一種多聚體白蛋白納米球及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為10～1000nm。該多聚體白蛋白納米球是一種安全、穩(wěn)定的生物相容性納米載體，可以包裹藥物或者造影劑等目標(biāo)投遞物，且其儲(chǔ)存穩(wěn)定性高，有利于長(zhǎng)時(shí)間有效、穩(wěn)定地釋放目標(biāo)投遞物；此外，該多聚體白蛋白納米球的粒徑小，且尺寸均一，分散性好；本發(fā)明還提供了該多聚體白蛋白納米球的制備方法及應(yīng)用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種多聚體白蛋白納米球及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥材料領(lǐng)域，具體涉及一種多聚體白蛋白納米球及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]納米技術(shù)的興起使得基于高分子納米微粒的藥物輸送得到了廣泛的關(guān)注，白蛋白具有可生物降解、無(wú)毒、無(wú)抗原性等諸多特點(diǎn)，被認(rèn)為是一個(gè)理想的藥物載體。而通常單個(gè)白蛋白質(zhì)分子的尺寸在幾個(gè)納米以?xún)?nèi)，不適合直接用于載藥，超聲乳化法和去溶劑法可制得粒徑小于Iym的白蛋白納米球，可用于運(yùn)載藥物，但由于白蛋白分子的水溶性高，該類(lèi)方法制得的白蛋白納米球載體的釋藥性能不易于控制，如何使白蛋白納米顆粒在水中有良好的穩(wěn)定性，且在稀釋條件下不溶解是目前制備技術(shù)上的難點(diǎn)。
[0003]戊二醛等交聯(lián)劑常被用來(lái)穩(wěn)定得到的納米球，但戊二醛會(huì)非選擇性的結(jié)合白蛋白表面的氨基位點(diǎn)，在生物體內(nèi)會(huì)釋放出醛類(lèi)殘基，對(duì)生物體有著顯著毒副作用。因此，有必要提供一種制備安全、穩(wěn)定性高的白蛋白納米球的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種多聚體白蛋白納米球，該多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，在稀釋條件下有較高的穩(wěn)定性；此外，該多聚體白蛋白納米球的粒徑為10~lOOOnm，且其尺寸均一，分散性好，是運(yùn)載藥物或造影劑等目標(biāo)投遞物的良好載體，有利于在患者體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間有效、安全、穩(wěn)定地釋放投遞物；本發(fā)明還提供了一種多聚體白蛋白納米球的制備方法和應(yīng)用。
`[0005]第一方面，本發(fā)明提供了一種多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為10~lOOOnm。
[0006]優(yōu)選地，所述含巰基或二硫鍵的白蛋白分子為人血清白蛋白、牛血清白蛋白、豬血清白蛋白、重組血清白蛋白和血紅蛋白中的至少一種。
[0007]優(yōu)選地，所述多聚體白蛋白納米球中包裹有目標(biāo)投遞物。
[0008]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述目標(biāo)投遞物為抗癌藥物和造影劑中的至少一種。
[0009]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述抗癌藥物為鉬及鉬的配合物、5 β，20-環(huán)氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯_2_苯甲酸酯-13 [ (2’ R，3’ S) -N-苯甲酰-3-苯基異絲氨酸酯](紫杉醇)、(7S:9S) -9-羥乙?；?4-甲氧基 _7，8, 9, 10-四氧-6，7, 9, 11-四羥基-7-0-(2’，3’，6’，- 二去氧-3’ -氣基-a-Ι-來(lái)蘇已吡喃基)-5，12-萘二酮(阿霉素)、(E，E)-1，7-雙(4-羥基-3-甲氧基苯基)-1，6_庚二烯-3，5-二酮(姜黃素)、4_乙基-4，12-二氧-4-羥-1H-吡喃(3’，4’ ,6,7)吡吲哚(1，2-6)喹啉-3，14- 二酮(喜樹(shù)堿)、(2S-反式)-18-羧基_20_(羧甲基)-13-乙基-2，3- 二氫3，7，12，17-四甲基-8-乙烯基-21H, 23H-卟吩-2-丙酸(二氫卟吩e6)、IR700碘化物和
11-氯-1，I’- 二正丙基_3，3，3’，3’-四甲基-10，12-三亞甲基吲哚三碳花青碘鹽(IR780)中的至少一種。
[0010]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述造影劑為2，7-雙[1，3- 二氫-1，1- 二甲基-3- (4_磺丁基)-1, 3，5-庚三烯單鈉鹽(吲哚青綠)、對(duì)-[(2，4- 二氨基喋啶-6)-N-甲基甲氨基]苯甲酰谷氨酸(甲氨蝶呤)、3，7-雙(二甲氨基)吩噻嗪-5-翁氯化物(美藍(lán))、6，6’ -[[3，3’ - 二甲基(1，I’- 二苯基)-4，4’-二基]雙(偶氮基)]雙(4-氨基-5-羥基-1，3-萘二磺酸)四鈉鹽(伊文思藍(lán))、2_((4_ 二乙氨基)苯)(4_( 二乙氨基)環(huán)己燒_2，5- 二烯)甲燒)苯基-1，4-二磺酸鹽(異硫藍(lán))、4，4’_雙(二乙氨基)三苯脫水甲醇_2”，4”-二磺酸單鈉(專(zhuān)利藍(lán))和金屬納米粒子中的至少一種。
[0011]由于白蛋白單體分子易溶性，物理方法團(tuán)聚的白蛋白納米球容易解體，納米球中包裹的藥物很容易被過(guò)早地釋放，不利于藥物等目標(biāo)投遞物在人體循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)的運(yùn)輸，即物理方法團(tuán)聚的白蛋白納米球載體的釋藥性能的可控性不高，而本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球由多個(gè)白蛋白單體分子通過(guò)分子間的二硫鍵相互連接，這種化學(xué)鍵穩(wěn)定的多聚體結(jié)構(gòu)比通過(guò)物理方法聚集的蛋白納米球更穩(wěn)定，不易被人體體液稀釋、溶解而解體，有助于保證靶向部位足夠的給藥濃度。
[0012]在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中，納米粒子藥物的粒徑比較重要，不同的粒徑代謝路徑也不一樣，小粒徑通過(guò)腎代謝，大粒徑通過(guò)肝代謝；其中，20~200nm的粒子對(duì)腫瘤有被動(dòng)靶向作用，在此粒徑范圍內(nèi)的納米粒子藥物可以消除在藥物本身的尺寸大小引起的一些生物醫(yī)學(xué)效應(yīng)，從而影響療效。
[0013]此外，納米粒子藥物的分散性是比較重要的，分散性不好，粒子容易團(tuán)聚，甚至沉淀，導(dǎo)致應(yīng)用較為困難，特別是其生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用，分散性尤其重要。
[0014]本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球粒徑小且尺寸均一，分散性好，用該納米球包括投遞藥物在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用有較大優(yōu)勢(shì)，有利于納米球通過(guò)EPR效應(yīng)進(jìn)入腫瘤內(nèi)部并通過(guò)gp60同路祀向到腫瘤細(xì)胞。
[0015]另外，一般自由蛋白質(zhì)分子的分子量大都小于60KDa，本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球由多個(gè)蛋白質(zhì)單體分子聚集而成，分子量高于60KDa，不易被腎小球?yàn)V過(guò)(由于腎小球的濾過(guò)作用下，一般分子量小于60KDa的蛋白質(zhì)分子會(huì)在代謝的過(guò)程中被清除掉，而不能達(dá)到靶向位置)，能提高藥物等目標(biāo)投遞物的投遞效率。
[0016]第二方面，本發(fā)明提供了一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0017](I)制備體積質(zhì)量濃度為0.01~300mg/mL的含巰基的白蛋白水溶液，并調(diào)節(jié)所述白蛋白水溶液的PH值為7~12 ;
[0018](2)向步驟(1)所得的所述pH值為7~12的白蛋白混合液中加入帶巰基的還原劑得反應(yīng)液，然后在O~60°C下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)0.05~12小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述帶巰基的還原劑的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的10~5000倍；
[0019](3)將步驟(2)反應(yīng)后的溶液在O~60°C的條件下進(jìn)行超聲，所述超聲的功率范圍為I~100KW，同時(shí)在攪拌的條件下在所述進(jìn)行超聲的溶液中以0.01~1000ml/s的速度加入有機(jī)溶劑得到微乳溶液，所述微乳溶液在O~60°C的條件下反應(yīng)5~240min后，靜置分層，然后去除有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液，其中，所述有機(jī)溶劑加入的體積為所述步驟(2)反應(yīng)后的溶液的2~100倍；
[0020](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液在O~60°C以及pH值為7~12的條件下進(jìn)行透析，得到多聚體白蛋白納米球溶液；
[0021](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液進(jìn)行干燥脫水處理，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為10~lOOOnm。
[0022]優(yōu)選地，所述步驟(1)中，所述含巰基或二硫鍵的白蛋白分子為人血清白蛋白、牛血清白蛋白、豬血清白蛋白、重組血清白蛋白和血紅蛋白中的至少一種。
[0023]優(yōu)選地，所述步驟(1)中，所述白蛋白水溶液中含有體積分?jǐn)?shù)為5%~50%的二甲基亞諷。
[0024]本發(fā)明采用的DMSO能提高藥物或造影劑在溶液中的溶解度，使藥物或造影劑充分溶解均勻。
[0025]優(yōu)選地，所述步驟(1)中，所述白蛋白水溶液中含有目標(biāo)投遞物，所述目標(biāo)投遞物的質(zhì)量為所述白蛋白質(zhì)量的0.0002~0.5倍。
[0026]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述目標(biāo)投遞物為抗癌藥物和造影劑中的至少一種。
[0027]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述抗癌藥物為鉬及鉬的類(lèi)似物、紫杉醇、阿霉素、姜黃素、喜樹(shù)堿、二氫卟吩e6、IR700碘化物和IR780中的至少一種。
[0028]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述造影劑為吲哚青綠、甲氨蝶呤、美藍(lán)、伊文思藍(lán)、異硫藍(lán)、專(zhuān)利藍(lán)和金屬納米粒子中的至少一種。
[0029]本發(fā)明采用的DMSO還能提高目標(biāo)投遞物(如藥物或造影劑)在溶液中的溶解度，使目標(biāo)投遞物與蛋白質(zhì)充分溶解并混合均勻，且目標(biāo)投遞物與白蛋白分子可以充分接觸，為下一步超聲過(guò)程中白蛋白包裹目標(biāo)投遞物做準(zhǔn)備。
[0030]優(yōu)選地，所述步驟(2)中，所述帶巰基的還原劑為谷胱甘肽、半胱氨酸、巰基乙醇或
二硫蘇糖醇。
[0031]優(yōu)選地，所述步驟(3)中，所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙醇或叔丁醇中的至少一種。
[0032]進(jìn)一步優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑中還含有三氯甲烷、二氯甲烷或正己烷中的至少一種。
[0033]優(yōu)選地，所述步驟(4)中，所述進(jìn)行透析的方法為:先將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液置于PH值為7~12的PBS緩沖液中透析10~300小時(shí)，然后在雙蒸水內(nèi)透析12小時(shí)，得到含多聚體白蛋白納米球的溶液。
[0034]本發(fā)明采用pH值為7~12的PBS緩沖液進(jìn)行透析，一方面可以去除多聚體白蛋白納米球的懸濁液中的無(wú)機(jī)小分子等雜質(zhì)，另一方面，在堿性條件下，某些存在于多聚體白蛋白納米球之間的巰基斷開(kāi)，然后和各自納米球中的蛋白質(zhì)分子形成新的巰基，從而使得聚集的多聚體白蛋白納米球分離，達(dá)到分散多聚體白蛋白納米球的目的，進(jìn)而形成單個(gè)的分散的多聚體白蛋白納米球。
[0035]優(yōu)選地，所述步驟(5)中，其特征在于，所述多聚體白蛋白納米球中包裹有目標(biāo)投遞物。
[0036]優(yōu)選地，所述對(duì)步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液進(jìn)行干燥脫水處理的方式為:將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)O~20°C下預(yù)凍I~48小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)20~80°C下冷凍2~48小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥12~120小時(shí)。
[0037]本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球的制備方法，采用了邊超聲邊將有機(jī)溶劑(乙醇或含氯仿等非極性溶劑的乙醇)注入白蛋白溶液的超聲乳化-去溶劑法的方式制備納米球，一方面，乙醇等有機(jī)溶劑注入白蛋白溶液時(shí)能將蛋白質(zhì)分子析出，與此同時(shí)，白蛋白分子間因二硫鍵的形成而聚集形成多聚體白蛋白納米球。另一方面，控制好超聲功率的大小和乙醇等有機(jī)溶劑的注入速度，可以控制所制備的多聚體白蛋白納米球的粒徑。這是因?yàn)?，?dāng)超聲功率的大，乙醇等有機(jī)溶劑的注入速度大，所得的多聚體白蛋白納米球的粒徑就??；反之，當(dāng)超聲功率的小，乙醇等有機(jī)溶劑的注入速度小，所得的多聚體白蛋白納米球的粒徑就大。因此，本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球的制備方法不但能獲得多聚體白蛋白納米球，而且能得到粒徑可控的多聚體白蛋白納米球，本發(fā)明提供的方法可以制備出粒徑在10~1000nm之間的多聚體白蛋白納米球。
[0038]此外，本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球的制備方法，將白蛋白水溶液和目標(biāo)投遞物先充分混合，使得白蛋白在包裹目標(biāo)投遞物之間就與目標(biāo)投遞物充分接觸，能提高白蛋白包裹目標(biāo)投遞物的效率。
[0039]第三方面，本發(fā)明提供了如第一方面所述的多聚體白蛋白納米球或如第二方面所述的多聚體白蛋白納米球的制備方法在制備預(yù)防、治療或診斷癌癥的藥物中的應(yīng)用。
[0040]本發(fā)明提供了的多聚體白蛋白納米球及其制備方法和應(yīng)用具有如下有益效果:
[0041](I)本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球由不同的白蛋白分子通過(guò)分子之間二硫鍵相互連接形成納米球團(tuán)，在水、磷酸鹽緩沖液、乙醇、血清、培養(yǎng)基等溶劑稀釋條件下，比物理結(jié)合的白蛋白載體具有更高的穩(wěn)定性；
[0042](2)與使用化學(xué)交聯(lián)劑如戊二醛等穩(wěn)定的白蛋白載體相比，本發(fā)明提供的白蛋白納米球采用了蛋白質(zhì)分子本身的二硫鍵來(lái)獲得穩(wěn)定的納米球，因此本分明提供的白蛋白納米球更加安全；`
[0043](3)本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球的粒徑為10~lOOOnm，且其尺寸均一，分散性好，是運(yùn)載藥物或造影劑等目標(biāo)投遞物的良好載體，有利于在患者體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間有效、安全、穩(wěn)定地釋放投遞物；
[0044](4)本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球可用于制備預(yù)防、治療或診斷癌癥的藥物?！緦?zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0045]圖1為本發(fā)明實(shí)施例一制得的多聚體白蛋白納米球的掃描電子顯微鏡圖像；
[0046]圖2為本發(fā)明實(shí)施例一制得的多聚體白蛋白納米球在不同溶劑中的稀釋實(shí)驗(yàn)；
[0047]圖3為本發(fā)明實(shí)施例一制得的多聚體白蛋白納米球在還原型條件下溶解實(shí)驗(yàn)。
【具體實(shí)施方式】
[0048]以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0049]實(shí)施例一[0050]—種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0051](1)取ImL體積質(zhì)量濃度為0.01 (w/v, mg/mL)的吲哚青綠的二甲基亞砜溶液和ImL體積質(zhì)量濃度為0.02 (w/v, mg/mL)的牛血清白蛋白混合,得到白蛋白混合液,然后采用0.lmol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)所述白蛋白混合液的pH值到7 ；
[0052](2)向步驟(1)所得的所述pH值為7的白蛋白混合液中加入谷胱甘肽得反應(yīng)液，然后在o°c下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)I小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述谷胱甘肽的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的10倍；
[0053](3)將步驟(2)反應(yīng)后的溶液在0°C的條件下進(jìn)行超聲，超聲功率為100KW，同時(shí)在所述進(jìn)行超聲的溶液中以1000mL/S的速度注入的4mL無(wú)水乙醇得到微乳溶液，所述微乳溶液在0°C的條件下反應(yīng)5min后，靜置待微乳溶液分層后除去有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液；
[0054](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液移入透析袋，保持溫度為(TC的條件下，將透析袋置于5L pH為10的PBS緩沖液內(nèi)透析10小時(shí)，期間每12個(gè)小時(shí)換液I次，每次都采用5L pH為10的PBS緩沖液，然后再將透析袋置于5L雙蒸水內(nèi)透析I小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球溶液；
[0055](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)20°C下預(yù)凍2小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)80°C下冷凍12小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥12小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為10~lOOnm。
[0056]為充分說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例制備的多聚體白蛋白納米球的有益效果，本實(shí)施例還提供了該多聚體白蛋白納米球的掃描電子顯微鏡圖像，如圖1所示，圖1為本發(fā)明實(shí)施例一制得的多聚體白蛋白納米球的掃描電子顯微鏡圖像，由該圖像可知，本實(shí)施例制備的多聚體白蛋白納米球尺寸均一，顆粒較為分散。
[0057]此外，本實(shí)施例還提供了該多聚體白蛋白納米球在不同溶劑中的稀釋實(shí)驗(yàn)，具體操作為:將該多聚體白蛋白納米球溶液分別溶解在磷酸鹽緩沖液(pH為7.4)、血清(pH為7.4)和細(xì)胞培養(yǎng)基(pH為7.4)中，隨后在不同的時(shí)間點(diǎn)取樣觀察該多聚體白蛋白納米球的粒徑，結(jié)果如圖2所示。
[0058]圖2為本發(fā)明實(shí)施例一制得的多聚體白蛋白納米球在不同溶劑中的稀釋實(shí)驗(yàn)，由圖2可知:該多聚體白蛋白納米球在磷酸鹽緩沖液、血清和細(xì)胞培養(yǎng)基中的粒徑隨時(shí)間變化不明顯，即本發(fā)明提供的多聚體白蛋白納米球能在接近生理?xiàng)l件下的稀釋實(shí)驗(yàn)中穩(wěn)定存在，具有醫(yī)學(xué)應(yīng)用前景。
[0059]其次，本實(shí)施例還提供了該多聚體白蛋白納米球在還原型條件下的溶解實(shí)驗(yàn)，具體操作為:將該多聚體白蛋白納米球溶液分別溶解在濃度為20mM的二硫蘇糖醇，2小時(shí)，8小時(shí)和24小時(shí)后，分別跑SDS-PAGE電泳，檢測(cè)該多聚體白蛋白納米球在還原型條件下的溶解規(guī)律，其中，a、b、c泳道分別對(duì)應(yīng)多聚體白蛋白納米球在還原2小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)后的樣品，d泳道為白蛋白單體分子的對(duì)照，結(jié)果如圖3所示。
[0060]圖3為本發(fā)明實(shí)施例一制得的多聚體白蛋白納米球在還原型條件下溶解實(shí)驗(yàn)，由圖3可知，框I中的條帶為本實(shí)施例制備的多聚體白蛋白納米球，框2中的條帶為組成該多聚體白蛋白納米球的白蛋白低聚物的條帶，框3中的條帶為組成該多聚體白蛋白納米球的白蛋白二聚體和三聚體的條帶，框4中的條帶為組成該多聚體白蛋白納米球的白蛋白單分子的條帶；該結(jié)果顯示，即白蛋白二聚體和三聚體對(duì)應(yīng)的框3中的條帶濃度隨還原時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，此外，蛋白質(zhì)單體對(duì)應(yīng)的框4中的條帶濃度隨還原時(shí)間的延長(zhǎng)也有明顯的提高；即本實(shí)施例提供的該多聚體白蛋白納米球可以在還原劑存在的條件下溶解，并隨還原時(shí)間的延長(zhǎng)，其二硫鍵被還原的程度越高，因此，當(dāng)采用該多聚體白蛋白納米球進(jìn)行藥物投遞時(shí)，可以被細(xì)胞中的還原性谷胱甘肽等還原性物質(zhì)降解，從而釋放藥物。
[0061]實(shí)施例二
[0062]一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0063](I)取0.1mL體積質(zhì)量濃度為0.l(w/v，mg/mL)阿霉素的二甲基亞砜溶液和2mL體積質(zhì)量濃度為315 (w/v,mg/mL)的豬血清白蛋白混合,得到白蛋白混合液,然后采用Imol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)所述白蛋白混合液的pH值到7 ；
[0064](2)向步驟(1)所得的所述pH值為7的白蛋白混合液中加入二硫蘇糖醇得反應(yīng)液，然后在60°C下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)0.05小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述二硫蘇糖醇的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的5000倍；
[0065](3)將步驟(2)反應(yīng)后的溶液在60°C的條件下進(jìn)行超聲，超聲功率為1KW，同時(shí)在所述進(jìn)行超聲的溶液中以0.01ml/s的速度注入的200mL含氯仿的乙醇溶液(氯仿和乙醇的體積比為1:9)得到微乳溶液，所述微乳溶液在60°C的條件下反應(yīng)20min后，靜置待微乳溶液分層后除去有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液；
[0066](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液移入透析袋，保持溫度為30°C的條件下，將透析袋置于 IL pH為7的PBS緩沖液內(nèi)透析300小時(shí)，期間每12個(gè)小時(shí)換液I次，每次都采用IL pH為7的PBS緩沖液，然后再將透析袋置于5L雙蒸水內(nèi)透析24小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球溶液，
[0067](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)0°C下預(yù)凍I小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)20°C下冷凍2小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥72小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為900~lOOOnm。
[0068]實(shí)施例三
[0069]一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0070](I)取0.5mL體積質(zhì)量濃度為0.5(w/v，mg/mL)美籃的二甲基亞砜溶液和1.5mL200(w/v,mg/mL)的重組血清白蛋白混合,得到白蛋白混合液,然后采用2mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)所述白蛋白混合液的pH值到12 ；
[0071](2)向步驟(1)所得的所述pH值為12的白蛋白混合液中加入巰基乙醇得反應(yīng)液，然后在30°C下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)12小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述β -巰基乙醇的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的100倍；
[0072](3)將步驟(2)反應(yīng)后的溶液在30°C的條件下進(jìn)行超聲，超聲功率為100KW，同時(shí)在所述進(jìn)行超聲的溶液中以lOOOml/s的速度注入的IOOmL含氯仿的乙醇溶液(氯仿和乙醇的體積比為1:9)得到微乳溶液，所述微乳溶液在30°C的條件下反應(yīng)240min后，靜置待微乳溶液分層后除去有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液；
[0073](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液移入透析袋，保持溫度為60°C的條件下，將透析袋置于IL pH為12的PBS緩沖液內(nèi)透析144小時(shí)，每次都采用IL pH為12的PBS緩沖液，期間每12個(gè)小時(shí)換液I次，然后再將透析袋置于5L雙蒸水內(nèi)透析12小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球溶液，
[0074](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)4°C下預(yù)凍48小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)50°C下冷凍48小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥96小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為100~200nm。
[0075]實(shí)施例四
[0076]一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0077](I)取ImL體積質(zhì)量濃度為I (w/v，mg/mL)二氫卟吩e6溶液的二甲基亞砜溶液和lmL300 (w/v,mg/mL)的血紅蛋白溶液混合,得到白蛋白混合液,然后采用0.5mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)所述白蛋白混合的PH值到9 ;
[0078](2)向步驟(1)所得的所述pH值為9的白蛋白混合液中加入谷胱甘肽得反應(yīng)液，然后在60°C下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)0.05小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述谷胱甘肽的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的2500倍；
[0079](3)將步驟(2)反應(yīng)后的溶液在60°C的條件下進(jìn)行超聲，超聲功率為10KW，同時(shí)在所述進(jìn)行超聲的溶液中以50ml/s的速度注入的22mL含氯仿的乙醇溶液(氯仿和乙醇的體積比為1:9)得到微乳溶液，所述微乳溶液在60°C的條件下反應(yīng)30min后，靜置待微乳溶液分層后除去有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液；
[0080](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液移入透析袋，保持溫度為60°C的條件下，將透析袋置于IL pH為9的PBS緩沖液內(nèi)透析36小時(shí)，期間每12個(gè)小時(shí)換液I次，每次都采用IL pH為9的P`BS緩沖液，然后再將透析袋置于5L雙蒸水內(nèi)透析18小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球溶液，
[0081](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)10°C下預(yù)凍24小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)80°C下冷凍24小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥120小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為600~700nm。
[0082]實(shí)施例五
[0083]一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0084](I)取2mL體積質(zhì)量濃度為0.01 (w/v，mg/mL)的豬血清白蛋白溶液，然后采用lmol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)所述白蛋白混合液的pH值到7 ；
[0085](2)向步驟(1)所得的所述pH值為7的白蛋白混合液中加入半胱氨酸得反應(yīng)液，然后在60°C下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)0.05小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述半胱氨酸的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的10倍；
[0086](3)將步驟(2)反應(yīng)后的溶液在60°C的條件下進(jìn)行超聲，超聲功率為1KW，同時(shí)在所述進(jìn)行超聲的溶液中以50ml/s的速度注入的4mL含氯仿的乙醇溶液(氯仿和乙醇的體積比為1:9)得到微乳溶液，所述微乳溶液在60°C的條件下反應(yīng)20min后，靜置待微乳溶液分層后除去有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液；
[0087](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液移入透析袋，保持溫度為30°C的條件下，將透析袋置于IL pH為7的PBS緩沖液內(nèi)透析10小時(shí)，期間每12個(gè)小時(shí)換液I次，每次都采用IL pH為7的PBS緩沖液，然后再將透析袋置于5L雙蒸水內(nèi)透析I小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球溶液，
[0088](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)0°C下預(yù)凍I小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)20°C下冷凍2小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥12小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為100~200nm。
[0089]實(shí)施例六
[0090]一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0091](I)取2mL300 (w/v, mg/mL)的重組血清白蛋白溶液，然后采用2mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)所述白蛋白混合液的PH值到12 ；
[0092](2)向步驟(1)所得的所述pH值為12的白蛋白混合液中加入二硫蘇糖醇得反應(yīng)液，然后在30°C下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)12小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述二硫蘇糖醇的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的5000倍；
[0093](3)將步驟(2)反應(yīng)后的溶液在30°C的條件下進(jìn)行超聲，超聲功率為100KW，同時(shí)在所述進(jìn)行超聲的溶液中以lOOOml/s的速度注入的200mL含氯仿的乙醇溶液(氯仿和乙醇的體積比為1:9)得到微乳溶液，所述微乳溶液在30°C的條件下反應(yīng)240min后，靜置待微乳溶液分層后除去有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液；
[0094](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液移入透析袋，保持溫度為60°C的條件下，將透析袋置于I L pH為12的PBS緩沖液內(nèi)透析300小時(shí)，每次都采用IL pH為12的PBS緩沖液，期間每12個(gè)小時(shí)換液I次，然后再將透析袋置于5L雙蒸水內(nèi)透析24小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球溶液，
[0095](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)4°C下預(yù)凍48小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)80°C下冷凍36小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥96小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為10~lOOnm。
[0096]實(shí)施例七
[0097]一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0098](I)取2mL150 (w/v, mg/mL)的白蛋白溶液，然后采用2mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)所述白蛋白混合液的PH值到9 ；
[0099](2)向步驟(1)所得的所述pH值為9的白蛋白混合液中加入β-巰基乙醇得反應(yīng)液，然后在0°c下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)17小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述β-巰基乙醇的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的2500倍；
[0100](3)將步驟(2)反應(yīng)后的溶液在O°C的條件下進(jìn)行超聲，超聲功率為10KW，同時(shí)在所述進(jìn)行超聲的溶液中以0.01ml/s的速度注入的IOOmL含氯仿的乙醇溶液(氯仿和乙醇的體積比為1:9)得到微乳溶液，所述微乳溶液在0°C的條件下反應(yīng)5min后，靜置待微乳溶液分層后除去有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液；
[0101](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液移入透析袋，保持溫度為(TC的條件下，將透析袋置于IL pH為9的PBS緩沖液內(nèi)透析144小時(shí)，每次都采用IL pH為12的PBS緩沖液，期間每12個(gè)小時(shí)換液I次，然后再將透析袋置于5L雙蒸水內(nèi)透析12小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球溶液，
[0102](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)20°C下預(yù)凍24小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)50°C下冷凍48小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥120小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為100~200nm。
[0103]對(duì)比實(shí)施例一
[0104]一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0105](I)取2mL0.01 (w/v, mg/mL)的牛血清白蛋白溶液；
[0106](2)向步驟(1)所得的牛血清白蛋白水溶液中加入半胱氨酸得反應(yīng)液，然后在60°C下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)0.05小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述半胱氨酸的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的10倍；
[0107](3)在所述步驟(2)所得的溶液中加入的IOmL無(wú)水乙醇溶液得到微乳溶液，所述微乳溶液在0°c的條件下反應(yīng)10min后，靜置待微乳溶液分層后除去有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液；
[0108](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液移入透析袋，保持溫度為25°C的條件下，將透析袋置于5L雙蒸水內(nèi)透析12小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球溶液，
[0109](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)20°C下預(yù)凍2小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)80°C下冷凍24小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥48小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包`括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為10-600nm。
[0110]對(duì)比實(shí)施例二
[0111]一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，包括以下步驟:
[0112](I)取ImL體積質(zhì)量濃度為I (w/v, mg/mL)的吲哚青綠和lmL300 (w/v, mg/mL)的牛血清白蛋白混合，得到白蛋白混合液；
[0113](2)向步驟(1)所得的白蛋白混合液中加入谷胱甘肽得反應(yīng)液，然后在60°C下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)0.05小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述谷胱甘肽的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的5000倍;
[0114](3)在所述步驟(2)所得的溶液中加入的IOmL無(wú)水乙醇溶液得到微乳溶液，所述微乳溶液在0°c的條件下反應(yīng)10min后，靜置待微乳溶液分層后除去有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液；
[0115](4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液移入透析袋，保持溫度為25°C的條件下，將透析袋置于5L雙蒸水內(nèi)透析12小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球溶液，
[0116](5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)20°C下預(yù)凍2小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)80°C下冷凍24小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥48小時(shí)，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為100~lOOOnm。
[0117]相對(duì)于本發(fā)明實(shí)施例提供的多聚體白蛋白納米球，對(duì)比實(shí)施例1和對(duì)比實(shí)施例2提供的多聚體白蛋白納米球粒徑分布集中度不高，不利于其在生物醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。[0118]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之 內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種多聚體白蛋白納米球，其特征在于，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為10~lOOOnm。
2.如權(quán)利要求1所述的一種多聚體白蛋白納米球，其特征在于，所述含巰基或二硫鍵的白蛋白分子為人血清白蛋白、牛血清白蛋白、豬血清白蛋白、重組血清白蛋白和血紅蛋白中的至少一種。
3.如權(quán)利要求1所述的一種多聚體白蛋白納米球，其特征在于，所述多聚體白蛋白納米球中包裹有目標(biāo)投遞物。
4.如權(quán)利要求3所述的一種多聚體白蛋白納米球，其特征在于，所述目標(biāo)投遞物為抗癌藥物和造影劑中的至少一種。
5.如權(quán)利要求4所述的一種多聚體白蛋白納米球，其特征在于，所述抗癌藥物為鉬及鉬的配合物、5β，20_環(huán)氧_1，2α，4，7β，10β，13α-六羥基紫杉烷-1 1-烯-9-酮-4，10- 二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13 [ (2’ R, 3’ S) -N-苯甲酰-3-苯基異絲氨酸酯]、(7S:9S)-9-羥乙?；?4-甲氧基-7，8，9，10-四氫-6，7，9，11-四羥基-7_0-(2’，3’，6’，_二去氧-3’ _氣基-a_l_來(lái)蘇已吡喃基)_5，12-蔡二麗、(E, E)-1, 7-雙(4-羥基-3-甲氧基苯基)-1，6-庚二烯-3，5- 二酮、4-乙基-4，12- 二氧-4-羥-1H-吡喃(3’，4’，6，7)吡吲哚(I，2-6)喹啉-3，14- 二酮、(2S-反式)-18-羧基-20-(羧甲基)-13-乙基-2，3- 二氫3，7，12，17-四甲基-8-乙烯基-21H，23H-卟吩-2-丙酸、IR700碘化物和11-氯-1，I’ - 二正丙基-3，3，3’，3’ -四甲基-10，12-三亞甲基吲哚三碳花青碘鹽中的至少一種。
6.如權(quán)利要求4所述的一 種多聚體白蛋白納米球，其特征在于，所述抗造影劑為2，7-雙[1，3- 二氫-1，1- 二甲基-3- (4-橫丁基)-1, 3, 5-庚二烯單鈉鹽、對(duì)-[(2, 4- 二氨基喋啶-6)_N-甲基甲氨基]苯甲酰谷氨酸、3，7-雙(二甲氨基)吩噻嗪-5-翁氯化物、6，6’-[[3，3’-二甲基(1，1’-二苯基)-4，4’-二基]雙(偶氮基)]雙(4-氨基-5-羥基-1，3-萘二磺酸)四鈉鹽、2-((4- 二乙氨基)苯)(4_( 二乙氨基)環(huán)己燒_2，5- 二烯)甲烷)苯基-1，4-二磺酸鹽、4，4’-雙(二乙氨基)三苯脫水甲醇_2’’，4’’-二磺酸單鈉和金屬納米粒子中的至少一種。
7.一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)制備體積質(zhì)量濃度為0.01~300mg/mL的含疏基的白蛋白水溶液，并調(diào)節(jié)所述白蛋白水溶液的PH值為7~12 ; (2)向步驟(1)所得的所述pH值為7~12的白蛋白混合液中加入帶巰基的還原劑得反應(yīng)液，然后在O~60°C下輕輕搖動(dòng)反應(yīng)0.05~12小時(shí)，在所述反應(yīng)液中，所述帶巰基的還原劑的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的10~5000倍； (3)將步驟(2)反應(yīng)后的溶液在O~60°C的條件下進(jìn)行超聲，所述超聲的功率范圍為I~100KW，同時(shí)在攪拌的條件下在所述進(jìn)行超聲的溶液中以0.01~1000ml/s的速度加入有機(jī)溶劑得到微乳溶液，所述微乳溶液在O~60°C的條件下反應(yīng)5~240min后，靜置分層，然后去除有機(jī)相，得到含多聚體白蛋白納米球的懸濁液，其中，所述有機(jī)溶劑加入的體積為所述步驟(2)反應(yīng)后的溶液的2~100倍； (4)將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液在O~60°C以及pH值為7~12的條件下進(jìn)行透析，得到多聚體白蛋白納米球溶液； (5)將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液進(jìn)行干燥脫水處理，得到多聚體白蛋白納米球，所述多聚體白蛋白納米球包括含巰基或二硫鍵的白蛋白分子，所述白蛋白分子之間通過(guò)二硫鍵相互連接，所述多聚體白蛋白納米球的粒徑為10~lOOOnm。
8.如權(quán)利要求7所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)中，所述含巰基或二硫鍵的白蛋白分子為人血清白蛋白、牛血清白蛋白、豬血清白蛋白、重組血清白蛋白和血紅蛋白中的至少一種。
9.如權(quán)利要求7所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述步驟(O中，所述白蛋白水溶液中含有體積分?jǐn)?shù)為5%~50%的二甲基亞砜。
10.如權(quán)利要求7所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述白蛋白水溶液中含有目標(biāo)投遞物，所述目標(biāo)投遞物的質(zhì)量為所述白蛋白質(zhì)量的0.0002 ~0.5 倍。
11.如權(quán)利要求10所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述目標(biāo)投遞物為抗癌藥物和造影劑中的至少一種。
12.如權(quán)利要求11所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述抗癌藥物為鉬及鉬的配合物、50，20-環(huán)氧-1，2(1，4，7110113(1-六羥基紫杉烷-1 1-烯-9-酮-4，10- 二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13 [ (2’ R, 3’ S) -N-苯甲酰-3-苯基異絲氨酸酯]、(7S:9S)-9-羥乙?；?4-甲氧基-7，8，9，10-四氫_6，7，9，11-四羥基-7_0-(2’，3’，6’，_二去氧-3’ _氣基-a_l_來(lái)蘇已吡喃基)_5，12-蔡二麗、(E, E)-1, 7-雙(4-羥基-3-甲氧基苯基) -1，6-庚二烯-3，5- 二酮、4-乙基-4，12- 二氧-4-羥-1H-吡喃(3’，4’，6，7)吡吲哚(I，2-6)喹啉-3，14- 二酮、(2S-反式)-18-羧基-20-(羧甲基)-13-乙基-2，3- 二氫3，7，12，17-四甲基-8-乙烯基-21H，23H-卟吩-2-丙酸、IR700碘化物和11-氯-1，I’ - 二正丙基-3，3，3’，3’ -四甲基-10，12-三亞甲基吲哚三碳花青碘鹽中的至少一種。
13.如權(quán)利要求11所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述造影劑為2，7-雙[1，3- 二氫-1，1- 二甲基-3- (4-橫丁基)-1, 3，5-庚二烯單鈉鹽、對(duì)-[(2，4-二氨基喋啶-6)-N-甲基甲氨基]苯甲酰谷氨酸、3，7-雙(二甲氨基)吩噻嗪-5-翁氯化物、6，6’ -[ [3，3’ - 二甲基(1，I’ - 二苯基)-4，4’ - 二基]雙(偶氮基)]雙(4-氨基-5-羥基-1，3-萘二磺酸)四鈉鹽、2-((4-二乙氨基)苯)(4-( 二乙氨基)環(huán)己烷-2，5-二烯)甲烷)苯基-1，4-二磺酸鹽、4，4’-雙(二乙氨基)三苯脫水甲醇-2’ ’，4’ ’ - 二磺酸單鈉和金屬納米粒子中的至少一種。
14.如權(quán)利要求7所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述帶巰基的還原劑為谷胱甘肽、半胱氨酸、巰基乙醇或二硫蘇糖醇。
15.如權(quán)利要求7所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙醇或叔丁醇中的至少一種。
16.如權(quán)利要求15所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑中還含有三氯甲烷、二氯甲烷或正己烷中的至少一種。
17.如權(quán)利要求7所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中，所述進(jìn)行透析的方法為:先將步驟(3)所得的含多聚體白蛋白納米球的懸濁液置于pH值為7~12的PBS緩沖液中透析10~300小時(shí)，然后在雙蒸水內(nèi)透析I~24小時(shí)，得到含多聚體白蛋白納米球的溶液。
18.如權(quán)利要求7所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)中，其特征在于，所述對(duì)步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液進(jìn)行干燥脫水處理的方式為:將步驟(4)所得的多聚體白蛋白納米球溶液置于負(fù)O~20°C下預(yù)凍I~48小時(shí)后轉(zhuǎn)移至負(fù)20~80°C下冷凍2~48小時(shí)，然后在冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥12~120小時(shí)。
19.如權(quán)利要求7所述的一種多聚體白蛋白納米球的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)中，其特征在于，所述多聚體白蛋白納米球中包裹有目標(biāo)投遞物。
20.如權(quán)利要求1~6任一 所述的多聚體白蛋白納米球在制備預(yù)防、治療或診斷癌癥的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K47/42GK103495179SQ201310449770
【公開(kāi)日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2013年9月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月27日
【發(fā)明者】蔡林濤, 胡德紅, 盛宗海 申請(qǐng)人:深圳先進(jìn)技術(shù)研究院