一種胰島素淀粉樣多肽抑制劑及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及抑制劑1化合物，能治療糖尿病。所述的抑制劑1序列為KATPIESHQVJAAEKRKC。所述抑制劑1的制備方法，采用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù)制備，Rink酰氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體，6-氯-1-羥基苯并三氮唑和N,N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，三氟乙酸為切割試劑。所述抑制劑1在預(yù)防或治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥中的應(yīng)用。所述的糖尿病并發(fā)癥是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變。抑制劑1可通過多種給藥方式預(yù)防或治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。本發(fā)明中的胰島淀粉樣多肽抑制劑1，可以靶向抑制胰島淀粉樣多肽形成，達(dá)到預(yù)防或治療糖尿病的效果。
【專利說明】一種胰島素淀粉樣多肽抑制劑及其制備方法、應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于治療糖尿病的多肽化合物。

【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，是由于胰島素不足或胰島素的細(xì)胞 代謝作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)代謝紊亂的一種綜合癥。近年來，糖尿病患者 的人數(shù)逐漸增多，分為I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人數(shù)占糖尿病 總?cè)藬?shù)的85-90%，嚴(yán)重威脅著病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引 起很多并發(fā)癥，例如：糖尿病腎病、視網(wǎng)膜病變、高血壓等。
[0003] 近期的研究表明在2型糖尿病的病發(fā)過程中，不斷增長的β-細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致β-細(xì)胞衰退和高血糖癥發(fā)生的主要原因。目前，大多數(shù)患者通過口服降糖藥物來幫助控制 體內(nèi)血糖，但是卻無法提高β-細(xì)胞的活性，促進(jìn)胰島素的分泌，很多患者最終仍然要使用 胰島素治療。
[0004] 胰島淀粉樣變性與糖尿病之間存在聯(lián)系。胰島淀粉樣多肽的纖維絲形成會通過細(xì) 胞凋亡導(dǎo)致β-細(xì)胞死亡，淀粉樣沉積可能直接會殺死細(xì)胞。抑制胰島淀粉樣多肽形成，可 以減少胰島淀粉樣多肽對β-細(xì)胞的細(xì)胞毒性，促進(jìn)胰島素的分泌。因此，胰島淀粉樣多肽 抑制認(rèn)為是治療糖尿病的靶點(diǎn)。盡管如此，并沒有成熟開發(fā)的胰島淀粉樣多肽抑制劑問世， 用于預(yù)防或治療糖尿病。


【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0005] 本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有降血糖的藥物的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種抑制劑，能有效治療糖尿 病。
[0006] 技術(shù)方案
[0007] -種胰島淀粉樣多肽抑制劑1，其序列為KATPIESHQVAAEKRKC。所述抑制劑1的制 備方法，其特征在于：采用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù)制備，采用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù) 制備，Rink酰氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體，6-氯-1-羥基苯并三氮唑和 N，N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，三氟乙酸為切割試劑。所述抑制劑1在預(yù)防或治療糖尿 病及糖尿病并發(fā)癥中的應(yīng)用。所述的糖尿病并發(fā)癥是糖尿病腎病、糖尿病高血壓、糖尿病眼 疾、糖尿病神經(jīng)性病變。抑制劑1可通過多種給藥方式預(yù)防或治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥， 包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。
[0008] 有益結(jié)果：
[0009] 本發(fā)明中的胰島淀粉樣多肽抑制劑1，可以靶向抑制胰島淀粉樣多肽形成，達(dá)到預(yù) 防或治療糖尿病的效果。更優(yōu)選是治療糖尿病和/或糖尿病并發(fā)癥藥物中的用途。所述的 糖尿病包括I型糖尿病和Π型糖尿?。凰龅奶悄虿〔l(fā)癥包括但不限于：糖尿病腎病、 糖尿病高血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變等。

【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1
[0011] 多肽的化學(xué)合成方法
[0012] 抑制劑1用Fmoc保護(hù)的固相合成技術(shù)制備。合成反應(yīng)按照抑制劑1序列從C端 向N端進(jìn)行，Rink醜氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體（可在AdvancedChem Tech公司購得）上有自由氨基。每一步連接過程中，氨基酸殘基都要活化，活化混合物中有 4倍于載體上自由氨基的HBTU，H0Bt，DIEA和Fmoc-氨基酸。用6-氯-1-羥基苯并三氮唑 和N，N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，進(jìn)行連接反應(yīng)，每次氨基酸的連接反應(yīng)之后，用吡啶/ 醋酸/N-甲基咪唑（4:1:0.5)的混合物來封閉未連接的自由氨基，封閉反應(yīng)10分鐘。下一 個(gè)氨基酸連接之前，都要把載體上的Fmoc-基團(tuán)去掉，去Fmoc-基團(tuán)使用含20%哌啶的二甲 基甲酰胺，需15分鐘。最后，當(dāng)所有氨基酸殘基順序連接之后，抑制劑1用98%三氟乙酸從 載體上切割下來，切割在室溫下進(jìn)行2小時(shí)。
[0013] 應(yīng)用上述化學(xué)條件可合成并獲得抑制劑1，序列為KATPIESHQVJAAEKRKC，該序列 為全新序列。也可委托上海生工合成。
[0014] 實(shí)施例2
[0015] 胰島淀粉樣多肽抑制劑1的體外細(xì)胞凋亡的測定
[0016] 本實(shí)驗(yàn)研究了胰島素淀粉樣多肽抑制劑1抑制胰島瘤細(xì)胞（INS-1細(xì)胞）凋亡的 作用。當(dāng)細(xì)胞用10μmol/L胰島素樣淀粉多肽處理后，經(jīng)TUNEL染色后發(fā)現(xiàn)與培養(yǎng)基對照組 相比出現(xiàn)了很多綠色亮點(diǎn)，說明體系中存在凋亡的細(xì)胞。當(dāng)20ymol/L胰島素淀粉樣多肽 抑制劑1與胰島素淀粉樣多肽共孵育后，鏡檢看到比單純加胰島素樣淀粉多肽的對照組較 少的綠色亮點(diǎn)。對拍攝照片進(jìn)行計(jì)數(shù)并統(tǒng)計(jì)后，發(fā)現(xiàn)用lOumol/L胰島素樣淀粉多肽處理 的細(xì)胞凋亡率約為76. 3 %，而20μmol/L抑制劑1與胰島素樣淀粉多肽共同處理的細(xì)胞凋 亡率減少到35. 5 % (p〈0. 05)。并且只用20μmol/L抑制劑1處理的細(xì)胞的凋亡情況與培 養(yǎng)基對照組并無明顯差別，說明抑制劑1顯著減少了胰島素樣淀粉多肽誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡， 但此濃度的抑制劑1自身對細(xì)胞沒有毒性作用。
[0017] 實(shí)施例3
[0018] 胰島淀粉樣多肽抑制劑1的體內(nèi)降糖實(shí)驗(yàn)
[0019] 昆明小鼠，高脂高糖喂養(yǎng)至體重18?22g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水24h，腹腔 一次性注射鏈脲佐菌素（STZ) 50mg/kg(1 %的檸檬酸鹽緩沖液溶解配制）。1周后小鼠尾靜 脈采血測血糖（BS)，BS高于16mmol/L為造模成功。造模后將小鼠分為3組，每組10只， 糖尿病模型組（DM組）：給予等量的PBS緩沖液皮下注射；對照組（胰島素）：20μg/kg皮 下注射給藥（溶于0.lmol/LPBS緩沖液），一天兩次，連續(xù)12d;樣品組（胰島淀粉樣多肽 抑制劑1):同對照組；另取10只正常小鼠做為空白組。用藥后第12d于尾靜脈取血快速測 量血糖。12d之后，在停藥1周后，禁食不禁水16小時(shí)進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(yàn)。用25%葡萄 糖溶液（2g/kg)灌胃，灌胃后0、120分鐘尾靜脈取血檢測血糖。
[0020] 結(jié)果：胰島淀粉樣多肽抑制劑1具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用（P〈〇. 05,表 1);同時(shí)，可以緩解糖尿病模型小鼠的糖耐量（表2)。其抑制劑1的作用與對照組胰島素 作用相當(dāng)。
[0021] 表1胰島淀粉樣多肽抑制劑1對小鼠降血糖作用
[0022]
[0023]

【權(quán)利要求】
1. 一種胰島淀粉樣多肽抑制劑，其特征在于：其氨基酸序列為KATPIESHQVAAEKRKC。
2. -種權(quán)利要求1所述抑制劑的制備方法，其特征在于：采用Fmoc保護(hù)的固相合成 技術(shù)制備，Rink酰氨MBHA樹脂和Fmoc-Gly-Wang樹脂作為載體，6-氯-1-羥基苯并三氮 唑和N，N-二異丙基碳二亞胺為縮合劑，三氟乙酸為切割試劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述抑制劑在制備預(yù)防或治療糖尿病及糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng) 用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其特征在于所述的糖尿病并發(fā)癥是糖尿病腎病、糖尿病高 血壓、糖尿病眼疾、糖尿病神經(jīng)性病變。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的抑制劑的用途，其特征在于：通過多種給藥方式預(yù)防或治療 糖尿病及糖尿病并發(fā)癥，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥丸、 膠囊，鼻噴劑。
【文檔編號】A61P3/10GK104327162SQ201410508632
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司