本發(fā)明涉及黃芩苷在制備治療急性溶血性尿毒綜合征藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
黃芩苷(Baicalin)是從黃芩根中提取分離出來的一種黃酮類化合物，具有明顯的抗真菌活性，尤其對酵母型真菌具選擇性作用，最低抑菌濃度(MIC)在70-100μg/ml之間。但未見黃芩苷用于治療由大腸桿菌引起的急性溶血性尿毒綜合征的報道。急性溶血性尿毒綜合征通常是由大腸桿菌分泌的II型志賀毒素引起的腎臟損傷，通常是嚴(yán)重的并發(fā)癥，一般在老年人和兒童較容易發(fā)病，病死率極高。近年來由于抗生素的大量使用導(dǎo)致大腸桿菌耐藥菌株越來越多，臨床上對大腸桿菌感染的治療面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，而通?？股啬軌虼龠M(jìn)耐藥性大腸桿菌II型志賀毒素的分泌，進(jìn)而導(dǎo)致疾病的進(jìn)一步加重。因此，尋找新型、安全的治療藥物迫在眉睫。黃芩苷是來源于我國傳統(tǒng)中藥材黃芩、木蝴蝶等的成分，本發(fā)明研究證實了黃芩苷對大腸桿菌II型志賀毒素，尤其是耐藥性大腸桿菌II型志賀毒素引起的急性溶血性尿毒綜合征具有較好的治療效果。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
黃芩苷的分子結(jié)構(gòu)如下：本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了黃芩苷對大腸桿菌II型志賀毒素引起的急性溶血性尿毒綜合征具有較好的治療效果。尤其是耐藥性大腸桿菌II型志賀毒素引起的急性溶血性尿毒綜合征具有更好的治療效果。本發(fā)明同時提供了黃芩苷在制備治療急性溶血性尿毒綜合征藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明技術(shù)方案優(yōu)選黃芩苷在制備由大腸桿菌II型志賀毒素引起的急性溶血性尿毒綜合征藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明可將黃芩苷和藥學(xué)上可接受的輔料制備成各種劑型。本發(fā)明所述藥物，包括藥學(xué)上可接受的任何劑型。本發(fā)明優(yōu)選將黃芩苷制備成注射劑、膠囊、片劑、粉針劑等劑型。本發(fā)明與用抗生素治療相比較，使用黃芩苷治療具有無耐藥性，治愈率高的優(yōu)點。附圖說明圖1.分子對接發(fā)現(xiàn)黃芩苷結(jié)合于Stx2A亞基酶活性中心(左圖為黃芩苷與Stx2的結(jié)合方式，右圖為黃芩苷與Stx2的結(jié)合位點)。圖2.復(fù)合物體系自由能貢獻(xiàn)分析(橫軸為氨基酸種類，縱軸為自由能變化；Etotal為總結(jié)合能，Evdw為范德華力，Eele為靜電作用力，Esol為非極性溶劑化能)。圖3.黃芩苷誘導(dǎo)蓖麻毒素A亞基形成多聚體。圖4.黃芩苷對小鼠急性尿毒綜合征存活率的影響(橫坐標(biāo)為觀察時間，縱坐標(biāo)為存活率，d的單位為天，PBS為陰性對照組，Stx為感染未給藥組，Stx+BAI為給藥組)。圖5.注射黃芩苷后急性尿毒綜合征小鼠腎臟病理組織學(xué)變化(PBS為陰性對照組，Stx為感染未給藥組，Stx+BAI為給藥組)。圖6.黃芩苷對急性尿毒綜合征小鼠腎功能的影響(橫坐標(biāo)為處理方式，縱坐標(biāo)為濃度，Con為陰性對照組，Stx+BAI為給藥組，Stx為感染未給藥組)。具體實施方式通過對Hela細(xì)胞的保護(hù)作用以及小鼠性溶血性尿毒綜合征模型證實了黃芩苷治療II型志賀毒素感染的作用。1.黃芩苷對Hela細(xì)胞的保護(hù)作用將培養(yǎng)的Hela細(xì)胞以每孔15000個細(xì)胞鋪到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24小時完全貼壁后每孔加入純化的II型志賀毒素50pg，并加入不同梯度的黃芩苷溶液，置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時后離心去除細(xì)胞培養(yǎng)液上清檢測其乳酸脫氫酶釋放量，通過乳酸脫氫酶釋放評價其對細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果顯示黃芩苷能顯著抑制II型志賀毒素導(dǎo)致的Hela細(xì)胞毒性作用，并呈現(xiàn)劑量依賴性。加入不同濃度的黃芩苷后Hela細(xì)胞的存活率如下表1：表1.黃芩苷對II型志賀毒素導(dǎo)致的Hela細(xì)胞毒性的抑制作用2.黃芩苷抗II型志賀毒素機(jī)制分析及靶點確證應(yīng)用分子模擬和對接發(fā)現(xiàn)黃芩苷能結(jié)合到II型志賀毒素的活性口袋中，從而抑制了其活性的發(fā)揮，通過分解復(fù)合物體系的自由能，發(fā)現(xiàn)對復(fù)合物體系自由能貢獻(xiàn)較大的氨基酸是77位酪氨酸和204位精氨酸。進(jìn)一步將得到的數(shù)據(jù)應(yīng)用點突變技術(shù)和熒光淬滅技術(shù)進(jìn)行驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)計算機(jī)模擬結(jié)果和驗證結(jié)果一致。黃芩苷結(jié)合到II型志賀毒素的77和204位的氨基酸導(dǎo)致其失去酶活性從而抑制了其活性作用的發(fā)揮，黃芩苷與II型志賀毒素結(jié)合位點見圖1，結(jié)合能分析見圖2。3.結(jié)構(gòu)生物學(xué)靶點確證本研究得到了II型志賀毒素結(jié)構(gòu)和功能類似蛋白蓖麻毒素A亞基的晶體，并解析了蓖麻毒素A亞基和黃芩苷復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)，通過結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)黃芩苷促使蓖麻毒素A亞基形成多聚體而失去活性(附圖3)，黃芩苷與蓖麻毒素A亞基的結(jié)合位點為R189,T190,R193,Y194,R235和R258；通過序列比對發(fā)現(xiàn)，黃芩苷與II型志賀毒素的結(jié)合位點為R179,Q180,S183,E184和V218。4.小鼠急性溶血性尿毒綜合征實驗治療學(xué)研究4.1小鼠急性溶血性尿毒綜合征模型BALB/C小鼠(雄性，18-22g)經(jīng)乙醚麻醉后，經(jīng)腹腔給予純化的II型志賀毒素蛋白，小鼠平躺直至蘇醒，建立小鼠急性溶血性尿毒綜合征模型。存活率試驗、病理學(xué)試驗及腎功能評價試驗給予50ng純化的II型志賀毒素蛋白。4.2保護(hù)率試驗保護(hù)率試驗分為三組，每組20只BALB/C雄性小鼠，滅菌PBS為陰性對照組，Stx為感染未給藥組，Stx+BAI為治療組。給藥組小鼠在注射II型志賀毒素蛋白6h后皮下注射200mg/kg的黃芩苷，每6h給藥一次，共給藥96h。陽性對照組(Stx組)注射毒素后給予100μl的滅菌PBS，統(tǒng)計其存活率。結(jié)果表明，經(jīng)黃芩苷處理后，顯著提高小鼠急性溶血性尿毒綜合征的存活率，見圖4。4.3病理組織學(xué)實驗試驗分為三組，每組20只BALB/C雄性小鼠，滅菌PBS為陰性對照組，Stx為感染未給藥組，Stx+BAI為治療組。給藥組小鼠在注射II型志賀毒素蛋白6h后皮下注射200mg/kg的黃芩苷，每6h給藥一次，共給藥72h。陽性對照組(Stx組)給與100μl的滅菌PBS，每組10只小鼠，感染72小時后將小鼠麻醉致死取腎臟做病理切片觀察其病理變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，陽性對照組小鼠腎臟有出血，腎小管上皮細(xì)胞有大量細(xì)胞脫落，腎小球消失；而給藥組腎組織僅有少量出血，與正常組小鼠比較無明顯差異；見圖5。4.4腎功能評價試驗試驗分為三組，每組20只BALB/C雄性小鼠，滅菌PBS為陰性對照組，Stx為感染未給藥組，Stx+BAI為治療組。給藥組小鼠在注射II型志賀毒素蛋白6h后皮下注射200mg/kg的黃芩苷，每6h給藥一次，共給藥72h。陽性對照組(Stx組)給與100μl的滅菌PBS，每組10只小鼠。通過評價小鼠血清中肌酐、尿素氮的含量來評價黃芩苷對模型小鼠腎功能的改善。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給藥組肌酐、尿素氮含量與陰性對照組小鼠比較無顯著差異(P>0.05)，而陽性組小鼠與陰性組則差異極顯著(P<0.01)，見圖6。