一種高產(chǎn)賴氨酸的枯草芽孢桿菌pl83及制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高產(chǎn)賴氨酸的枯草芽孢桿菌PL83及制備方法和應(yīng)用，從豬腸道中采取食糜，篩選枯草芽孢桿菌，然后通過紫外照射，AEC篩選，獲得了一株高產(chǎn)賴氨酸的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PL83，CCTCC?NO：M2013412。10L發(fā)酵罐用LB培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，賴氨酸的產(chǎn)量為30-40g/L，枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）PL83結(jié)合芽孢桿菌的抗菌活性和高產(chǎn)賴氨酸的能力，具備增強(qiáng)免疫、促生長的功能，可以顯著抑制致病菌的生長繁殖、增強(qiáng)動物免疫能力，對動物生長和健康具有促進(jìn)的作用。
【專利說明】一種高產(chǎn)賴氨酸的枯草芽孢桿菌PL83及制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及飼料添加劑領(lǐng)域，更具體涉及ー種高產(chǎn)賴氨酸枯草芽孢桿菌，同時涉及該細(xì)菌的制備方法，還涉及該菌株在制備動物飼料添加劑和抑制細(xì)菌生長中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]集約化養(yǎng)殖過程中，動物由于環(huán)境條件變化容易產(chǎn)生各種應(yīng)激，比如斷奶、天氣突然變化等，從而引起動物免疫力降低，ー些致病菌，特別是腸道條件性致病菌，能迅速繁殖，進(jìn)而引發(fā)相應(yīng)的疾病，比如大腸桿菌、沙門氏菌等。目前，主要是通過在飼料中添加抗生素的方法來控制和減弱應(yīng)激?？股匮a給后可以抑制仔豬腸道致病菌的生長繁殖、有利于有益菌的生長，從而維持腸道的正常微生物群落結(jié)構(gòu)。然而，抗生素在飼料中的大量使用存在著嚴(yán)重的弊端，比如抗生素引起內(nèi)源性感染和二重感染、耐藥菌株的產(chǎn)生、畜禽免疫力下降和畜產(chǎn)品及環(huán)境中殘留等，很多國家和地區(qū)都已經(jīng)禁止使用抗生素。益生菌具有安全、無污染、具有免疫增強(qiáng)功能等優(yōu)點，成為抗生素替代品的首選，而芽孢桿菌更是益生菌中使用最廣泛的ー種微生態(tài)制劑。
[0003]賴氨酸能調(diào)節(jié)機(jī)體代謝平衡、提高鈣的吸收以及在體內(nèi)的積累、増加食欲，從而促進(jìn)生長發(fā)育、減少疾病和增強(qiáng)免疫機(jī)能的作用。因此，在飼料生產(chǎn)中，賴氨酸在全價料中的添加比例在0.7%左右。然而，我國飼料行業(yè)經(jīng)過30年的發(fā)展，利潤率不斷下降，已經(jīng)進(jìn)入微利時代。目前，我國全價料的利潤大約在20元/噸左右。特別是現(xiàn)在各種自然災(zāi)害頻發(fā)、通貨膨脹等因素，導(dǎo)致大宗原料，如玉米、豆柏、魚粉等，價格不斷上漲，全價料利潤空間不斷壓縮，如何節(jié)省成本，成為當(dāng)前飼料生產(chǎn)企業(yè)最為關(guān)注的問題。
[0004]充分發(fā)揮枯草芽孢桿菌的抑菌活性，同時結(jié)合賴氨酸增強(qiáng)免疫和促進(jìn)生長的活性，篩選得到抗菌活性強(qiáng)、且賴氨酸產(chǎn)量豐富的芽孢桿菌菌株，對養(yǎng)殖業(yè)具有重要的現(xiàn)實意義。本專利篩選具有抗致病菌活性、增強(qiáng)免疫和抗應(yīng)激功能的產(chǎn)賴氨酸枯草芽孢桿菌菌株，從而提高動物生產(chǎn)性能，維護(hù)機(jī)體健康；同時，飼料中添加該菌株后，可以節(jié)省賴氨酸在飼料中的添加量，從而有效降低飼料生產(chǎn)成本。目前，高產(chǎn)賴氨酸活性枯草芽孢桿菌，在養(yǎng)殖動物的飲水和飼料中的應(yīng)用，尚未有報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是在于提供了一種高產(chǎn)賴氨酸的枯草芽孢桿菌，該枯草芽孢桿菌菌株不僅具有常規(guī)枯草芽孢桿菌的益生屬性，同時具備在高產(chǎn)賴氨酸的特性，該細(xì)菌已于2013年9月11日送往中國典型培養(yǎng)物保藏中心進(jìn)行保藏，分類命名:枯草芽孢桿菌PL83Bacillus subtilis PL83 ;保藏編號=CCTCC NO:M2013412 ;地址:中國武漢武漢大學(xué)。
[0006]本發(fā)明還有ー個目的是在于提供了一種枯草芽孢桿菌PL83的制備方法,方法簡單，易行，適于大規(guī)模生產(chǎn)，通過本方法，最終發(fā)酵液中賴氨酸濃度達(dá)到30_40g/L。
[0007]本發(fā)明還有ー個目的是在于提供了一種枯草芽孢桿菌PL83在體外抑制大腸桿菌生長中的應(yīng)用，該菌株具有顯著的抗菌活性，可顯著抑制大腸桿菌致病菌的繁殖。[0008]本發(fā)明還有ー個目的是在于提供了一種枯草芽孢桿菌PL83在體外抑制沙門氏菌生長中的應(yīng)用，該菌株具有顯著的抗菌活性，可顯著抑制沙門氏菌致病菌的繁殖。
[0009]本發(fā)明的最后ー個目的是在于提供了一種枯草芽孢桿菌PL83在制備動物飼料添加劑中的應(yīng)用。一種本發(fā)明還涉及產(chǎn)賴氨酸枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)PL83作為養(yǎng)殖動物飼料添加劑的應(yīng)用。所述應(yīng)用是將所述菌株的發(fā)酵液添加到養(yǎng)殖動物的飲水和/或飼料中。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案:
[0010]一種枯草芽孢桿菌PL83，其獲得方式如下:
[0011]動物腸道食糜中，稀釋分離，或得了一株抑菌效果好且高產(chǎn)賴氨酸枯草芽孢桿菌原始菌株，LB液體培養(yǎng)基接種上述得到的原始菌株，培養(yǎng)稀釋后進(jìn)行紫外照射(25W，253nm，40cm)，挑取多個生長狀態(tài)好的菌落進(jìn)行抑菌活性檢測和產(chǎn)賴氨酸分析，獲得ー株抑制大腸桿菌效果好且產(chǎn)賴氨酸高的菌株，被命名為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)PL83，該細(xì)菌已于2013年9月11日送往中國典型培養(yǎng)物保藏中心進(jìn)行保藏，分類命名:枯草芽孢桿菌 PL83Bacillus subtilis PL83 ;保藏編號:CCTCC NO:M2013412 ;地址:中國武漢武漢大學(xué)。
[0012]枯草芽孢桿菌PL83Bacillus subtilis PL83其生理生化特性如下:
[0013]
【權(quán)利要求】
1.一種枯草芽孢桿菌，其特征在于:枯草芽孢桿菌(Bacillus subti I is )PL83，CCTCCNO:M 2013412。
2.權(quán)利要求1所述的ー種枯草芽孢桿菌的制備方法，其步驟如下: IOL發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵:裝液量4-7L培養(yǎng)基，接種量3-5%，接種濃度IO8 CFU/ml，發(fā)酵溫度 25-400C，pH 值 6.8-7.8，發(fā)酵時間 18_36h，轉(zhuǎn)速，200-400 r/min,通氣量 1:1 ； 發(fā)酵培養(yǎng)基為:胰蛋白胨10 g、酵母浸出物5 g、氯化鈉10 g、蒸懼水1000ml, pH值6.8-7.2 。
3.權(quán)利要求1所述的ー種枯草芽孢桿菌在體外抑制大腸桿菌生長中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述的ー種枯草芽孢桿菌在體外抑制沙門氏菌生長中的應(yīng)用。
5.權(quán) 利要求1所述的ー種枯草芽孢桿菌在制備動物飼料添加劑中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P31/04GK103555625SQ201310515822
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月28日
【發(fā)明者】李麗立, 王升平, 張彬, 范覺鑫 申請人:李麗立