用于在嬰兒中引發(fā)針對RSV和百日咳博德特氏菌的免疫應答的方法相關申請的交叉引用本申請要求2012年8月6日提交的美國臨時申請?zhí)?1/679,928和2013年3月15日提交的美國非臨時申請?zhí)?3/835,829的申請日的權益，其公開內(nèi)容以其整體通過引用并入本文。依照37C.F.R.§1.71(E)的版權通告本專利文件的部分公開內(nèi)容含有受到版權保護的材料。版權所有者不反對專利文件或專利公開中任何人使用如PatentandTrademarkOffice的專利文件或記錄中出現(xiàn)的傳真復制件，但除此之外保留所有版權利。背景本公開涉及免疫學領域。更具體而言，本公開涉及用于引發(fā)對呼吸道合胞病毒(RSV)和百日咳博德特氏菌(Bordetellapertussi)(百日咳)特異性的免疫應答的組合物和方法。人呼吸道合胞病毒(RSV)是小于6個月齡的嬰兒和懷孕期小于或等于35周的早產(chǎn)兒中下呼吸道感染(LRTI)的最常見的全球性原因。RSV被充分證明為急性LRTI(包括細支氣管炎和肺炎)的每年冬季流行病的一個原因。RSV相關LRTI在其他方面健康的兒童中的發(fā)生率計算為生命前兩年中37/1000名兒童-年(小于6個月齡的嬰兒中45/1000名兒童-年)，而住院風險為6/1000名兒童-年(生命前6個月中每1000名兒童-年)。發(fā)生率在患有心肺疾病的兒童和早產(chǎn)兒中較高，在美國這些兒童構成幾乎半數(shù)的RSV相關醫(yī)院收治。經(jīng)受由RSV引起的更嚴重的LRTI的兒童以后具有升高的兒童哮喘發(fā)生率。這些研究表明普遍需要RSV疫苗。細菌百日咳博德特氏菌是百日咳的病原體，所述百日咳是在嬰兒和年幼兒童中可嚴重的呼吸系統(tǒng)疾病。WHO估計表明，在2008年，世界各地發(fā)生約16百萬例百日咳，并且195,000個兒童死于所述疾病。疫苗已經(jīng)可用數(shù)十年，并且全球接種估計(WHO)已在2008年避免了約687,000例死亡。該疾病的臨床過程的特征在于快速咳嗽的發(fā)作，隨后呼吸努力，經(jīng)常與特征性“咳嗽”聲相關。在嚴重的情況下，缺氧可導致腦損傷；然而最常見的并發(fā)癥是繼發(fā)性肺炎。盡管用抗生素治療是可用的，但到診斷出疾病時，細菌毒素經(jīng)常已引起嚴重損害。因此，所述疾病的預防是非常重要的，因此，開發(fā)接種具有重要興趣。針對百日咳博德特氏菌的第一代疫苗是全細胞疫苗，其由已通過熱處理、福爾馬林或其他方式殺滅的全細菌構成。這些在1950年代和1960年代引入許多國家，并且在減少百日咳的發(fā)病率方面是成功的。后續(xù)改進已包括開發(fā)無細胞百日咳疫苗，其含有高度純化的百日咳博德特氏菌蛋白-通常至少百日咳類毒素(PT；經(jīng)化學處理或遺傳修飾以去除其毒性的百日咳毒素)和絲狀血細胞凝集素(FHA)，經(jīng)常連同69kD蛋白百日咳桿菌粘附素(PRN)，并且在一些情況下，進一步包括2型和3型菌毛蛋白(FIM2和3)。這些無細胞疫苗的反應原性通常遠低于全細胞疫苗，并且已被采取用于許多國家的接種計劃。RSV和百日咳兩者的特征在于免疫力在兒童期后減弱，并且在對于這些病原體完全實現(xiàn)小兒接種之前，在生命的前幾個月過程中的感染導致最嚴重的發(fā)病率和死亡率。盡管百日咳接種充分確立，盡管多種嘗試以產(chǎn)生安全且有效的RSV疫苗，其在健康的和有風險的群體中引發(fā)持久且保護性的免疫應答，迄今所評估的候選物無一證明作為疫苗用于預防RSV感染和/或減輕或預防RSV疾病是安全且有效的。因此，存在未滿足的聯(lián)合疫苗的需要，所述聯(lián)合疫苗賦予針對對新生兒和年幼嬰兒構成特別危險的RSV和百日咳博德特氏菌感染和相關疾病的保護。簡述本公開涉及通過向孕婦施用至少一種包含重組抗原RSVF蛋白類似物和百日咳抗原的免疫原性組合物而保護嬰兒免于由呼吸道合胞病毒(RSV)和百日咳博德特氏菌(百日咳)引起的疾病的接種方案和方法。用含有F蛋白類似物和百日咳抗原的一種或多種免疫原性組合物主動免疫孕婦引發(fā)母體抗體，所述母體抗體經(jīng)由胎盤轉移至妊娠期嬰兒，由此保護嬰兒在出生后免于RSV疾病。因此，本公開還涉及免疫孕婦以保護她的嬰兒免于RSV和百日咳引起的疾病的接種方案和方法，重組RSVF蛋白類似物和百日咳抗原在免疫懷孕雌性以保護她的嬰兒免于RSV引起的疾病中的用途，和可用于免疫孕婦以保護她們的嬰兒免于RSV和百日咳的試劑盒。附圖簡述圖1A是突出顯示RSVF蛋白的結構特征的示意圖。圖1B是示例性RSV融合前F(PreF)抗原的示意圖。圖2顯示對于實施例1中進行的豚鼠實驗的研究設計。圖3顯示來自實施例1的用RSV攻擊豚鼠后代之后的結果。圖4顯示實施例1中的豚鼠模型中的中和抗體應答的時間過程。圖5A和5B是說明用RSV+百日咳聯(lián)合疫苗免疫之后針對RSV攻擊感染的中和滴度和保護的圖。圖6A和6B是說明用RSV+百日咳聯(lián)合疫苗免疫之后針對百日咳博德特氏菌攻擊的血清抗體滴度和保護的圖。詳述介紹開發(fā)保護嬰兒免于由呼吸道合胞病毒(RSV)和百日咳博德特氏菌(百日咳)引起的疾病的安全且有效的疫苗中的一個具體挑戰(zhàn)在于，最高的發(fā)生率和嚴重性，就發(fā)病率和死亡率而言，在非常年幼的嬰兒中。這本身提出了許多挑戰(zhàn)。年幼嬰兒，特別是那些早產(chǎn)兒，可具有不成熟的免疫系統(tǒng)。還存在非常年幼嬰兒中接種干擾母體抗體的潛在風險。在過去，已存在針對RSV接種年幼嬰兒加重RSV疾病的問題，以及由自然感染和免疫引發(fā)的免疫減弱導致的挑戰(zhàn)。本公開涉及通過用含有RSVF蛋白類似物和百日咳抗原的免疫原性組合物主動免疫孕婦而保護年幼嬰兒(例如，出生和6個月齡之間)免于由RSV和百日咳兩者引起的疾病的方法。F蛋白類似物和百日咳抗原優(yōu)選引發(fā)抗體，所述抗體經(jīng)由胎盤轉移至妊娠期嬰兒，導致出生后嬰兒的被動免疫保護，且持續(xù)至對于由RSV和百日咳兩者引起的感染和嚴重疾病的關鍵期。本公開的一個方面涉及保護嬰兒(包括新生兒)免于由RSV和百日咳兩者引起的感染或疾病的接種方案。接種方案涉及向懷孕雌性施用能夠加強(或誘導或引發(fā))針對RSV和百日咳的體液免疫應答(例如，抗體應答)的至少一種免疫原性組合物。有利地，至少一種免疫原性組合物包括包含F(xiàn)蛋白類似物的重組RSV抗原和作為全細胞百日咳抗原或無細胞百日咳蛋白的百日咳抗原。施用至少一種免疫原性組合物后，由免疫原性組合物引發(fā)的對于RSV和百日咳特異性的母體抗體的至少一種亞型經(jīng)由胎盤轉移到妊娠期嬰兒，由此保護嬰兒免于RSV和百日咳兩者引起的感染或疾病。本公開的另一個方面涉及保護嬰兒免于由呼吸道合胞病毒(RSV)和百日咳引起的感染或疾病的方法，所述方法包括向具有妊娠期嬰兒的懷孕雌性施用至少一種免疫原性組合物，所述疫原性組合物包含含有F蛋白類似物的重組RSV抗原和百日咳抗原，其中由免疫原性組合物引發(fā)的母體抗體的至少一種亞型經(jīng)由胎盤轉移到妊娠期嬰兒，由此保護嬰兒免于RSV引起的感染或疾病。在另一個方面，本公開涉及一種或多種免疫原性組合物，所述免疫原性組合物包括包含F(xiàn)蛋白類似物的重組RSV抗原和至少一種百日咳抗原，其用于保護嬰兒免于RSV和百日咳引起的感染或疾病，所述免疫原性組合物配制用于施用于懷孕雌性。在施用于懷孕雌性后，所述免疫原性組合物能夠加強體液免疫應答(例如，誘導、引發(fā)或增加)對于RSV和百日咳特異性的母體抗體的至少一種亞型。母體抗體經(jīng)由胎盤轉移到妊娠期嬰兒，由此賦予針對RSV和百日咳引起的感染和/或疾病的保護。在另一個方面，本公開涉及包含配制用于施用于懷孕雌性的多種(例如，2種或更多種)免疫原性組合物的試劑盒。所述試劑盒包括(a)包含能夠誘導、引發(fā)或加強對于RSV特異性的體液免疫應答的F蛋白類似物的第一免疫原性組合物；和(b)包含能夠誘導、引發(fā)或加強對于百日咳博德特氏菌特異性的體液免疫的至少一種百日咳抗原的第二免疫原性組合物。免疫原性組合物任選地包含在一個或多個預充式注射器中，例如，雙(或多)個有腔注射器中。在施用于懷孕雌性后，試劑盒的至少第一和第二免疫原性組合物誘導、引發(fā)或加強RSV特異性抗體的至少一種亞型和百日咳特異性抗體的至少一種亞型，所述抗體經(jīng)由胎盤轉移到由懷孕雌性孕育的嬰兒。母體抗體經(jīng)由胎盤轉移賦予針對RSV和百日咳兩者引起的感染和/或疾病的保護。在一個具體實施方案中，接種方案、方法或用途或試劑盒涉及F蛋白類似物的免疫原性組合物(例如，和其施用)，所述F蛋白類似物是融合前F或“PreF”抗原，其包括穩(wěn)定F蛋白的融合前構象的至少一個修飾。或者，融合后構象(“PostF”)中穩(wěn)定或者就構象而言不穩(wěn)定的F類似物可用于本文描述的方法中。通常，F(xiàn)蛋白類似物，(例如，PreF、PostF等)抗原缺乏跨膜結構域，并且是可溶的，即不是膜結合的(例如，以促進F蛋白類似物的表達和純化)。在示例性實施方案中，接種方案、方法、用途或試劑盒涉及施用F蛋白類似物，其在N-末端至C-末端方向包含：RSVF蛋白多肽的至少一部分或實質(zhì)上所有F2結構域和F1結構域，任選地與異源三聚化結構域。在一個實施方案中，F(xiàn)2結構域和F1結構域之間不存在弗林蛋白酶切割位點。在某些示例性實施方案中，F(xiàn)2結構域包含對應于SEQIDNO:2的參照F蛋白前體多肽(F0)的氨基酸26-105的RSVF蛋白多肽的至少一部分和/或F1結構域包含對應于SEQIDNO:2的參照F蛋白前體多肽(F0)的氨基酸137-516的RSVF蛋白多肽的至少一部分。例如，在具體實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物選自：a)包含選自SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20和SEQIDNO:22的多肽的多肽；b)由選自SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19和SEQIDNO:21的多核苷酸、或由在嚴格條件下在實質(zhì)上其整個長度與選自SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19和SEQIDNO:21的多核苷酸雜交的多核苷酸編碼的多肽，所述多肽包含至少部分對應于天然存在的RSV毒株的氨基酸序列；c)與選自SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20和SEQIDNO:22的多肽具有至少95％序列同一性的多肽，所述多肽包含不對應于天然存在的RSV毒株的氨基酸序列。任選地，F(xiàn)蛋白類似物進一步包含信號肽。任選地，F(xiàn)蛋白類似物可進一步包含促進純化的“標簽”或序列，例如，多組氨酸序列。在包含異源三聚化結構域的實施方案中，此類結構域可以包含卷曲-螺旋結構域，諸如異亮氨酸拉鏈，或者它可以包含替代三聚化結構域，諸如來自噬菌體T4fibritin(“foldon”)或流感HA的三聚化結構域。在某些示例性實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物包含至少一個選自以下的修飾：(i)改變糖基化的修飾。(ii)消除至少一個非弗林蛋白酶切割位點的修飾；(iii)缺失pep27結構域的一個或多個氨基酸的修飾；和(iv)F蛋白胞外結構域的疏水結構域中取代或添加親水性氨基酸的修飾。在某些實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物包含多肽的多聚體，例如，多肽的三聚體。就百日咳抗原而言，所述抗原可以是一種或多種無細胞百日咳蛋白或全細胞百日咳抗原。例如，無細胞百日咳蛋白可以選自：百日咳類毒素(PT)、絲狀血細胞凝集素(FHA)、百日咳桿菌粘附素(PRN)、2型菌毛蛋白(fimbrae)(FIM2)、3型菌毛蛋白(FIM3)和BrkA。PT可以是化學類毒素化的或遺傳類毒素化的(例如，通過一個或兩個突變：R9K和E129G)。在某些有利的實施方案中，百日咳抗原包含百日咳蛋白的組合，例如：PT和FHA；PT、FHA和PRN；或PT、FHA、PRN和任選的FIM2和FIM3中的一者或兩者。在包括全細胞(Pw)百日咳抗原的實施方案中，Pw抗原可以具有降低的內(nèi)毒素含量。降低的內(nèi)毒素含量可以通過脂寡糖(LOS)的化學提取，或通過內(nèi)毒素產(chǎn)生的遺傳操作，例如以誘導3-O-脫酰酶的過表達或異源表達，來實現(xiàn)。在某些有利的實施方案中，Pw抗原包含含有至少部分3-O-脫?；腖OS的百日咳博德特氏菌細胞。在某些實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物和/或百日咳抗原配制在包含藥學可接受的載體或賦形劑、諸如緩沖劑的免疫原性組合物中。任選地，免疫原性組合物還包括佐劑，例如和包括以下的佐劑：3D-MPL、QS21(例如，呈脫毒形式)，水包油乳狀液(例如，有或沒有免疫刺激分子，諸如α-生育酚)，礦物鹽，諸如鋁鹽(例如，氫氧化鋁磷酸鋁)，包括明礬，或其組合。優(yōu)選地，如果免疫原性組合物包括佐劑，則佐劑增強或增加體液免疫，其特征在于產(chǎn)生抗體，特別是IgG1亞類的IgG抗體?；蛘?，免疫原性組合物在不存在(即沒有)佐劑的情況下配制。通常，含有F蛋白類似物和百日咳抗原的免疫原性組合物在懷孕(妊娠)的末三月期間施用，盡管有益效果(特別是處于增加早產(chǎn)風險的懷孕)可以在末三月開始之前獲得。因此，盡管F蛋白類似物可以在妊娠的26周(從最后一次月經(jīng)期間開始測量)或更晚(例如，妊娠的26和38周之間，或妊娠的28和34周之間)施用，但F蛋白類似物也可以在妊娠的26周之前施用。在接種方案、方法、用途或試劑盒的某些實施方案中，RSV抗原(重組F蛋白類似物)和百日咳抗原共同配制在相同的免疫原性組合物中。在替代實施方案中，RSV抗原(重組F蛋白類似物)和百日咳抗原配制在不同(例如，兩種不同)的免疫原性組合物中，其可以共同施用(即在相同時間或接近相同時間，即，同一天施用)，或在不同天，通常條件是兩種免疫原性組合物在懷孕的末三月期間，例如妊娠的26周后、或妊娠的28周后、通常妊娠的34周前、或妊娠的38周前進行施用。施用于懷孕雌性可通過任何各種途徑實現(xiàn)，例如，肌內(nèi)、皮膚或皮內(nèi)施用途徑。有利地，試劑盒中包括的免疫原性組合物的接種方案、方法、用途或施用引發(fā)懷孕雌性(優(yōu)選，人雌性)中的免疫應答，當經(jīng)由所述胎盤被動轉移到她的妊娠期嬰兒時，其保護嬰兒，例如，從出生到至少約6個月齡的嬰兒。因此，受本文公開的方法保護的嬰兒可以是免疫未成熟的嬰兒，諸如小于六個月齡的嬰兒，諸如小于兩個月齡的嬰兒，例如，小于一個月齡的嬰兒，例如新生兒或新出生嬰兒。有利地，抗體的至少一種亞型，例如，IgG抗體，諸如IgG1抗體經(jīng)由胎盤轉移。也被視為有利的是，母體抗體的亞型(subset)包括針對RSV的中和抗體。在某些實施方案中，抗體的至少一種亞型(subset)經(jīng)由胎盤轉移可以通過免疫學方法(例如，ELISA)來測量。例如，在某些有利的實施方案中，RSV特異性抗體在出生時嬰兒的血清中可以等于或大于30mcg/ml的水平檢測到。類似地，在某些有利的實施方案中，百日咳特異性抗體在出生時嬰兒的血清中可以等于或大于10ELISA單位/ml(EU)的水平檢測到。有利地，對于RSV和百日咳特異性的抗體在嬰兒血清中在出生時以一定水平存在，所述水平保護免于(或抑制)感染，且減少或防止RSV和百日咳引起的疾病，而不損害嬰兒隨后對免疫(或暴露)的響應。任選地，為了確保免疫應答超過六個月齡的持續(xù)性，接種方案、方法或用途(和試劑盒的組合物的施用)可以涉及向嬰兒(懷孕雌性生育的嬰兒)施用一種或多種組合物，所述組合物引發(fā)或誘導嬰兒中針對RSV和/或百日咳的主動免疫應答。向嬰兒施用的一種或多種組合物與向懷孕雌性施用的一種或多種組合物可以是相同或不同的。例如，向嬰兒施用的組合物可包括作為F蛋白類似物的RSV抗原組分，或它可包括作為編碼一種或多種RSV抗原的核酸的RSV抗原組分，諸如活減毒病毒，病毒載體(例如，腺病毒或MVA載體)，或病毒復制子顆?；蚱渌晕覐椭频暮怂?。所述組合物可以可選地或額外包括百日咳抗原組分，其是無細胞百日咳抗原(Pa，例如，一種或多種百日咳蛋白)或全細胞百日咳抗原(Pw)，如本文所述。如果向嬰兒施用RSV抗原組分和百日咳抗原組分兩者，則RSV抗原組分和百日咳抗原組分可以共同配制在相同的免疫原性組合物中?；蛘撸琑SV抗原組分和百日咳抗原組分可以配制在兩種(或更多種)不同的免疫原性組合物中，其可以共同施用(同時或在同一天)，或可根據(jù)不同的時間表(例如，根據(jù)各種批準和/或推薦的小兒免疫時間表)施用。任選地，向嬰兒施用的一種或多種組合物可以包括除了RSV或百日咳以外的一種或多種額外病原體的抗原(例如，配制在通常根據(jù)各種小兒免疫時間表施用的疫苗中)。根據(jù)制劑，免疫原性組合物可以通過各種確立途徑，例如，肌內(nèi)、皮膚、皮內(nèi)和/或粘膜(例如，鼻內(nèi))來向嬰兒施用。本文公開的接種方案、方法、用途和試劑盒可減少RSV和百日咳引起的感染或疾病的發(fā)病率或嚴重度。例如，接種方案、方法、用途和試劑盒可減少RSV疾病(諸如LRTI)的發(fā)生率或嚴重度，或通過減少嚴重RSV疾病(諸如LRTI)的發(fā)生率。類似地，接種方案、方法、用途和試劑盒可減少百日咳博德特氏菌感染引起的疾病的發(fā)病率或嚴重度(例如，“百日咳”咳嗽或肺炎或相關癥狀的持續(xù)時間或嚴重度)。保護嬰兒優(yōu)先包括保護嬰兒免于由RSV和/或百日咳引起的嚴重疾病和住院治療。因此，本文公開的方法和用途可以使RSV和百日咳兩者引起的嚴重疾病的發(fā)病率減少50％或更多、或60％或更多、或70％或更多，如在接種母親的嬰兒組群的嚴重LRTI率和/或住院治療和/或肺炎率相比于未接種母親的嬰兒減少50％或更多、或60％或更多、或70％或更多所測量。術語為了便于概覽本公開的各個實施方案，提供了術語的下列解釋?？梢栽诒竟_的上下文中提供額外術語和解釋。除非另有解釋，本文所使用的所有技術和科學術語與本公開所屬領域普通技術人員的通常理解具有相同含義。分子生物學中的常見術語的定義可見BenjaminLewin,GenesV,由OxfordUniversityPress出版，1994(ISBN0-19-854287-9)；Kendrew等人(編)，TheEncyclopediaofMolecularBiology,由BlackwellScienceLtd.出版，1994(ISBN0-632-02182-9);和RobertA.Meyers(編)，MolecularBiologyandBiotechnology:aComprehensiveDeskReference,由VCHPublishers,Inc.出版，1995(ISBN1-56081-569-8)。除非上下文另有明確指明，單數(shù)術語“一個/種(a)”、“一個/種(an)”和“所述(the)”包括復數(shù)所指物。類似地，除非上下文另有明確指明，詞語“或”意圖包括“和”。術語“多個/種”指兩個/種或更多個/種。應當進一步理解的是，對核酸或多肽給出的所有堿基大小或氨基酸大小，和所有分子量或分子質(zhì)量值是近似的，并且為了描述而提供。另外，關于物質(zhì)諸如抗原的濃度或水平給出的數(shù)值限制意圖為近似的。因此，當指明濃度是至少(例如)200pg，則意圖該濃度被理解為至少近似(或“約”或“～”)200pg。盡管與本文所描述的方法和材料類似或等同的方法和材料可以在本公開的實踐或測試中使用，下文描述了合適的方法和材料。術語“包含”意指“包括”。因此，除非上下文另有要求，詞語“包含(comprises)”及其變化形式諸如“包含(comprise)”和“包含(comprising)”應當理解為暗示包括規(guī)定的化合物或組合物(例如核酸、多肽、抗原)或步驟，或者化合物或步驟的組，但是不排除任何其他化合物、組合物、步驟，或其組?？s寫“例如”(e.g.)衍生自拉丁語exemplifygratia，并且在本文中用于指明非限制性實例。因此，縮寫“例如”(e.g.)與術語“例如”(forexample)是同義的。術語“F蛋白”或“融合蛋白”或“F蛋白多肽”或“融合蛋白多肽”是指具有RSV融合蛋白多肽的整個或部分氨基酸序列的多肽或蛋白。已經(jīng)描述了許多RSV融合蛋白，并且是本領域技術人員已知的。WO2008114149記載了示例性F蛋白變體(例如天然存在的變體)?！癋蛋白類似物”是指包括改變F蛋白的結構或功能的修飾、但保留F蛋白的免疫學特性使得針對F蛋白類似物生成的免疫應答將識別天然F蛋白的F蛋白。以其整體通過引用并入本文的WO2010149745記載了示例性F蛋白類似物。以其整體通過引用并入本文的WO2011008974也記載了示例性F蛋白類似物。F蛋白類似物包括例如PreF抗原，其包括至少一個穩(wěn)定F蛋白的融合前構象的修飾，且通常是可溶的，即不與膜結合。F蛋白類似物也包括融合后F(postF)抗原，其處于RSVF蛋白的融合后構象中，優(yōu)選穩(wěn)定在此類構象中。F類似物進一步包括中間構象、優(yōu)選穩(wěn)定在此類構象的F蛋白。此類替代物通常也是可溶的。在提及核酸或多肽(例如RSVF或G蛋白核酸或多肽，或F類似物核酸或多肽)時，“變體”是指與參照核酸或多肽不同的核酸或多肽。通常，變體與參照核酸或多肽之間的差異構成與所指物相比小比例的差異數(shù)。多肽或蛋白的“結構域”是指多肽或蛋白內(nèi)結構限定的元件。例如，“三聚化結構域”是多肽內(nèi)促進多肽裝配成三聚體的氨基酸序列。例如，三聚化結構域可促進經(jīng)由與(具有相同或不同氨基酸序列的額外多肽的)其他三聚化結構域的結合而裝配成三聚體。該術語也用于指編碼此類肽或多肽的多核苷酸。術語“天然的”和“天然存在的”是指以與其在自然界中相同狀態(tài)存在的元件，諸如蛋白、多肽或核酸。也就是說，該元件未經(jīng)人工修飾。應當理解的是，在本公開的上下文中，RSV蛋白或多肽存在許多天然的/天然存在的變體，例如獲得自不同的天然存在的RSV毒株或分離株。以其整體通過引用并入本文的WO2008114149含有示例性RSV毒株、蛋白和多肽，參見例如圖4。術語“多肽”是指其中單體是經(jīng)由酰胺鍵連接在一起的氨基酸殘基的聚合物。如本文中所使用的術語“多肽”或“蛋白”意圖涵蓋任何氨基酸序列，而且包括經(jīng)修飾的序列諸如糖蛋白。術語“多肽”具體意圖涵蓋天然存在的蛋白，以及重組或合成生成的蛋白。術語“片段”提到多肽時是指多肽的部分(即子序列)。術語“免疫原性片段”是指多肽的保留全長參照蛋白或多肽的至少一個優(yōu)勢免疫原性表位的所有片段。多肽內(nèi)的取向一般以N端至C端方向描述，由各個氨基酸的氨基和羧基部分的取向限定。多肽從N或氨基端朝向C或羧基端翻譯?！靶盘栯摹笔且环N短的氨基酸序列(例如長度為約18-25個氨基酸)，其將新合成的分泌性蛋白或膜蛋白引導至膜及穿過膜，例如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的膜。信號肽常常但不普遍位于多肽的N端，并且常常在蛋白已穿過膜后被信號肽酶切去。信號序列通常含有三種常見的結構特征：N端極性堿性區(qū)(n區(qū))、疏水性核心、和親水性c區(qū)）。術語“多核苷酸”和“核酸序列”是指長度為至少10個堿基的核苷酸聚合形式。核苷酸可以是核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、或任一核苷酸的經(jīng)修飾形式。該術語包括單一和雙重形式的DNA?！胺蛛x的多核苷酸”意指與編碼序列兩者均不緊密相鄰的多核苷酸，它與所述編碼序列在衍生其的生物體的天然存在的基因組中緊密相鄰(一個在5’端上，而一個在3’端上)。在一個實施方案中，多核苷酸編碼多肽。核酸的5’和3’方向通過參照各個核苷酸單位的連接性來限定，并根據(jù)脫氧核糖(或核糖)糖環(huán)的碳位置來指定。以5’至3’方向閱讀多核苷酸序列的信息(編碼)內(nèi)容。“重組”核酸是具有非天然存在的序列或者具有通過人工組合兩個在其他情況中分開的序列區(qū)段制備的序列的核酸。可以通過化學合成或者，更常見地，通過人工操作分離的核酸區(qū)段，例如通過遺傳工程技術來實現(xiàn)此人工組合?！爸亟M”蛋白指由已經(jīng)引入宿主細胞諸如細菌或真核細胞中的異源(例如重組)核酸編碼的蛋白?？梢栽诰哂心軌虮磉_由所引入核酸編碼的蛋白的信號的表達載體上引入核酸，或者可以將核酸整合入宿主細胞染色體中。術語“異源的”就核酸、多肽或另一細胞組分而言表明存在如下組分，其在自然界中通常找不到和/或其源自不同來源或物種?！翱乖笔强稍谥黧w中刺激抗體生成和/或T細胞應答的化合物、組合物、或物質(zhì)，包括注射、吸附、或其他方式引入主體中的組合物。術語“抗原”包括所有相關抗原性表位。術語“表位”或“抗原決定簇”是指抗原上由B和/或T細胞應答的位點?！皟?yōu)勢抗原性表位”或“優(yōu)勢表位”是針對其產(chǎn)生功能上顯著的宿主免疫應答(例如抗體應答或T細胞應答)的那些表位。因此，就針對病原體的保護性免疫應答而言，優(yōu)勢抗原性表位是指在被宿主免疫系統(tǒng)識別時導致產(chǎn)生保護免于由該病原體引起的疾病的那些抗原性部分。術語“T細胞表位”是指在與合適的MHC分子結合時被T細胞特異性結合(經(jīng)由T細胞受體)的表位?！癇細胞表位”是被抗體(或B細胞受體分子)特異性結合的表位?！白魟笔且苑强乖禺愋苑绞皆鰪娒庖邞甬a(chǎn)生的試劑。常見的佐劑包括將抗原吸附至其上的礦物質(zhì)(明礬、氫氧化鋁、磷酸鋁)的懸液；乳狀液，包括油包水、和水包油(及其變體，包括雙重乳狀液和可逆乳狀液)、脂糖、脂多糖、免疫刺激性核酸(諸如CpG寡核苷酸)、脂質(zhì)體、Toll樣受體激動劑(特別是TLR2、TLR4、TLR7/8和TLR9激動劑)，和此類組分的各種組合。“抗體”或“免疫球蛋白”是特異性結合抗原的血漿蛋白，其由四個多肽構成?？贵w分子由通過二硫鍵保持在一起的兩個重鏈多肽和兩個輕鏈多肽(或其倍數(shù))構成。在人中，抗體被定義為五種同種型或類：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。IgG抗體可以進一步分為四個亞類(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)?！爸泻汀笨贵w是能夠抑制病毒的感染性的抗體。因此，對于RSV特異性的中和抗體能夠抑制或降低RSV的感染性。“免疫原性組合物”是適合于對人或動物主體施用(例如在實驗或臨床背景下)的物質(zhì)的組合物，其能夠引發(fā)特異性免疫應答，例如針對病原體諸如RSV或百日咳博德特氏菌）。因此，免疫原性組合物包括一種或多種抗原(例如多肽抗原)或抗原性表位。免疫原性組合物還可以包括一種或多種能夠引發(fā)或增強免疫應答的額外組分，諸如賦形劑、載體、和/或佐劑。在某些情況下，施用免疫原性組合物來引發(fā)保護主體免于由病原體誘導的癥狀或狀況的免疫應答。在一些情況下，在主體暴露于病原體后，通過抑制病原體的復制或細胞感染來預防(或減輕或改善)由病原體引起的癥狀或疾病。在本公開的上下文中，術語免疫原性組合物應當理解成涵蓋意圖用于對主體或主體群體施用以引發(fā)針對RSV或百日咳的保護性、預防性或姑息性免疫應答的組合物(即疫苗組合物或疫苗)。“免疫應答”是免疫系統(tǒng)細胞諸如B細胞、T細胞、或單核細胞對刺激(諸如病原體或抗原(例如，配制為免疫原性組合物或疫苗))的應答。免疫應答可以是B細胞應答，其導致特異性抗體諸如抗原特異性中和性抗體的產(chǎn)生。免疫應答也可以是T細胞應答，諸如CD4+應答或CD8+應答。B細胞和T細胞應答是“細胞”免疫應答的方面。免疫應答也可以是“體液”免疫應答，其由抗體介導，其可以進行檢測和/或測量，例如，通過ELISA測定。在一些情況下，應答對特定抗原是特異性的(即“抗原特異性應答”)。如果抗原衍生自病原體，則抗原特異性應答是“病原體特異性應答”?！氨Ｗo性免疫應答”是抑制病原體的有害功能或活性、減輕病原體感染、或減輕源于病原體感染的癥狀(包括死亡)的免疫應答?？梢岳缤ㄟ^在噬斑減少測定法或中和測定法中抑制病毒復制或噬斑形成，或者通過在體內(nèi)測量對病原體攻擊的抗性來測量保護性免疫應答。主體暴露于免疫原性刺激，諸如病原體或抗原(例如，配制為免疫原性組合物或疫苗)，引發(fā)或誘導對于刺激特異性的初級免疫應答，即，暴露“引發(fā)”免疫應答。隨后暴露(例如，通過免疫)于刺激可以增加或“加強”特異性免疫應答的量級(或持續(xù)時間或兩者)。因此，通過施用免疫原性組合物“加強”預先存在的免疫應答增加抗原(或病原體)特異性應答的量級，(例如，通過增加抗體滴度和/或親和力，通過增加抗原特異性B或T細胞的頻率，通過誘導成熟效應子功能，或其任何組合)。形容詞“藥學可接受的”表明所指物適合于對主體(例如人或動物主體)施用。Remington’sPharmaceuticalSciences，E.W.Martin,MackPublishingCo.,Easton,PA,第15版(1975)描述了適合于治療性和/或預防性組合物(包括免疫原性組合物)的藥學遞送的組合物和制劑(包括稀釋劑)。術語“減輕”是一個相對術語，從而使得如果應答或狀況在施用試劑后得到定量減弱，或者如果與參照試劑相比，它在施用試劑后得到減弱，則所述試劑減輕應答或狀況。類似地，術語“保護”不一定意指試劑完全消除感染或感染引起的疾病的危險，只要應答或狀況的至少一種特征被實質(zhì)上或顯著減少或消除。因此，保護免于或減少感染或疾病或其癥狀的免疫原性組合物可以，但不一定防止或消除所有主體中的感染或疾病，只要感染的發(fā)生率或嚴重度或疾病的發(fā)生率或嚴重度可測量地降低，例如，在所述試劑不存在的情況下或相比于參照試劑的感染或響應的至少約50％，或至少約60％，或至少約70％，或至少約80％，或至少約90％。在某些情況下，降低是下呼吸道感染(LRTI)的發(fā)生率，或嚴重LRTI的發(fā)生率，或由于RSV疾病的住院治療，或RSV引起的疾病的嚴重度。在其他情況下，降低是肺炎的發(fā)生率，或由于百日咳博德特氏菌引起的疾病導致的住院治療的降低?！爸黧w”是活的多細胞脊椎動物生物體。在本公開的上下文中，主體可以是實驗主體，諸如非人動物，例如小鼠、棉鼠、豚鼠、奶?；蚍侨遂`長類。或者，主體可以是人主體。類似地，懷孕雌性和嬰兒可以分別是非人動物或人雌性和嬰兒。母體免疫下呼吸道感染(LRTI)是任何下呼吸道組織的感染，其中最嚴重形式包括細支氣管炎和肺炎。人呼吸道合胞病毒(RSV)是小于6個月齡的嬰兒和懷孕期小于或等于35周的早產(chǎn)兒中下呼吸道感染(LRTI)的最常見的全球性原因。RSV疾病范圍包括從鼻炎(rhinitis)和耳炎(otitis)至肺炎(pneumonia)和細支氣管炎(bronchiolitis)的一大批呼吸癥狀，后兩種疾病與相當高的發(fā)病率和死亡率有關。細菌百日咳博德特氏菌(百日咳)是百日咳的病原體，所述百日咳是在嬰兒和年幼兒童中可嚴重的呼吸系統(tǒng)疾病，其中繼發(fā)性肺炎、窒息和呼吸窘迫和衰竭是嚴重并發(fā)癥。盡管用抗生素治療是可用的，但到診斷出疾病時，細菌毒素可引起嚴重損害。RSV自然感染和用百日咳疫苗免疫兩者導致隨著時間推移減弱的免疫力，其后果是青少年和成人可以充當這些高度傳染性疾病的儲庫。這使新生兒在生命的前幾個月處于特別風險中，其中感染的后果是最嚴重的。保護脆弱的新生兒免于百日咳感染和疾病的策略包括“作繭(cocooning)”，即接種可能與新生兒接觸的青少年和成人(包括產(chǎn)后婦女)。針對百日咳接種孕婦(母體免疫)現(xiàn)在幾個國家中推薦，由此抗百日咳抗體經(jīng)胎盤轉移以提供保護，直至嬰兒可以直接接種。盡管如此，仍存在未滿足的聯(lián)合疫苗的需要，所述聯(lián)合疫苗賦予針對對新生兒和年幼嬰兒構成特別危險的RSV和百日咳博德特氏菌感染和相關疾病的保護。開發(fā)保護嬰兒免于由RSV和百日咳引起的疾病的安全且有效的疫苗中的一個具體挑戰(zhàn)在于，最高的發(fā)生率和最大的發(fā)病率和死亡率在非常年幼的嬰兒中。年幼嬰兒，特別是那些早產(chǎn)兒，可具有不成熟的免疫系統(tǒng)。嬰兒在生理上可能比年長兒童更容易受到下呼吸道疾病的影響。因此，保護年幼嬰兒免于RSV疾病、百日咳和特別是免于嚴重LRTI、肺炎和呼吸窘迫和衰竭是特別重要的。還有嬰兒的接種干擾經(jīng)由胎盤轉移至嬰兒的抗體(“母源抗體”)的潛在風險，使得早期嬰兒期中的接種可能不是足夠有效，例如，以引起完全保護性中和抗體響應。本公開涉及適合用于通過用含有RSVF蛋白類似物和無細胞或全細胞百日咳抗原的安全且有效的免疫原性組合物主動免疫孕婦而保護年幼嬰兒免于由RSV和百日咳引起的疾病的接種方案、方法和免疫原性組合物的用途和試劑盒。F蛋白類似物通過加強或增加由天然暴露于(或針對RSV的先前接種)RSV先前引發(fā)的體液應答的幅度而有利地引發(fā)抗體(例如，中和抗體)。類似地，百日咳抗原通過加強或增加由天然暴露于(或針對百日咳的先前接種)百日咳先前引發(fā)的體液應答的幅度而引發(fā)抗體。響應于F蛋白類似物和百日咳抗原產(chǎn)生的抗體經(jīng)由胎盤轉移至妊娠期嬰兒，導致出生后嬰兒的被動免疫保護，且持續(xù)至對于由RSV和百日咳引起的感染和嚴重疾病的關鍵期(例如，在嬰兒接種是完全保護的之前)。通常，由該方法賦予的被動免疫保護在出生和至少兩個月齡之間持續(xù)，例如，長達約6個月齡，或甚至更長。本文所述的含有F蛋白類似物和/或百日咳抗原的免疫原性組合物經(jīng)設計以誘導強抗體應答(例如，中和抗體)。由于孕婦在她們的生命過程中通常已經(jīng)一種或多次暴露于RSV，所以她們具有存在的對RSV的引發(fā)的響應。到成年暴露于RSV感染的群體的比例基本上是100％。設計保護免于百日咳和預防百日咳的小兒免疫程序是普遍的。然而，盡管廣泛免疫，但百日咳博德特氏菌的自然感染也是常見的。因此，引發(fā)為百日咳也是普遍的。因此，剛出生后和隨后關鍵的前幾個月為嬰兒提供保護免于RSV和百日咳可以通過增加母體中針對RSV和百日咳的血清抗體應答(水平)盡可能有效地和就可以穿過胎盤且為嬰兒提供保護的特定抗體亞類(亞型)諸如IgG1而言有利地加強這些引發(fā)的應答來實現(xiàn)。在一個實施方案中，用于本文中使用的免疫原性組合物不包括佐劑，或包括有利于強烈IgG1應答的佐劑，諸如礦物鹽諸如鋁鹽或鈣鹽，特別是氫氧化鋁、磷酸鋁或磷酸鈣。因此，一個具體實施方案中，用于本文所述的方法和用途的F蛋白類似物有利地用無機鹽(優(yōu)選明礬)配制。在替代實施方案中，有利于強烈IgG1應答的佐劑是水包油乳狀液、或皂苷，諸如QS21(或其脫毒版本)，這將在下面更詳細地描述。懷孕雌性可以是人雌性，并且相應地，嬰兒或妊娠期嬰兒可以是人嬰兒。對于懷孕的人雌性，正在發(fā)育胎兒的胎齡從最后一次月經(jīng)周期的開始進行測量。受孕后周數(shù)從最后一次月經(jīng)周期開始后14天進行測量。因此，當懷孕婦女據(jù)說是受孕后24周時，這將等于她最后一次月經(jīng)周期開始后26周，或妊娠的26周。當懷孕已通過輔助生殖技術實現(xiàn)時，正在發(fā)育的胎兒的妊娠期從受孕日期之前兩周進行計算。如本文所使用的術語“妊娠期嬰兒”意指懷孕雌性的胎兒或正在發(fā)育的胎兒。術語“胎齡”用于指孕周數(shù)，即從最后一次月經(jīng)周期開始后的周數(shù)。人妊娠通常是從最后一次月經(jīng)周期開始約40周，并且可以方便地分成幾個三個月，第一個三個月從最后一次月經(jīng)周期的第一天延伸到妊娠的第13周；第二個三個月從妊娠的第14周跨越至跨越妊娠的第27周，且末三月在第28周開始，延伸直到出生。因此，末三月在受孕后26周開始，并且繼續(xù)直到嬰兒的出生。當是指人時，術語“嬰兒”是0和兩歲之間。將理解的是，由本文所述的方法和用途提供的保護可以潛在地為嬰兒至2歲到11歲的兒童、或例如2歲到5歲的早期兒童或甚至12歲到18歲的青春期提供保護。然而，在嬰兒期過程中，個體最容易受到嚴重RSV疾病和百日咳(百日咳)的并發(fā)癥的影響，所以這是本公開的焦點(例如，從出生到約6個月齡)。在生命的前幾個月，特別是當早產(chǎn)時，例如35周妊娠之前，當免疫系統(tǒng)不能足夠充分發(fā)育以達到能夠以發(fā)育的免疫系統(tǒng)將能夠響應于相同病原體發(fā)揮作用的方式防止病原體引起的感染或疾病的免疫應答時，人嬰兒可以是在免疫不成熟的。免疫不成熟的嬰兒比具有更發(fā)達或成熟的免疫系統(tǒng)的嬰兒更可能屈服于病原體引起的感染和疾病。人嬰兒還可以由于生理和發(fā)育的原因在生命的前幾個月過程中具有對LRTI(包括肺炎)的增加的脆弱性，例如，氣道很小，并且相比于兒童和成人不那么發(fā)達或成熟的。由于這些原因，當我們在本文中提到嬰兒期的前六個月時，這對于不成熟或早產(chǎn)嬰兒可以根據(jù)低于40周或低于38周或低于35周的胎齡丟失的時間量進行延伸。在一個替代實施方案中，懷孕雌性及其嬰兒來自任何物種，諸如上述在“主體”下的那些。對于懷孕動物，諸如懷孕豚鼠或牛，受孕后的時間被測量從交配開始的時間。在人和一些動物(例如豚鼠)中，抗體從母體經(jīng)由胎盤傳給胎兒。一些抗體同種型可優(yōu)先通過胎盤轉移，例如，在人中，IgG1抗體是通過胎盤最有效地轉移的同種型。盡管亞類存在于實驗動物諸如豚鼠和小鼠中，但各種亞類不一定行使相同功能，并且人和動物的亞類之間的直接關聯(lián)不能容易地實現(xiàn)。有利地，通過降低抑制RSV和百日咳引起的感染和減少RSV和百日咳引起的疾病的發(fā)病率或嚴重度保護嬰兒覆蓋至少新生兒期間和非常年幼的嬰兒期，例如出生后生命的至少前幾周，諸如從出生的第一個月，或從出生的前兩個月或前三個月或前四個月或前五個月或前六個月，或更長時間，例如，當嬰兒是妊娠的約40周或更晚生育的完全足月嬰兒時。前幾個月后，當嬰兒不那么容易受到嚴重RSV疾病和百日咳的影響時，針對這些感染的保護可以減弱。因此，重要保護在當最需要它的期間過程中提供。在早產(chǎn)兒的情況下，有利地，根據(jù)出生時嬰兒的胎齡，提供保護持續(xù)從出生的更長期間，例如至少等于嬰兒出生和已經(jīng)是35周妊娠(即，到約5個額外周)或38周妊娠(約2個額外周)或更長的時間之間的時間間隔的額外時間期間。將明顯的是，保護嬰兒不一定意指100％保護免于RSV或百日咳的感染。如果感染或疾病的發(fā)生率或嚴重度存在降低，則將認識到提供保護。保護嬰兒優(yōu)先包括保護嬰兒免于RSV和百日咳引起的嚴重疾病和住院治療。因此，本文公開的方法和用途減少RSV和百日咳引起的感染或疾病諸如LRTI、肺炎或其他癥狀或疾病的發(fā)生率或嚴重度。例如，施用本文公開的含有F蛋白類似物的免疫原性組合物可相比于未接種母親的嬰兒使LRTI的(接種母親的嬰兒的組群中)發(fā)生率降低至少約50％，或至少約60％，或60至70％，或至少約70％，或至少約80％，或至少約90％。有利地，此類施用相比于未接種母親的感染嬰兒使LRTI的嚴重度降低至少約50％，或至少約60％，或60至70％，或至少約70％，或至少約80％，或至少約90％。有利地，此類施用相比于未接種母親的感染嬰兒使此類組群中由于嚴重RSV疾病導致的住院治療的需要降低至少約50％，或至少約60％，或60至70％，或至少約70％，或至少約80％，或至少約90％。是否被認為存在由于嚴重LRTI導致的住院治療的需要，或是否LRTI的具體病例住院治療，可以因國家不同而不同，并且因此，根據(jù)本領域眾所周知的定義的臨床癥狀而判斷的嚴重LRTI可以是比需要住院治療更好的措施。就百日咳而言，施用本文公開的含有無細胞或全細胞百日咳抗原的免疫原性組合物可相比于未接種母親的嬰兒使嚴重疾病(例如，肺炎和/或呼吸窘迫和衰竭)的(接種母親的嬰兒的組群中)發(fā)生率降低至少約50％，或至少約60％，或60至70％，或至少約70％，或至少約80％，或至少約90％。有利地，此類施用相比于未接種母親的感染嬰兒使肺炎的嚴重度降低至少約50％，或至少約60％，或60至70％，或至少約70％，或至少約80％，或至少約90％。有利地，此類施用相比于未接種母親的感染嬰兒使此類組群中由于嚴重的百日咳并發(fā)癥導致的住院治療的需要降低至少約50％，或至少約60％，或60至70％，或至少約70％，或至少約80％，或至少約90％。通常，根據(jù)接種方案、方法、用途和試劑盒，將F蛋白類似物和百日咳抗原在懷孕(妊娠)的末三月過程中施用于懷孕雌性。母體免疫的時機經(jīng)設計以允許生成母體抗體和母體抗體轉移至胎兒。因此，有利地，免疫和出生之間經(jīng)過足夠時間，以允許母體抗體通過胎盤的最佳轉移。抗體轉移在人中通常在妊娠的約25周開始，增加直至28周，并且從妊娠的約30周變得最佳且保持最佳。據(jù)信在如本文所述的母體免疫和出生之間需要最少約二至四周，以允許針對RSVF蛋白和百日咳抗原(例如，包含百日咳類毒素(PT)、絲狀血細胞凝集素(FHA)、百日咳桿菌粘附素(PRN)、2型菌毛蛋白(FIM2)、3型菌毛蛋白(FIM3)和BrkA、或全細胞百日咳抗原中的一種或多種)的母體抗體有效轉移至胎兒。因此，母體免疫可以在妊娠25周后的任何時間發(fā)生，例如在妊娠的25、26、27、28、29、30、31、32、33或34周(受孕后的23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36周)或其之后，或妊娠的38、37、36、35、34、33、32、31或30周(受孕后的36、35、34、33、32、31、29或28周)在或其之前發(fā)生。有利地，母體免疫在妊娠的26至38周，諸如28至34周實施。有利地，母體免疫在嬰兒的預產(chǎn)期之前至少兩周或至少三周或至少四周或至少五周或至少六周實施。在懷孕雌性處于早產(chǎn)風險的情況下，施用時機可能需要進行調(diào)整，以便提供足夠時間用于生成抗體和轉移至胎兒。有利地，將F蛋白類似物和百日咳抗原或其制劑在所述期間過程中以單一劑量施用于懷孕雌性。如本文所述的針對RSV和百日咳的母體免疫可以被認為是現(xiàn)有的針對RSV和百日咳的母體免疫的“加強劑”，其增加先前已經(jīng)引發(fā)(例如，通過天然暴露或接種)的針對RSV和百日咳的免疫應答。因此，預期只需要單一劑量。如果施用第二劑量，則這有利地也在施用第一劑量的時間期間內(nèi)，有利地第一和第二劑量之間的時間差為例如一至八周或兩至六周，例如兩周或四周或六周。向懷孕雌性施用F蛋白類似物和百日咳抗原導致加強母體抗體滴度，例如，增加血清(例如，中和)抗體，優(yōu)選IgG1亞類的滴度。母親中增加的抗體滴度導致RSV特異性和百日咳特異性抗體(例如，具有中和效應子功能)經(jīng)由Fc受體介導的主動轉運機制(例如，在絨膜絨毛的合體滋養(yǎng)細胞(syncytiotrophoblast)中)通過胎盤被動轉移至正在孕育的嬰兒。由本文公開的免疫方法產(chǎn)生的RSV-和百日咳特異性的IgG1抗體的跨胎盤轉運預期是有效的，且導致的滴度在足月或接近足月出生的嬰兒中接近、等于或超過母體循環(huán)中的滴度。例如，RSV特異性抗體的滴度有利地在出生時在至少30mcg/mL的水平。通常，所述滴度在足月妊娠出生的健康嬰兒中等于或超過該水平，諸如在40mcg/mL，50mcg/mL，60mcg/mL，或甚至更高，諸如75mcg/mL，80mcg/mL，90mcg/mL，100mcg/mL，或者甚至高達120mcg/mL或更高。百日咳-(例如，PT-)特異性抗體的滴度通常通過ELISA在ELISA單位/ml(EU)的方面進行測量，如描述于，例如，Meade等人,“Descriptionandevaluationofserologicassaysusedinamulticentertrialofacellularpertussisvaccines”,Pediatrics(1995)96:570-5。簡而言之，例如，微量滴定板(例如，Immulon2,VWRInternational,WestChester,PA,USA)用標準量的PT、FHA、FIM或PRN包被。血清的系列稀釋液在28℃孵育約2小時，并且添加堿性磷酸酶綴合的山羊抗人IgG的適當稀釋液。將反應顯色且在405nm讀數(shù)。每種特定抗體的檢測下限通過多次測量每種抗原的系列稀釋的參照材料來測定，并且對于PT、FHA和PRN設定為1個ELISA單位(EU)，對于FIM設定為2個EU。有利地，在施用根據(jù)本文公開的接種方案、方法、用途或如試劑盒中所含的包含百日咳抗原的免疫原性組合物之后，百日咳特異性抗體滴度在出生時為至少10EU的水平。通常，滴度可以等于或高于該水平，諸如等于20EU、30EU、40EU、50EU、60EU、70EU、80EU、90EU，或等于或高于100EU。這些值可以基于個體或基于群體平均值。有利地，在出生時觀察到的抗體水平高于規(guī)定閾值，且在出生后持續(xù)幾個月。轉移抗體的效應子功能，例如，中和能力(中和滴度)也可進行評價，并且提供與保護相關的抗體的功能屬性的量度。例如，在RSV的情況下，將特定量的能夠復制的RSV病毒和血清的定義稀釋液混合并孵育。然后將病毒血清反應混合物轉移到容許病毒復制的宿主細胞(例如，HEp-2細胞)上，并且在適于細胞生長和病毒復制的條件和時間段孵育。未中和的病毒能夠感染宿主細胞和在宿主細胞中復制。這導致在細胞單層上形成給定數(shù)量的噬斑形成單位(PFU)，這可以使用熒光標簽的抗RSV抗體來檢測。中和滴度通過計算誘導與單獨病毒在無血清的情況下感染的細胞單層相比PFU的指定水平的抑制(例如，50％抑制或60％抑制)的血清稀釋度來測定。例如，帕利珠單抗抗體已顯示具有分別針對臨床RSVA和RSVB分離株的0.65mcg/mL(平均0.75±0.53mcg/mL；n=69，范圍0.07-2.89mcg/mL)和0.28mcg/mL(平均0.35±0.23mcg/mL；n=35，范圍0.03-0.88mcg/mL)的中和滴度(50％有效濃度[EC50])，所述中和滴度表示為與未處理的病毒感染的細胞相比使RSV抗原的檢測降低50％需要的抗體濃度。因此，在某些實施方案中，經(jīng)由胎盤轉移到妊娠期嬰兒的抗體的中和滴度可以在出生后的嬰兒中測量，并且對于RSVA毒株具有(基于群體中值)至少約0.50mcg/mL(例如，至少約0.65mcg/mL)或更大的EC50，并且對于RSVB毒株具有至少約0.3mcg/mL(例如，至少約0.35mcg/mL)或更大的EC50。有利地，中和抗體滴度在出生后持續(xù)數(shù)周至數(shù)月維持高于規(guī)定閾值。對于百日咳毒素特異性的抗體的毒素中和效應子功能，如果需要，也可以，例如，在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中和測定中，進行測量，所述測定，例如，描述于Gillenius等人,“ThestandardizationofanassayforpertussistoxinandantitoxininmicroplatecultureofChinesehamsterovarycells”.J.Biol.Stand.(1985)13:61-66。然而，該測定中的中和活性與保護不是那么良好相關。任選地，根據(jù)本文公開的接種方案、方法、用途和試劑盒，為了延長針對RSV和百日咳的保護超越被動轉移的母體抗體提供保護的生命的最初幾個月，可以對嬰兒主動免疫以引發(fā)對于RSV和/或百日咳特異性的適應性免疫應答。嬰兒的此類主動免疫可以通過施用一種或多于一種含有RSV抗原和/或百日咳抗原的組合物來實現(xiàn)。例如，所述(一種或多種)組合物可以包含F(xiàn)蛋白類似物，任選地與佐劑配制以增強抗原引發(fā)的免疫應答。對于向以前尚未暴露于RSV的嬰兒的施用，F(xiàn)蛋白類似物可以與佐劑配制，其引發(fā)免疫應答，所述免疫應答的特征在于產(chǎn)生表現(xiàn)出Th1細胞因子概況的T細胞(或者，特征在于表現(xiàn)出Th1和Th2細胞因子概況的T細胞的平衡)。或者，而不是施用F蛋白類似物或其他蛋白亞單位疫苗，引發(fā)適應性免疫應答以保護免于RSV的組合物可以包括活減毒病毒疫苗，或編碼一種或多種RSV抗原(諸如F抗原、G抗原、N抗原或M2抗原或其部分)的核酸。例如，所述核酸可以在載體中，諸如重組病毒載體，例如，腺病毒載體，腺相關病毒載體，MVA載體，麻疹載體等。示例性病毒載體公開于WO2012089231，其出于說明含有編碼一種或多種RSV抗原的病毒載體的免疫原性組合物的目的并入本文?；蛘撸怂峥梢允亲晕覐椭频暮怂?，諸如自我復制的RNA，例如，呈病毒復制子，諸如α病毒復制子的形式(例如，呈用病毒結構蛋白包裝的病毒復制子顆粒的形式)。此類自我復制的RNA復制子的實例描述于WO2012/103361，其出于公開編碼RSV蛋白的RNA復制子和它們的作為免疫原性組合物的制劑的目的并入本文。額外或替代地，可以將一種或多種含有百日咳抗原的組合物施用于嬰兒。例如，所述組合物可以包括選自以下的無細胞百日咳抗原：百日咳類毒素(PT)、絲狀血細胞凝集素(FHA)、百日咳桿菌粘附素(PRN)、2型菌毛蛋白(FIM2)、3型菌毛蛋白(FIM3)和BrkA或其組合(例如，PT和FHA；PT、FHA和PRN；或PT、FHA、PRN和FIM2和FIM3中的一者或兩者)，例如，其中PT如下所述化學或遺傳類毒素化?；蛘撸鼋M合物可以包括如下所述的全細胞百日咳抗原。在某些實施方案中，將RSV抗原組分(例如，重組蛋白，諸如F蛋白類似物)和百日咳抗原組分共同配制成待根據(jù)本文所述的接種方案、方法或用途施用的單一免疫原性組合物?；蛘?，將RSV抗原組分和百日咳抗原組分配制在兩種(或更多種)不同的免疫原性組合物中，其可以，例如，根據(jù)各種批準和推薦的小兒免疫時間表，在相同或不同的時間施用。當將引發(fā)適應性RSV免疫應答和/或適應性百日咳免疫應答的組合物施用于在懷孕過程中接受本文公開的RSV疫苗的母親生育的嬰兒時，所述組合物可以施用一種或多次。第一次施用可以在出生時或接近出生時(例如，在出生當天或出生次日)，或出生1周內(nèi)或在出生約2周內(nèi)。或者，第一次施用可以在出生后約4周，出生后約6周，出生后約2個月，出生后約3個月，出生后約4個月，或更晚，諸如出生后約6個月，出生后約9個月，或出生后約12個月。例如，在含有百日咳抗原(例如，Pa或Pw)的組合物的情況下，通常在出生后約2、4和6個月施用疫苗(隨后在12-18個月和任選4-7歲之間的額外劑量)。因此，在一個實施方案中，本公開提供用于通過向雌性生育的嬰兒施用一種或多種引發(fā)對于RSV和/或百日咳特異性的免疫應答的組合物而保護嬰兒免于RSV和百日咳引起的疾病的方法，所述雌性在她懷有該嬰兒時過程中施用包含F(xiàn)蛋白類似物和百日咳抗原的免疫原性組合物。RSVF蛋白類似物本文公開且適于接種方案、方法、用途和試劑盒中使用的重組RSV抗原是源自(即，免疫上全部或部分對應于)RSVF蛋白的F蛋白類似物。它們可以包括一個或多個改變F蛋白的結構或功能的修飾、但保留F蛋白的免疫學特性，使得針對F蛋白類似物生成的免疫應答將識別天然F蛋白并因此識別RSV。本文所述的F蛋白類似物可用作免疫原。本文參照本領域中廣泛接受的術語和名稱來提供RSVF蛋白結構的詳情，并在圖1A中示意性顯示。參照F蛋白多肽的一級氨基酸序列(圖1A)，利用下列術語來描述F蛋白類似物的結構特征。術語F0指全長翻譯的F蛋白前體。F0多肽可以細分成由稱作pep27的居間肽分開的F2結構域和F1結構域。成熟過程中，F(xiàn)0多肽在位于F2和F1之間且在pep27側翼的兩個弗林蛋白酶位點處經(jīng)歷蛋白水解切割。為了隨后的討論，F(xiàn)2結構域包括F蛋白氨基酸1-109的至少一部分，并且多達所有，而F1結構域的可溶性部分包含F(xiàn)蛋白氨基酸137-526的至少一部分，并且多達所有。如上文所指明的，這些氨基酸位置(和本文指明的所有隨后的氨基酸位置)參照SEQIDNO：2的示例性F蛋白前體多肽(F0)給出。在自然界中，RSVF蛋白表達為長度為574個氨基酸的單一多肽前體，稱作F0。在體內(nèi)，F(xiàn)0在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中寡聚化，并且在兩種保守的弗林蛋白酶共有序列(弗林蛋白酶切割位點)，即RARR109(SEQIDNO：15)和RKRR136(SEQIDNO：16)處被弗林蛋白酶蛋白水解加工以產(chǎn)生由兩個二硫化物連接的片段組成的寡聚物。這些片段中較小者稱作F2，并且源于F0前體的N端部分。本領域技術人員應當認識到的是，縮寫F0、F1和F2在科學文獻中通常稱作F0、F1和F2。較大的、C端F1片段經(jīng)由疏水性氨基酸序列錨定膜中的F蛋白，所述疏水性氨基酸與24個氨基酸的胞質(zhì)尾部相鄰。三個F2-F1二聚體結合以形成成熟的F蛋白，其采用亞穩(wěn)性融原前(prefusogenic)(“融合前”)構象，該構象在與目標細胞膜接觸后得到觸發(fā)以經(jīng)受構象變化。此構象變化暴露疏水性序列(稱為融合肽)，其與宿主細胞膜結合，并促進病毒或受感染細胞的膜與目標細胞膜融合。F1片段至少含有兩種七價(heptad)重復結構域，稱作HRA和HRB，并且分別位于融合肽和跨膜錨定結構域附近。處于融合前構象，F(xiàn)2-F1二聚體形成球狀頭部和莖狀結構，其中HRA結構域在球狀頭部中處于分段的(延伸的)構象。相比之下，HRB結構域形成自頭部區(qū)域延伸的三鏈卷曲螺旋莖。從融合前向融合后構象轉變期間，HRA結構域崩塌(collapse)，并使其接近HRB結構域以形成反平行的六螺旋束。處于融合后狀態(tài)，融合肽和跨膜域并列以便于膜融合。盡管上文所提供的構象描述基于晶體學數(shù)據(jù)的分子建模，但是可以在不訴諸于晶體學的情況下監(jiān)測融合前與融合后構象之間的結構差別。例如，可以使用電子顯微照相術來區(qū)別融合前和融合后(或者稱作融原前和融原)構象，如由Calder等人,Virology,271:122-131(2000)和Morton等人,Virology,311:275-288所表明，其出于它們的技術教導的目的通過引用并入本文。也可以通過脂質(zhì)體結合測定法來區(qū)別融合前構象與融原(融合后)構象，如由Connolly等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:17903-17908(2006)所描述的，其出于其技術教導的目的通過引用并入本文。另外，可以使用如下抗體來區(qū)別融合前與融原構象，所述抗體特異性識別在RSVF蛋白的融合前或融原形式之一種或另一種上存在，而另一種形式上不存在的構象表位。此類構象表位可以是由于分子表面上抗原決定簇的優(yōu)先暴露。或者，構象表位可以源于線性多肽中非連續(xù)氨基酸的并列。通常，F(xiàn)蛋白類似物(PreF、PostF等)類似物缺乏跨膜結構域和胞質(zhì)尾，并且也可以被稱為F蛋白胞外結構域或可溶性F蛋白胞外結構域。F蛋白類似物包括F蛋白多肽，其已經(jīng)進行修飾以穩(wěn)定F蛋白的融合前構象，即成熟的經(jīng)裝配的F蛋白在與宿主細胞膜融合前的構象。出于清晰和簡單的目的，這些F蛋白類似物稱作“PreF類似物”、“PreF”或“PreF抗原”并且通常是可溶的。本文所公開的PreF類似物以如下發(fā)現(xiàn)為基礎，即已經(jīng)通過并入異源三聚化結構域來修飾的可溶性F蛋白類似物展現(xiàn)出改進的免疫原性特征，而且在對主體體內(nèi)施用時是安全且高度保護性的。示例性PreF抗原描述于WO2010149745，其出于提供PreF抗原的實例的目的以其整體通過引用并入本文。F蛋白類似物也包括F蛋白多肽，其具有融合后F蛋白的構象，并且可被稱為PostF抗原或融合后抗原。PostF類似物描述于通過引用并入本文的WO2011008974。PostF抗原含有至少一個修飾以改變天然融合后F蛋白的結構或功能。在一個優(yōu)選實施方案中，用于母體免疫以保護嬰兒免于RSV疾病的組合物包括細胞粘附和融合之前在病毒上發(fā)現(xiàn)的融合前構象中穩(wěn)定的RSVPreF類似物抗原。圖1B中提供了示例性PreF類似物的示意圖。本領域技術人員將理解，根據(jù)本文提供的教導，可以修飾任何RSVF蛋白來穩(wěn)定融合前構象。因此，為了便于理解指導PreF(以及PostF，和其他構象)類似物的產(chǎn)生的原則，各個結構組分會參照示例性F蛋白來指明，所述示例性F蛋白的多核苷酸和氨基酸序列分別在SEQIDNOs:1和2中提供。類似地，當可適用時，G蛋白抗原參照示例性G蛋白來描述，所述示例性G蛋白的多核苷酸和氨基酸序列分別在SEQIDNOs:3和4中提供。將本文所公開的PreF類似物設計成穩(wěn)定并維持RSVF蛋白的融合前構象，從而使得在所表達蛋白的群體中，實質(zhì)部分的所表達蛋白群體處于融原前(融合前)構象(例如如通過結構和/或熱力學建模所預測或者如通過上文所公開的一種或多種方法所評價)。將穩(wěn)定化修飾引入天然的(或合成的)F蛋白諸如SEQIDNO：2的示例性F蛋白中，從而使得F蛋白的融合前構象的主要免疫原性表位在將PreF類似物引入細胞或細胞外環(huán)境后(例如在體內(nèi)，例如在對主體施用后)得到維持。第一，可以在構建體的C端末端放置異源穩(wěn)定化結構域以替換F0多肽的膜錨定域。預測此穩(wěn)定化結構域補償HRB不穩(wěn)定性，有助于穩(wěn)定融合前構象異構體。在示例性的實施方案中，異源穩(wěn)定化結構域是蛋白多聚化域。此類蛋白多聚化域的一個特別有利的實例是三聚化結構域。示例性三聚化結構域折疊成卷曲螺旋，其促進裝配成具有此類卷曲螺旋域的多個多肽的三聚體。三聚化結構域的實例包括來自流感血細胞凝集素、SARS刺突、HIVgp41、修飾的GCN4、噬菌體T4fibritin和ATCase的三聚化結構域。三聚化結構域的一個有利的實例是異亮氨酸拉鏈。一種示例性異亮氨酸拉鏈結構域是由Harbury等人Science262:1401-1407(1993)所描述的經(jīng)工程改造的酵母GCN4異亮氨酸變體。一種合適的異亮氨酸拉鏈域的序列以SEQIDNO：11表示，盡管保留形成卷曲螺旋穩(wěn)定化結構域的能力的該序列的變體是同樣合適的。替代的穩(wěn)定化卷曲螺旋三聚化結構域包括：TRAF2(GENBANK?登錄號Q12933[gi:23503103]；氨基酸299-348)；血小板反應蛋白1(登錄號PO7996[gi:135717]；氨基酸291-314)；胞外基質(zhì)蛋白-4(登錄號O95460[gi:14548117]；氨基酸594-618)；CMP(胞外基質(zhì)蛋白-1)(登錄號NP_002370[gi:4505111]；氨基酸463-496)；HSF1(登錄號AAX42211[gi:61362386]；氨基酸165-191)；和Cubilin(登錄號NP_001072[gi:4557503]；氨基酸104-138)。預期合適的三聚化結構域導致實質(zhì)部分的所表達蛋白裝配成三聚體。例如，至少50％的具有三聚化結構域的重組PreF多肽將裝配成三聚體(例如如通過AFF-MALS所評價)。通常，至少60％，更有利地，至少70％，并且最期望地，至少約75％或更多的所表達多肽作為三聚體存在。穩(wěn)定化突變的另一個實例是將親水性氨基酸添加或取代入F蛋白的疏水域中。通常，會在疏水區(qū)中添加帶電荷的氨基酸諸如賴氨酸或者用其取代中性殘基諸如亮氨酸。例如，可以將/用親水性氨基酸添加至或取代F蛋白胞外結構域的HRB卷曲螺旋域內(nèi)的疏水性或中性氨基酸。通過實例的方式，可以用帶電荷的氨基酸殘基諸如賴氨酸取代F蛋白的位置512處存在的亮氨酸(相對于天然F0多肽；SEQIDNO：6的示例性PreF類似物多肽的L482K)?？蛇x地或額外地，可以將/用親水性氨基酸添加至或取代F蛋白的HRA結構域內(nèi)的疏水性或中性氨基酸。例如，可以在PreF類似物的位置105-106處或者接近位置105-106處(例如在對應于參照SEQIDNO：2的殘基105的氨基酸之后，諸如在氨基酸105和106之間)插入一個或多個帶電荷的氨基酸諸如賴氨酸。任選地，可以在HRA和HRB結構域兩者中添加親水性氨基酸或者用親水性氨基酸取代?；蛘撸梢匀笔б粋€或多個疏水性殘基，只要PreF類似物的總體構象沒有受到不利影響。第二，可以去除pep27。對處于融合前狀態(tài)的RSVF蛋白的結構模型的分析提示pep27在F1和F2之間產(chǎn)生大的無約束環(huán)。此環(huán)并不促成融合前狀態(tài)的穩(wěn)定化，并且在弗林蛋白酶切割天然蛋白后被去除。因此，pep27也可以從涉及融合后(或其他)構象類似物的實施方案中去除。第三，可以缺失兩個弗林蛋白酶切割基序中的一者或兩者(從天然F0蛋白的F2和F1結構域之間)。位于位置105-109或106-109和位置133-136的一個或兩個弗林蛋白酶識別位點可以通過以下去除：缺失或取代弗林蛋白酶識別位點的一個或多個氨基酸，例如缺失一個或多個氨基酸或取代一個或多個氨基酸或一個或多個取代或缺失的組合，或使得蛋白酶不能將PreF(或其他F蛋白類似物)多肽切割為其組成結構域的修飾。任選地，也可以去除或用例如接頭肽取代居間pep27肽。另外，或任選地，可以去除或取代接近融合肽的非弗林蛋白酶切割位點(例如位置112-113的金屬蛋白酶位點)。因此，可以獲得用于根據(jù)本發(fā)明的方法和用途中使用的F蛋白類似物，這是具有一個或多個改變的弗林蛋白酶切割位點的未裂解胞外域。此類F蛋白類似物多肽在宿主細胞中重組產(chǎn)生，所述宿主細胞在氨基酸101至161的位置未切割，例如在位置105-109和131-136的弗林蛋白酶切割位點未切割的形式分泌它們。在具體實施方案中，取代K131Q，在位置131-134的氨基酸缺失，或取代K131Q或R133Q或R135Q或R136Q，被用來抑制136/137的切割。在一個示例性設計中，不從F2切割融合肽，這阻止從融合前構象異構體的球狀頭部釋放和與鄰近膜的可接近性。預測融合肽與膜界面之間的相互作用是融合前狀態(tài)不穩(wěn)定性的主要問題。融合過程期間，融合肽與目標膜之間的相互作用導致融合肽從球狀頭部結構內(nèi)暴露，增強融合前狀態(tài)的不穩(wěn)定性，并折疊成融合后構象異構體。此構象變化實現(xiàn)膜融合過程。預測去除兩個弗林蛋白酶切割位點中的一者或兩者阻止膜與融合肽N端部分的可接近性，這穩(wěn)定融合前狀態(tài)。因此，在本文公開的示例性實施方案中，去除弗林蛋白酶切割基序導致產(chǎn)生包含完整融合肽的PreF類似物，其在加工和裝配期間或之后不被弗林蛋白酶切割。任選地，還可以通過例如取代一個或多個氨基酸來去除至少一個非弗林蛋白酶切割位點。例如，實驗證據(jù)提示，在有助于某些金屬蛋白酶進行切割的條件下，可以在氨基酸110-118附近切割F蛋白類似物(例如其中切割在F蛋白類似物的氨基酸112和113之間；在參照F蛋白多肽SEQIDNO：2的位置142的亮氨酸和位置143的甘氨酸之間發(fā)生)。因而，該區(qū)域內(nèi)的一個或多個氨基酸的修飾可降低F蛋白類似物的切割。例如，可以用不同氨基酸諸如異亮氨酸、谷氨酰胺或色氨酸(如SEQIDNO：20的示例性實施方案中所示)取代位置112的亮氨酸?？蛇x地或額外地，可以用絲氨酸或丙氨酸取代位置113的甘氨酸。在進一步實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物進一步含有改變的胰蛋白酶切割位點，并且F蛋白類似物在氨基酸101和161之間的位點不被胰蛋白酶切割。任選地，F(xiàn)蛋白類似物可以包括一個或多個改變糖基化模式或狀態(tài)的修飾(例如通過提高或降低天然F蛋白多肽中存在的一個或多個糖基化位點上被糖基化的分子比例)。例如，預測SEQIDNO：2的天然F蛋白多肽可以在氨基酸位置27、70和500(對應SEQIDNO：6的示例性PreF類似物的位置27、70和470)被糖基化。在一個實施方案中，在位于氨基酸位置500的糖基化位置附近引入修飾(指定為N470)。例如，可以通過用氨基酸諸如谷氨酰胺(Q)取代以替代(通過比對對應于示例性PreF類似物的位置470的參照序列的)位置500的天冬酰胺去除糖基化位點。有利地，在該糖基化位點引入增加糖基化效率的修飾。合適修飾的實例包括在位置500-502的以下氨基酸序列：NGS、NKS、NGT、NKT。有趣的是，已發(fā)現(xiàn)導致該糖基化位點的糖基化增加的修飾也導致實質(zhì)增加的PreF產(chǎn)生。因此，在某些實施方案中，PreF類似物在對應于參照PreF序列(SEQIDNO：2)氨基酸500的位置(例如在SEQIDNO：6所例舉的PreF類似物的位置470)具有修飾的糖基化位點。合適的修飾包括在對應于參照F蛋白多肽序列中位置500-502的氨基酸的序列：NGS、NKS、NGT、NKT。包括“NGT”修飾的示例性實施方案的氨基酸提供于SEQIDNO:18。本領域技術人員可以容易地確定對應NGS、NKS和NKT修飾的類似修飾。此類修飾有利地與任何本文公開的穩(wěn)定化突變(例如，異源卷曲螺旋，諸如異亮氨酸拉鏈，疏水性區(qū)域中的結構域和/或修飾，和/或去除pep27，和/或去除弗林蛋白酶切割位點，和/或去除非弗林蛋白酶切割位點，和/或去除非弗林蛋白酶切割位點)進行組合。例如，在一個具體實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物包括去除非弗林蛋白酶切割位點的取代和增加糖基化的修飾。示例性PreF類似物序列提供于SEQIDNO:22(其示例性實施方案包括“NGT”修飾和谷氨酰胺取代位置112的亮氨酸的取代)。例如，在某些示例性實施方案中，糖基化修飾的PreF類似物選自：a)包含SEQIDNO:22或由其組成的多肽；b)由SEQIDNO:21或在嚴格條件下在實質(zhì)上其整個長度與SEQIDNO:21雜交的多核苷酸序列編碼的多肽；c)與SEQIDNO:22具有至少95％序列同一性的多肽。更通常，本文公開的任一穩(wěn)定修飾，例如添加異源穩(wěn)定結構域，諸如卷曲螺旋(例如，異亮氨酸拉鏈結構域)，優(yōu)選位于可溶性F蛋白類似物的C末端；疏水HRB結構域中殘基的修飾，諸如亮氨酸到賴氨酸的修飾；去除pep27；去除一個或兩個弗林蛋白酶切割基序；去除非弗林蛋白酶切割位點諸如胰蛋白酶切割位點；和/或糖基化位點的修飾可以與任何一種或多種(或者多達以任何期望組合中的所有)其他穩(wěn)定修飾組合使用。例如，可以單獨使用異源卷曲螺旋(或其他異源穩(wěn)定結構域)，或者與下述中的任一種組合使用：疏水區(qū)內(nèi)的修飾、和/或去除pep27、和/或去除弗林蛋白酶切割位點、和/或去除非弗林蛋白酶切割位點、和/或去除非弗林蛋白酶切割位點。某些特定實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物諸如PreF類似物，包含C-端卷曲螺旋(異亮氨酸拉鏈)結構域、HRB疏水結構域中的穩(wěn)定取代和一個或兩個弗林蛋白酶切割位點的去除。此類實施方案包括未被弗林蛋白酶切割去除的完整融合肽。在一個特定實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物還包括氨基酸位點500的修飾的糖基化位點。用于本文所述的方法和用途的F蛋白類似物可以通過這樣的方法產(chǎn)生，所述方法包括提供含有F蛋白類似物(例如，PreF類似物、PostF類似物或未切割F蛋白胞外域，等)的生物材料和從所述生物材料純化類似物多肽單體或多聚體(例如，三聚體)或其混合物。F蛋白類似物可以是多肽單體或三聚體或可平衡存在的單體和三聚體的混合物的形式。單一形式的存在可以提供優(yōu)點，諸如更可預測的免疫應答和更好的穩(wěn)定性。因此，在一個實施方案中，用于本發(fā)明中使用的F蛋白類似物是純化的F蛋白類似物，其可以是單體或三聚體或單體和三聚體的混合物的形式，其實質(zhì)上不含脂質(zhì)和脂蛋白。F蛋白多肽可以選自RSVA或RSVB毒株的任何F蛋白，或者選自其變體(如上文所定義的)。在某些示例性的實施方案中，F(xiàn)蛋白多肽是以SEQIDNO：2表示的F蛋白。為了便于理解本公開內(nèi)容，所有氨基酸殘基位置(不管毒株)相對于(即氨基酸殘基位置對應于)示例性F蛋白的氨基酸位置給出。本領域普通技術人員可以通過使用容易地可獲得且眾所周知的比對算法(諸如BLAST，例如使用默認參數(shù))來比對選定RSV毒株的氨基酸序列與示例性序列的氨基酸序列，從而容易地確定任何其他RSVA或B毒株的相當氨基酸位置。WO2008114149中公開了來自不同RSV毒株的F蛋白多肽的許多額外實例(出于提供RSVF和G蛋白序列的額外實例的目的通過引用并入本文)。額外變體可以經(jīng)由遺傳漂移生成，或者可以使用定點或隨機誘變，或者通過重組兩種或更多種先前存在的變體來人工生成。此類額外變體也適用于本文公開的免疫方法的背景下利用的F蛋白類似物的背景下。在可用于本文所述的方法和用途的替代實施方案中，重組RSV蛋白是如WO2011008974(其出于描述額外F蛋白類似物的目的通過引用并入本文)中所述的F蛋白類似物，參見例如WO2011008974的圖1中和還有WO2011008974的實施例1中描述的F蛋白類似物。在選擇F蛋白的F2和F1結構域時，本領域技術人員將認識到，包括整個F2和/或F1結構域不是嚴格必要的。通常，構象考慮在選擇F2結構域的子序列(或片段)時是重要的。因此，F(xiàn)2結構域通常包括F2結構域中促進多肽裝配和穩(wěn)定性的部分。在某些示例性的變體中，F(xiàn)2結構域包括氨基酸26-105。然而，在長度上具有微小修飾(通過添加或缺失一個或多個氨基酸)的變體也是可能的。通常，選擇至少F1結構域的子序列(或片段)，并將其設計成維持包括F蛋白的免疫優(yōu)勢表位的穩(wěn)定構象。例如，通常期望選擇F1多肽結構域中包括氨基酸262-275(帕利珠單抗(palivizumab)中和)和423-436(Centocor的ch101F單抗)的區(qū)域中由中和性抗體識別的表位的子序列。另外，期望包括T細胞表位，例如在氨基酸328-355的區(qū)域中。最常見地，作為F1亞單位的單一連續(xù)部分(例如跨越氨基酸262-436)，但是表位可以在包括作為以穩(wěn)定構象裝配的不連續(xù)元件的這些免疫優(yōu)勢表位的合成序列中得到保留。因此，F(xiàn)1結構域多肽包含RSVF蛋白多肽的至少約氨基酸262-436。在本文提供的一個非限制性實例中，F(xiàn)1結構域包含天然F蛋白多肽的氨基酸137至516。本領域技術人員將認識到，額外更短的子序列可以任憑從業(yè)人員使用。在選擇F2或F1結構域的子序列時(例如，如在下文就某些PreF-G類似物的G蛋白組分而言進行討論)，除了構象考慮以外，可期望基于包括額外免疫原性表位來選擇序列(例如變體、子序列等)。例如，可以使用本領域中已知的錨基序或其他方法諸如神經(jīng)網(wǎng)絡或多項式確定來鑒定額外T細胞表位，參見例如RANKPEP(在萬維網(wǎng)上于：mif.dfci.harvard.edu/Tools/rankpep.html可獲得)；ProPredI(在萬維網(wǎng)上于：imtech.res.in/raghava/propredI/index.html可獲得)；Bimas(在萬維網(wǎng)上于：www-bimas.dcrt.nih.gov/molbi/hla_bind/index.html可獲得)；和SYFPEITH(在萬維網(wǎng)上于：syfpeithi.bmi-heidelberg.com/scripts/MHCServer.dll/home.htm可獲得)。例如，使用算法來測定肽的“結合閾值”，并選擇具有給予它們MHC或抗體以某種親和力結合的高概率的得分的那些。算法基于對MHC結合特定位置處的特定氨基酸的影響、對抗體結合特定位置處的特定氨基酸的影響、或對結合含有基序的肽中的特定取代的影響。在免疫原性肽的背景內(nèi)，“保守殘基”是在肽中特定位置處以比通過隨機分布會預期的頻率顯著更高的頻率出現(xiàn)的殘基。錨殘基是保守殘基，其提供與MHC分子的接觸點。由此類預測方法鑒定的T細胞表位可以通過測量它們對特定MHC蛋白的結合及通過其在MHC蛋白的背景下呈遞時刺激T細胞的能力來確認。有利地，F(xiàn)蛋白類似物,例如PreF類似物(包括PreF-G類似物，如下文所討論的)，PostF類似物，或其他構象類似物，包括對應于表達系統(tǒng)的信號肽，例如哺乳動物或病毒信號肽，諸如RSVF0天然信號序列(例如SEQIDNO：2的氨基酸1-25或SEQIDNO：6的氨基酸1-25)。通常，信號肽選擇為與選擇用于重組表達的細胞相容。例如，可以用信號肽(諸如桿狀病毒信號肽，或蜂毒肽信號肽)取代以在昆蟲細胞中表達。合適的植物信號肽是本領域中已知的，如果植物表達系統(tǒng)是優(yōu)選的。許多示例性信號肽是本領域中已知的(參見例如，參見Zhang&Henzel,ProteinSci.,13:2819-2824(2004)，其描述了許多人信號肽)，并列入例如SPdb信號肽數(shù)據(jù)庫，其包括古細菌、原核生物和真核生物的信號序列(http://proline.bic.nus.edu.sg/spdb/)。任選地，任何前述抗原可以包括額外序列或標簽諸如His標簽來促進純化。任選地，F(xiàn)蛋白類似物(例如，PreF或PostF或其他類似物)可包括額外免疫原性組分。在某些特別有利的實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物包括RSVG蛋白抗原性組分。具有PreF和G組分的示例性嵌合蛋白包括下列PreF_V1(以SEQIDNO：7和8表示)和PreF_V2(以SEQIDNO：9和10表示)。在PreF-G類似物中，在構建體的C端末端處添加G蛋白的抗原性部分(例如截短的G蛋白，諸如氨基酸殘基149-229)。通常，經(jīng)由柔性接頭序列將G蛋白組分連接至F蛋白組分。例如，在示例性PreF_V1設計中，通過-GGSGGSGGS-接頭(SEQIDNO：14)將G蛋白連接至PreF組分。在PreF_V2設計中，接頭較短。代替具有-GGSGGSGGS-接頭(SEQIDNO：14)，PreF_V2具有用于接頭的2個甘氨酸(-GG-)。在存在時，G蛋白多肽結構域可以包括選自任何RSVA或RSVB毒株的G蛋白的整個或部分。在某些示例性實施方案中，G蛋白是以SEQIDNO:4表示的G蛋白(或者與其95％相同)。合適的G蛋白序列的額外實例可見WO2008114149(通過引用并入本文)。G蛋白多肽組分選擇為包括至少G蛋白的保留免疫優(yōu)勢T細胞表位(例如在氨基酸183-197的區(qū)域中)的子序列(或片段)，諸如G蛋白的包括天然G蛋白的氨基酸151-229、149-229、或128-229的片段。在一個示例性實施方案中，G蛋白多肽是天然G蛋白多肽中包括天然G蛋白多肽的氨基酸殘基149至229整個或部分的子序列(或片段)。本領域技術人員將容易理解，也可以使用更長或更短的G蛋白部分，只要所選部分不在構象上使F蛋白類似物不穩(wěn)定或者破壞F蛋白類似物的表達、折疊或加工。任選地，G蛋白結構域包括位置191的氨基酸取代，先前已經(jīng)顯示其參與減輕和/或預防特征在于與福爾馬林滅活的RSV疫苗相關的嗜酸粒細胞增多的增強性疾病。天然存在的和取代的(N191A)G蛋白的屬性的全面描述可見例如美國專利公開號2005/0042230，其通過引用并入本文?；蛘撸現(xiàn)蛋白類似物可配制在免疫原性組合物中，所述免疫原性組合物還含有包括G蛋白組分的第二多肽。G蛋白組分通常包括至少G蛋白的氨基酸149-229。盡管可以使用G蛋白的更小部分，但是此類片段應當最低限度包括氨基酸184-198的免疫學優(yōu)勢表位?；蛘?，G蛋白可以包括G蛋白的更大部分，諸如氨基酸128-229或130-230，任選地，作為更大蛋白諸如全長G蛋白或嵌合多肽的元件。例如，就選擇與天然存在的毒株對應的序列而言，一個或多個結構域可以在序列上對應于RSVA或B毒株，諸如稱作A2或Long的常見實驗室分離株，或任何其他天然存在的毒株或分離株。迄今已經(jīng)分離出多種RSV毒株。由GenBank和/或EMBL登錄號指明的示例性毒株可見WO2008114149，出于公開適合于在本文公開的F蛋白類似物中使用的RSVF的核酸和多肽序列的目的，其通過引用并入本文。額外RSV毒株可能會得到分離，并且涵蓋在RSV屬內(nèi)。類似地，RSV屬涵蓋通過遺傳漂移和/或重組，由天然存在毒株(例如以前或以后鑒定的毒株)產(chǎn)生的變體。除了此類天然存在的和分離的變體外，也可以在F蛋白類似物包括PreF、PostF或其他類似物(包括F-G)類似物的背景下采用與上述序列共享序列相似性的經(jīng)工程改造的變體。本領域技術人員應當理解的是，F(xiàn)蛋白類似物多肽(和如下所述的多核苷酸序列)之間的相似性，就多肽(和通常，核苷酸序列)而言，可以在序列間的相似性(在其他情況中稱為序列同一性)方面表示。序列同一性常常在百分比同一性(或相似性)方面進行測量；百分比越高，兩種序列的一級結構越相似。通常，兩種氨基酸(或多核苷酸)序列的一級結構越相似，源于折疊和裝配的更高級結構越相似。F蛋白多肽(和多核苷酸)序列的變體通常具有一個或少量氨基酸缺失、添加或取代，但是仍然共享非常高百分比的其氨基酸，和通常其多核苷酸序列。更重要的是，變體保留本文所公開的參照序列的結構屬性和因此，構象屬性。測定序列同一性的方法是本領域中眾所周知的，并且可適用于F蛋白類似物多肽，以及編碼它們的核酸(例如如下所述)。多種程序和比對算法描述于Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2:482,1981;Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48:443,1970;Higgins和Sharp,Gene73:237,1988;Higgins和Sharp,CABIOS5:151,1989;Corpet等人,NucleicAcidsResearch16:10881,1988;以及Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:2444,1988。Altschul等人,NatureGenet.6:119,1994呈現(xiàn)了序列比對方法和同源性計算的詳細考慮。NCBI基本的局部比對搜索工具(BasicLocalAlignmentSearchTool，BLAST)(Altschul等人,J.Mol.Biol.215:403,1990)可獲自數(shù)個來源，包括(美國)國家生物技術信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation，NCBI，Bethesda，MD)及在因特網(wǎng)上，用于與序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx組合使用。如何使用此程序來測定序列同一性的描述在因特網(wǎng)上NCBI網(wǎng)站上可獲得。在一些情況下，F(xiàn)蛋白類似物相對于衍生其的天然存在的毒株的氨基酸序列具有一個或多個氨基酸修飾(例如除了上述穩(wěn)定化修飾外)。此類差異可以是一個或多個氨基酸的添加、缺失或取代。變體通常相差不超過約1％、或2％、或5％、或10％、或15％、或20％的氨基酸殘基。例如，與參照F蛋白序列(例如，SEQIDNO:6、8、10、18、20和/或22的PreF類似物多肽序列)的相關部分相比，變體F蛋白類似物，例如，PreF或PostF或其他類似物多肽序列可以包括1或2，或至多5，或至多約10，或至多約15，或至多約50，或至多約100個氨基酸差異。因此，RSVF或G蛋白，或F蛋白類似物背景下的變體通常與參照蛋白(例如在PreF類似物的背景下：SEQIDNO：2、4、6、8、10、18、20和/或22中顯示的參照序列，或本文所公開的任何示例性PreF類似物)共享至少80％、或85％，更常見地，至少約90％或更多，諸如95％，或甚至98％或99％序列同一性。作為本公開的特征包括的額外變體是包括選自WO2008114149中所公開的天然存在變體的核苷酸或氨基酸序列整個或部分的F蛋白類似物。額外變體可以經(jīng)由遺傳漂移生成，或者可以使用定點或隨機誘變，或者通過重組兩種或更多種先前存在的變體來人工生成。此類額外變體在本文所公開的F蛋白類似物抗原的背景下也是合適的。例如，修飾可以是一個或多個氨基酸(諸如兩個氨基酸、三個氨基酸、四個氨基酸、五個氨基酸、多至約十個氨基酸，或更多個)的取代，其不改變所得F蛋白類似物的構象或免疫原性表位。可選地或額外地，修飾可以包括一個或多個氨基酸的缺失和/或一個或多個氨基酸的添加。確實，如果需要，一個或多個多肽結構域可以是合成的多肽，其不對應于任何單一毒株，但是包括來自多個毒株，或者甚至來自通過比對多種RSV病毒株多肽推導的共有序列的組分子序列。在某些實施方案中，通過添加構成標簽的氨基酸序列來修飾一個或多個多肽結構域，所述標簽便于隨后的加工或純化。此類標簽可以是抗原性或表位標簽、酶標簽或多組氨酸標簽。通常，標簽位于蛋白的一個或另一個末端，諸如在抗原或融合蛋白的C端或N端。本文公開的F蛋白類似物(和還有如果適用，G抗原)可以使用充分確立的表達和純化重組蛋白的程序來產(chǎn)生。簡而言之，通過任何許多眾所周知的程序，諸如電穿孔、脂質(zhì)體介導的轉染、磷酸鈣沉淀、感染、轉染等(這取決于載體和宿主細胞的選擇)將編碼F蛋白類似物的重組核酸引入宿主細胞。有利的宿主細胞包括原核(即細菌)宿主細胞，諸如大腸桿菌(E.coli)，以及許多真核宿主細胞，包括真菌(例如，酵母，諸如釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和巴氏德畢赤酵母(Picchiapastoris))細胞、昆蟲細胞、植物細胞和哺乳動物細胞(諸如3T3、COS、CHO、BHK、HEK293)或Bowes黑色素瘤細胞。在所選宿主細胞中表達之后，重組F蛋白類似物可以根據(jù)本領域眾所周知的程序進行分離和/或純化。示例性表達方法以及編碼PreF類似物(包括PreF-G類似物)的核酸提供在WO2010149745中，其出于提供用于表達和純化F蛋白類似物的合適方法的目的并入本文。百日咳抗原在本文公開的接種方案、方法、用途和試劑盒的背景下，所述至少一種百日咳博德特氏菌抗原可以是選自以下的至少一種無細胞百日咳(Pa)蛋白：百日咳類毒素(PT)、絲狀血細胞凝集素(FHA)、百日咳桿菌粘附素(PRN)、2型菌毛蛋白(FIM2)、3型菌毛蛋白(FIM3)。此類無細胞抗原是本領域眾所周知的?？乖M行部分或高度純化。PT可以以各種方式產(chǎn)生，例如通過從百日咳博德特氏菌的培養(yǎng)物純化毒素、隨后化學脫毒(例如如WO91/12020中描述，其通過引用并入本文)，或者通過純化PT的遺傳脫毒的類似物(例如，如以下中描述，其出于公開考慮的PT的遺傳修飾的目的通過引用并入本文：EP306318、EP322533、EP396964、EP322115、EP275689)。在一個具體實施方案中，PT是遺傳脫毒的。更具體地，遺傳脫毒的PT攜帶以下取代中的一者或兩者：R9K和E129G。百日咳抗原組分可以包括無細胞百日咳抗原PT、FHA、PRN、FIM2和FIM3中的任何1、2、3、4或5種，包括其組合。更具體地，組合可以具體包括(且不限于)：PT和FHA；PT、FHA和PRN；PT、FHA、PRN和FIM2；PT、FHA、PRN和FIM3；和PT、FHA、PRN、FIM2和FIM3。在一個具體實施方案中，PT以2-50ug(例如精確地或近似地2.5或3.2ug/劑量)，5-40ug(例如精確地或近似地5或8ug/劑量)或10-30ug(例如精確地或近似地20或25ug/劑量)的量使用。在一個具體實施方案中，F(xiàn)HA以2-50ug(例如精確地或近似地2.5或34.4ug/劑量)，5-40ug(例如精確地或近似地5或8ug/劑量)或10-30ug(例如精確地或近似地20或25ug/劑量)的量使用。在一個具體實施方案中，PRN以0.5-20ug，0.8-15ug(例如精確地或近似地0.8或1.6ug/劑量)或2-10ug(例如精確地或近似地2.5或3或8ug/劑量)的量使用。在一個具體實施方案中，F(xiàn)IM2和/或FIM3以0.5-10ug(例如精確地或近似地0.8或5ug/劑量)的總量使用。在一個具體實施方案中，百日咳抗原組分包括等量/劑量(為精確地或近似地8或20或25ug)的PT和FHA?；蛘?，百日咳抗原組分包括精確地或近似地分別5和2.5ug或精確地或近似地3.2和34.4ug的PT和FHA。在一個進一步實施方案中，免疫原性組合物包含分別精確或近似量/劑量為25:5:8ug；8:8:2.5ug；20:20:3ug；2.5:5:3ug；5:2.5:2.5ug；或3.2:34.4:1.6ug的PT、FHA和PRN?；蛘?，或與任何上面討論的無細胞百日咳抗原組合，百日咳抗原組分可以包含源自百日咳博德特氏菌‘BrkA’抗原的抗原(如公開于WO2005/032584，和Marr等人(2008),Vaccine,26(34):4306-4311，其通過引用并入本文)。在一個進一步實施方案中，至少一種Pa抗原可以采用從百日咳博德特氏菌獲得的外膜囊泡(OMV)的形式，如公開于Roberts等人(2008),Vaccine,26:4639-4646，其通過引用并入本文。具體而言，此類OMV可以源自表達脂質(zhì)A修飾酶，諸如3-O-脫酰酶，例如PagL的重組百日咳博德特氏菌菌株(Asensio等人(2011),Vaccine,29:1649-1656，其通過引用并入本文)。在一個替代實施方案中，至少一種百日咳博德特氏菌抗原是全細胞百日咳(Pw)疫苗，此類Pw疫苗是本領域眾所周知的。Pw可以通過幾種已知方法，包括無汞方法，進行滅活。此類方法可以包括熱(例如55-65℃或56-60℃，持續(xù)5-60分鐘或持續(xù)10-30分鐘，例如60℃持續(xù)30分鐘)，甲醛(例如0.1％，在37℃，24小時)，戊二醛(例如，0.05%，在室溫，10分鐘)，丙酮-I(例如，在室溫三次處理)或丙酮-II(例如在室溫三次處理和在37℃第四次處理)滅活(參見例如Gupta等人,1987,J.Biol.Stand.15:87;Gupta等人,1986,Vaccine,4:185)。制備適用于本發(fā)明的免疫原性組合物中的殺滅的全細胞百日咳博德特氏菌(Pw)的方法公開于WO93/24148。更具體地，本發(fā)明的免疫原性組合物包含5-50、7-40、9-35、11-30、13-25、15-21、或近似地或精確地20(以國際不透明度單位，“IOU”)的量/劑量的Pw。在本發(fā)明的包含Pw的免疫原性組合物的一個具體實施方案中，組合物的Pw疫苗組分引發(fā)降低的反應原性。Pw疫苗的反應原性(疼痛、發(fā)熱、腫脹等)主要由脂寡糖(‘LOS’，其在百日咳博德特氏菌的背景下與脂多糖(‘LPS’)同義；‘LOS’將用于本文中)引起，所述脂寡糖是來自細菌外膜的內(nèi)毒素。LOS的脂質(zhì)A部分是主要負責的。為了產(chǎn)生更低反應原性的含有Pw的疫苗(相對于諸如通過上面討論的失活方法制備的‘傳統(tǒng)’Pw疫苗)，內(nèi)毒素可以遺傳或化學脫毒和/或從外膜提取。然而，這必須以不實質(zhì)損害Pw疫苗的免疫原性的方式來進行，因為LOS是免疫系統(tǒng)的有效佐劑。在一個實施方案中，本發(fā)明的免疫原性組合物的至少一種百日咳博德特氏菌抗原包含‘低反應原性’Pw疫苗，其中LOS已經(jīng)遺傳或化學脫毒和/或提取。例如，Pw疫苗可以進行用有機溶劑(諸如丁醇和水)的混合物處理，如描述于WO2006/002502和Dias等人(2012),HumanVaccines&Immunotherapeutics,9(2):339-348，其出于公開LOS的化學提取的目的通過引用并入本文。在一個替代實施方案中，‘低反應原性’通過從經(jīng)遺傳工程改造以產(chǎn)生較低毒性LOS的百日咳博德特氏菌菌株衍生Pw疫苗來實現(xiàn)。WO2006/065139(通過引用并入本文)公開了百日咳博德特氏菌LOS的遺傳3-O-脫?；兔摱?，這導致產(chǎn)生包含至少部分的3-O-脫?；腖OS的菌株。本發(fā)明的免疫原性組合物的至少一種百日咳博德特氏菌抗原因此可以是衍生自已經(jīng)工程改造以表達脂質(zhì)A修飾酶諸如脫-O-?；傅陌偃湛炔┑绿厥暇甑腜w疫苗。具體而言，此類菌株可以表達PagL，如描述于WO2006/065139，以及Geurtsen等人(2006),InfectionandImmunity,74(10):5574-5585和Geurtsen等人(2007),MicrobesandInfection,9:1096-1103，所有都通過引用并入本文?？蛇x地或額外地，衍生Pw疫苗的菌株可以天然地，或由于工程改造：缺乏用葡糖胺修飾其脂質(zhì)A磷酸基團的能力；具有在C-3’位置被C10-OH或C12-OH取代的脂質(zhì)A二葡糖胺骨架；和/或表達缺乏末端庚糖的分子LOS種類。此類菌株，18-323，公開于Marr等人(2010),TheJournalofInfectiousDiseases,202(12):1897-1906(通過引用并入本文)。免疫原性組合物表達和純化之后，F(xiàn)蛋白類似物通常配制入用于施用于懷孕雌性的免疫原性組合物，且當需要時配制入用于施用于出生后的嬰兒的制劑。此類制劑通常含有藥學可接受的載體或賦形劑。任選地，額外抗原也可以包括在制劑中，諸如另一種RSV抗原(例如，如WO2010149745中所述的G蛋白抗原)或人偏肺病毒(hMPV)抗原、白喉抗原、破傷風抗原或流感抗原。WO2010149743描述了可與RSV抗原組合的hMPV抗原的實例，并且出于提供hMPV抗原的實例的目的通過引用并入本文。GallS.A.等人.MaternalImmunizationwithtetanus-diphtheria-pertussisvaccine:effectonmaternalandneonatalserumantibodylevels.AmJObstetGynecol2011:204，描述了用含有百日咳抗原百日咳桿菌粘附素(PRN)、百日咳毒素(PT)、絲狀血細胞凝集素(FHA)和菌毛蛋白(FIM)2/3的白喉-破傷風-百日咳(Tdap)疫苗免疫孕婦，并且出于提供關于使用百日咳抗原的母體免疫的額外細節(jié)的目的通過引用并入本文。藥學可接受載體和賦形劑是眾所周知的，并且可以由本領域技術人員進行選擇。例如，載體或賦形劑可以有利地包括緩沖劑。任選地，載體或賦形劑還含有至少一種穩(wěn)定溶解度和/或穩(wěn)定性的組分。增溶劑/穩(wěn)定劑的實例包括去污劑，例如月桂樹肌氨酸和/或tween。替代的增溶劑/穩(wěn)定劑包括精氨酸和玻璃形成多元醇(諸如蔗糖、海藻糖等)。許多藥學可接受的載體和/或藥學可接受的賦形劑是本領域已知的，并且描述于例如Remington’sPharmaceuticalSciences,E.W.Martin,MackPublishingCo.,Easton,PA,第5版(975)。因此，本領域技術人員可以選擇合適的賦形劑和載體以產(chǎn)生適合于通過所選施用途徑向主體遞送的制劑。合適的賦形劑包括但不限于：甘油、聚乙二醇(PEG)、山梨糖醇、海藻糖、N-月桂酰肌氨酸鈉鹽、L-脯氨酸、非去污劑磺基甜菜堿、鹽酸胍、脲、三甲胺氧化物、KCl、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+和其他二價陽離子相關鹽、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇(Dithioerytrol)、和β-巰基乙醇。其他賦形劑可以是去污劑(包括：Tween80、Tween20、TritonX-00、NP-40、EmpigenBB、辛基葡糖苷、月桂酰麥芽糖苷、Zwittergent3-08、Zwittergent3-0、Zwittergent3-2、Zwittergent3-4、Zwittergent3-6、CHAPS、去氧膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉、溴化十六烷基三甲銨)。在用于本文所述的接種方案、方法、用途和試劑盒的含有F蛋白類似物和/或百日咳抗原的組合物中，所述組合物被設計為誘導強烈血清(例如，中和)抗體應答。母親已經(jīng)暴露于RSV和百日咳(例如，通過自然感染或免疫)，并且因此將具有現(xiàn)有引發(fā)的應答，所以為嬰兒提供保護的目標是盡可能有效地和就可以高效穿過胎盤且為嬰兒提供保護的抗體亞類諸如IgG1而言加強這種引發(fā)的應答。這可以在不包括佐劑，或通過包括僅包括礦物鹽諸如鋁鹽或鈣鹽、特別是氫氧化鋁、磷酸鋁或磷酸鈣的佐劑，來實現(xiàn)。或者，這可以通過用油和水乳狀液佐劑或增強IgG1亞類的抗體產(chǎn)生的另一種佐劑配制來實現(xiàn)。因此，用于本文所述的接種方案、方法、用途和試劑盒的F蛋白類似物和/或百日咳抗原有利地與礦物鹽，有利地明礬(氫氧化鋁或磷酸鋁)，或者與油和水乳狀液佐劑配制。選擇在孕婦中安全且良好耐受的任何佐劑。任選地，免疫原性組合物還包括除了明礬以外的佐劑。例如，有利地選擇包括3D-MPL、角鯊烯(例如，QS21)、脂質(zhì)體、和/或油和水乳狀液中的一種或多種的佐劑，條件是最終制劑增強懷孕(并且通常引發(fā)的)雌性中具有期望特征(例如，亞類和中和功能)的RSV特異性抗體和百日咳抗體的產(chǎn)生。在一些情況下，佐劑制劑包括礦物鹽諸如鈣或鋁(明礬)鹽，例如磷酸鈣、磷酸鋁或氫氧化鋁。當存在明礬(或單獨，或例如，與3D-MPL組合)時，所述量通常為約100μg至1mg，諸如約100μg，或約200μg至約750μg，諸如約500μg/劑量。在一些實施方案中，佐劑包括油和水乳狀液，例如，水包油乳狀液。水包油乳狀液的一個實例包含在含水載體中可代謝油，諸如角鯊烯；母育酚(tocol)，諸如生育酚，例如α-生育酚；和表面活性劑，諸如山梨醇三油酸酯(Span85?)或聚環(huán)氧乙烷山梨醇單油酸酯(Tween80?)。水包油乳狀液的實例為MF59。在某些實施方案中，水包油乳狀液不含有任何額外免疫刺激劑(特別是其不含有無毒脂質(zhì)A衍生物，諸如3D-MPL；或皂苷，諸如QS21)。含水載體可以是例如磷酸鹽緩沖鹽水。此外，水包油乳狀液可以含有span85和/或卵磷脂和/或三辛酸甘油酯。在本發(fā)明的另一個實施方案中，佐劑組合物包含水包油乳狀液和任選地，一種或多種進一步免疫刺激物，其中所述水包油乳狀液包含0.5-10mg可代謝油(合適地角鯊烯)、0.5-11mg母育酚(合適的是生育酚，諸如α-生育酚)和0.4-4mg乳化劑。以其自身或與3D-MPL或本文所述的另一種佐劑組合，用于此處描述的接種方案、方法、用途和試劑盒的免疫原性組合物中的可以與F蛋白類似物，諸如PreF類似物用于免疫原性組合物中的其他佐劑，是皂苷，諸如QS21。此類佐劑通常不與百日咳抗原一起采用(但如果需要這樣，可以采用)。在一個實施方案中，用于本文所述的方法和用途的重組F蛋白類似物，諸如PreF抗原與皂苷例如QS21配制，特別是提供了preF類似物和QS21的組合。在另一個實施方案中，用于本文所述的方法和用途的F蛋白類似物諸如PreF抗原與QS21和3D-MPL配制。皂苷類教導于：Lacaille-Dubois,M和WagnerH.(1996.Areviewofthebiologicalandpharmacologicalactivitiesofsaponins.Phytomedicine第二卷pp363-386)。皂苷類是植物和海洋動物界中廣泛分布的類固醇或三萜糖苷。皂苷類記錄用于在水中形成膠體溶液(其在搖動后起泡沫)且用于沉淀膽固醇。當皂苷類接近細胞膜時，它們在膜中產(chǎn)生引起膜爆裂的孔樣結構。紅細胞溶血是此現(xiàn)象的一個實例，其是某些但不是所有皂苷類的特性。已知皂苷類為用于全身施用的疫苗中的佐劑。本領域中已經(jīng)廣泛研究了個別皂苷的佐劑和溶血活性(Lacaille-Dubois和Wagner，參見上文)。例如，QuilA(衍生自南美喬木皂皮樹(QuillajaSaponariaMolina)的樹皮)及其級分描述于US5,057,540和“Saponinsasvaccineadjuvants”,Kensil,C.R.,CritRevTherDrugCarrierSyst,1996,12(1-2):1-55;以及EP0362279B1。包含QuilA級分的顆粒結構(稱作免疫刺激性復合物(ISCOMS))是溶血的，并且已經(jīng)在疫苗的制造中使用(Morein,B.,EP0109942B1;WO96/11711;WO96/33739)。溶血性皂苷類QS21和QS17(HPLC純化的QuilA級分)已經(jīng)被描述為有效的系統(tǒng)佐劑，并且其生產(chǎn)方法公開于美國專利號5,057,540和EP0362279B1，通過引用并入本文。已經(jīng)在系統(tǒng)疫苗接種研究中使用的其他皂苷類包括衍生自其他植物物種諸如絲石竹(Gypsophila)和肥皂草(Saponaria)的那些(Bomford等人,Vaccine,10(9):572-577,1992)。QS21是衍生自皂皮樹樹皮的Hplc純化的非毒性級分。美國專利號5,057,540中公開了用于生成QS21的方法。含有QS21的非反應原性佐劑制劑描述于WO96/33739。前述參考文獻通過引用并入本文?？梢砸悦咳藙┝康拿庖咴越M合物1和50μg之間的量使用所述免疫學活性皂苷，諸如QS21。有利地，以約25μg，例如20-30μg之間，合適地，21-29μg之間或22-28μg之間或23-27μg之間或24-26μg之間，或25μg的水平使用QS21。在另一個實施方案中，人劑量的免疫原性組合物包含在約10μg，例如5和15μg之間，合適地6-14μg之間，例如7-13μg之間或8-12μg之間或9-11μg之間，或10μg的水平的QS21。在一個進一步實施方案中，人劑量的免疫原性組合物包含在約5μg，例如1-9μg之間，或2-8μg之間或者合適地3-7μg之間或4-6μg之間，或5μg的水平的QS21。已經(jīng)顯示了包含QS21和膽固醇的此類制劑在與抗原一起配制時是成功的Th1刺激性佐劑。因此，例如，PreF多肽可以有利地與包含QS21和膽固醇的組合的佐劑用于免疫原性組合物中。如上所示，所述佐劑可以包括礦物鹽諸如鋁鹽或鈣鹽、特別是氫氧化鋁、磷酸鋁和磷酸鈣。此類佐劑還可以包括3D-MPL。例如，含有3D-MPL以及鋁鹽(例如，氫氧化鋁或磷酸鋁，“明礬”)的佐劑適合于配制用于施用于人主體的含有F蛋白類似物的免疫原性組合物中。此類制劑通常不與百日咳抗原一起使用，但如果需要這樣，可以使用。3D-MPL是非毒性細菌脂多糖衍生物。合適的脂質(zhì)A的非毒性衍生物的實例是單磷酰脂質(zhì)A或者更具體地，3-脫酰單磷酰(monophoshoryl)脂質(zhì)A(3D-MPL)。3D-MPL由GlaxoSmithKlineBiologicalsN.A.以名稱MPL銷售，并且在整個文獻中稱為MPL或3D-MPL。參見例如，美國專利號4,436,727;4,877,611;4,866,034和4,912,094。3D-MPL主要促進具有IFN-γ(Th1)表型的CD4+T細胞應答?？梢愿鶕?jù)GB2220211A中所公開的方法來生成3D-MPL。在化學上，它是具有3、4、5或6條?；湹?-脫酰單磷酰脂質(zhì)A的混合物。在本發(fā)明的組合物中，可以使用小顆粒3D-MPL。小顆粒3D-MPL具有如下顆粒大小，使得其可以無菌過濾通過0.22μm濾器。此類制備物描述于WO94/21292?？梢砸悦咳藙┝康拿庖咴越M合物1和50μg之間的量使用脂多糖諸如3D-MPL?？梢砸约s25μg，例如20-30μg之間，合適地21-29μg之間或22和28μg之間或23和27μg之間或24和26μg之間，或25μg的水平使用此類3D-MPL。在另一個實施方案中，人劑量的免疫原性組合物包含在約10μg，例如5和15μg之間，合適地6和14μg之間，例如7和13μg之間或8和12μg之間或9和11μg之間，或10μg的水平的3D-MPL。在一個進一步實施方案中，人劑量的免疫原性組合物包含在約5μg，例如1和9μg之間，或2和8μg之間或者合適地3和7μg之間或4和μg之間，或5μg的3D-MPL。在其他實施方案中，脂多糖可以是β(1-6)葡糖胺二糖，如描述于美國專利號6,005,099和EP專利號0729473B1?；谶@些參考文獻的教導，本領域技術人員會容易地能夠產(chǎn)生各種脂多糖，諸如3D-MPL。盡管如此，每篇這些參考文獻通過引用并入本文。除了前述免疫刺激物(其在結構上與LPS或MPL或3D-MPL類似)外，作為上述MPL結構的亞部分的?；瘑翁呛投茄苌镆彩呛线m的佐劑。在其他實施方案中，佐劑是脂質(zhì)A的合成衍生物，其中一些被描述為TLR-4激動劑，并且包括但不限于：OM174(2-脫氧-6-o-[2-脫氧-2-[(R)-3-十二烷?；趸耐轷；被鵠-4-o-膦?；?β-D-吡喃葡萄糖基]-2-[(R)-3-羥基十四烷酰基氨基]-α-D-吡喃葡萄糖基二氫磷酸酯)(WO95/14026)；OM294DP(3S,9R)-3--[(R)-十二烷?；趸耐轷；被鵠-4-氧代-5-氮雜-9(R)-[(R)-3-羥基十四烷酰基氨基]癸-1,10-二醇，1,10-二(二氫磷酸酯)(WO99/64301和WO00/0462)；和OM197MP-AcDP(3S-,9R)-3-[(R)-十二烷?；趸耐轷；被鵠-4-氧代-5-氮雜-9-[(R)-3-羥基十四烷酰基氨基]癸-1,10-二醇，1-二氫磷酸酯10-(6-氨基己酸酯)(WO01/46127)。在一個具體實施方案中，佐劑制劑包括以乳狀液諸如水包油乳狀液形式制備的3D-MPL。在一些情況下，所述乳狀液具有直徑小于0.2μm的小粒徑，如公開于WO94/21292。例如，3D-MPL顆?？梢孕〉米阋詿o菌過濾通過0.22微米膜(如描述于歐洲專利號0689454)?；蛘?，3D-MPL可以制備在脂質(zhì)體制劑中。任選地，含有3D-MPL(或其衍生物)的佐劑還包括額外免疫刺激性組分。不同佐劑諸如本文上面提及那些的組合，也可以與F蛋白類似物諸如PreF類似物(和如果需要，任選地還與百日咳抗原)用于組合物中。例如，如已經(jīng)注明，可以將QS21與3D-MPL配制在一起。QS21∶3D-MPL的比率將通常為大約1∶10至10∶1；諸如1∶5至5∶1，和經(jīng)常實質(zhì)上為1∶1。通常，比率在2.5∶1至1∶13D-MPL∶QS21的范圍中。另一種組合佐劑制劑包括3D-MPL和鋁鹽，諸如氫氧化鋁?？梢允褂玫钠渌鸗LR4配體是烴基氨基葡糖苷磷酸酯(AGP)諸如WO98/50399或美國專利號6,303,347(還公開了用于制備AGP的方法)中公開的那些，合適地，RC527或RC529或AGP的藥學可接受鹽，如公開于美國專利號6,764,840。一些AGP是TLR4激動劑，而一些是TLR4拮抗劑。認為兩者作為佐劑都是有用的。能夠經(jīng)由TLR-4引起信號傳導應答(Sabroe等人,JI2003p1630-5)的其他合適的TLR-4配體是例如來自革蘭氏陰性細菌的脂多糖及其衍生物，或其片段，特別是LPS的非毒性衍生物(諸如3D-MPL)。其他合適的TLR激動劑是：熱休克蛋白(HSP)10、60、65、70、75或90；表面活性劑蛋白A、乙酰透明質(zhì)酸寡糖、硫酸乙酰肝素片段、纖連蛋白片段、血纖蛋白原肽和b-防衛(wèi)素-2、和胞壁酰二肽(MDP)。在一個實施方案中，TLR激動劑是HSP60、70或90。其他合適的TLR-4配體如描述于WO2003/011223和WO2003/099195，諸如WO2003/011223的第4-5頁或WO2003/099195的第3-4頁上公開的化合物I、化合物II和化合物III和特別是WO2003/011223中公開為ER803022、ER803058、ER803732、ER804053、ER804057、ER804058、ER804059、ER804442、ER804680和ER804764的那些化合物。例如，一種合適的TLR-4配體是ER804057。額外TLR激動劑作為佐劑也是有用的。術語“TLR激動劑”是指能夠經(jīng)由TLR信號傳導途徑引起信號傳導應答(或是作為直接的配體或是間接地經(jīng)由生成內(nèi)源或外源配體)的試劑?？梢允褂么祟愄烊坏幕蚝铣傻腡LR激動劑作為替代或額外佐劑。Kaisho&Akira,BiochimicaetBiophysicaActa1589:1-13,2002中提供了TLR作為佐劑受體的作用的簡短綜述。這些潛在佐劑包括但不限于TLR2、TLR3、TLR7、TLR8和TLR9的激動劑。因此，在一個實施方案中，佐劑和免疫原性組合物進一步包含選自以下的佐劑：TLR-1激動劑、TLR-2激動劑、TLR-3激動劑、TLR-4激動劑、TLR-5激動劑、TLR-6激動劑、TLR-7激動劑、TLR-8激動劑、TLR-9激動劑、或其組合。在本發(fā)明的一個實施方案中，使用能夠經(jīng)由TLR-1引起信號傳導應答的TLR激動劑。合適地，能夠經(jīng)由TLR-1引起信號傳導應答的TLR激動劑選自：三?；?LP)；酚可溶性調(diào)控蛋白(modulin)；結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)LP；S-(2,3-二(棕櫚酰基氧基)-(2-RS)-丙基)-N-棕櫚?；?(R)-Cys-(S)-Ser-(S)-Lys(4)-OH三鹽酸鹽(Pam3Cys)LP(其模擬細菌脂蛋白的乙酰化氨基端)和來自布氏疏螺旋體(Borreliaburgdorferi)的OspALP。在一個替代實施方案中，使用能夠經(jīng)由TLR-2引起信號傳導應答的TLR激動劑。合適地，能夠經(jīng)由TLR-2引起信號傳導應答的TLR激動劑是以下中的一者或多者：來自結核分枝桿菌、布氏疏螺旋體或蒼白密螺旋體(Tpallidum)的脂蛋白、肽聚糖、細菌脂肽；來自包括金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的物種的肽聚糖；脂磷壁酸質(zhì)類、甘露糖醛酸類、奈瑟氏球菌(Neisseria)孔蛋白、細菌菌毛蛋白、耶爾森氏菌(Yersina)毒力因子、CMV病毒粒子、麻疹血細胞凝集素、和來自酵母的酵母聚糖。在一個替代實施方案中，使用能夠經(jīng)由TLR-3引起信號傳導應答的TLR激動劑。合適地，能夠經(jīng)由TLR-3引起信號傳導應答的TLR激動劑是雙鏈RNA(dsRNA)、或聚肌苷酸-聚胞苷酸(PolyIC)，與病毒感染有關的分子核酸模式。在一個替代實施方案中，使用能夠經(jīng)由TLR-5引起信號傳導應答的TLR激動劑。合適地，能夠經(jīng)由TLR-5引起信號傳導應答的TLR激動劑是細菌鞭毛蛋白。在一個替代實施方案中，使用能夠經(jīng)由TLR-6引起信號傳導應答的TLR激動劑。合適地，能夠經(jīng)由TLR-6引起信號傳導應答的TLR激動劑是分枝桿菌脂蛋白、二?；疞P、和酚可溶性調(diào)控蛋白。額外TLR6激動劑描述于WO2003/043572。在一個替代實施方案中，使用能夠經(jīng)由TLR-7引起信號傳導應答的TLR激動劑。合適地，能夠經(jīng)由TLR-7引起信號傳導應答的TLR激動劑是單鏈RNA(ssRNA)、洛索立賓(loxoribine)、在位置N7和C8的鳥苷類似物、或咪唑喹啉化合物、或其衍生物。在一個實施方案中，TLR激動劑是咪喹莫特(imiquimod)。其他TLR7激動劑描述于WO2002/085905。在一個替代實施方案中，使用能夠經(jīng)由TLR-8引起信號傳導應答的TLR激動劑。合適地，能夠經(jīng)由TLR-8引起信號傳導應答的TLR激動劑是單鏈RNA(ssRNA)、具有抗病毒活性的咪唑喹啉分子，例如瑞喹莫德(resiquimod，R848)；瑞喹莫德也能夠被TLR-7識別。可以使用的其他TLR-8激動劑包括描述于WO2004/071459的那些。在一個替代實施方案中，使用能夠經(jīng)由TLR-9引起信號傳導應答的TLR激動劑。在一個實施方案中，能夠經(jīng)由TLR-9引起信號傳導應答的TLR激動劑是HSP90。或者，能夠經(jīng)由TLR-9引起信號傳導應答的TLR激動劑是細菌或病毒DNA、含有未甲基化的CpG核苷酸的DNA，特別是稱為CpG基序的序列背景。含有CpG的寡核苷酸主要誘導Th1應答。此類寡核苷酸是眾所周知的，并且描述于例如WO96/02555、WO99/33488和美國專利號6,008,200和5,856,462。合適地，CpG核苷酸是CpG寡核苷酸。在本發(fā)明的免疫原性組合物中使用的合適的寡核苷酸是含有CpG的寡核苷酸，任選地，其含有由至少三個，合適地，至少六個或更多個核苷酸分開的兩個或更多個二核苷酸CpG基序。CpG基序是胞嘧啶核苷酸和隨后的鳥嘌呤核苷酸。本發(fā)明的CpG寡核苷酸通常是脫氧核苷酸。在一個具體實施方案中，寡核苷酸中的核苷酸間鍵是二硫代磷酸酯，或者合適地硫代磷酸酯鍵，盡管磷酸二酯和其他核苷酸間鍵在本發(fā)明的范圍內(nèi)。還包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是具有混合的核苷酸間鍵的寡核苷酸。用于產(chǎn)生硫代磷酸酯寡核苷酸或二硫代磷酸酯的方法描述于美國專利號5,666,153、5,278,302和WO95/26204。用于與F蛋白類似物諸如PreF類似物(和任選地，如果需要，與百日咳抗原，諸如純化的無細胞百日咳蛋白)用于制劑中的另一類合適的佐劑包括基于OMP的免疫刺激性組合物?；贠MP的免疫刺激性組合物特別適合作為粘膜佐劑，例如，用于鼻內(nèi)施用?；贠MP的免疫刺激性組合物是一類來自革蘭氏陰性細菌諸如但不限于奈瑟氏球菌物種的外膜蛋白(OMP，包括一些孔蛋白)的制備物(參見例如Lowell等人.,J.Exp.Med.167:658,1988;Lowell等人.,Science240:800,1988;Lynch等人.,Biophys.J.45:104,1984;Lowell,于"NewGenerationVaccines"第2版,MarcelDekker,Inc.,NewYork,Basil,HongKong,page193,1997;美國專利號5,726,292;美國專利號4,707,543)，其作為載體或者在免疫原諸如細菌或病毒抗原的組合物中是有用的。一些基于OMP的免疫刺激性組合物可以稱為“蛋白體”，其是疏水性的，并且對于人使用是安全的。蛋白體具有自動裝配成約20nm至約800nm的囊泡或囊泡樣OMP簇的能力，和非共價地與蛋白抗原(Ag)，特別是具有疏水性部分的抗原合并、協(xié)調(diào)、結合(例如靜電地或疏水地)、或以其他方式協(xié)作的能力。導致產(chǎn)生囊泡或囊泡樣形式的外膜蛋白組分(包括一種或多種OMP的多分子膜性結構或熔球樣OMP組合物)的任何制備方法包括在蛋白體的定義內(nèi)。可以制備蛋白體，例如如本領域中所述(參見例如美國專利號5,726,292或美國專利號5,985,284)。蛋白體還可以含有源于用于生成OMP孔蛋白的細菌(例如奈瑟氏球菌物種)的內(nèi)源脂多糖或脂寡糖(分別為LPS或LOS)，其通常將為總OMP制備物的小于2％。蛋白體主要由通過去污劑維持在溶液中的來自腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriamenigitidis)的化學提取的外膜蛋白(OMP)(主要為孔蛋白A和B以及第4類OMP)構成(LowellGH.ProteosomesforImprovedNasal,Oral,orInjectableVaccines.:LevineMM,WoodrowGC,KaperJB,CobonGS,編,NewGenerationVaccines.NewYork:MarcelDekker,Inc.1997;193-206)。蛋白體可以與多種抗原諸如衍生自病毒來源的純化的或重組的蛋白(包括本文所公開的F蛋白類似物諸如PreF多肽)(例如通過滲濾或傳統(tǒng)的透析方法)或與純化的百日咳抗原蛋白一起配制。逐漸去除去污劑容許直徑約100-200nm的微粒疏水性復合物的形成(LowellGH.ProteosomesforImprovedNasal,Oral,orInjectableVaccines.:LevineMM,WoodrowGC,KaperJB,CobonGS,編,NewGenerationVaccines.NewYork:MarcelDekker,Inc.1997;193-206)。如本文中所使用的“蛋白體：LPS或Protollin”是指與至少一類脂多糖混合(例如通過外源添加)以提供OMP-LPS組合物(其可以發(fā)揮免疫刺激性組合物的功能)的蛋白體制備物。因此，OMP-LPS組合物可以由Protollin基本組分中的兩種構成，其包括(1)從革蘭氏陰性細菌諸如腦膜炎奈瑟氏球菌制備的蛋白體(例如Projuvant)的外膜蛋白制備物，和(2)一種或多種脂糖的制備物。脂寡糖可以是內(nèi)源的(例如與OMP蛋白體制備物天然包含在一起)，可以與來自外源制備的脂寡糖(例如從與OMP制備物不同的培養(yǎng)物或微生物制備)的OMP制備物混合或組合，或者可以是其組合。此類外源添加的LPS可以來自制備OMP制備物的相同革蘭氏陰性細菌或者來自不同革蘭氏陰性細菌。還應當理解，任選地，Protollin包括脂質(zhì)、糖脂、糖蛋白、小分子等，及其組合?？梢灾苽銹rotollin，例如如描述于美國專利申請公開號2003/0044425。應當注意到，不管所選佐劑，最終制劑中的濃度計算為在懷孕雌性的目標群體中是安全且有效的。用于本文的免疫方案、方法、用途和試劑盒中使用的免疫原性組合物通常含有免疫保護量(或其部分劑量)或提供抗體的被動轉移的量的抗原，以便在經(jīng)免疫的懷孕雌性的嬰兒中是免疫保護的，并且可以通過常規(guī)技術制備。免疫原性組合物(包括用于對人主體施用的免疫原性組合物)的制備通常描述于PharmaceuticalBiotechnology,第61卷VaccineDesign-thesubunitandadjuvantapproach,Powell和Newman編,PlenurnPress,1995.NewTrendsandDevelopmentsinVaccines,Voller等人編,UniversityParkPress,Baltimore,Maryland,U.S.A.1978。例如，F(xiàn)ullerton，美國專利4,235,877描述了脂質(zhì)體內(nèi)的包囊。例如，Likhite，美國專利4,372,945和Armor等人，美國專利4,474,757公開了蛋白與大分子的綴合。通常，每劑量免疫原性組合物中的抗原(例如，蛋白)的量選擇為在典型的主體(即，懷孕雌性或妊娠嬰兒)中誘導嬰兒中的免疫保護性應答而沒有顯著的、不利的副作用的量。在此背景下的免疫保護性并不必然意指針對感染的完全保護性；它意指保護免于癥狀或疾病，尤其是與病毒相關的嚴重疾病。抗原量可以根據(jù)采用哪種特定免疫原而變化。通常，預期每個人劑量將包含1-1000μg每種蛋白或抗原，諸如約1μg至約100μg，例如，約1μg至約60μg，諸如約1μg，約2μg，約5μg，約10μg，約15μg，約20μg，約25μg，約30μg，約40μg，約50μg，或約60μg。通常，人劑量將在0.5ml體積中。因此，用于本文所述的用途和方法的組合物可以是例如0.5ml人劑量中的10μg或30μg或60μg?；谥黧w群體來選擇免疫原性組合物中利用的量?？梢酝ㄟ^涉及在主體中觀察抗體滴度和其他應答的標準研究來確定特定組合物的最佳量。在初始接種之后，主體可以在嬰兒分娩之前約4-12周或者任何時候，有利地預期分娩日之前至少兩周或至少四周接受加強。額外制劑細節(jié)可見WO2010149745，其出于提供關于包含F(xiàn)蛋白類似物諸如PreF類似物的免疫原性組合物的制劑的額外細節(jié)的目的通過引用并入本文。任選地，含有F蛋白類似物諸如PreF或PostF類似物的免疫原性組合物與除了RSV以外的病原生物體的至少一種額外抗原配制。例如，病原性生物體可以是呼吸道病原體(諸如引起呼吸道感染的病毒)。在某些情況下，免疫原性組合物含有從除了RSV以外的病原性病毒(諸如引起呼吸道感染諸如流感或副流感的病毒)衍生的抗原。類似地，如果需要，百日咳抗原也可以與除了RSV以外的病原病毒的抗原配制。RSV蛋白類似物與無細胞百日咳抗原或全細胞百日咳抗原的共同配制描述于本文中，并且是本文公開的接種方案、方法和用途的一個優(yōu)選實施方案。在某些實施方案中，適用于本文公開的接種方案、方法、用途和試劑盒的免疫原性組合物額外包含來自除了RSV和百日咳博德特氏菌以外的至少一種病原生物體的至少一種抗原。具體而言，所述至少一種病原生物體可以選自：白喉棒狀桿菌(Corynebacteriumdiphtheriae)；破傷風梭菌(Clostridiumtetani)；乙型肝炎病毒；脊髓灰質(zhì)炎病毒；b型流感嗜血桿菌；C型腦膜炎奈瑟氏球菌；Y型腦膜炎奈瑟氏球菌；A型腦膜炎奈瑟氏球菌，W型腦膜炎奈瑟氏球菌；和B型腦膜炎奈瑟氏球菌。更具體地，所述至少一種抗原可以選自：白喉類毒素(D)；破傷風類毒素(T)；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)；滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒(IPV)；綴合至載體蛋白的b型流感嗜血桿菌(Hib)的莢膜糖；綴合至載體蛋白的C型腦膜炎奈瑟氏球菌的莢膜糖(MenC)；綴合至載體蛋白的Y型腦膜炎奈瑟氏球菌的莢膜糖(MenY)；綴合至載體蛋白的A型腦膜炎奈瑟氏球菌的莢膜糖(MenA)；綴合至載體蛋白的W型腦膜炎奈瑟氏球菌的莢膜糖(MenW)；和來自B型腦膜炎奈瑟氏球菌的抗原(MenB)。在這些或其他實施方案中，可以選擇額外抗原來便于施用或減少保護主體免于多種感染性生物體的影響所需的接種數(shù)目。例如，抗原可以衍生自以下中的一種或多種：流感、乙性肝炎、白喉、破傷風、百日咳、流感嗜血桿菌(Hemophilusinfluenza)、脊髓灰質(zhì)炎病毒、hMPV、鏈球菌屬(Streptococcus)或肺炎球菌屬(Pneumococcus)等。含有百日咳博德特氏菌抗原(Pa或Pw)與D和T以及其他抗原(諸如選自IPV、HBsAg、Hib和綴合的腦膜炎奈瑟氏球菌莢膜糖)的各種組合的聯(lián)合疫苗是本領域眾所周知的，并且適合于本文的接種方案、方法、用途和試劑盒的背景下，例如作為InfanrixTM(諸如DTPa-IPV-HBsAg-Hib)和BoostrixTM(諸如dTpa)產(chǎn)品。在這方面，WO93/024148、WO97/000697和WO98/019702通過引用并入，如同WO02/00249，其公開了DTPw-HepB-MenAC-Hib組合物。此類聯(lián)合疫苗適合于本文公開的接種方案、方法、用途和試劑盒的背景下。適用于本文公開的接種方案、方法、用途和試劑盒的具體免疫原性組合物除了至少一種RSV抗原和至少一種百日咳博德特氏菌抗原以外包括：D和T；D、T和IPV；D、T和HBsAg；D、T和Hib；D、T、IPV和HBsAg；D、T、IPV和Hib；D、T、HBsAg和Hib；或D、T、IPV、HBsAg和Hib。在一個具體實施方案中，D以每個劑量1-10個國際單位(IU)(例如精確地或近似地2IU)或10-40IU(例如精確地或近似地20或30IU)或1-10個絮凝沉淀單位(Lf單位)(例如精確地或近似地2或2.5或9Lf)或10-30Lf(例如精確地或近似地15或25Lf)的量使用。在一個具體實施方案中，T以每個劑量10-30IU(例如精確地或近似地20IU)或30-50IU(例如精確地或近似地40IU)或1-15Lf(例如精確地或近似地5或10Lf)的量使用。在示例性實施方案中，適合于接種方案、方法、用途和試劑盒的免疫原性組合物，除了所述至少一種RSV抗原和至少一種百日咳博德特氏菌抗原以外，包括每個劑量各自精確或近似量為30:40IU；25:10Lf；20:40IU；15:5Lf；2:20IU；2.5:5Lf；2:5Lf；25:10Lf；9:5Lf的D和T。例如，此類組合物可包含(除了所述至少一種RSV抗原以外)：(i)20-30ug，例如精確地或近似地25ug的PT；(ii)20-30ug，例如精確地或近似地25ug的FHA；(iii)1-10ug，例如精確地或近似地3或8ug的PRN；(iv)10-30Lf，例如精確地或近似地15或25Lf的D；和(v)1-15Lf，例如精確地或近似地5或10Lf的T。通過另一個實例的方式，此類合適的組合物可包含(除了所述至少一種RSV抗原以外)：(i)2-10ug，例如精確地或近似地2.5或8ug的PT；(ii)2-10ug，例如精確地或近似地5或8ug的FHA；(iii)0.5-4ug，例如2-3ug，諸如精確地或近似地2.5或3ug的PRN；(iv)1-10Lf，例如精確地或近似地2或2.5或9Lf的D；和(v)1-15Lf，例如精確地或近似地5或10Lf的T。因此，將清楚的是，根據(jù)本文公開的接種方案、方法、用途和試劑盒，考慮所述免疫原性組合物用于醫(yī)學中使用，具體而言用于預防或治療人主體中RSV和百日咳博德特氏菌的感染，或與RSV和百日咳博德特氏菌相關的疾病。在含有來自其他病原體的抗原的某些實施方案中，此類預防或治療將延伸到其他病原體。如本文所述的母體免疫經(jīng)由用于RSV疫苗和百日咳疫苗的合適施用途徑實施，包括肌內(nèi)、鼻內(nèi)或皮膚施用。有利地，如本文所述的RSV和/或百日咳母體免疫皮膚實施，這意指將抗原引入皮膚的真皮和/或表皮(例如，皮內(nèi))。在一個具體實施方案中，將包含F(xiàn)蛋白類似物諸如PreF抗原或PostF抗原的重組RSV抗原和/或包含無細胞百日咳蛋白或全細胞百日咳的百日咳抗原皮膚或皮內(nèi)遞送至懷孕雌性。在一個具體實施方案中，F(xiàn)蛋白諸如PreF抗原或postF抗原與本文所述的佐劑，例如皂苷諸如QS21，有或沒有3D-MPL，配制，用于皮膚或皮內(nèi)遞送。在另一個具體實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物諸如PreF或postF抗原與礦物鹽諸如氫氧化鋁或磷酸鋁或磷酸鈣，有或沒有免疫刺激劑諸如QS21或3D-MPL，配制，用于皮膚或皮內(nèi)遞送。百日咳抗原通常與鋁鹽組合配制，并且可以任選地通過皮膚或皮內(nèi)途徑施用。任選地，F(xiàn)蛋白類似物和百日咳抗原共同配制，例如，在礦物鹽諸如氫氧化鋁或磷酸鋁或磷酸鈣存在的情況下，有或沒有免疫刺激劑諸如QS21或3D-MPL，用于皮膚或皮內(nèi)遞送。經(jīng)由皮膚途徑(包括皮內(nèi)途徑)的遞送可需要或允許比其他途徑諸如肌內(nèi)遞送更低劑量的抗原。因此還提供了用于皮膚或皮內(nèi)遞送的免疫原性組合物，其包含低劑量例如小于正常肌內(nèi)劑量，例如正常肌內(nèi)劑量的50%或更小，例如每個人劑量50μg或更小、或20μg或更小、或10μg或更小、或5μg或更小的F蛋白類似物。類似地，含有百日咳抗原的免疫原性組合物可以用于皮膚或皮內(nèi)施用的劑量范圍下端(或者甚至更低劑量)配制，例如，1-10μgPT，1-10μgFHA，0.5-4μgPRN(有或沒有額外抗原組分)。任選地，用于皮膚或皮內(nèi)遞送的免疫原性組合物還包含佐劑例如鋁鹽或QS21或3D-MPL或其組合。用于皮膚施用的設備包括短針設備(其具有長度為約1至約2mm的針)，諸如US4,886,499、US5,190,521、US5,328,483、US5,527,288、US4,270,537、US5,015,235、US5,141,496、US5,417,662和EP1092444中描述的那些。皮膚疫苗也可通過限制針進入皮膚的有效穿透長度的設備施用，所述設備諸如在WO99/34850(其通過引用并入本文)中描述的那些，以及它們的功能等同物。還合適的是，經(jīng)由液體噴射注射器或經(jīng)由刺穿角質(zhì)層并產(chǎn)生到達真皮的噴射的針遞送液體疫苗到真皮的噴射注射設備。噴射注射設備描述于，例如US5,480,381、US5,599,302、US5,334,144、US5,993,412、US5,649,912、US5,569,189、US5,704,911、US5,383,851、US5,893,397、US5,466,220、US5,339,163、US5,312,335、US5,503,627、US5,064,413、US5,520,639、US4,596,556US54,790,824、US4,941,880、US4,940,460、WO97/37705和WO97/13537。用于皮膚施用的設備還包括使用壓縮氣體以加速粉末形式的疫苗通過皮膚的外層到真皮的彈道粉末/顆粒遞送設備。此外，常規(guī)注射器可以在皮膚施用的經(jīng)典曼托法(mantouxmethod)中使用。然而，使用常規(guī)注射器需要高度熟練的操作人員，并且因此能夠在沒有高度熟練的使用者的情況下準確地遞送的設備是優(yōu)選的。用于皮膚施用的額外設備包括包含如本文所述的免疫原性組合物的貼劑。皮膚遞送貼劑通常包括背板，所述背板包括固體基材(例如閉塞或非閉塞性外科敷料)。此類貼劑經(jīng)由刺穿角質(zhì)層的微突將免疫原性組合物遞送至真皮或表皮。微突通常為10Dm至2mm，例如20Dm至500Dm，30Dm至1mm，100至200，200至300，300至400，400至500，500至600，600至700，700，800，800至900，100Dm至400Dm，特別是約200Dm至300Dm或約150Dm至250Dm。皮膚遞送貼劑通常包含多個微突，例如2至5000個微針，例如1000至2000個微針。所述微突出可以是適合于刺穿角質(zhì)層、表皮和/或真皮的任何形狀。微突出可以做成如在例如WO2000/074765和WO2000/074766中所公開的形狀。所述微突出可以具有至少3：1(高度對基底處的直徑)，至少約2：1或至少約1：1的高寬比。用于微突出的一個具體形狀是具有多邊形的底部，例如六邊形或菱形的椎體。其他可能的微突出形狀顯示于，例如美國公開的專利申請2004/0087992。在具體實施方案中，微突出具有朝向基底變厚的形狀。陣列中微突出的數(shù)目通常至少約100、至少約500、至少約1000、至少約1400、至少約1600或至少約2000。鑒于它們小的尺寸，微突出的面積密度不可以特別高，但是例如每cm2的微突出的數(shù)目可以是至少約50、至少約250、至少約500、至少約750、至少約1000或至少約1500。在本發(fā)明的一個實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物在將貼劑置于宿主的皮膚上的5小時內(nèi)，例如4小時、3小時、2小時、1小時或30分鐘內(nèi)遞送到主體。在具體實施方案中，F(xiàn)蛋白類似物在放置貼劑在皮膚上20分鐘內(nèi)，例如30秒，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19分鐘內(nèi)遞送。所述微突可以由本領域技術人員已知的任何合適的材料制成。在具體實施方案中，至少部分微突是生物可降解的，尤其是在微突的頂端或微突的最外層。在具體實施方案中，實質(zhì)上所有的微突是生物可降解的。如本文所使用的術語“生物可降解的”意指在體內(nèi)使用(例如插入皮膚)的預期條件下可降解，而無論生物降解機制。生物降解的示例性機制包括崩解、分散、溶解、腐蝕、水解和酶促降解。包含抗原的微突的實例公開于WO2008/130587和WO2009/048607?？纱x的微針的制造方法公開于WO2008/130587和WO2010/124255。用抗原包被微突可以通過技術人員已知的任何方法例如WO06/055844、WO06/055799中公開的方法進行。本文所述的方法和用途中用于皮膚遞送、包括皮內(nèi)遞送的合適的遞送設備包括BDSoluviaTM設備(這是用于皮內(nèi)施用的微針設備)、CoriumMicroCorTM貼劑遞送系統(tǒng)、GeorgiaTech微針疫苗貼劑、Nanopass微針遞送設備和DebiotechNanojectTM微針設備。還提供了含有本文所述的用于RSV母體免疫的免疫原性組合物(例如重組F蛋白類似物諸如PreF抗原，任選地與佐劑諸如礦物鹽例如明礬或QS21或3D-MPL或其組合配制)的皮膚或皮內(nèi)遞送設備。實施例實施例1概念驗證-豚鼠模型中的母體接種選擇豚鼠模型，這是因為胎盤結構和IgG轉移比典型嚙齒動物模型的情況更接近于人(綜述于Pentsuk和vanderLaan(2009)BirthDefectsResearch(partB)86:328-344。豚鼠的相對長的妊娠間(68天)允許懷孕過程中的免疫和免疫應答發(fā)展。為了模擬在其整個生命已經(jīng)暴露于RSV且具有對RSV的預先存在的免疫應答的孕婦的RSV免疫狀態(tài)，在接種之前6周或10周用活RSV引發(fā)雌性豚鼠。在接種之前6或10周(約交配時或交配前4周)，用活RSV病毒(2.5x105pfu)鼻內(nèi)引發(fā)雌性豚鼠(N=5/組)。兩組未引發(fā)。在妊娠開始后約6周用與氫氧化鋁組合的10μgPreF抗原免疫懷孕雌性。一組未引發(fā)的雌性用PBS注射。在整個引發(fā)和妊娠期收集血清樣品，以監(jiān)測抗RSV結合和中和抗體的水平。后代(7至16日齡)用1x107pfu的活RSV鼻內(nèi)攻擊。攻擊后四天，將肺收集并分離成7葉。滴定7葉中的6葉中的病毒，并且計算每克肺的總病毒顆粒。結果顯示在圖2和3中的圖表中。在接種當天觀察到類似水平的抗體，無論豚鼠在6或10周前是否已經(jīng)引發(fā)。從引發(fā)后14天達到平臺滴度。中和抗體滴度在達到平臺后沒有下降，持續(xù)至少約60天后。因此，在兩個時間點的引發(fā)在該模型中是等效的，并且適于模擬人中的母體感染。來自豚鼠后代中的肺病毒載量的結果表明，與由無引發(fā)/未接種的母體生育的后代相比，由已引發(fā)和接種的母體生育的后代受保護免于RSV攻擊。相反，由無引發(fā)/未接種的母體生育的后代未受保護免于RSV攻擊。實施例2聯(lián)合疫苗保護免于RSV攻擊本實施例表明含有RSV和百日咳博德特氏菌(B.Pertussis)抗原(PT、FHA和PRN)的聯(lián)合疫苗引發(fā)的針對RSV的保護。兩個劑量的聯(lián)合Pa-RSV疫苗的免疫原性(中和抗體滴度)在Balb/c小鼠模型中評估，隨后鼻內(nèi)RSV攻擊來測量聯(lián)合疫苗的功效。幾組BALB/c小鼠(n=14/組)以3周間隔用表1中顯示的制劑肌內(nèi)免疫兩次。表1：RSV攻擊前施用的疫苗制劑來自所有小鼠的血清在第0天(第一次免疫前)、在第21天(第二次免疫前)和在第35天(第二次免疫后2周)單獨收集，并且使用噬斑減少測定測試RSV中和抗體的存在。簡而言之，將各血清的系列稀釋液與RSVALong(靶向100pfu/孔)在37℃孵育20min。孵育后，將病毒-血清混合物轉移至用Vero細胞預先接種且缺乏生長培養(yǎng)基的板。在每個板上，將一列的細胞僅與病毒孵育(100％感染性)，并且2個孔不接受任何病毒或血清(細胞對照)。板在37℃孵育2小時，去除培養(yǎng)基，并且將含有0.5％CMC(低粘度羧甲基纖維素)的RSV培養(yǎng)基添加至所有孔。在免疫熒光染色前，將板在37℃孵育3天。對于染色，將細胞單層用PBS洗滌，并用1％多聚甲醛固定。使用商業(yè)的山羊抗RSV抗血清和隨后的綴合至FITC的兔抗山羊IgG來檢測RSV陽性細胞。每孔的染色噬斑數(shù)目使用自動成像系統(tǒng)進行計數(shù)。將各血清的中和抗體滴度測定為引起噬斑數(shù)目相比于無血清對照60％降低的血清稀釋度的倒數(shù)(ED60)。結果顯示于圖5A中。用Al(OH)3佐劑化的基于PreF的疫苗保護小鼠免于鼻內(nèi)RSV攻擊，并且該動物模型因此可用于研究RSV疫苗介導肺部病毒清除的能力。然后測試單一疫苗中百日咳博德特氏菌(PT、FHA和PRN)和RSV(PreF)抗原的組合在鼻內(nèi)RSV攻擊小鼠模型中的保護效力。第二次疫苗劑量后兩周，通過滴注50μl(每個鼻孔25μL)的活RSVALong菌株(約1.45x106pfu/50μl)而攻擊小鼠。在攻擊后四天收集肺，用于評估肺病毒載量。攻擊后四天，使小鼠安樂死，無菌收獲肺并個別稱重和勻漿。將每種肺勻漿的系列稀釋液(各8個重復)與Vero細胞孵育，并且接種后6天，通過免疫熒光鑒定含有噬斑的孔。病毒滴度使用Spearman-K?rber方法測定用于TCID50計算，并以每克肺表示。所采用的統(tǒng)計方法是對log10值的方差分析(ANOVA1)。結果顯示于圖5B中。如預期，與用單獨(standalone)Pa接種的小鼠(對照組，其中預期沒有保護免于RSV攻擊)相比，與Al(OH)3組合的2μgPreF有效促進了肺部病毒清除。PreF組中的14只中只有兩只動物在肺部具有可檢測水平的RSV，其中在12只其他動物中沒有可檢測的RSV。Pa-RSV聯(lián)合疫苗同樣能夠保護小鼠免于RSV攻擊，如14只動物中只有一只在肺部具有可檢測水平的RSV所示，在剩余13只動物中沒有檢測到RSV?？傮w而言，與用單獨Pa接種的對照動物相比，用PreF+Al(OH)3疫苗或用Pa抗原+PreF+Al(OH)3接種的動物具有顯著更低的肺病毒滴度(P<0.001)。在不存在佐劑的Pa抗原+PreF接種的組中，肺病毒滴度顯著降低(P<0.001)，然而，該組中沒有動物看起來受到充分保護免于RSV攻擊，因為在來自所有動物的肺部的病毒是可定量的。使用攻擊動物模型，我們觀察到，Pa-RSV聯(lián)合疫苗引發(fā)與RSV疫苗相當?shù)尼槍SV的保護性免疫應答。該免疫應答與RSV中和抗體的產(chǎn)生相關。實施例3聯(lián)合疫苗保護免于百日咳博德特氏菌攻擊本實施例表明含有RSV和百日咳博德特氏菌(B.Pertussis)抗原(PT、FHA和PRN)的聯(lián)合疫苗引發(fā)的針對百日咳博德特氏菌的保護。兩個劑量的聯(lián)合Pa-RSV疫苗的免疫原性(中和抗體滴度)在Balb/c模型中評估，隨后用感染性百日咳博德特氏菌鼻內(nèi)攻擊來測量聯(lián)合疫苗的功效。幾組BALB/c小鼠(n=20/組)以3周間隔用表2中顯示的制劑皮下免疫兩次。表1：百日咳博德特氏菌攻擊前施用的疫苗制劑來自所有小鼠的血清在第二次免疫后七天(d28–攻擊前一天)個別收集，并測試抗-PT、-FHA和-PRNIgG抗體的存在。簡而言之，96孔板用碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液(50mM)中的FHA(2μg/ml)、PT(2μg/ml)或PRN(6μg/ml)包被，并且在4℃孵育過夜。用PBS-BSA1%緩沖液的飽和步驟后，將小鼠血清以1/100稀釋在PBS-BSA0.2%Tween0.05%中，并且系列稀釋在來自板的孔中(12個稀釋度，步驟?)。添加偶聯(lián)至過氧化物酶的抗小鼠IgG(1/5000稀釋)。比色反應在添加過氧化物酶底物(OPDA)后觀察，并且用HCL1M終止，然后通過分光光度法(波長：490-620nm)讀數(shù)。對于測試的每種血清和每個板上添加的標準品，將4-參數(shù)邏輯曲線擬合至OD和稀釋度之間的關系(Softmaxpro)。這允許推導以STD滴度表示的每個樣品滴度。疫苗誘導的對于Pa抗原(PT、FHA和PRN)特異性的血清學抗體應答被認為表明(但不是決定性的)疫苗引發(fā)針對Pa疫苗中發(fā)現(xiàn)的個別抗原的抗體應答的能力。圖6A顯示，DTPa、單獨Pa和Pa-RSV組合在兩次免疫后促進PT、FHA和PRN特異性IgG應答。在來自未接種或RSV-接種的小鼠的血清中沒有檢測到任何抗原特異性抗體(數(shù)據(jù)未呈現(xiàn))。統(tǒng)計分析表明DTPa(Infanrix)和Pa-RSV組合誘導的抗PT和抗FHA抗體應答之間的等效性。單獨Pa和Pa-RSV聯(lián)合疫苗誘導的抗PRN特異性抗體的量也是統(tǒng)計學等效的，表明RSV抗原的存在不干擾抗百日咳抗體應答的產(chǎn)生。為了證明保護，加強后一周，通過將50μl細菌懸浮液(約5E6CFU/50μl)滴注至左鼻孔而攻擊小鼠。細菌攻擊后2小時、2天、5天和8天使每組五只小鼠安樂死。無菌收獲肺并個別勻漿。肺細菌清除通過計數(shù)Bordet-Gengou瓊脂板上的菌落生長來測量。對于每個收集時間，根據(jù)每個治療組中每個肺的菌落形成單位(CFU–log10)的數(shù)目的平均數(shù)值對數(shù)據(jù)進行作圖。所采用的統(tǒng)計方法是使用異質(zhì)方差模型用2個因素(治療和天)對log10值的方差分析(ANOVA)。在該模型中，無細胞的百日咳博德特氏菌疫苗(Pa)保護小鼠免于細菌的鼻內(nèi)攻擊。該動物模型因此可用于研究基于百日咳博德特氏菌的疫苗介導肺部細菌清除的能力。然后測試單一疫苗中百日咳博德特氏菌(PT、FHA和PRN)和RSV(Pre-F)抗原的組合在鼻內(nèi)攻擊小鼠模型中的保護效力。代表性結果顯示于圖6B。如預期，與未接種的小鼠相比，經(jīng)調(diào)整的人劑量(四分之一劑量的商業(yè)DTPa疫苗Infanrix)有效地促進了細菌清除。單獨的Pa和Pa-RSV聯(lián)合疫苗兩者也能夠引發(fā)保護性免疫應答，導致細菌消除。如預期，單獨的Pre-FRSV疫苗無法在該動物模型中保護免于百日咳博德特氏菌。這些結果在動物模型中表明，Pa-RSV聯(lián)合疫苗引發(fā)針對百日咳博德特氏菌以及針對RSV的保護性免疫應答，如上述實施例2中所證實。該免疫應答與針對無細胞Pa疫苗中發(fā)現(xiàn)的三種亞單位抗原(PT、FHA、PRN)的特異性抗體的產(chǎn)生相關。當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3