林蛙提取中藥復(fù)合制劑及其在制備治療痤瘡的藥物及化妝品中的用途
【專利摘要】一種林蛙提取中藥復(fù)合制劑及其在制備治療痤瘡的藥物及化妝品中的用途，屬于中藥學(xué)制劑【技術(shù)領(lǐng)域】。是將林蛙干除雜除塵后粉碎，再加入復(fù)合酶水解液，取離心后的上層上清液；將剩余混合物研磨后剪切，噴霧干燥成粉末狀，將該超微粉加入到醋酸中超聲后紗網(wǎng)過濾，離心后取上清液減壓濃縮；從而得到多糖、抗菌肽和鈣離子的混合物；將上述物質(zhì)混合得到林蛙提取混合液，再與復(fù)合藥物提取液混合，從而得到林蛙提取中藥復(fù)合制劑；林蛙提取中藥復(fù)合制劑是中藥制劑，無任何副作用，并且能夠給予細(xì)胞充足營養(yǎng)，修復(fù)受損細(xì)胞；抗菌肽可結(jié)合鈣離子，增強殺菌效果。本發(fā)明對皮膚粘膜無刺激、殺菌速度快、病灶部位愈合快、使用簡便、無色無味，適合不同年齡人群使用。
【專利說明】林蛙提取中藥復(fù)合制劑及其在制備治療痤瘡的藥物及化妝品中的用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥學(xué)制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及林蛙提取中藥復(fù)合制劑及其在制備治療痤瘡的藥物及化妝品中的用途。

【背景技術(shù)】
[0002]痤瘡是好發(fā)于毛囊皮脂腺的慢性炎癥性疾病，好發(fā)于顏面、胸背，以粉刺、丘疹、膿疤、結(jié)節(jié)、囊腫及疤痕為特征，常伴皮脂溢出。多發(fā)于青年男女，又被稱為“青春痘”，古代稱面瘡、酒刺、肺風(fēng)等。但隨著生活壓力加大和綜合因素的影響，痤瘡的發(fā)病年齡有提高的趨勢。病情纏綿難愈且留下癱痕，不僅影響美觀，還給患者帶來嚴(yán)重的精神負(fù)擔(dān)，影響工作和社交活動。
[0003]目前，國內(nèi)對林蛙皮抗菌肽進(jìn)行了研究，申報的專利也在增多，以林蛙為關(guān)鍵詞，檢索國內(nèi)外專利，沒有查到國外關(guān)于林蛙的專利，國內(nèi)專利中CN1216768A “生物抗菌肽及其制備方法”是涉及一種具有廣譜抗菌活性的林蛙蛙皮生物抗菌肽及其制備方法；CN1583166A “林蛙抗菌肽噴霧劑及其制備方法”、CN1583165A “林蛙抗菌肽凝膠劑及其制備方法”是涉及保護(hù)林蛙皮膚抗菌肽以噴霧劑和凝膠劑兩種形式用于臨床皮膚感染、燒傷燙傷感染領(lǐng)域；CN1679632A“林蛙鎮(zhèn)痛水提物及其制備方法及其制備方法”是關(guān)于保護(hù)從林蛙皮中提取的一種具有鎮(zhèn)痛作用的林蛙鎮(zhèn)痛水提物及其制備技術(shù)。均是以林蛙皮為原料，提取了林蛙皮抗菌肽。CN103073628A—種利用超聲波從林蛙體中提取抗菌肽的生產(chǎn)制備方法是以林蛙體為原料采用超聲提取抗菌肽，提取的抗菌肽是分子量為4KDa最適pH值為3.5，等電點Pl值為8.0?10.5的堿性多肽。以上專利均以抗菌肽為保護(hù)內(nèi)容，申請保護(hù)其在抗菌方面的作用，所述抗菌是指抵抗細(xì)菌和真菌包括大腸桿菌、綠膿桿菌等革蘭氏陰性菌和金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌及臨床耐藥菌克雷伯桿菌、鮑曼不動桿菌、白色念珠菌、酵母菌的一種或多種；并且抗菌治療途徑均為外用給藥。CN103432058A “林蛙膠原蛋白液及其制備工藝”是以林蛙皮提取物、西洋參皂甙、五味子浸出液、蘆薈提取物和水配制而成；CN102492760A “一種利用復(fù)合酶生產(chǎn)活性東北林蛙膠原蛋白低聚肽的方法”是以干東北林蛙皮為原料；CN102229972A “制備林蛙皮膠原蛋白肽的方法”是以林蛙皮為原料，以上三個專利均是以林蛙皮為原料或主要原料提取林蛙皮中所含的膠原蛋白。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的之一提供一種林蛙提取中藥復(fù)合制劑，其由如下步驟制備得到:
[0005](I)君藥林蛙提取混合液的制備
[0006]①45?65重量份林蛙干(林蛙干為除脂除卵的林蛙干體)除雜除塵后分別經(jīng)20?100目粉碎，使林蛙干粉碎物的粒徑在500 μ m以下，按照Ig:1?1mL的比例加入復(fù)合酶水解液，復(fù)合酶水解液中含木瓜蛋白酶I?5wt%、胰蛋白酶2?4wt%，風(fēng)味蛋白酶
I?3wt%，酶解溫度為50?55 °C，酶解時間為I?2h，酶解pH為7.0?7.5，而后85?90°C下滅酶5?15min,將混合物在溫度10?30°C時離心,離心時間為I?5min,離心轉(zhuǎn)速為2000?4000rpm，取離心后混合液體積20?40%的上層上清液，此時上層上清液中含有林蛙干短肽膠原蛋白(由于離心力的作用，短鏈膠原蛋白將集中在上層上清液中，長鏈蛋白分子將會集中在混合液的中下層剩余混合物中)，其分子量為2?3KDa，等電點pi值為
7.5?7.8，其中堿性氨基酸(精氨酸、賴氨酸、組氨酸)占上層上清液的11.04?12.89%(質(zhì)量比)，酸性氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)占上層上清液的17.99?19.13% (質(zhì)量比)。
[0007]②將上清后剩余混合物(原體積的60?80% )，放入膠體磨，研磨2?15min，使混合物的平均粒徑在300 μ m以下；將混合物放入高剪切分散乳化機內(nèi)，剪切I?15min，使混合物平均粒徑在100?200 μ m之間，將混合物進(jìn)行噴霧干燥成粉末狀，此時得到林蛙干提取短肽膠原蛋白后剩余的纖維、骨質(zhì)等物質(zhì)的超微粉；
[0008]將上述超微粉加入到質(zhì)量濃度為2?10%醋酸中，醋酸與超微粉的體積質(zhì)量比為10?40mL:lg，在4?30°C下超聲5?75min ;再經(jīng)150 μ m紗網(wǎng)過濾，將150 μ m紗網(wǎng)上面未過濾物質(zhì)加入質(zhì)量體積比為Ig:1?8mL的0.01?0.03mol/L的氫氧化鈉，進(jìn)行微波提取，微波功率為500?600W，微波時間3?9min，再次經(jīng)150 μ m紗網(wǎng)過濾；合并兩次濾液，30?50°C下攪拌10?30min,攪拌速度為100?200rpm ;攪拌后的濾液離心,離心溫度為4?30°C，離心時間為2?40min，離心轉(zhuǎn)速為2000?15000rpm ;取上清，減壓濃縮，壓力為600?700托，溫度為65?70°C，濃縮體積比為8?40:1 ;此時得到多糖、抗菌肽和鈣離子的混合物，多糖的分子量為I?5KDa ;抗菌肽的分子量為I?3KDa，其等電點pi值為
7.5?8.0，且其中堿性氨基酸(精氨酸、賴氨酸、組氨酸)占多糖、抗菌肽和鈣離子的混合物的11.28?13.05% (質(zhì)量比)，酸性氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)占多糖、抗菌肽和鈣離子的混合物的10.01?11.47% (質(zhì)量比)；
[0009]③將步驟①和步驟②的產(chǎn)物混合，得到林蛙提取混合液；
[0010](2)復(fù)合藥物提取液的制備
[0011]①稱取20?30重量份灰葡巴、I?3重量份蒼術(shù)、I?2重量份百部、I?2重量份藿香、I?3重量份金銀花、I?重量2份牛膝，混合后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)90?100 %的乙醇中浸泡I?10h，乙醇的體積與上述物質(zhì)質(zhì)量和的比例為I?20mL:lg ;然后100?300 μ m紗網(wǎng)過濾，濾液15?30°C、3000?6000rpm條件下離心10?20min,去沉淀后，85?100°C加熱濃縮，濃縮體積比為24?8:1，得乙醇提取液；
[0012]②稱取I?3重量份五倍子、I?3重量份苦參、I?3重量份馬齒覓、I?2重量份蛇床子、I?3重量份黃柏、I?3重量份薄荷葉、I?3重量份憲活、I?2重量份防己、I?3重量份白癖皮、I?2重量份胡黃連、I?2重量份地膚子、I?3重量份紅花、I?2重量份桂枝、I?3重量份鐵冬青，混合后加入水浸泡I?24h，水的體積與上述物質(zhì)質(zhì)量和的比例為10?25mL:lg ;然后100?300 μ m紗網(wǎng)過濾，15?30°C、3000?7000rpm條件下離心10?20min，去沉淀后，85?100°C加熱濃縮，濃縮體積比為24?8:1，得水提取液；
[0013]③將上述乙醇提取液與水提取液混合，攪拌10?30min，攪拌速度為100?400rpm，得復(fù)合藥物提取液；
[0014](3)將步驟(I)制得的林蛙提取混合液與步驟(2)制得的復(fù)合藥物提取液混合，從而得到林蛙提取中藥復(fù)合制劑。
[0015]所述林蛙提取中藥復(fù)合制劑可以與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑形成藥物制劑，所述制劑可以為噴霧劑、氣霧劑、霜劑、軟膏劑、凝膠劑或濕巾等外用劑型。
[0016]所述林蛙提取中藥復(fù)合制劑可以與化妝品上可接受的載體或賦形劑形成相關(guān)化妝品，所述化妝品可以為洗面奶、化妝水、潔膚水、平衡水、乳液、面霜、面膜、浴液等日化產(chǎn)品O
[0017]所述林蛙提取中藥復(fù)合制劑可以與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑形成藥物制劑，所述制劑可以為口服液、顆粒劑、混懸液、乳劑等口服劑型。
[0018]本發(fā)明的目的之二是提供一種治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合軟膏劑，其由如下步驟制備得到:
[0019](I)油相的制備:取5?15重量份石臘、2?5重量份單硬脂酸甘油脂、5?10重量份白凡士林、5?10重量份液體石臘、I?5重量份司盤40、I?5重量份乳化劑0P、1?3重量份對羥基苯甲酸乙酯研磨混勻，得到油相；
[0020](2)將步驟(I)制得的油相與由45?65重量份林蛙干按上述步驟制備得到的林蛙提取中藥復(fù)合制劑分別加熱至70?100°C，將林蛙提取中藥復(fù)合制劑加入到所述油相中，邊加料邊攪拌通過自體冷卻至室溫，再經(jīng)納米勻質(zhì)機勻質(zhì)4?7次，115?121°C滅菌10?30min ;然后將I?3重量份冰片加熱到70?100°C后過0.45 μ m膜，無菌條件下與上述滅菌后的產(chǎn)物混合均勻，即得到治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合軟膏劑。
[0021]用法用量:外用，每日早晚兩次患部涂敷，I?3mL/次，7天為I療程。
[0022]本發(fā)明的目的之三是提供一種治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合乳液，其由如下步驟制備得到:
[0023](I)將由45?65重量份林蛙干按上述步驟制備得到的林蛙提取中藥復(fù)合制劑與5?10重量份甘油、0.1?0.5重量份三乙醇胺、60?75重量份超純水充分混合，攪拌，攪拌溫度15?30°C，攪拌時間10?40min，攪拌速度為200?300rpm，形成水相；
[0024](2)將2?10重量份硬脂酸，I?5重量份十八醇，I?5重量份十六醇，2?10重量份白油，0.1?2重量份Twenn-60,1?5重量份羊毛脂,0.1?I重量份橄欖油混合，攪拌，攪拌溫度20?50°C,攪拌時間10?30min,攪拌速度為200?500rpm,形成油相；
[0025](3)將油相與水相在20?50°C下混合攪拌，再加入0.1?0.3重量份香精、0.01?0.1重量份布羅波爾、0.01?0.1重量份尼泊金丙酯，再次攪拌，攪拌溫度20?50°C，攪拌時間10?30min,攪拌速度為200?400rpm,經(jīng)納米勻質(zhì)機2?7次,既得林娃提取中藥復(fù)合乳液。
[0026]用法用量:外用，每日早晚兩次患部涂敷，I?3mL/次，7天為I療程。
[0027]本發(fā)明的目的之四是提供一種治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合面膜，其由如下方法制備得到:
[0028]將由45?65重量份林蛙干按上述步驟制備得到的林蛙提取中藥復(fù)合制劑與2?10重量份甘油、2?6重量份1，3-丁二醇、0.1?2重量份透明質(zhì)酸、I?5重量份熊果苷、0.1?2重量份卡波樹脂、0.1?I重量份泛醇、2?8重量份維生素C脂質(zhì)體、0.1?2重量份三乙醇胺、0.1?I重量份聚乙二醇-60氫化蓖麻油、0.1?2重量份尼泊金丙酯、0.1?0.5重量份茉莉香精和70?80重量份超純水混合，攪拌，攪拌溫度20?50°C，攪拌時間10?30min,攬祥速度為200?400rpm,攬祥后115?121°C滅菌10?20min ；自體冷卻至室溫后加入到放有無菌無紡布(15CmX15Cm)獨立包裝袋內(nèi)，密封即得林蛙提取中藥復(fù)合面膜。
[0029]本發(fā)明的目的之五是提供一種治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合口服制劑，其由如下步驟制備得到:
[0030](I)減壓濃縮:將由45?65重量份林蛙干按上述步驟制備得到的林蛙提取中藥復(fù)合制劑在減壓條件下進(jìn)行蒸餾，壓力在8X 13?3X 14帕，溫度為50?85°C，濃縮比為I?5:1，得濃縮液；
[0031](2)將I?5重量份醋酸鋅緩慢加入到濃縮液中，邊加料邊攪拌；加完后用0.lmol/L NaOH調(diào)節(jié)pH為6.2?6.5，攪勻后使其自然沉降，自體冷卻至室溫過夜；
[0032](3)0.45 μ m濾膜過濾后，向得到的澄清液中加入5?15重量份檸檬酸、5?25重量份蜂蜜、5?30重量份白砂糖，溫度在50?65°C時，100?200rpm攪拌，攪拌時間為10-25min，過濾，再向清液中加入5?15重量份黃原膠和5?15重量份山梨酸鉀，經(jīng)0.22 um濾膜精濾；
[0033](4)灌裝壓蓋:在無菌條件下灌裝，壓蓋封口 ；
[0034](5)滅菌:加熱到62?65°C，保持30?40min，自體冷卻至室溫即得林蛙提取中藥復(fù)合口服制劑。
[0035]用法用量:內(nèi)服,每日早晚兩次口服，20mL/次,7天為I療程。
[0036]本發(fā)明的積極效果在于:林蛙提取中藥復(fù)合制劑是中藥制劑，無任何副作用，所含短肽膠原蛋白在灰蔸巴多糖的作用下可更好的進(jìn)入正常細(xì)胞，給予細(xì)胞充足營養(yǎng)；抗菌肽可結(jié)合鈣離子，增強其對真菌細(xì)胞壁的破壞，使五倍子、苦參、馬齒莧、蛇床子、黃柏、薄荷葉、羌活、防己、蒼術(shù)、白癬皮、胡黃連、地膚子、百部、紅花、桂枝、藿香、金銀花等中藥的有效殺菌成分進(jìn)入真菌細(xì)胞達(dá)到殺菌效果；灰蔸巴、紅花、牛膝、鐵冬青等活血有效成分可與林蛙短肽膠原蛋白一同修復(fù)受損細(xì)胞。本發(fā)明對皮膚粘膜無刺激、殺菌速度快、病灶部位愈合快、使用簡便、無色無味，適合不同年齡人群使用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0037]圖1:林蛙提取混合液中上層上清液中所含短鏈膠原蛋白凝膠電泳圖。
[0038]采用Tricine電泳法測短肽膠原蛋白分子量，以索萊寶公司的超低分子量蛋白質(zhì)marker作為標(biāo)準(zhǔn)，得出所含短肽膠原蛋白分子量約為2?3KDa。
[0039]圖中左側(cè)為標(biāo)準(zhǔn)的marker，即標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白質(zhì)的電泳圖，由左向右依次為實施例一中林蛙提取混合液中上層上清液中所含短鏈膠原蛋白凝膠電泳圖；實施例二中林蛙提取混合液中上層上清液中所含短鏈膠原蛋白凝膠電泳圖；實施例三中林蛙提取混合液中上層上清液中所含短鏈膠原蛋白凝膠電泳圖；實施例四中林蛙提取混合液中上層上清液中所含短鏈膠原蛋白凝膠電泳圖；實施例五中林蛙提取混合液中上層上清液中所含短鏈膠原蛋白凝膠電泳圖。
[0040]圖2:多糖分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0041]以標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖Tl (分子量1000)、T3 (分子量3000)、Τ5 (分子量5000)、Τ10 (分子量10000)，藍(lán)葡聚糖(分子量2000000)為標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)S印hadex G-25凝膠柱(10cmX 1.5cm)以超純水洗脫，流速為1.2mL/min, 254nm檢測多糖分子量分布,計算出每種標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖糖峰洗脫體積。以分子量為200萬的藍(lán)葡聚糖和葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)糖來確定層析柱的外水體積Vo和總體積Vt，Ve為總體積減去外水體積。以Ve/Vt為橫坐標(biāo)，Ig(Mw)為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算多糖分子量的公式為:
[0042]Ig(Mw) = (K1 - K2) Ve/Vt
[0043]Mw:多糖分子量；
[0044]Ve:待測樣品的糖峰洗脫體積；
[0045]Vo:分子篩排阻層析柱的外水體積；
[0046]Vt:分子篩排阻層析柱的總體積；
[0047]KpK2S 常數(shù)。
[0048]以藍(lán)葡聚糖和不同分子量葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)制作得出多糖分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0049]圖3:林蛙提取混合液所含多糖經(jīng)S印hadex G_25凝膠柱層析得到的洗脫曲線。
[0050]采用凝膠層析制備方法檢測，用S印hadex G_25凝膠柱層析254nm下紫外檢測儀測定林蛙提取混合液洗脫曲線，得出洗脫體積Ve。將洗脫體積Ve，帶入公式Ig(Mw)=(K1 -K2) Ve/Vt，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖曲線(圖2所示曲線)，算出林蛙提取混合液所含多糖分子量Mw約為I?5Kda。
[0051 ] 圖4:混合多糖標(biāo)準(zhǔn)RP-HPLC分析圖譜。
[0052]采用高效液相色譜法測定繪制單糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，稱取多糖標(biāo)準(zhǔn)樣品，加入ImL無水鹽酸-甲醇，充N2封管后，100°C水解16h后吹干液體。甲醇解后的多糖標(biāo)準(zhǔn)樣品經(jīng)干燥后，加入2mol/L三氟乙酸2mL，120°C充N2封管水解3h，水解產(chǎn)物倒入蒸發(fā)皿中，加入適量無水乙醇45°C水浴蒸除三氟乙酸。PMP柱前衍生化及其處理，取0.5mL PMP試劑和0.5mL0.3mol/L的NaOH溶液于蒸發(fā)皿中，將干燥物溶解后取其中的0.1 mL于小離心管中，7 O °C水浴30min。進(jìn)行高效液相檢測。
[0053]高效液相色譜分析條件
[0054]儀器:Shimadzu LC_14ATvp液相色譜儀，附SPD-10AVD紫外檢測器
[0055]色譜柱:DIKMAInertsil 0DS-3 μ m(150X4.6mm)
[0056]檢測溫度:35°C
[0057]檢測波長:245nm
[0058]洗脫液:82%PBS (0.1M, pH7.0), 18% Acetonitrile (v/v)
[0059]流速:1.0mT ,/mi η
[0060]圖5:林蛙提取液所含多糖組分的RP-HPLC分析圖譜。
[0061]采用高效液相法分析其單糖組成情況，利用混合多糖的標(biāo)樣確定組分中單糖的比例。林蛙提取混合液中含有的單糖有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、巖藻糖、葡萄糖醛酸以及半乳糖醛酸，其中鼠李糖:甘露糖:半乳糖:葡萄糖:木糖:阿拉伯糖:巖藻糖的比例約為1:4:6:12:7:5:3(體積比)，糖醛酸含量中葡萄糖醛酸:半乳糖醛酸=
1:1(體積比)；
[0062]圖6:林蛙提取混合液中所含抗菌肽分子凝膠電泳圖。
[0063]采用Tricine電泳法測抗菌肽分子量，以索萊寶公司的超低分子量蛋白質(zhì)marker作為標(biāo)準(zhǔn)，得出所含抗菌肽分子量約為I?3Kda。
[0064]圖中左側(cè)為標(biāo)準(zhǔn)的marker，即標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白質(zhì)的電泳圖，由左向右依次為實施例一中林蛙提取混合液中所含抗菌肽分子凝膠電泳圖；實施例二中林蛙提取混合液中所含抗菌肽分子凝膠電泳圖；實施例三中林蛙提取混合液中上所含抗菌肽分子凝膠電泳圖；實施例四中林蛙提取混合液中所含抗菌肽分子凝膠電泳圖；實施例五中林蛙提取混合液中所含抗菌肽分子凝膠電泳圖。

【具體實施方式】
[0065]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述。本發(fā)明所用林蛙干產(chǎn)自是我國東北地區(qū)長白山麓。中國林娃(Rana temporaria chensinensis)俗稱田雞、哈士蟆、雪哈等,在動物分類上屬兩棲綱、無尾目、蛙科、蛙屬，是我國東北地區(qū)長白山麓的特有品種，屬于藥、食兩用的珍貴蛙種，并且資源豐富。
[0066]實施例一林蛙提取復(fù)合中藥制劑的制備
[0067](I)林蛙提取混合液的制備
[0068]將林蛙干54g (林蛙干為除脂除卵的林蛙干體)除雜除塵后分別經(jīng)20目、40目、80目粉碎，使林蛙干粉碎物的粒徑在500μπι以下，按照Ig:8mL的比例加入復(fù)合酶水解液，復(fù)合酶水解液中含木瓜蛋白酶3wt %、胰蛋白酶2wt %，風(fēng)味蛋白酶Iwt %，酶解溫度為55°C，酶解時間為lh，酶解pH為7.2，而后90°C、1min滅酶，將混合物在溫度25°C時離心，離心時間為2min，離心轉(zhuǎn)速為3500rpm，取離心后混合液總體積30%的上層上清液，此時提取了林蛙干中含有的短肽膠原蛋白；
[0069]上層上清液所含膠原蛋白中(紫外光譜分析法分析氨基酸類別，氨基酸自動分析儀收集測定氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù))精氨酸、賴氨酸、組氨酸的含量(相對于上層上清液的質(zhì)量百分?jǐn)?shù))分別為3.12%,7.43%,0.73%，天冬氨酸、谷氨酸的含量(相對于上層上清液的質(zhì)量百分?jǐn)?shù))分別為7.86%、11.19%。
[0070]取上清后剩余混合物(原體積的70% )，放入膠體磨，研磨8min，使混合物的平均粒徑在300 μ m以下；將混合物放入高剪切分散乳化機內(nèi)，剪切3min，使混合物平均粒徑在100?200 μ m之間，將混合物進(jìn)行噴霧干燥成粉末狀，此時得到林蛙干提取短肽膠原蛋白后剩余纖維、骨質(zhì)等物質(zhì)的超微粉；
[0071]將纖維、骨質(zhì)等物質(zhì)的超微粉加入到質(zhì)量濃度為7%醋酸中，醋酸與超微粉的體積質(zhì)量比(mL:g)為15:1。超聲，超聲時間為:35min，超聲溫度為20°C;過濾，經(jīng)150μπι紗網(wǎng)過濾；150 μ m紗網(wǎng)上面未過濾物質(zhì)加入質(zhì)量體積比(g:mL)為1:3的0.03mol/L氫氧化鈉，進(jìn)行微波提取，微波功率為500W，微波時間5min，再次經(jīng)150 μ m紗網(wǎng)過濾；合并兩次濾液，40°C，攪拌15min，攪拌速度為120rpm ;攪拌后的濾液離心，離心溫度為20°C，離心時間為lOmin，離心轉(zhuǎn)速為5000rpm;取上清，減壓濃縮，壓力為650托，溫度為65°C，濃縮體積比為12:1 ;此時得到多糖、抗菌肽和鈣離子(鈣離子的檢測采用EDTA滴定法檢測)的混合物；
[0072]混合物中多糖(Sephadex G - 25凝膠柱分離收集單糖,高效液相色譜法測定單糖組成)主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、巖藻糖、葡萄糖醛酸以及半乳糖醛酸組成，其中含單糖鼠李糖:甘露糖:半乳糖:葡萄糖:木糖:阿拉伯糖:巖藻糖約為
1:4:6:12:1:0.5:1(體積比)，糖醛酸含量中葡萄糖醛酸:半乳糖醛酸=1:1(體積比)；
[0073]混合物所含抗菌肽中(紫外光譜分析法分析氨基酸類別，氨基酸自動分析儀收集測定氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù))精氨酸、賴氨酸、組氨酸的含量(相對于混合物的質(zhì)量百分?jǐn)?shù))分別為2.73%,8.16%,0.69%，天冬氨酸、谷氨酸的含量(相對于混合物的質(zhì)量百分?jǐn)?shù))分別為4.47%,5.98%0
[0074]將短肽膠原蛋白、多糖、抗菌肽、鈣離子混合，得到林蛙提取混合液130ml，其中含有隹丐離子 104mg(80mg/100ml)。
[0075](2)復(fù)合藥物提取液的制備
[0076]稱取灰葡巴27g、蒼術(shù)lg、百部2g、藿香Ig,金銀花3g,牛膝Ig,加入12倍體積(mL:g，乙醇的體積為420mL)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%乙醇浸泡8h，300 μ m紗網(wǎng)過濾，20°C、4000rpm離心12min，去沉淀后，90°C加熱濃縮，濃縮體積比為15:1，得乙醇提取液；稱取五倍子lg、苦參2g、馬齒覓lg、蛇床子lg、黃柏lg、薄荷葉lg、憲活2g、防己lg、白癬皮lg、胡黃連2g、地膚子lg、紅花lg、桂枝lg、鐵冬青l(xiāng)g，加入15倍體積(mL:g，水的體積為255mL)的水浸泡14h, 300 μ m紗網(wǎng)過濾,20°C、5000rpm離心15min,去沉淀后,90°C加熱濃縮,濃縮體積比為16:1 ;得水提取液；將乙醇提取液與水提取液混合，攪拌20min，攪拌速度為300rpm，得復(fù)合藥物提取液；
[0077]將林蛙提取混合液與復(fù)合藥物提取液充分混合，得到林蛙提取液中藥復(fù)合制劑，體積是230mL。
[0078]實施例二林蛙提取中藥復(fù)合軟膏劑的制備
[0079]處方組成(按重量份):林娃干54份,灰葡巴27份,五倍子I份,苦參2份,馬齒莧I份，蛇床子I份，黃柏I份，薄荷葉I份，羌活2份，防己I份，蒼術(shù)I份，白癬皮2份，胡黃連2份，地膚子I份，百部2份，紅花I份，藿香I份，桂枝I份，金銀花3份，牛膝I份，鐵冬青I份，石蠟8份，液體石蠟6份，白凡士林8份，單硬脂酸甘油酯3份，司盤402份，乳化劑0P3份，對羥基苯甲酸乙酯I份，冰片I份。
[0080]制備方法:
[0081](I)林蛙提取中藥復(fù)合制劑的制備
[0082]稱取林娃干54g(中國林娃長白山亞種,購自吉林大藥房)，灰葡巴27g(購自成都藥房)，五倍子lg，苦參2g,馬齒覓Ig,蛇床子lg，黃柏lg，薄荷葉lg，憲活2g,防己lg,蒼術(shù)lg，白癬皮lg，胡黃連2g,地膚子lg,百部2g,紅花Ig,藿香Ig,桂枝Ig,金銀花3g,牛膝Ig,鐵冬青Ig (以上19味中藥均購自吉林大藥房)，按照實施例一的方法制備成林蛙提取中藥復(fù)合制劑230mL ；
[0083](2)油相的制備:取石蠟8g，液體石蠟6g，白凡士林8g，單硬脂酸甘油酯3g，司盤402g，乳化劑0P3g，對羥基苯甲酸乙酯Ig研磨混勻，得到油相；
[0084](3)林蛙提取中藥復(fù)合軟膏劑的制備:將步驟(2)制得的油相與林蛙提取中藥復(fù)合制劑分別加熱至90°C，將林蛙提取中藥復(fù)合制劑加入到所述油相中，邊加邊攪拌至冷凝，經(jīng)納米勻質(zhì)機勻質(zhì)7次，115°C滅菌lOmin，冰片Ig加熱到90°C過膜，無菌條件下與滅菌后產(chǎn)物混合均勻，分裝，即可。
[0085]實施例三林蛙提取中藥復(fù)合乳液的制備
[0086]處方組成(按重量份):林娃干54份，灰葡巴27份，五倍子I份，苦參2份，馬齒莧I份，蛇床子I份，黃柏I份，薄荷葉I份，羌活2份，防己I份，蒼術(shù)I份，白癬皮2份，胡黃連2份，地膚子I份，百部2份，紅花I份，藿香I份，桂枝I份，金銀花3份，牛膝I份，鐵冬青I份，硬脂酸4份，十八醇2份，十六醇3份，白油3份，Twenn-600.5份，羊毛脂I份，橄欖油0.5份，甘油6份，二乙醇胺0.3份，茉莉香精0.1份，布羅波爾0.05份，尼泊金丙酯0.05份，加超純水70份。
[0087]制備方法:
[0088](I)林蛙提取中藥復(fù)合制劑的制備
[0089]稱取林娃干54g(中國林娃長白山亞種,購自吉林大藥房)，灰葡巴27g(購自成都藥房)，五倍子lg，苦參2g,馬齒覓Ig,蛇床子lg，黃柏lg，薄荷葉lg，憲活2g,防己lg,蒼術(shù)lg，白癬皮lg，胡黃連2g,地膚子lg,百部2g,紅花Ig,藿香Ig,桂枝Ig,金銀花3g,牛膝Ig,鐵冬青Ig (以上19味中藥均購自吉林大藥房)，按照實施例一的方法制備成林蛙提取中藥復(fù)合制劑；
[0090](2)林蛙提取中藥復(fù)合乳液的制備
[0091]將4g硬脂酸,2g十八醇,3g十六醇,3g白油,0.5gTwenn_60, Ig羊毛脂,0.5g橄欖油混合,攪拌,攪拌溫度40°C，攪拌時間20min，攪拌速度為200rpm，形成油相；
[0092]將林蛙提取中藥復(fù)合制劑230mL與6g甘油，0.3g三乙醇胺，70g超純水充分混合，攪拌，攪拌溫度20°C,攪拌時間1min,攪拌速度為300rpm,形成水相；
[0093]將油相與水相在30°C下混合攪拌，加入0.1g茉莉香精，0.05g布羅波爾，0.05g尼泊金丙酯，再次攪拌，攪拌溫度25°C,攪拌時間15min,攪拌速度為200rpm,經(jīng)納米勻質(zhì)機4次，既得林蛙提取乳液。
[0094]實施例四林蛙提取中藥復(fù)合面膜的制備
[0095]處方組成(按重量份):林娃干54份，灰葡巴27份，五倍子I份，苦參2份，馬齒莧I份，蛇床子I份，黃柏I份，薄荷葉I份，羌活2份，防己I份，蒼術(shù)I份，白癬皮2份，胡黃連2份，地膚子I份，百部2份，紅花I份，藿香I份，桂枝I份，金銀花3份，牛膝I份，鐵冬青I份，甘油5份，I, 3- 丁二醇4份，透明質(zhì)酸0.5份，熊果苷2份，卡波樹脂0.5份，泛醇0.5份，維生素C脂質(zhì)體3.0份，三乙醇胺0.1份，聚乙二醇-60氫化蓖麻油0.3份，尼泊金丙酯0.2份，茉莉香精0.1份，超純水80份。
[0096]制備方法:
[0097](I)林蛙提取中藥復(fù)合制劑的制備
[0098]稱取林娃干54g(中國林娃長白山亞種,購自吉林大藥房)，灰葡巴27g(購自成都藥房)，五倍子lg，苦參2g,馬齒覓Ig,蛇床子Ig,黃柏Ig,薄荷葉lg，憲活2g,防己lg,蒼術(shù)lg，白癬皮lg，胡黃連2g,地膚子Ig,百部2g,紅花Ig,藿香Ig,桂枝Ig,金銀花3g,牛膝lg，鐵冬青l(xiāng)g，(以上19味中藥均購自吉林大藥房)，按照實施例一的方法制備成林蛙提取中藥復(fù)合制劑230mL ；
[0099](2)林蛙提取中藥復(fù)合面膜的制備
[0100]將林娃提取中藥復(fù)合制劑230mL,5g甘油，4gl, 3_ 丁二醇,0.5g透明質(zhì)酸，2g熊果苷,0.5g卡波樹脂，0.5g泛醇,3g維生素C脂質(zhì)體，0.1g三乙醇胺,0.3g聚乙二醇-60氫化蓖麻油，0.2g尼泊金丙酯，0.1g茉莉香精與80g超純水混合，115°C滅菌lOmin。自體冷卻至室溫，加入到放有無菌無紡布(15cmX15cm)獨立包裝袋內(nèi)，密封即得。
[0101]實施例五林蛙提取中藥復(fù)合口服制劑的制備
[0102]處方組成(按重量份):林娃干54份,灰葡巴27份,五倍子I份,苦參2份,馬齒覓I份，蛇床子I份，黃柏I份，薄荷葉I份，羌活2份，防己I份，蒼術(shù)I份，白癬皮2份，胡黃連2份，地膚子I份，百部2份，紅花I份，藿香I份，桂枝I份，金銀花3份，牛膝I份，鐵冬青I份，檸檬酸5份，蜂蜜21份，白砂糖22份，黃原膠6 g份，山梨酸鉀8份，醋酸鋅I份。
[0103]制備方法:
[0104](I)林蛙提取中藥復(fù)合制劑的制備
[0105]稱取林娃干54g(中國林娃長白山亞種,購自吉林大藥房)，灰葡巴27g(購自成都藥房)，五倍子lg，苦參2g,馬齒覓Ig,蛇床子lg，黃柏lg，薄荷葉lg，憲活2g,防己lg,蒼術(shù)lg，白癬皮lg，胡黃連2g,地膚子lg,百部2g,紅花Ig,藿香Ig,桂枝Ig,金銀花3g,牛膝Ig,鐵冬青Ig (以上19味中藥均購自吉林大藥房)，按照實施例一的方法制備成林蛙提取中藥復(fù)合制劑；
[0106](2)減壓濃縮:將林蛙提取中藥復(fù)合制劑在減壓條件下進(jìn)行蒸餾，壓力在9.2 X 13帕，溫度為74°C，濃縮比為3:1，得濃縮液；
[0107](3)調(diào)節(jié)混合液
[0108]將研細(xì)的Ig醋酸鋅緩慢加入林蛙提取混合液中，邊加邊攪拌；加完后用0.lmol/LNaOH調(diào)節(jié)pH為6.4 ± 0.1，攪勻后使其自然沉降，自體冷卻過夜；
[0109](4)過濾
[0110]0.45μπι濾膜過濾后，向得到的澄清液中加入5g檸檬酸、21g蜂蜜、22g白砂糖，溫度在55°C時，150rpm攪拌,攪拌時間為15min,過濾,再向清液中加入6g黃原膠和8g山梨酸鉀，經(jīng)0.22 μ m濾膜精濾；
[0111](5)灌裝壓蓋
[0112]在無菌條件下灌裝，每瓶20mL，壓蓋封口；
[0113](6)滅菌
[0114]將灌裝好的林蛙提取混合液口服制劑加熱到65°C，保持30min，自體冷卻至室溫即為成品。
[0115]以下試驗例表明本發(fā)明在治療痤瘡藥物中的用途
[0116]試驗例I
[0117]采用完全隨機的方法，將780例受試對象分配到治療組(300例，共5組)和對照組(480例，8組)。治療組分別采用實施例二、實施例三、實施例四、實施例五、實施例二 +實施例五制成的林蛙提取復(fù)合中藥制劑，對照組采用迪維霜(市售重慶華邦制藥股份有限公司)、林蛙皮抗菌肽(采用CN1216768A方法制備)、林蛙體抗菌肽(采用CN103073628A方法制備)、中藥復(fù)合制劑A組(組成為本發(fā)明中去掉林蛙干的外用制劑)、中藥復(fù)合制劑Al組(組成為本發(fā)明中去掉林蛙干的口服制劑)、中藥復(fù)合制劑B組(組成為本發(fā)明中去掉林娃干、灰葡巴的外用制劑)、中藥復(fù)合制劑C組(組成為本發(fā)明中去掉林娃干、五倍子、苦參、蛇床子、防己、蒼術(shù)的外用制劑)、中藥復(fù)合制劑A+中藥復(fù)合制劑Al組。根據(jù)療效標(biāo)準(zhǔn)判斷療效，結(jié)果見表I。
[0118]用法:實施例二組、實施例三組、實施例四組、迪維霜組、林娃皮抗菌肽組、林娃體抗菌肽組、中藥復(fù)合制劑A組、中藥復(fù)合制劑B組、中藥復(fù)合制劑C組為外用組，每日早晚兩次清洗患處后使用藥物或化妝品，實施例二組每次用藥量為2g，用藥方式為涂抹患處，2次/d ;實施例三組每次用量為2mL，使用方式為涂抹患處，2次/d ;實施例四組使用前清洗患處，每次使用時間為15min，l次/d ;迪維霜組每次用藥量為2g，用藥方式為涂抹患處，2次/d ;林蛙皮抗菌肽組、林蛙體抗菌肽組、中藥復(fù)合制劑A組、中藥復(fù)合制劑B組、中藥復(fù)合制劑C組，每次用藥量為2mL，用藥方式為涂抹患處，2次/d ;
[0119]實施例五組、中藥復(fù)合制劑Al組為口服組；實施例二 +實施例五組、中藥復(fù)合制劑A+中藥復(fù)合制劑Al組為外用+ 口服組。實施例五組、中藥復(fù)合制劑Al組每日早晚口服，每次20mL，服藥期間無食物禁忌；實施例二 +實施例五組每日早晚口服實施例五，每次20mL，并且早晚兩次清洗患處后外用實施例二，每次用藥量為2g，用藥方式為涂抹患處，2次/d;中藥復(fù)合制劑A+中藥復(fù)合制劑Al組每日早晚口服中藥復(fù)合制劑Al，每次20mL，并且早晚兩次清洗患處后外用中藥復(fù)合制劑A，每次用藥量為2mL，用藥方式為涂抹患處，2次/d。
[0120]各組同時停用其他相關(guān)手段和治療藥物，均以7天為I療程。
[0121]統(tǒng)計學(xué)方法:計量資料用t檢驗，記數(shù)資料用X2及Rdiit檢驗，P〈0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0122]療效評定標(biāo)準(zhǔn):
[0123]參照《中藥新藥治療痤瘡的臨床研究指導(dǎo)原則》中關(guān)于疾病療效判定標(biāo)準(zhǔn)。痊愈:癥狀，體征消失或基本消失，積分值減少1>95% ;顯效:癥狀，體征明顯改善，積分值減少^ 70% ;有效:癥狀，體征有好轉(zhuǎn)，積分值減少> 30% ;無效:癥狀，體征未見好轉(zhuǎn)，積分值減少 <30% ο
[0124]表1本發(fā)明治療痤瘡的情況(例)
[0125]

【權(quán)利要求】
1.一種林蛙提取中藥復(fù)合制劑，其由如下步驟制備得到: (1)君藥林蛙提取混合液的制備 ①45?65重量份林蛙干除雜除塵后分別經(jīng)20?100目粉碎，使林蛙干粉碎物的粒徑在500 μ m以下，按照Ig:1?1mL的比例加入復(fù)合酶水解液，復(fù)合酶水解液中含木瓜蛋白酶I?5wt%、胰蛋白酶2?4wt%、風(fēng)味蛋白酶I?3wt%，酶解溫度為50?55°C，酶解時間為I?2h，酶解pH為7.0?7.5，而后85?90°C下滅酶5?15min，將混合物在溫度10?30°C時離心，離心時間為I?5min,離心轉(zhuǎn)速為2000?4000rpm,取離心后混合液體積20?40%的上層上清液； ②將上述剩余混合物放入膠體磨，研磨2?15min,使混合物的平均粒徑在300μ m以下；將混合物放入高剪切分散乳化機內(nèi)，剪切I?15min，使混合物平均粒徑在100?200 μ m之間，將混合物進(jìn)行噴霧干燥成粉末狀，此時得到林蛙干剩余混合物的超微粉； 將上述超微粉加入到質(zhì)量濃度為2?10%醋酸中，醋酸與超微粉的體積質(zhì)量比為10?40mL:lg，在4?30°C下超聲5?75min ;再經(jīng)150 μ m紗網(wǎng)過濾，將150 μ m紗網(wǎng)上面未過濾物質(zhì)加入質(zhì)量體積比為Ig:1?8mL的0.01?0.03mol/L的氫氧化鈉，進(jìn)行微波提取，微波功率為500?600W，微波時間3?9min，再次經(jīng)150 μ m紗網(wǎng)過濾；合并兩次濾液，30?50°C下攪拌10?30min,攪拌速度為100?200rpm ;攪拌后的濾液離心,離心溫度為4?30°C,離心時間為2?40min，離心轉(zhuǎn)速為2000?15000rpm ;取上清，減壓濃縮，壓力為600?700托，溫度為65?70°C，濃縮體積比為8?40:1 ;此時得到多糖、抗菌肽和鈣離子的混合物； ③將步驟①和步驟②的產(chǎn)物混合，得到林蛙提取混合液； (2)復(fù)合藥物提取液的制備 ①稱取20?30重量份灰葡巴、I?3重量份蒼術(shù)、I?2重量份百部、I?2重量份藿香、I?3重量份金銀花、I?重量2份牛膝，混合后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)90?100%的乙醇中浸泡I?10h，乙醇的體積與上述物質(zhì)質(zhì)量和的比例為I?20mL:lg ;然后100?300 μ m紗網(wǎng)過濾，濾液15?30°C、3000?6000rpm條件下離心10?20min,去沉淀后，85?10CTC加熱濃縮，濃縮體積比為24?8:1，得乙醇提取液； ②稱取I?3重量份五倍子、I?3重量份苦參、I?3重量份馬齒覓、I?2重量份蛇床子、I?3重量份黃柏、I?3重量份薄荷葉、I?3重量份憲活、I?2重量份防己、I?3重量份白癖皮、I?2重量份胡黃連、I?2重量份地膚子、I?3重量份紅花、I?2重量份桂枝、I?3重量份鐵冬青，混合后加入水浸泡I?24h，水的體積與上述物質(zhì)質(zhì)量和的比例為10?25mL:lg ;然后100?300 μ m紗網(wǎng)過濾，15?30°C、3000?7000rpm條件下離心10?20min，去沉淀后，85?100°C加熱濃縮，濃縮體積比為24?8:1，得水提取液； ③將上述乙醇提取液與水提取液混合，攪拌10?30min，攪拌速度為100?400rpm，得復(fù)合藥物提取液； (3)將步驟(I)制得的林蛙提取混合液與步驟(2)制得的復(fù)合藥物提取液混合，從而得到林蛙提取中藥復(fù)合制劑。
2.權(quán)利要求1所述的林蛙提取中藥復(fù)合制劑在制備治療痤瘡的藥物或化妝品中的用途。
3.一種治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合軟膏劑，其由如下步驟制備得到: (I)油相的制備:取5?15重量份石臘、2?5重量份單硬脂酸甘油脂、5?10重量份白凡士林、5?10重量份液體石蠟、I?5重量份司盤40、I?5重量份乳化劑ΟΡ、1?3重量份對羥基苯甲酸乙酯研磨混勻，得到油相； (2)將步驟(I)制得的油相與由45?65重量份林蛙干如權(quán)利要求1所述步驟制備得到的林蛙提取中藥復(fù)合制劑分別加熱至70?100°C，將林蛙提取中藥復(fù)合制劑加入到所述油相中，邊加料邊攪拌通過體系自動冷卻至室溫，再經(jīng)納米勻質(zhì)機勻質(zhì)4?7次，115?121 °C滅菌10?30min ;然后將I?3重量份冰片加熱到70?100°C后過0.45 μ m膜，無菌條件下與上述滅菌后的產(chǎn)物混合均勻，即得到治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合軟膏劑。
4.一種治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合乳液，其由如下步驟制備得到: (1)將由45?65重量份林蛙干如權(quán)利要求1所述步驟制備得到的林蛙提取中藥復(fù)合制劑與5?10重量份甘油、0.1?0.5重量份三乙醇胺、60?75重量份超純水充分混合，攪拌，攪拌溫度15?30°C,攪拌時間10?40min,攪拌速度為200?300rpm,形成水相； (2)將2?10重量份硬脂酸，I?5重量份十八醇，I?5重量份十六醇，2?10重量份白油，0.1?2重量份Twenn-60，I?5重量份羊毛脂，0.1?I重量份橄欖油混合，攪拌，攪拌溫度20?50°C，攪拌時間10?30min，攪拌速度為200?500rpm，形成油相； (3)將油相與水相在20?50°C下混合攪拌，再加入0.1?0.3重量份香精、0.01?0.1重量份布羅波爾、0.01?0.1重量份尼泊金丙酯，再次攪拌，攪拌溫度20?50°C，攪拌時間10?30min,攪拌速度為200?400rpm,經(jīng)納米勻質(zhì)機2?7次,既得林娃提取中藥復(fù)合乳液。
5.一種治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合面膜，其由如下方法制備得到: 將由45?65重量份林蛙干如權(quán)利要求1所述步驟制備得到的林蛙提取中藥復(fù)合制劑與2?10重量份甘油、2?6重量份1，3- 丁二醇、0.1?2重量份透明質(zhì)酸、I?5重量份熊果苷、0.1?2重量份卡波樹脂、0.1?I重量份泛醇、2?8重量份維生素C脂質(zhì)體、0.1?2重量份三乙醇胺、0.1?I重量份聚乙二醇-60氫化蓖麻油、0.1?2重量份尼泊金丙酯、0.1?0.5重量份茉莉香精和70?80重量份超純水混合，攪拌，攪拌溫度20?50°C，攪拌時間10?30min,攬祥速度為200?400rpm,攬祥后115?121°C滅菌10?20min ；自體冷卻至室溫后加入到放有無菌無紡布獨立包裝袋內(nèi)，密封即得林蛙提取中藥復(fù)合面膜。
6.一種治療痤瘡的林蛙提取中藥復(fù)合口服制劑，其由如下步驟制備得到: (1)減壓濃縮:將由45?65重量份林蛙干如權(quán)利要求1所述步驟制備得到的林蛙提取中藥復(fù)合制劑在減壓條件下進(jìn)行蒸餾，壓力在8X 13?3X 14帕，溫度為50?85°C，濃縮比為I?5:1，得濃縮液； (2)將I?5重量份醋酸鋅緩慢加入到濃縮液中，邊加料邊攪拌；加完后用0.lmol/LNaOH調(diào)節(jié)pH為6.2?6.5，攪勻后使其自然沉降，自體冷卻過夜； (3)0.45 μ m濾膜過濾后，向得到的澄清液中加入5?15重量份檸檬酸、5?25重量份蜂蜜、5?30重量份白砂糖，溫度在50?65 °C時，100?200rpm攪拌，攪拌時間為10-25min，過濾，再向清液中加入5?15重量份黃原膠和5?15重量份山梨酸鉀，經(jīng)0.22 um濾膜精濾； (4)灌裝壓蓋:在無菌條件下灌裝，壓蓋封口； (5)滅菌:加熱到62?65°C，保持30?40min，自體冷卻至室溫即得林蛙提取中藥復(fù)合口服制劑。
【文檔編號】A61K8/98GK104173867SQ201410360141
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】劉艷, 孟慶繁, 王迪, 付珧, 謝晶, 逯家輝, 張 杰, 劉瑜, 滕美玉, 滕利榮, 姜丹, 孟珈同 申請人:吉林大學(xué)