酸化增加；而經(jīng)本發(fā)明藥物含藥血清萃取物預(yù)處理后，PKC-β I和 PKC-β II蛋白激酶水平明顯降低，且存在明顯的濃度相關(guān)性。
[0064] 實(shí)施例9本發(fā)明藥物含藥血清萃取物對高糖誘導(dǎo)大鼠系膜細(xì)胞分泌VEGF、 TGF-β 1的影響
[0065] 1、實(shí)驗(yàn)方法
[0066] 采用生長良好的HBZY-I細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分為以下8組：正常對照組（5. 6mmol/L D-葡萄糖）、高糖組（30mmol/L D-葡萄糖）、陽性對照組（2μπι〇1/1 GF109203X(蛋白激酶 C抑制劑））、本發(fā)明藥物（按實(shí)施例方法1制備）含藥血清低濃度組（終濃度1% )、含藥血 清中濃度組（終濃度2% )、含藥血清高濃度組（4% )，每組雙復(fù)孔。分別于給藥處理24h、 48h收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，利用ELISA試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF、TGF-β 1含量，檢測 方法參見試劑盒說明書。
[0067] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
[0068] 1、ELISA檢測結(jié)果（圖3)顯示：與正常對照相比，高濃度葡萄糖（30mmol/L)刺 激不同時(shí)間后，培養(yǎng)上清中VEGF含量明顯增高；而不同濃度的本發(fā)明藥物含藥血清預(yù)處理 后，高糖刺激的HBZY-I細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF含量有不同程度降低。而陽性對照GF109203X 亦可明顯抑制高糖刺激HBZY-I細(xì)胞分泌VEGF增加。結(jié)果表明本發(fā)明藥物能有效抑制高糖 誘導(dǎo)的大鼠系膜細(xì)胞分泌VEGF增加。
[0069] 2、ELISA檢測結(jié)果（圖4)顯示：與正常對照相比，高濃度葡萄糖（30mmol/L)刺激 不同時(shí)間后，培養(yǎng)上清中TGF-β 1含量明顯增高；經(jīng)不同濃度的本發(fā)明藥物含藥血清萃取 物預(yù)處理后，高糖刺激的HBZY-I細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGF-β 1含量有不同程度降低。而陽性對 照GF109203X亦可明顯抑制高糖刺激HBZY-I細(xì)胞分泌TGF-β 1。結(jié)果表明本發(fā)明藥物能明 顯抑制高糖誘導(dǎo)的大鼠系膜細(xì)胞分泌TGF-β 1增加。
[0070] 實(shí)施例10本發(fā)明藥物組合物對糖尿病腎病模型的大鼠藥效學(xué)評價(jià)
[0071] 1.實(shí)驗(yàn)方法
[0072] 選取健康雄性SD大鼠（四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供，合格證號： SCXK (川）2008-24)，SPF級，體重180?220g，各組大鼠按55mg/kg的劑量單次尾靜脈注 射STZ (PH4. 2的2%檸檬酸鈉溶液），正常對照組大鼠則給等量2%檸檬酸鈉溶液尾靜脈注 射。48h后尾靜脈采血測血糖值，空腹血糖連續(xù)3天彡16. 7mmol/L，尿量彡原尿量150%者 確定為糖尿病模型大鼠。4周后治療組分別灌胃給予開博通（21mg/kg · d)和藥物A(按對 比實(shí)施例1制備）（2. Og/kg · d)、藥物B (按對比實(shí)施例2制備）（2. Og/kg · d)、藥物C (按 對比實(shí)施例3制備）（2. Og/kg · d)、藥物D (按實(shí)施例2制備）（2. Og/kg · d)、藥物E (按實(shí) 施例1制備）（2. Og/kg · d)、藥物F(按實(shí)施例3制備）（2. Og/kg · d)，空白對照組、模型對 照組則每天灌胃等體積蒸餾水，各組給藥連續(xù)8周。于給藥治療后第2、4、8周代謝籠收集 記錄24h尿量，微柱層析測定糖化血紅蛋白，空腹血糖含量，以考馬斯亮藍(lán)法檢測24h尿蛋 白含量；于第8周末次給藥1小時(shí)后，股動脈穿刺取血，分離血清，測定血清甘油三酯（TG)、 總膽固醇（TC)含量，血清肌酐（Scr)、尿素氮（BUN)、肌酐清除率（Ccr)，同時(shí)稱取各組大鼠 腎臟和體重，計(jì)算腎臟重（KWT)和腎臟/體重（KWT/BWT)。
[0073] 2·結(jié)果
[0074] 2. 1對糖尿病腎病模型大鼠血糖、糖化血紅蛋白的影響
[0075] 表1對模型大鼠空腹血糖、糖化血紅蛋白的影響（X ± *SD ,n=10)
[0076]

【權(quán)利要求】
1. 一種預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物，其特征在于活性成分由以下重量百分 比的原料藥組成：黃芪32?40%、太子參10?15%、女貞子16?20%、枸杞子12?18%、 水蛭11?13%、大黃5?8%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述活性成分由以下重量百分 比的原料藥組成：黃芪36. 14%、太子參12. 05%、女貞子18. 07%、枸杞子14. 46%、水蛭 12. 05%、大黃 7. 23%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于所述的糖尿病并發(fā)癥為糖尿病 腎病。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于所述的糖尿病并發(fā)癥為糖尿病 視網(wǎng)膜病變。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物可以制成散劑、 片劑、膠囊劑、丸劑、口服液、顆粒劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于是所述的糖尿病視網(wǎng)膜病變?yōu)樵缙?糖尿病視網(wǎng)膜病變。
7. 權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物制備方法，其特征在于： 1) 黃芪除去雜質(zhì)，大小分開，洗凈，潤透，切成2-4_厚片，60-80°C烘干備用； 2) 太子參除去雜質(zhì)，搶水洗凈，切成2-4_厚片，60-80°C烘干備用； 3) 女貞子除去雜質(zhì)及梗葉，洗凈，60-80°C干燥，用時(shí)搗碎； 4) 枸杞子除去雜質(zhì)，揀去果梗，整潔后備用； 5) 水蛭，洗凈，切段，60-70°C烘干備用； 6) 大黃，除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，切直片，厚度為2-4mm，60-8(TC烘干，篩去碎屑備用； 將上述方法炮制后的大黃粉碎，過100目篩，取細(xì)粉進(jìn)行輻射滅菌，2KGY/小時(shí)，輻照時(shí) 間3小時(shí)后備用；取經(jīng)上述方法炮制過的女貞子加6倍量得75%乙醇，回流提取2-4次，每 次1小時(shí)，將醇提回收乙醇；女貞子的藥渣與經(jīng)上述方法炮制過的黃芪、太子參、枸杞子、水 蛭加水6倍量的水，煎煮2-4次，每次2小時(shí)，濾過，合并水提液，去棄藥渣，煎出液與女貞子 回收乙醇后的濃縮液合并，在-0. 015-0. 030MPa下，減壓濃縮，溫度為80°C，濃縮至浸膏相 對密度為1. 05-1. 15時(shí)，在70°C下噴霧干燥為干膏粉，再與前述備用的大黃混勻即得。
【文檔編號】A61P9/10GK104352645SQ201410538033
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2011年5月17日 優(yōu)先權(quán)日:2011年5月17日
【發(fā)明者】柯尊洪, 孟保華 申請人:成都康弘制藥有限公司