辣木葉中黃酮成分的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了辣木葉中黃酮成分的提取方法，它包括如下操作步驟：取辣木葉粉以50～60％v/v乙醇為溶劑，料液比為1:50～60g/ml，進(jìn)行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為300～400W，提取時(shí)間為6～10min。本發(fā)明還提供了該提取方法制備的提取物。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，以相同的辣木葉粉為樣品，微波萃取的方法所得辣木葉總黃酮含量高于回流提取方法，同時(shí)大大縮短了提取時(shí)間，節(jié)約了提取時(shí)所耗的水和電，降低提取成本。
【專利說明】辣木葉中黃酮成分的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及辣木葉中黃酮成分的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]辣木(moriga oleifera)屬辣木科、辣木屬，起源于印度北部的亞喜馬拉雅山地帶。印度和非洲國家常用于治療糖尿病、高血壓、心血管病、肥胖癥等疾病。近年來，辣木在我國廣東、云南、海南和四川等都有引種栽培。2012年辣木葉被批準(zhǔn)為新資源食品，各種辣木產(chǎn)品開發(fā)火熱，廣泛應(yīng)用于食品、保健品、水質(zhì)凈化、化妝品等領(lǐng)域。
[0003]陳瑞嬌等以70%乙醇為提取溶劑，提取溫度60°C，提取時(shí)間lh，提取3次，提取液中黃酮含量達(dá)到3.5% (陳瑞嬌等，辣木葉總黃酮乙醇提取工藝的研究，食品研究與開發(fā)[J]，2007，28 (4): 29-31)。孫鳴燕等，以70%乙醇為提取溶劑，提取溫度80°C，提取時(shí)間
1.5h，提取次數(shù)3次，提取液中總黃酮含量達(dá)到6.593% (孫鳴燕等，辣木葉總黃酮提取方法的優(yōu)化研究，韶關(guān)學(xué)院學(xué)報(bào)[J]，2007，28 (12):88-92) 0然而，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用回流提取的時(shí)間長，能耗成本較高。
[0004]微波萃取是利用微波能使細(xì)胞內(nèi)部的溫度迅速上升，細(xì)胞內(nèi)部壓力增高使細(xì)胞破裂，藥材內(nèi)有效成分流出，并在較低的溫度下溶于萃取液。該方法加熱均勻，熱效率較高，提取速度快。目前還未見使用微波萃取技術(shù)對辣木葉總黃酮進(jìn)行提取的相關(guān)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種辣木葉中黃酮成分的微波提取方法。
[0006]具體的，本發(fā)明提供了辣木葉中黃酮成分的提取方法，它包括如下操作步驟:
[0007]取辣木葉粉以50?60% v/v乙醇為溶劑，料液比為1:50?60g/ml，進(jìn)行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為300?400W，提取時(shí)間為6?lOmin。
[0008]本發(fā)明研究表明，各提取條件參數(shù)對提取效率有顯著影響:
[0009](I)乙醇體積分?jǐn)?shù)在50-60%時(shí)，提取量較大，而乙醇濃度再增加時(shí)，提取量降低。
[0010](2)當(dāng)提取時(shí)間約為Smin時(shí)，總黃酮得率最高，提取時(shí)間稍短，提取不完全，而時(shí)間過長，部分黃酮類化合物可能被破壞，而導(dǎo)致得率下降。
[0011](3)隨著提取功率增加，總黃酮得率增加，功率達(dá)到約400w時(shí)最高，高于400w時(shí)則下降。在微波提取過程中，電磁波把能量直接傳遞到原料內(nèi)部，使之瞬時(shí)加熱，當(dāng)提取功率過高，使辣木葉中的黃酮類化合物分解或異構(gòu)化，導(dǎo)致總黃酮得率降低。
[0012](4)料液比從1:30至1:60過程中，總黃酮得率逐漸提高，而溶劑用量再增加，總黃酮得率逐漸降低。
[0013]進(jìn)一步地，乙醇濃度為58?60% v/v，料液比為1:58?60g/ml，微波功率為390?400W，提取時(shí)間為8.0?8.5min。
[0014]更進(jìn)一步地，乙醇濃度為58.45?60% v/v，料液比為1:59?60g/ml，微波功率為397.15?400W，提取時(shí)間為8.13?8.50min。
[0015]優(yōu)選地，乙醇濃度為58.45% v/v，料液比為1:59g/ml，微波功率為397.15W，提取時(shí)間為8.13min。
[0016]在本發(fā)明的一個(gè)【具體實(shí)施方式】中，為了避免低極性成分對黃酮提取結(jié)果的影響因素，從而較為準(zhǔn)確的判定提取工藝優(yōu)劣，在微波萃取前對辣木葉粉選擇了脫脂處理。當(dāng)然，即便不使用脫脂處理，本發(fā)明優(yōu)選的最佳方案，仍然最適合辣木葉黃酮的微波萃取。
[0017]其中，脫脂處理的方法如下:
[0018]取辣木葉粉，以石油醚或乙醚為溶劑提取，取提取后的辣木葉粉，揮干溶劑，即可。
[0019]更進(jìn)一步地，所述溶劑為石油醚。
[0020]優(yōu)選地，所述石油醚沸程為60_90°C。
[0021 ] 進(jìn)一步地，提取方法選自索氏提取。
[0022]優(yōu)選地，索氏提取時(shí)間為8h。
[0023]本發(fā)明還提供了上述提取方法制備的辣木葉提取物。
[0024]本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，以相同的辣木葉粉為樣品，微波萃取的方法所得辣木葉總黃酮含量高于回流提取方法，同時(shí)大大縮短了提取時(shí)間，節(jié)約了提取時(shí)所耗的水和電，降低提取成本。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1乙醇濃度對辣木葉總黃酮含量的影響
[0026]圖2提取時(shí)間對辣木葉總黃酮含量的影響
[0027]圖3微波功率對辣木葉總黃酮含量的影響
[0028]圖4料液比對辣木葉總黃酮含量的影響
[0029]圖5辣木葉微波萃取響應(yīng)面曲線及3D圖

【具體實(shí)施方式】
[0030]實(shí)施例1本發(fā)明提取方法
[0031]取辣木葉粉以58.45% v/v乙醇為溶劑，料液比為1:59g/ml，進(jìn)行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為397.15W，提取時(shí)間為8.13min。
[0032]實(shí)施例2本發(fā)明提取方法
[0033]取辣木葉粉以60% v/v乙醇為溶劑，料液比為l:60g/ml，進(jìn)行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為400W，提取時(shí)間為8.5min。
[0034]實(shí)施例3本發(fā)明提取方法
[0035]取辣木葉粉以58% v/v乙醇為溶劑，料液比為1:58g/ml，進(jìn)行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為390W，提取時(shí)間為8.0min。
[0036]實(shí)施例4本發(fā)明提取方法
[0037]取辣木葉粉，以石油醚索式回流脫脂處理8h，取提取后的辣木葉粉，揮干溶劑，再以58.45% v/v乙醇為溶劑,料液比為l:59g/ml,進(jìn)行微波萃取,收集提取液，即可；其中，微波功率為397.15W，提取時(shí)間為8.13min。
[0038]實(shí)施例5本發(fā)明提取方法的工藝考察
[0039]1.材料與方法
[0040]1.1材料與儀器
[0041]辣木葉粉(moriga oleifera),購自云南景洪。
[0042]為了避免辣木葉中其他低極性成分對黃酮提取工藝考察結(jié)果的影響，本發(fā)明在工藝考察過程之前，選擇對辣木葉粉進(jìn)行脫脂處理，并使用同批次處理后的原料進(jìn)行考察試驗(yàn)。
[0043]本發(fā)明使用的辣木葉，均需要脫脂處理，可以采用中藥化學(xué)或天然植物化學(xué)中常用的的脫脂方法，例如用低極性溶劑提取，所用的低極性溶劑可以是石油醚、乙醚等。本發(fā)明中主要采用石油醚進(jìn)行脫脂處理，具體方法為:
[0044]取辣木葉粉，以石油醚索式回流提取8h，取提取后的辣木葉粉，揮干溶劑，即可。使用的石油醚的沸程可以是60-90°C，也可以是30-60°C。
[0045]蘆丁:中國生物制品檢定所。
[0046]電腦微波超聲波紫外光組合催化合成儀:北京祥鶴科技發(fā)展有限公司XH-300UL型；
[0047]紫外可見分光光度計(jì):上海美譜達(dá)儀器有限公司，UV-1100型；
[0048]1.2試驗(yàn)方法
[0049]1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
[0050]精密稱取蘆丁對照品10mg，置50ml容量瓶中，用30%乙醇定容至刻度，搖勻，即得0.2mg/mL的對照液。精密吸取對照品溶液0.0、1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml，分別置1ml容量瓶中，各加70 %乙醇至5ml，搖勻，加5 %亞硝酸鈉0.5ml，搖勻，放置6min，加1 %硝酸鋁0.5ml，搖勻，放置6min，再加4%氫氧化鈉至刻度，搖勻，放置15min，在51nm波長下測定吸光度，以試劑空白作參比，所得吸光值與濃度作線性回歸方程。
[0051]1.2.2回流提取辣木葉黃酮及含量測定
[0052]方法一:
[0053]按照陳瑞嬌的方法，準(zhǔn)確稱定已去脂辣木葉樣品30g，加入70%乙醇，液料比20:1,60°C回流提取3次，每次lh。提取液過濾，合并濾液，即得回流提取總黃酮(Flavonoidby reflux extract1n, FRE)。冷卻至室溫后,取濾液lml,按照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液吸光值測定方法測定吸光值，測3次取平均值4。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出總黃酮含量。
[0054]方法二:
[0055]按照孫鳴燕的方法，準(zhǔn)確稱定已去脂辣木葉樣品30g，加入70 %乙醇，液料比20:1，80°C回流提取3次，每次1.5h。提取液過濾，合并濾液，即得回流提取總黃酮。冷卻至室溫后，取濾液1ml，按照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液吸光值測定方法測定吸光值，測3次取平均值A(chǔ)p根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出總黃酮含量。
[0056]1.2.3微波萃取辣木葉黃酮及含量測定
[0057]準(zhǔn)確稱定已去脂辣木葉樣品，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)的條件加入溶劑，置微波提取儀中，儀器設(shè)定為微波功率恒定模式，超聲波功率為200w，磁力攪拌。反應(yīng)完成后過濾，即得微波萃取總黃酮(Flavonoid by microwave extract1n, FME)。冷卻至室溫后取濾液lml,按照測蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液吸光值方法測定吸光值，測3次取平均值A(chǔ)2。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出總黃酮含量。
[0058]1.2.4辣木葉黃酮得率計(jì)算根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，由吸光值A(chǔ)計(jì)算出黃酮質(zhì)量濃度C，辣木葉總黃酮得率F則由下式計(jì)算:
[0059]F1 = C1XlOXV1ZM1......(I)
[0060]式(I)為回流提取總黃酮得率計(jì)算公式=C1為黃酮質(zhì)量濃度mg/ml ; 10為10倍J1為濾液體積W1為樣品質(zhì)量；
[0061]F2 = C2X10X50/M2......(2)
[0062]式⑵為微波萃取總黃酮得率計(jì)算公式:C2為黃酮質(zhì)量濃度mg/ml ; 10為10倍；50為50ml，M2為樣品質(zhì)量。
[0063]1.2.5響應(yīng)面法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
[0064]在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以醇濃度、微波功率、提取時(shí)間、液料比等因素為考察變量，以總黃酮得率F為響應(yīng)值，應(yīng)用DeSign-EXpert8.0.6軟件，優(yōu)化微波提取辣木葉總黃酮得工藝條件。實(shí)驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見表1.
[0065]表I Box-Behnken設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)因素水平
[0066]

H孝
X1醇濃度 X2微波功率 X3提取時(shí)間 X4液料比
水干
(%)(W)(min)(mL/g)
-150300650:1
060400860:1
1705001070:1
[0067]2結(jié)果與分析
[0068]2.1線性回歸方程
[0069]根據(jù)各濃度蘆丁對應(yīng)的吸光值，計(jì)算得到線性回歸C = 0.0817A+0.0018,相關(guān)系數(shù) R2 = 0.9998.
[0070]2.2回流提取辣木葉黃酮含量
[0071]方法一:經(jīng)回流后的提取液過濾，平均吸光值為0.499，體積為1575ml，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得總黃酮含量為2.05%。
[0072]方法二:經(jīng)回流后的提取液過濾，平均吸光值為0.375，體積為1590ml，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得總黃酮含量為1.72%。
[0073]2.2單因素實(shí)驗(yàn)
[0074]2.2.1乙醇濃度的影響準(zhǔn)確稱取Ig辣木葉粉5份，分別加入50%、60%、70%、80%、90%乙醇微波提取，微波功率200w，提取時(shí)間6min，液料比50:1，結(jié)果見圖1。
[0075]由圖1可見，乙醇體積分?jǐn)?shù)在50-70%時(shí)，提取量最大，而乙醇濃度再增加時(shí)，提取量降低。因此選擇體積分?jǐn)?shù)為60%。
[0076]2.2.2提取時(shí)間的影響準(zhǔn)確稱取Ig辣木葉粉5份，加入60%乙醇，微波功率200w，液料比 50:1,分別提取 6min、8min、lOmin、12min、14min。結(jié)果見圖 2。
[0077]由圖2可見，當(dāng)提取時(shí)間為Smin時(shí)，總黃酮得率最高，低于Smin時(shí)，提取不完全，而高于Smin時(shí)，部分黃酮類化合物可能被破壞，而導(dǎo)致得率下降。因此，選擇提取時(shí)間為8min。
[0078]2.2.3微波功率的影響準(zhǔn)確稱取Ig辣木葉粉5份，加入60 %乙醇，液料比50:1，分別于微波功率100w、200w、300w、400w、500w，提取8min。結(jié)果見圖3。
[0079]由圖3可見，隨著提取功率增加，總黃酮得率增加，功率達(dá)到400w時(shí)最高，高于400w時(shí)則下降。在微波提取過程中，電磁波把能量直接傳遞到原料內(nèi)部，使之瞬時(shí)加熱，當(dāng)提取功率過高，使黃酮類化合物分解或異構(gòu)化，導(dǎo)致總黃酮得率降低。因此，選擇提取功率為 400w。
[0080]2.2.4料液比的影響取60%乙醇50ml，按照1:70、1:60、1:50、1:40、1:30加入辣木葉粉，微波功率400w，提取8min，結(jié)果見圖4。
[0081]由圖4可見，當(dāng)料液比為1:60時(shí)，總黃酮得率最高，因此選擇料液比為1:60。
[0082]2.3響應(yīng)面法對辣木葉總黃酮微波提取工藝參數(shù)的優(yōu)化
[0083]試驗(yàn)分析方案及結(jié)果見表2
[0084]表2試驗(yàn)方案與結(jié)果
[0085]

【權(quán)利要求】
1.辣木葉中黃酮成分的提取方法，其特征在于:它包括如下操作步驟: 取辣木葉粉以50?60% v/v乙醇為溶劑，料液比為1:50?60g/ml，進(jìn)行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為300?400W，提取時(shí)間為6?lOmin。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:乙醇濃度為58?60%v/v，料液比為1:58?60g/ml，微波功率為390?400W，提取時(shí)間為8.0?8.5min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于:乙醇濃度為58.45?60% v/v，料液比為I:59?60g/ml，微波功率為397.15?400W，提取時(shí)間為8.13?8.50min。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于:乙醇濃度為58.45%v/v，料液比為1:59g/ml，微波功率為397.15W，提取時(shí)間為8.13min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:在微波萃取前，對辣木葉粉進(jìn)行脫脂處理，具體方法如下: 取辣木葉粉，以石油醚或乙醚為溶劑提取，取提取后的辣木葉粉，揮干溶劑，即可。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取方法，其特征在于:所述溶劑為石油醚。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的提取方法，其特征在于:所述石油醚沸程為60-90°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取方法，其特征在于:提取方法選自索氏提取。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的提取方法，其特征在于:索氏提取時(shí)間為8h。
10.權(quán)利要求1?9任意一項(xiàng)所述提取方法制備的辣木葉提取物。
【文檔編號】A61K36/185GK104173393SQ201410366619
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年7月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月29日
【發(fā)明者】汪開毓, 吉莉莉, 陳德芳, 趙玲, 黃小麗, 楊倩, 陽磊 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)