用于防止線粒體通透性改變的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于防止線粒體通透性改變的方法，具體地，減少或防止線粒體通透性改變的方法。該方法包括給予有效量的芳香族陽離子肽，該肽具有至少一個(gè)凈正電荷；最少四個(gè)氨基酸；最多約二十個(gè)氨基酸；凈正電荷的最小數(shù)目(pm)與氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的關(guān)系為：其中3pm是小于或等于r+1的最大數(shù)；以及芳香基的最小數(shù)目(a)與凈正電荷的總數(shù)(pt)之間的關(guān)系為：其中2a是小于或等于pt+1的最大數(shù)，除非當(dāng)a是1時(shí)，pt也可以是1。
【專利說明】用于防止線粒體通透性改變的方法
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2004年2月3日、分案提交日為2012年5月31日、申請(qǐng)?zhí)枮?201210177633. 0、發(fā)明名稱為"用于防止線粒體通透性改變的方法"的分案申請(qǐng)的再次分案 申請(qǐng)，其中，申請(qǐng)?zhí)枮?01210177633. 0的分案申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?00810177056. 9、申請(qǐng)日為 2004年2月3日、分案提交日為2008年11月19日、發(fā)明名稱為"用于防止線粒體通透性 改變的方法"的分案申請(qǐng)的再次分案申請(qǐng)，其中，申請(qǐng)?zhí)枮?00810177056. 9的分案申請(qǐng)是申 請(qǐng)?zhí)枮?00480009297. 2、申請(qǐng)日為2004年2月3日、發(fā)明名稱為"用于防止線粒體通透性 改變的方法"的母案申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002] 本申請(qǐng)要求于2003年2月4日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第60/444, 777號(hào)和于2004年 1月8日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第60/535, 690號(hào)的優(yōu)先權(quán)。將美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第60/444, 777 號(hào)和第60/535, 690號(hào)的內(nèi)容以引用的方式結(jié)合于本文中，作為參考。
[0003] 本發(fā)明是在由國(guó)家藥物濫用研究所提供的批準(zhǔn)號(hào)為POl DA08924-08的政府資助 下完成的。在本發(fā)明中美國(guó)政府擁有一定的權(quán)利。

【背景技術(shù)】
[0004] 線粒體幾乎存在于所有的真核細(xì)胞中，并且通過氧化磷酸化作用產(chǎn)生三磷酸腺苷 (ATP)，因而對(duì)于細(xì)胞生存是必需的。阻斷這一重要的功能可以導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
[0005] 線粒體還通過積聚鈣（Ca2+)而在細(xì)胞內(nèi)的鈣調(diào)節(jié)方面扮演重要的角色。通過膜電 位驅(qū)動(dòng)的單向轉(zhuǎn)運(yùn)體在線粒體基質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生鈣的積聚。
[0006] 鈣的攝入激活了線粒體脫氫酶，而這在維持能量生成和氧化磷酸化方面可能是重 要的。另外，線粒體可以作為過量胞漿Ca2+的儲(chǔ)槽，從而保護(hù)細(xì)胞免受Ca2+過載和壞死。
[0007] 局部缺血或低血糖癥可以導(dǎo)致線粒體功能失常，包括ATP水解和Ca2+過載。該功 能失常引起線粒體通透性改變（線粒體滲透性轉(zhuǎn)變，MPT)。MPT的特征有：氧化磷酸化解偶 聯(lián)，線粒體膜電位喪失，內(nèi)膜通透性增加以及腫脹。
[0008] 另外，線粒體膜間間隙是凋亡基因蛋白（apoptogenic proteins)的儲(chǔ)庫(kù)。因此， 線粒體電位的喪失和MPT可以導(dǎo)致將凋亡基因蛋白釋放到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。越來越多的證據(jù)表明 MPT與壞死性和細(xì)胞凋亡性細(xì)胞死亡有關(guān)（Crompton, Biochem J. 341:233-249, 1999)，這并 不令人奇怪。細(xì)胞的輕微損傷可能導(dǎo)致凋亡而不是壞死。
[0009] 環(huán)胞菌素可以抑制MPT。由環(huán)胞菌素 A所致的MPT阻斷可以抑制多種細(xì)胞類型 的凋亡，包括經(jīng)歷局部缺血，缺氧，Ca2+過載和氧化應(yīng)激的細(xì)胞（Kroemer et al·，Annu Rev Physiol. 60:619-642, 1998)。
[0010] 然而，環(huán)胞菌素 A作為抗壞死性和凋亡性細(xì)胞死亡的治療藥物不是最好的。例如， 環(huán)胞菌素 A不能特異性地靶向線粒體。另外，它很難被遞送到腦部。而且，由于它的免疫抑 制活性減少了環(huán)胞菌素 A的應(yīng)用范圍。
[0011] 四肽[DmtlDALDAQ'，6'_二甲基酪氨酸-D-精氨酸-苯丙氨酸-賴氨 酸-NH2;SS-02)分子量為640,并且在生理pH下帶有3個(gè)凈正電荷。[Dmt^DALDA以非 能量依賴的方式很容易穿過許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型的質(zhì)膜（Zhao et al.，J Pharmacol Exp.Ther.304:425_432,2003)并且穿過血腦屏障（Zhaoetal·，JPharmacolExp· Then 302:188-196, 2002)。盡管[Dmt^DALDA已經(jīng)顯示出是一種潛在的μ-阿片樣物質(zhì) (μ -類鴉片，opioid)受體激動(dòng)劑，但它的應(yīng)用還沒有擴(kuò)展到包括抑制MPT的方面。
[0012] 因此，在如局部缺血-再灌注、缺氧癥、低血糖癥以及由于線粒體膜通透性改變 (線粒體滲透性轉(zhuǎn)變）所導(dǎo)致的病理改變的其它的疾病和病癥的情況下，需要抑制MPT。這 樣的疾病和病癥包括多種常見的神經(jīng)退行性疾病或病癥。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明提供一種用于在有需要的任何哺乳動(dòng)物中減少經(jīng)歷線粒體通透性改變 (MPT)的線粒體數(shù)量或防止線粒體通透性改變的方法，這些目的和其它目的可以通過本發(fā) 明來實(shí)現(xiàn)。該方法包括給予該哺乳動(dòng)物有效量的具有以下特征的芳香族陽離子肽：
[0014] (a)至少一個(gè)凈正電荷；
[0015] (b)最少3個(gè)氨基酸；
[0016] (c)最多約20個(gè)氨基酸；
[0017] ⑷凈正電荷的最小數(shù)目（pm)和氨基酸殘基的總數(shù)（r)之間的關(guān)系為：其中3p m 是小于或等于r+1的最大數(shù)；以及
[0018] (e)芳香基的最小數(shù)目（a)和凈正電荷的總數(shù)（Pt)之間的關(guān)系為：其中2a是小于 或等于P t+1的最大數(shù)，除非當(dāng)a是1時(shí)，pt也可以是1。
[0019] 在另一具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種在哺乳動(dòng)物的離體器官中減少經(jīng)歷線粒體 通透性改變（MPT)的線粒體數(shù)量或防止線粒體通透性改變的方法。該方法包括給予該離體 器官有效量的具有以下特征的芳香族陽離子肽：
[0020] (a)至少一個(gè)凈正電荷；
[0021] (b)最少3個(gè)氨基酸；
[0022] (c)最多約20個(gè)氨基酸；
[0023] ⑷凈正電荷最小數(shù)目（pm)和氨基酸殘基總數(shù)（r)之間的關(guān)系為：其中3p m是小 于或等于r+Ι的最大數(shù)；以及
[0024] (e)芳香基的最小數(shù)目（a)和凈正電荷的總數(shù)（pt)之間的關(guān)系為：其中，2a是小 于或等于P t+1的最大數(shù)，除非當(dāng)a是1時(shí)，pt也可以是1。
[0025] 在又一具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種在有需要的哺乳動(dòng)物中減少經(jīng)歷線粒體通 透性改變（MPT)的線粒體數(shù)量或防止線粒體通透性改變的方法。該方法包括給予該哺乳動(dòng) 物有效量的具有以下特征的芳香族陽離子肽：
[0026] (a)至少一個(gè)凈正電荷；
[0027] (b)最少3個(gè)氨基酸；
[0028] (C)最多約20個(gè)氨基酸；
[0029] (d)凈正電荷的最小數(shù)目（pm)和氨基酸殘基的總數(shù)（r)之間的關(guān)系為：其中3p m 是小于或等于r+1的最大數(shù)；以及
[0030] (e)芳香基的最小數(shù)目（a)和凈正電荷的總數(shù)（Pt)之間的關(guān)系為：其中3a是小于 或等于P t+1的最大數(shù)，除非當(dāng)a是1時(shí)，pt也可以是1。
[0031] 在更進(jìn)一步的具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種在哺乳動(dòng)物的離體器官中減少經(jīng)歷 線粒體通透性改變（MPT)的線粒體數(shù)量或防止線粒體通透性改變的方法。該方法包括給予 該離體器官有效量的具有以下特征的芳香族陽離子肽：
[0032] (a)至少一個(gè)凈正電荷；
[0033] (b)最少3個(gè)氨基酸；
[0034] (C)最多約20個(gè)氨基酸；
[0035] (d)凈正電荷的最小數(shù)目（pm)和氨基酸殘基的總數(shù)（r)之間的關(guān)系為：其中3p m 是小于或等于r+1的最大數(shù)；以及
[0036] (e)芳香基的最小數(shù)目（a)和凈正電荷的總數(shù)（pt)之間的關(guān)系為：其中，3a是小 于或等于P t+1的最大數(shù)，除非當(dāng)a是1時(shí)，pt也可以是1。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0037] 圖IA-圖ID :線粒體中[DmtiDALDAGS-OZ)的細(xì)胞內(nèi)化和聚集。圖IA :用熒光 分光光度計(jì)測(cè)量SS-19的線粒體攝入（ex/em = 320/420)。加入經(jīng)分離的小鼠肝臟線粒體 (0· 35mg/ml)導(dǎo)致SS-19熒光強(qiáng)度快速淬滅（灰線）。用FCCP (1. 5 μ M)預(yù)處理的線粒體減 少淬滅< 20% (黑線）。圖IB :經(jīng)分離的線粒體用[3H]SS-02于37°C孵育（溫育）2分鐘。 于4°C離心（16000 X g) 5分鐘中止攝入，測(cè)定沉淀中的放射性。用FCCP預(yù)處理的線粒體抑制 [3H] SS-02攝入?20%。數(shù)據(jù)用平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差表示；η = 3，*，采用Student' s t-檢 驗(yàn)的P < 0. 05。圖IC :由丙甲甘肽誘導(dǎo)的線粒體腫脹使經(jīng)分離的線粒體攝入的TMRM丟失， 而攝入的SS-19則保持在高濃度。黑線為TMRM ;紅線為SS-19。圖ID :如通過TMRM熒光測(cè) 定的，在經(jīng)分離的線粒體中加入SS-02 (200 μ M)不改變線粒體電位。加入FCCP (1.5 μ M)引 起快速去極化，而Ca2+ (150 μ Μ)導(dǎo)致去極化和MPT漸進(jìn)開始。
[0038] 圖2Α-圖2C : [Dmt1]DALDA (SS-02)保護(hù)線粒體免受Ca2+過載和3-硝基丙酸（3ΝΡ) 誘導(dǎo)的線粒體通透性改變（MPT)。圖2A :經(jīng)分離的線粒體用10 μ M的SS-02預(yù)處理（用下 箭頭表示加入）阻止了由Ca2+過載誘導(dǎo)的MPT的發(fā)生（上箭頭）。黑線為緩沖液；紅線為 SS-02。圖2B :經(jīng)分離的線粒體用SS-02預(yù)處理增加了在MPT發(fā)生前成倍加入Ca2+的線粒 體耐受性。箭頭指示加入緩沖液或SS-02。線1為緩沖液；線2為50 μ M的SS-02 ;線3為 100 μ M的SS-02。圖2C :SS-02劑量依賴性地延緩由lmM3NP誘導(dǎo)的MPT的發(fā)生。箭頭表示 加入緩沖液或SS-02。線1為緩沖液，線2為0. 5 μ M的SS-02 ;線3為5 μ M的SS-02 ;線4 為 50μΜ 的 SS-02。
[0039] 圖3Α-圖3C : [DmtiDALDAGS-OZ)抑制線粒體腫脹和細(xì)胞色素 C釋放。圖3Α :將 經(jīng)分離的線粒體用SS-02預(yù)處理，其劑量依賴性地抑制了由200 μ M的Ca2+以劑量依賴方式 誘導(dǎo)的線粒體腫脹。通過在540nm處的吸光度來測(cè)量腫脹。圖3B :SS-02抑制經(jīng)分離的線粒 體中由Ca2+誘導(dǎo)的細(xì)胞色素 C的釋放。細(xì)胞色素 C的釋放量用線粒體中總細(xì)胞色素 C的百 分?jǐn)?shù)表示。數(shù)據(jù)用平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，η = 3。圖3C :SS-02也能抑制由MPP+(300 μ M) 誘導(dǎo)的線粒體腫脹。
[0040] 圖4Α-圖4C :D_精氨酸-Dmt-賴氨酸-苯丙氨酸-NH2 (SS-31)抑制線粒體腫脹和 細(xì)胞色素 C釋放。圖4A :經(jīng)分離的線粒體用SS-31 (10 μ M)預(yù)處理阻止了由Ca2+誘導(dǎo)的MPT 的發(fā)生?；揖€為緩沖液；紅線為SS-31。圖4B:線粒體用SS-31(50yM)預(yù)處理抑制了由 200mM的Ca2+誘導(dǎo)的線粒體腫脹。通過測(cè)量在570nm處的光散射來測(cè)量腫脹。圖4C:SS-02 和SS-31與環(huán)胞菌素（CsA)在抑制由Ca2+誘導(dǎo)的線粒體腫脹和細(xì)胞色素 C釋放的比較。細(xì) 胞色素 C釋放量用線粒體中總細(xì)胞色素 C的百分?jǐn)?shù)表示。數(shù)據(jù)用平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差表示， η = 3〇
[0041] 圖 5. [Dmt1] DALDA (SS-02)和 D-精氨酸-Dmt-賴氨酸-苯丙氨酸-NH2 (SS-31)在 經(jīng)灌注的離體豚鼠心臟的局部缺血-再灌注過程中保護(hù)心肌收縮力。心臟用緩沖液或含有 SS-02 (IOOnM)或SS-31 (InM)的緩沖液灌注30分鐘，然后經(jīng)受30分鐘的全心（global)缺 血。用同樣的灌注溶液進(jìn)行再灌注。發(fā)現(xiàn)在3個(gè)治療組中存在顯著的差異（雙因素方差分 析，P < (λ 001)。
[0042] 圖6.向心臟停搏液中加入[Dmt^DALDA顯著增強(qiáng)了經(jīng)灌注的離體豚鼠心臟在延 長(zhǎng)的缺血之后的收縮功能。穩(wěn)定30分鐘后，心臟用St. Thomas心臟停搏液（CPS)或含有 IOOnM的[Dmt1=DALDA的CPS灌注3分鐘。通過完全阻斷冠狀動(dòng)脈灌注90分鐘來引發(fā)全心 失血。隨后用氧化的Krebs-Henseleit溶液進(jìn)行60分鐘再灌注。在接受[Dmt^DALDA的 組中缺血后收縮力被顯著提高（P <0· 001)。

【具體實(shí)施方式】
[0043] 本發(fā)明是基于發(fā)明人的驚人發(fā)現(xiàn)：某些芳香族陽離子肽顯著地減少了經(jīng)歷線粒體 通透性改變（MPT)的線粒體數(shù)量，甚至完全阻止了 MPT。減少經(jīng)歷MPT的線粒體數(shù)量以及阻 止MPT是很重要的，因?yàn)镸PT與哺乳動(dòng)物中多種常見的疾病和病癥相關(guān)。另外，哺乳動(dòng)物的 離體器官容易發(fā)生MPT。這些疾病和病癥具有特殊的臨床意義，因?yàn)樵谏哪承╇A段它們 影響很大比例的人群。
[0044] 肽
[0045] 本發(fā)明中有用的芳香族陽離子肽是水溶性和高極性的。盡管有這些性質(zhì)，但這些 肽能夠很容易穿過細(xì)胞膜。
[0046] 本發(fā)明中有用的芳香族陽離子肽包括最少3個(gè)通過肽鍵共價(jià)連接的氨基酸，并且 優(yōu)選包括最少4個(gè)通過肽鍵共價(jià)連接的氨基酸。
[0047] 本發(fā)明的芳香族陽離子肽中的氨基酸最大數(shù)目為通過肽鍵共價(jià)連接的約20個(gè)氨 基酸。優(yōu)選的氨基酸的最大數(shù)目為約12個(gè)，更優(yōu)選為約9個(gè)，并且最優(yōu)選為約6個(gè)。最佳 的狀況是，存在于該肽中的氨基酸數(shù)目為4。
[0048] 本發(fā)明中有用的芳香族陽離子肽中的氨基酸可以是任何氨基酸。術(shù)語"氨基酸"在 本文中是指含有至少一個(gè)氨基和至少一個(gè)羧基的任何有機(jī)分子。優(yōu)選地，至少一個(gè)氨基位 于相對(duì)于羧基的α位。
[0049] 這些氨基酸可以是天然存在的。天然存在的氨基酸包括，例如在哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì) 中自然發(fā)現(xiàn)的20種最常見的左旋（L)氨基酸，即丙氨酸（Ala)、精氨酸（Arg)、天冬酰胺 (Asn)、天冬氨酸（Asp)、半胱氨酸（Cys)、谷氨酰胺（Gln)、谷氨酸（Glu)、甘氨酸（Gly)、組氨 酸（His)、異亮氨酸（Ileu)、亮氨酸（Leu)、賴氨酸（Lys)、蛋氨酸（Met)、苯丙氨酸（Phe)、脯 氨酸（Pro)、絲氨酸（Ser)、蘇氨酸（Thr)、色氨酸（Trp)、酪氨酸（Tyr)和纈氨酸（Val)。
[0050] 其它天然存在的氨基酸包括例如在與蛋白質(zhì)合成無關(guān)的代謝過程中合成的氨基 酸。例如，在產(chǎn)生尿的過程中哺乳動(dòng)物代謝合成的鳥氨酸和瓜氨酸這些氨基酸。
[0051] 本發(fā)明中可用的肽可以含有一個(gè)或多個(gè)非天然存在的氨基酸。這些非天然存在的 氨基酸可以是左旋（L)、右旋（D)或它們的混合物。最佳的狀況是該肽不含有天然存在的氨 基酸。
[0052] 非天然存在的氨基酸是那些通常不是在生物體正常代謝過程中合成，并且不是在 蛋白質(zhì)中天然存在的氨基酸。另外，本發(fā)明中優(yōu)選的可用的非天然存在的氨基酸也不被普 通的蛋白酶識(shí)別。
[0053] 非天然存在的氨基酸可以出現(xiàn)在該肽的任何位置。例如，該非天然存在的氨基酸 可以位于N-末端，C-末端或在N-末端和C-末端之間的任何位置。
[0054] 例如，該非天然存在的氨基酸可以包括烷基、芳基或烷芳基這些基團(tuán)。烷基氨基酸 的一些例子包括：α-氨基丁酸、β-氨基丁酸、Y-氨基丁酸、δ-氨基戊酸和ε-氨基己 酸。芳基氨基酸的一些例子包括鄰、間和對(duì)氨基苯甲酸。烷芳基氨基酸的一些例子包括鄰、 間和對(duì)氨基苯乙酸，和Y-苯基氨基丁酸。
[0055] 非天然存在的氨基酸也包括天然存在的氨基酸的衍生物。天然存在的氨基酸的衍 生物可以包括如向天然存在的氨基酸上添加一個(gè)或多個(gè)化學(xué)基團(tuán)。
[0056] 例如，一個(gè)或多個(gè)化學(xué)基團(tuán)可以被添加到苯丙氨酸或酪氨酸殘基的芳香環(huán)的2'、 3'、4'、5'或6'位中的一個(gè)或多個(gè)位置上，或色氨酸殘基的苯并環(huán)的4'、5'、6'或7'位中的 一個(gè)或多個(gè)位置上。該基團(tuán)是可以添加到芳香環(huán)上的任何化學(xué)基團(tuán)。這些基團(tuán)的一些例子 包括支鏈或直鏈的C 1-C4烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基或叔丁基，C1-C 4 烴氧基（即烷氧基），氨基，C1-C4烷基胺和C1-C4二烷基胺（例如甲胺、二甲胺），硝基，羥基， 鹵素（即氟基、氯基、溴基或碘基）。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些特殊 例子包括正纈氨酸（Nva)，正亮氨酸（Nle)和羥脯氨酸（Hyp)。
[0057] 本發(fā)明的方法中在有用肽中的氨基酸修飾的另一個(gè)例子是該肽的天冬氨酸或谷 氨酸殘基的羧基衍生化。衍生化的一個(gè)例子是用氨或用如甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺這些 伯胺或仲胺酰胺化。衍生化的另一個(gè)例子包括用如甲醇或乙醇酯化。
[0058] 另外一種這樣的修飾包括賴氨酸、精氨酸或組氨酸殘基的氨基衍生化。例如，這些 氨基可以被?；Ｒ恍┖线m的?；?，例如包括任何上述C 1-C4烷基的苯甲?；蛲轷?基，如乙?；虮；?。
[0059] 優(yōu)選的是非天然存在的氨基酸對(duì)普通蛋白酶是穩(wěn)定的，更優(yōu)選的是對(duì)其不敏感。 對(duì)蛋白酶穩(wěn)定或不敏感的非天然存在的氨基酸的例子包括任何上述天然存在的L-氨基酸 的右旋（D-)型，以及L-和/或D-型非天然存在的氨基酸。D-氨基酸不是正常存在于蛋白 質(zhì)中的，盡管在某些抗菌肽中發(fā)現(xiàn)過它們，但它們是通過除細(xì)胞正常的核糖體蛋白合成器 以外的工具合成的。本文中所使用的這些D-氨基酸可以認(rèn)為是非天然存在的氨基酸。
[0060] 為了使對(duì)蛋白酶的敏感性降到最低，本發(fā)明的方法中有用的肽應(yīng)該具有少于5 個(gè)，優(yōu)選少于4個(gè)，更優(yōu)選少于3個(gè)，且最優(yōu)選少于2個(gè)毗鄰的可以被普通蛋白酶識(shí)別的 L-氨基酸，無論這些氨基酸是否是天然存在的或非天然存在的。最佳的情況是，該肽僅含有 D-氨基酸,而不含有L-氨基酸。
[0061] 如果該肽含有蛋白酶敏感的氨基酸序列，則至少這些氨基酸中的一個(gè)優(yōu)選為非天 然存在的D-氨基酸（右旋精氨酸），從而提供蛋白酶抗性。蛋白酶敏感序列的例子包括容 易被普通蛋白酶如肽鏈內(nèi)切酶和胰蛋白酶切開的兩個(gè)或多個(gè)毗鄰的堿性氨基酸。堿性氨基 酸的例子包括精氨酸、賴氨酸和組氨酸。
[0062] 在生理pH下該芳香族陽離子肽具有相對(duì)于該肽中氨基酸殘基總數(shù)的最小數(shù)目的 凈正電荷是很重要的。生理PH下凈正電荷的最小數(shù)目下文中表示為（p m)。該肽中氨基酸 殘基總數(shù)下文中表示為（r)。
[0063] 下文討論的凈正電荷的最小數(shù)目都是在生理pH條件下。術(shù)語"生理pH"在本文中 是指哺乳動(dòng)物身體的組織和器官細(xì)胞中的正常pH。例如人的生理pH通常約為7. 4,但是哺 乳動(dòng)物中正常的生理pH可以是從約7. 0到約7. 8之間的任意pH。
[0064] "凈電荷"本文中是指由存在于該肽中的氨基酸所攜帶的正電荷數(shù)和負(fù)電荷數(shù)的 差值。在本說明書中，應(yīng)當(dāng)理解為凈電荷是在生理PH下測(cè)量的。在生理pH下具有正電荷 的天然存在的氨基酸包括L-賴氨酸、L-精氨酸和L-組氨酸。在生理pH下具有負(fù)電荷的 天然存在的氨基酸包括L-天冬氨酸和L-谷氨酸。
[0065] 通常，肽具有一個(gè)正電荷的N-末端氨基和一個(gè)負(fù)電荷的C-末端羧基。在生理 PH下電荷彼此抵消。作為計(jì)算凈電荷的一個(gè)例子，肽：酪氨酸-精氨酸-苯丙氨酸-賴氨 酸-谷氨酸-組氨酸-色氨酸-精氨酸（Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-Arg)具有一個(gè)負(fù) 電荷氨基酸（即，谷氨酸）和四個(gè)正電荷氨基酸（即，兩個(gè)精氨酸殘基，一個(gè)賴氨酸和一個(gè) 組胺酸）。因此上述肽含有3個(gè)凈正電荷。
[0066] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，該芳香族陽離子肽在生理pH下凈正電荷最小數(shù)目（pm) 和氨基酸殘基總數(shù)（r)之間的關(guān)系為：其中3Pm是小于或等于r+Ι的最大數(shù)。在該實(shí)施例 中，凈正電荷最小數(shù)目（Pm)和氨基酸殘基總數(shù)（r)之間的關(guān)系如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種在有需要的哺乳動(dòng)物中減少經(jīng)歷線粒體通透性改變（MPT)的線粒體數(shù)量或防 止線粒體通透性改變的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物有效量的芳香族陽離子肽，所述 芳香族陽離子肽具有： (a) 至少一個(gè)凈正電荷； (b) 最少4個(gè)氨基酸； (c) 最多大約20個(gè)氨基酸； (d) 所述凈正電荷數(shù)的最小數(shù)目（pm)與所述氨基酸殘基的總數(shù)（r)之間的關(guān)系為，其 中3pm是小于或等于r+Ι的最大數(shù)；以及 (e) 所述芳香基團(tuán)的最小數(shù)目（a)和凈正電荷總數(shù)（pt)之間的關(guān)系為：其中2a是小于 或等于Pt+1的最大數(shù)，除非當(dāng)a是1時(shí)，pt也可以是1。
【文檔編號(hào)】A61P21/00GK104225574SQ201410412683
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2004年2月3日 優(yōu)先權(quán)日:2003年2月4日
【發(fā)明者】黑茲爾·H·塞托, 趙克勝, 彼得·W·席勒 申請(qǐng)人:科內(nèi)爾研究基金會(huì), 蒙特利爾臨床研究學(xué)院