續(xù)斷總皂苷在制備安胎藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了續(xù)斷總皂苷在制備安胎藥物中的應用。續(xù)斷總皂苷能促進動物膜型的子宮、卵巢的雌激素和孕激素受體的表達，明顯減少動物模型的陰道出血，顯著提高了活胎數(shù)，減少流產(chǎn)數(shù)，降低了流產(chǎn)率，從多層次、多因素保護動物妊娠，其安胎作用非常顯著。
【專利說明】續(xù)斷總皂苷在制備安胎藥物中的應用

【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及續(xù)斷有效部位的用途，尤其是續(xù)斷總皂苷在制備安胎藥物中的應用。

【背景技術(shù)】
[0002] 續(xù)斷，來源于川續(xù)斷科植物川續(xù)斷Dipsacus asper Wall. Ex Henry的干燥根，首 載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有補肝腎、強筋骨、續(xù)折傷、止崩漏、安胎等功效，廣泛應用于臨床各 科，治療腰膝酸軟、風濕痹痛、跌仆損傷、崩漏、胎漏、胎動不安等癥。續(xù)斷的化學成分主要含 有三萜皂苷類、環(huán)烯醚萜類、生物堿類、揮發(fā)油類等成分?，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，其具有抑菌 消炎、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化防衰老、促骨形成等作用。
[0003] 自然流產(chǎn)是常見的妊娠病，近年發(fā)病率呈增長趨勢，其病因復雜，確切發(fā)病機制尚 不明確，古今中外的論述繁多。從中醫(yī)角度來看，自然流產(chǎn)的病因，大致歸納為腎虛、脾虛、 氣血不足、血熱、血瘀、外傷等，病機主要為沖任氣血不調(diào)，胎元不固。致病因素雖多，但多 數(shù)醫(yī)家認為腎脾二臟乃病機之關(guān)鍵。因腎為先天之本，主生殖，主藏精而系胞胎。胎孕既 成，則有賴于先天生殖之精的滋養(yǎng)和腎氣的鞏固，后天水谷之精的充養(yǎng)。若腎氣不足，胎失 所系，或脾虛血少，胎失所養(yǎng)，均可致胎元不固而殞墮。故腎不系胎，脾失攝養(yǎng)為本病之關(guān) 鍵。中藥安胎作用機理可能與以下五個作用機制有關(guān)：對子宮興奮性的影響、對妊娠期內(nèi)分 泌的調(diào)節(jié)的作用、對妊娠期的免疫調(diào)節(jié)作用、改善血液流變學作用、對滋養(yǎng)細胞的影響等。
[0004] 從現(xiàn)代病因?qū)W看，導致自然流產(chǎn)的病因，主要有遺傳因素、內(nèi)分泌功能異常、免疫 因素、感染因素、生活環(huán)境因素和解剖因素等。
[0005] 遺傳因素 染色體異常：包括數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常，可自然發(fā)生也可由外界因素（物理、化學、生 物）和遺傳因素誘發(fā)。染色體異常以數(shù)量異常多見，常見染色體三體，其次是45, X0。多 倍體異常少見，其中以三倍體多見。在染色體結(jié)構(gòu)異常的流產(chǎn)中以平衡移位攜帶者多見，其 次是臂間倒位及性染色體異常。
[0006] 基因異常：目前原因不明的反復自然流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion, RSA)遺傳免疫學研究多集中于HLA位點，即HLA易感基因和（或）HLA易感單體，其次是 與凝血功能有關(guān)的異常基因，地中海貧血純合子也可發(fā)生流產(chǎn)。HLA位于人類6號染色體 短臂（6p21，3)，全長4000kh，分為IJIJII 3個區(qū)域，其主要功能是參與免疫應答調(diào)控。 目前研究表明，Π 區(qū)域中的DQ亞區(qū)與免疫性疾病有關(guān)。遺傳性血栓形成傾向不僅與妊娠血 栓栓塞有關(guān)，而且也是流產(chǎn)的重要原因。凝血因子V突變和活化蛋白C抵抗是導致流產(chǎn)的 常見原因，同時不耐熱的亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR)基因多態(tài)性在凝血缺陷所導致的 流產(chǎn)中起一定的作用。
[0007] 內(nèi)分泌功能異常 最常見為黃體功能不全，由于卵泡發(fā)育不良，排卵后黃體形成不健全；或妊娠早期卵巢 對HCG反應欠佳，孕酮分泌不足；另一方面，子宮內(nèi)膜的孕激素受體（PR)不足，對孕酮的效 應低下，均可影響蛻膜及胎盤形成。
[0008] 有研究發(fā)現(xiàn)，反復早期自然流產(chǎn)的患者，其血清E2水平在卵泡期和黃體期均顯著 低于正常對照組，而卵泡刺激素（FSH)、促黃體生成素（LH)、催乳素（PRL)和孕酮（P)水平 則與對照組無統(tǒng)計學意義差異。但子宮內(nèi)膜組織雌激素受體（ER)、孕激素受體（PR)含量 卻顯著低于對照組。提示子宮內(nèi)膜對激素的效應不良是自然流產(chǎn)的重要原因。
[0009] 近年的研究還發(fā)現(xiàn)，先兆流產(chǎn)或不全流產(chǎn)的患者血漿β -內(nèi)啡肽（β -EP)水平顯 著上升，而促性腺激素釋放激素（Gn-RH)、人絨毛膜促性腺激素（HCG)和孕酮（P)水平則下 降（Ρ〈0· 01)。
[0010] 此外，甲狀腺功能異常（甲亢或甲低)、糖尿病或其它內(nèi)分泌疾患也可影響胚胎發(fā) 育而流產(chǎn)。
[0011] ⑶免疫因素 原因不明的反復自然流產(chǎn)，多數(shù)是免疫因素所致。約50%的RSA發(fā)病與免疫因素有關(guān)， 流產(chǎn)是母胎之間免疫狀態(tài)失衡，發(fā)生免疫排斥所致。免疫因素引起的RSA可分為自身免疫 型和同種免疫型兩類。
[0012] 自身免疫：通?？稍诨颊叩捏w內(nèi)檢出自身抗體，如抗磷脂抗體等?？沽字贵w綜合 征（the antiphospholipid syndrome, APS)是最常見的自身免疫病型疾病。另外，抗甲 狀腺抗體、抗凝血酶原抗體、抗核抗體等均與復發(fā)性流產(chǎn)（recurrent miscarriage, RM)發(fā) 病密切相關(guān)。
[0013] 同種免疫：由同種免疫病型可能因為母-胎界面的免疫耐受機制發(fā)生異常，胚胎 受到母體免疫應答的攻擊而使胚胎遭受排斥、流產(chǎn)。主要與人類白細胞抗原（HLA)、蛻膜T 細胞和自然殺傷細胞（NK細胞）、細胞因子、補體系統(tǒng)、凋亡因子表達異常有關(guān)。
[0014] 細胞因子：近年研究證明，Thl、Th2細胞因子平衡對妊娠結(jié)局關(guān)系密切。Th2來源 的細胞因子對妊娠有利，而Thl來源的細胞因子則不利于妊娠。對妊娠結(jié)局而言，重要的是 Thl /Th2的平衡，而不是哪一類因子的絕對值。轉(zhuǎn)化生長因子-β (TGF-β 1)可能對維持妊 娠至關(guān)重要，但也可能是復發(fā)性流產(chǎn)的一個危險因子。
[0015] 補體系統(tǒng)異常：有學者推測，如果補體調(diào)節(jié)蛋白表達發(fā)生缺陷，那么補體介導的 免疫病理作用可能導致流產(chǎn)。李霞等的實驗結(jié)果證明了血清中可溶性補體調(diào)節(jié)蛋白分子可 能與習慣性流產(chǎn)有關(guān)，即有習慣性流產(chǎn)史的非妊娠婦女血清抗補體抑制率較正常無流產(chǎn)的 經(jīng)產(chǎn)婦低。據(jù)此認為有習慣性流產(chǎn)史的患者妊娠時,可能由于血清本身的抗補體作用低下， 難以有效地抑制補體激活，從而促發(fā)免疫病理作用，導致習慣性流產(chǎn)。
[0016] 凋亡因子表達異常：細胞凋亡增加可能是RSA發(fā)生的一個重要病理過程。母胎界 面存在凋亡因子受體FasL和Trai-IR，二者分別與激活的淋巴細胞表面存在的凋亡因子（ Fas和Trail)結(jié)合，誘導細胞凋亡，使胚胎逃避免疫打擊。研究表明，RSA患者胎盤絨毛滋 養(yǎng)細胞表面FasL表達減少，導致母胎間免疫耐受的破壞，引起異常的免疫反應，從而導 致RSA的發(fā)生。
[0017] 感染因素 急性傳染病、高熱可引起子宮收縮而流產(chǎn)；細菌毒素或病毒(如風疹病毒、巨細胞病毒、 單純皰疹病毒等)可通過胎盤進入胎兒血循環(huán)，可導致胎兒發(fā)育異?；蛩劳?。TORCH感染與 自然流產(chǎn)的相關(guān)性已得到臨床醫(yī)生的廣泛關(guān)注。近年來，對流產(chǎn)婦女和正常早孕婦女常規(guī) 檢測風疹病毒、巨細胞病毒、單純皰疹病毒和弓形體抗體，人類微小病毒B19 (B19V)等。
[0018] 生殖道的支原體、衣原體感染與自然流產(chǎn)的相關(guān)性也是近年研究的熱點。研究表 明，自然流產(chǎn)患者宮頸CT、UU、MH感染率顯著高于正常妊娠組。其機理可能是炎癥細胞浸潤 子宮內(nèi)膜，影響胚胎的生長；或通過垂直傳播影響胚胎，導致胚胎停止發(fā)育。
[0019] 解剖因素 子宮形態(tài)異常(如雙子宮、縱隔子宮或子宮發(fā)育不良)、盆腔或?qū)m腔內(nèi)占位性病變(如子 宮肌瘤等)，影響胎兒生長發(fā)育；宮頸內(nèi)口松弛或?qū)m頸重度裂傷，導致宮頸機能不全，可造成 晚期流產(chǎn)。
[0020] 生活環(huán)境因素 孕期接觸有害的化學物質(zhì)與物理因素，包括重金屬、苯、甲醛、放射線、噪音、高溫等以 及主動被動吸煙等，可直接或間接對胚胎或胎兒造成損害。
[0021] 目前，對于自然流產(chǎn)的治療，西醫(yī)多采用期待療法、激素療法和免疫療法，但是這 些方法有種種局限和副作用，并不能安全有效地防治自然流產(chǎn)。而中醫(yī)藥由于其副作用少， 安全可靠且具有遠期療效，在調(diào)經(jīng)、種子、安胎方面具特色和優(yōu)勢。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0022] 本發(fā)明的目的在于提供續(xù)斷總皂苷的用途，即續(xù)斷總皂苷在制藥中的應用。
[0023] 實際上，本發(fā)明涉及續(xù)斷總皂苷在制備安胎藥物中的應用。
[0024] 本發(fā)明涉及續(xù)斷總皂苷在制備減少流產(chǎn)率的藥物中的應用。
[0025] 本發(fā)明涉及續(xù)斷總皂苷在制備提高活胎數(shù)的藥物的應用。
[0026] 本發(fā)明涉及續(xù)斷總皂苷在制備減少陰道出血的藥物中的應用。
[0027] 本發(fā)明涉及續(xù)斷總皂苷在制備調(diào)節(jié)妊娠內(nèi)分泌的藥物中的應用。具體地，涉及續(xù) 斷總皂苷作為制備提高妊娠期卵巢及子宮的孕激素受體水平藥物的應用；作為制備提高妊 娠期卵巢及子宮的雌激素受體水平藥物的應用。
[0028] 作為本發(fā)明的一個實施例，所述續(xù)斷總皂苷的制備方法為： (1) 將續(xù)斷干燥、切細、粉碎后，醇提得續(xù)斷醇提物； (2) 續(xù)斷醇提物除醇后，上大孔樹脂，先后經(jīng)水和乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙 醇后得續(xù)斷總皂苷粗提物； (3) 續(xù)斷總皂苷粗提物酸化，調(diào)整pH值至廣2,氯仿萃取，水層部分用堿調(diào)整pH值至 ΚΓ11，氯仿萃取，水層部分減壓濃縮得續(xù)斷總皂苷。
[0029] 本發(fā)明所述步驟（1)中，續(xù)斷經(jīng)干燥、切細和粉碎后經(jīng)5?7倍75%乙醇回流提取三 次，提取時間分別為2小時，I. 5hr及I. 5hr，過濾，合并三次濾液，得到續(xù)斷醇提物。
[0030] 所述步驟（2)中，續(xù)斷醇提物除醇后，上大孔樹脂，用蒸餾水洗脫至近無色，然后 用95%乙醇洗脫，95%乙醇與續(xù)斷醇提物之間的體積比為7:1~8:1. 5。
[0031] 所述大孔樹脂為HP - 20大孔樹脂。
[0032] 所述步驟⑶中，續(xù)斷總皂苷粗提物用1 %稀鹽酸酸化，調(diào)整pH值至1~2,采用等 體積氯仿進行萃?。宦确螺腿『笏畬硬糠忠?%的NaOH溶液中和調(diào)整pH值至l(Tll，采用 等體積氯仿進行萃取。
[0033] 所述的續(xù)斷總皂苷的治療有效量是為個體給藥后產(chǎn)生安胎等活性作用的劑量。而 給予個體單劑或多劑量時，給藥劑量根據(jù)多種因素而不同，包括續(xù)斷總皂苷的藥代動力學 性質(zhì)、給藥途徑、患者情況何特性（性別、年齡、體重、健康情況、體型）、癥狀程度、并存的治 療、治療頻率和期望的效果。
[0034] 所述的續(xù)斷總皂苷可由多種途徑進行個體給藥，給藥途徑包括口服、靜脈注射等。 相應地，所述的續(xù)斷總皂苷可以與可藥用載體制備成口服制劑和注射劑。其中，口服制劑包 括片劑、膠囊劑、微膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、滴丸、口服液和散劑。注射劑包括靜脈注射劑 和粉針劑。還可以根據(jù)劑型需要可配以不同的可藥用載體，同時可加入抗氧化劑、乳化劑、 穩(wěn)定劑和防霉劑。
[0035] 本發(fā)明研究了續(xù)斷總皂苷的藥理作用，根據(jù)藥理學研究原則，設計了相關(guān)的實驗 動物模型，進行了動物模型的流產(chǎn)療效研究，經(jīng)實驗證明：續(xù)斷總皂苷能促進動物膜型的 子宮、卵巢的雌激素和孕激素受體的表達，明顯減少動物模型的陰道出血，顯著提高了活胎 數(shù)，減少流產(chǎn)數(shù)，降低了流產(chǎn)率?？梢?，續(xù)斷總皂苷的安胎作用非常顯著。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0036] 圖1是本發(fā)明續(xù)斷總皂苷的HPLC-UV指紋圖譜。

【具體實施方式】
[0037] 下面結(jié)合實例及附圖對本發(fā)明作進一步的詳細闡述續(xù)斷總皂苷在醫(yī)藥領域中的 新用途，尤其是安胎藥物的用途。但是以下實施方式僅用于說明本發(fā)明的目的，并不限制本 發(fā)明的保護范圍。
[0038] 續(xù)斷總皂苷對腎虛-黃體功能抑制流產(chǎn)模型大鼠安胎作用的藥效及作用機制研究 1實驗材料 1. 1實驗藥物及藥材商品來源： 菟絲子、續(xù)斷：購自廣東康美有限公司采購的地道藥材。
[0039] 桑寄生：委托華南植物園采集的從化桑寄生。
[0040] 地屈孕酮片：荷蘭 Solvay pharmaceuticals B. V，規(guī)格：20 片 / 盒（IOmg/片） 339430 米非司酮片：湖北葛店人福藥業(yè)有限責任公司，規(guī)格：6片/盒（25mg/片)，編號： 101002U10302U10202 羥基脲片：齊魯制藥有限公司，規(guī)格：1〇〇片/盒（〇. 5g/片)，批號：005009LC、103012LC 羧甲基纖維素鈉（CMC-Na):天津市福晨化學試劑廠，批號：20090320。
[0041] ?0?有關(guān)材料：1^2〇1，5父逆轉(zhuǎn)錄131^€61'，5\定量131^€61'，(1階1 38，麗1^，了39酶 1. 2實驗動物 SPF級SD大鼠，體重：雌220?280g，雄30(T350g，雌雄比例=2 : 1。廣東省醫(yī)學實 驗動物中心提供。
[0042] 合格證號：0090923、0097324、0094245、0094568。
[0043] 動物實驗設施合格證：0057219。
[0044] 1. 3實驗儀器 超凈工作臺：蘇州金燕凈化設備有限公司，型號：JYB-1300。
[0045] 電子分析天平：上海友聲衡器有限公司，型號：BS-3000A，感量0. lg。
[0046] 顯微鏡：日本奧林巴斯廠（OLYMPUS )，型號：CX21。
[0047] 電子分析天平：德國Sartorius，型號：BS224S3。
[0048] 高效液相色譜議：Agilent 1100 series。
[0049] 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：型號：EYELA NlOOO型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，日本東京理化。
[0050] PCR:ABI 3900臺式高通量DNA合成儀，科大創(chuàng)新HC-3018R高速冷凍離心機， BIO-RAD定性PCR儀，ABI-7500全自動熒光定量PCR儀。
[0051] 2實驗方法 2. 1實驗藥物的制備 2. I. 1續(xù)斷總提物、續(xù)斷總皂苷的制備 將3. 5kg續(xù)斷干燥、切細，經(jīng)粉碎機加工成碎粒，經(jīng)6倍75%乙醇回流提取三次(分別 為2小時，I. 5hr及I. 5hr)。過濾后，合并三次濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮除去乙醇，濃縮 至約1500 mL無醇味續(xù)斷醇提物。減壓濃縮條件：濃縮溫度區(qū)間55 °C_60°C，濃縮轉(zhuǎn)速70 rpm/min，真空度小于0.1 Mpa。
[0052] 續(xù)斷醇提取物上HP-20大孔樹脂柱（Diaion HP-20,日本三菱化成公司，直徑100 mm，高I m)，先用雙蒸水進行洗脫至近無色，再用8L 95%乙醇進行洗脫，收集95%乙醇洗脫 液，洗脫液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮除去乙醇，濃縮至IOOOml無醇味的含總生物堿及總苷的 續(xù)斷總阜苷粗提物。減壓濃縮條件：濃縮溫度區(qū)間55 °C-60°C，濃縮轉(zhuǎn)速70 rpm/min，真 空度小于0. I Mpa。其后，續(xù)斷總皂苷粗提物用1 %稀鹽酸酸化，調(diào)整pH值至1-2。用等體 積氯仿（IOOOml)振搖萃取，得到非極性成分共16. Ig (提取率為0. 46%)。靜置30 min分 層完全，去除下層萃取液，同樣操作萃取四次，水層部分以1 %的NaOH溶液中和，調(diào)整pH值 ΚΓ11，用等體積氯仿（IOOOml)振搖萃取四次，水層部分以1%鹽酸中和，減壓濃縮得續(xù)斷 總皂苷775g(提取率22. 5%)。4°C，避光保存?zhèn)溆?。續(xù)斷水提取物的制備：將3. 35kg續(xù)斷 干燥、切細，然后經(jīng)粉碎機加工成碎粒，用1〇倍水煎煮兩次(分別為2小時和I. 5hr)。過 濾后，減壓下除去水分，得水提取物1500g (提取率44. 7 % )。保存在4°C，備用。
[0053] 2. L 2減味壽胎丸總提物的制備 將干燥藥材菟絲子400g，桑寄生300g，續(xù)斷300g，分別用中藥粉碎機粉碎成20? 30目粗粉，混合均勻后以七倍量的95%乙醇（即7L )回流提取2次，每次為半小時，溫度 30?40°C，超聲頻率40KHz條件下超聲30分鐘，過濾，合并兩次濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀揮干溶 齊U，減壓濃縮成浸膏，濃縮溫度50°c，濃縮轉(zhuǎn)速70rpm(轉(zhuǎn)/每分鐘)，濃縮真空度0. IMpa下， 濃縮所得浸膏即為減味壽胎丸醇提物樣品。
[0054] 將醇提后的濾渣，在室溫下?lián)]干溶劑至無醇味，加七倍量蒸餾水（即7L)浸泡 30min后，加熱煎煮30min，水沸開始計時。四層紗布過濾，濾漁再加蒸饋水7L浸泡30min 后，加熱煎煮30min，再用四層紗布過濾，合并兩次濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，濃縮 條件如下：溫度60°C，轉(zhuǎn)速70rpm (轉(zhuǎn)/每分鐘)，濃縮真空度0. IMpa下，濃縮所得浸膏即為 減味壽胎丸水提物樣品。
[0055] 將減味壽胎丸醇提物與水提物合并，即得減味壽胎丸總提物樣品，重51. 6克，提 取率為25. 8%，避光保存在4°C，備用。
[0056] 2.2實驗藥物的鑒定 2. 2. 1續(xù)斷的鑒定 2. 2. I. 1續(xù)斷各有效部位的定性鑒定 氯仿-濃硫酸反應(定性鑒別三萜皂苷） 分別取續(xù)斷乙醇總提取物、續(xù)斷乙醇總提取物的純化物、總皂苷部位部位樣品的水溶 液lmL，加入氯仿2mL，再加入濃硫酸3mL進行反應，結(jié)果各反應液均分為上下兩層，續(xù)斷乙 醇總提取物、續(xù)斷乙醇總提取物的純化物、總皂苷部位的反應較大，其中總皂苷部位的上層 水溶液變?yōu)樽仙Ｒ虼?，可以確定該部位含有三萜皂苷，即驗證該部位為續(xù)斷的總皂苷部 位。
[0057] 2. 2. 1. 2.續(xù)斷各有效部位與續(xù)斷乙醇總提取物成分比照分析 HPLC-UV指紋圖譜法 分別取續(xù)斷乙醇總提取物、續(xù)斷乙醇總提取物的純化物、和總皂苷部位樣品，分別用適 量的甲醇溶解，過0.45 μ m濾膜，備用。分別吸取以上樣品注入高效液相色譜中，進行測試。 并與對照品續(xù)斷總皂苷VI對照。
[0058] 色譜條件：色譜柱：Hyperisil ODS C18 柱（4. 6 mm X 250mm i. d. , 5 μ m);流 動相：〇· 1% 磷酸水溶液（A)，乙腈（B)，0?24 min，5%?17% B ;24?60 min，17%?25% B ;60?80 min, 25%?50% B，80?81 min，50%-5% B ;檢測波長：212nm，254nm，270nm，360 nm ;柱溫：30 °〇；流速：11111/111；[11;進樣量：5以1^104匕
[0059] 結(jié)果：如圖1所示，續(xù)斷乙醇總提取物、續(xù)斷乙醇總提取物的純化物和總皂苷部 位、總生物堿部位與對照品續(xù)斷總皂苷VI的HPLC-UV指紋圖譜（212 nm)具有較好的相似 性；續(xù)斷乙醇總提取物的純化物色譜圖中的色譜峰的個數(shù)明顯多于總皂苷部位的色譜峰； 同時，續(xù)斷總皂苷部位的色譜峰可從續(xù)斷乙醇總提取物色譜圖中找到相應的色譜峰，且保 留時間基本一致；通過以上樣品中相同保留時間成分的紫外吸收圖譜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各相同保 留時間的成分的紫外吸收圖譜相同；以上結(jié)果說明總皂苷部位與續(xù)斷乙醇總提取物具有相 同的化學成分，且總皂苷部位為續(xù)斷乙醇總提取物成分的一部分（參見圖1)。
[0060] 2. 3實驗藥物劑量設計 2. 3. 1實驗藥物劑量計算方法 按照成人常用劑量：菟絲子20g、桑寄生15g、續(xù)斷15g計算。
[0061] 低劑量組(等效劑量）：大鼠每日公斤體重給藥劑量（g/kg/d) =成人常用劑量 (g)/60kgX6. 25X 提取率。
[0062] 中劑量組：2· 5倍等效劑量。
[0063] 高劑量組：5倍等效劑量。
[0064] 2. 3. 2實驗藥物劑量計算結(jié)果 續(xù)斷總提物：臨床推薦劑量是每日15g (按體重60kg計算），提取率44. 7%，相當于 0· 112g · kg-1 · cf1。換算成大鼠等效劑量為0· 6984g · kg-1 · cf1，大鼠等效劑量的5倍為高 劑量組，即3. 492g · kg4 · cf1，大鼠等效劑量的2. 5倍為中劑量組，即I. 746g · kg4 · cf1， 大鼠等效劑量的1倍為低劑量組，即〇.6984g 續(xù)斷總提物高劑量組簡稱續(xù)總高 組，續(xù)斷總提物中劑量組簡稱續(xù)總中組，續(xù)斷總提物低劑量組簡稱續(xù)總低組。
[0065] 續(xù)斷總皂苷：臨床推薦劑量是每日15g (按體重60kg計算），提取率22. 5%，相當 于0· 056g · kg4 · cf1。換算成大鼠等效劑量為0· 352g · kg4 · cf1，大鼠等效劑量的5倍為 高劑量組，即I. 76g · kg4 · cf1，大鼠等效劑量的2. 5倍為中劑量組，即0. 879g · kg4 · cf1， 大鼠等效劑量的1倍為低劑量組，即〇.352g ·(!'續(xù)斷總皂苷高劑量組簡稱續(xù)總苷 高組，續(xù)斷總皂苷中劑量組簡稱續(xù)總苷中組，續(xù)斷總皂苷低劑量組簡稱續(xù)總苷低組。

【權(quán)利要求】
1. 續(xù)斷總皂苷作為制備安胎藥物中的應用。
2. 續(xù)斷總皂苷作為制備減少流產(chǎn)率的藥物中的應用。
3. 續(xù)斷總皂苷作為制備提高活胎數(shù)的藥物中的應用。
4. 續(xù)斷總皂苷作為制備減少陰道出血的藥物中的應用。
5. 續(xù)斷總皂苷作為制備調(diào)節(jié)妊娠內(nèi)分泌的藥物中的應用。
6. 續(xù)斷總皂苷作為制備提高妊娠期卵巢及子宮的孕激素受體水平藥物的應用。
7. 續(xù)斷總皂苷作為制備提高妊娠期卵巢及子宮的雌激素受體水平藥物的應用。
8. -種續(xù)斷總皂苷的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 將續(xù)斷干燥、切細、粉碎后，醇提得續(xù)斷醇提物； (2) 續(xù)斷醇提物除醇后，上大孔樹脂，先后經(jīng)水和乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙 醇后得續(xù)斷總皂苷粗提物； (3) 續(xù)斷總皂苷粗提物酸化，調(diào)整pH值至廣2,氯仿萃取，水層部分用堿調(diào)整pH值至 ΚΓ11，氯仿萃取，水層部分減壓濃縮得續(xù)斷總皂苷。
9. 權(quán)利要求8所述續(xù)斷總皂苷的制備方法，其特征在于，所述步驟（1)中，續(xù)斷經(jīng)干燥、 切細和粉碎后經(jīng)5?7倍75 %乙醇回流提取三次，提取時間分別為2小時，1. 5hr及1. 5hr， 過濾，合并三次濾液，得到續(xù)斷醇提物；所述步驟（2)中，續(xù)斷醇提物除醇后，上大孔樹脂， 用蒸餾水洗脫至近無色，然后用95%乙醇洗脫，95%乙醇與續(xù)斷醇提物之間的體積比為 7:1~8:1. 5 ;所述大孔樹脂為HP - 20大孔樹脂；所述步驟⑶中，續(xù)斷總皂苷粗提物用1 % 稀鹽酸酸化，調(diào)整pH值至廣2,采用等體積氯仿進行萃??；萃取后水層部分以1%的NaOH溶 液中和調(diào)整pH值至ΚΓ11，采用等體積氯仿進行萃取。
10. -種權(quán)利要求8或9所述制備方法制備的續(xù)斷總皂苷。
【文檔編號】A61K36/185GK104288188SQ201410482049
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月19日
【發(fā)明者】羅頌平, 郜潔, 繆江霞 申請人:羅頌平