一種從茶果皮中提取α-淀粉酶抑制劑的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及α-淀粉酶抑制劑的提取方法，旨在提供一種從茶果皮中提取α-淀粉酶抑制劑的方法。該方法的步驟包括：稱取干燥后粉碎的茶果皮加入無水乙醇，浸泡離心得到經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮，然后加入乙醇水溶液，超聲提取后離心得到上清液，再依次加入丙酮、氯仿進(jìn)行萃取得到萃余液，向萃余液中加入正丁醇萃取得到正丁醇萃取液，最后真空干燥即得到α-淀粉酶抑制劑。本發(fā)明通過超聲提取和極性篩選從茶果皮中提取出了一種α-淀粉酶抑制劑，且本發(fā)明制備的α-淀粉酶抑制劑是一種天然α-淀粉酶抑制劑，對(duì)α-淀粉酶的抑制效果優(yōu)于阿卡波糖，另外，本發(fā)明的技術(shù)可以有效提高茶果皮資源的經(jīng)濟(jì)效益。
【專利說明】一種從茶果皮中提取α-淀粉酶抑制劑的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明是關(guān)于α-淀粉酶抑制劑的提取方法，特別涉及一種從茶果皮中提取α -淀粉酶抑制劑的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，全球糖尿病人已達(dá)1.5億，預(yù)測2025年，可達(dá)3億。其中，我國有5000萬以上的糖尿病患者，發(fā)病年齡呈現(xiàn)年輕化趨勢。餐后高血糖是2型糖尿病的一個(gè)典型特征。由于2型糖尿病餐后胰島素分泌峰值延遲，造成肝糖產(chǎn)生及周圍組織糖利用異常，導(dǎo)致餐后血糖持續(xù)升高，引起葡萄糖毒性，造成心血管系統(tǒng)損傷，對(duì)人體健康造成不可逆的傷害甚至引起死亡。所以，控制餐后血糖升高，對(duì)于控制心血管疾病的發(fā)生和進(jìn)展具有非常重要的意義。α -淀粉酶抑制劑能有效地抑制消化道內(nèi)唾液及胰淀粉酶的活性，阻礙食物中碳水化合物的水解和消化，從而降低餐后血糖水平。由于臨床上使用的阿卡波糖等合成型抑制劑對(duì)于腸道具有一定的毒副作用，所以，從植物源探尋天然的α-淀粉酶抑制劑成為了國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。
[0003]茶果是茶樹除茶葉之外的另一重要部位，包括茶果皮、茶籽殼和茶籽仁。隨著2010年茶葉籽油被衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新資源食品，茶葉籽油加工如火如荼開展，然而，這也導(dǎo)致茶果皮這一加工副產(chǎn)物的大量產(chǎn)生。目前，對(duì)于如何有效利用茶果皮資源還鮮見報(bào)道。更未見從茶果皮中提取α-淀粉酶抑制劑的報(bào)道或?qū)＠?br>
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的主要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種能有效利用茶果皮資源，且能提取出天然α-淀粉酶抑制劑的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的解決方案是:
[0005]提供一種從茶果皮中提取α-淀粉酶抑制劑的方法，包括干燥和粉碎茶果皮，具體步驟包括:
[0006]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮，以茶果皮和無水乙醇為Ig:20ml~Ig:30ml的比例，向茶果皮中加入無水乙醇，并浸泡2~3小時(shí)后，離心得到經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮；
[0007]步驟B:向步驟A中得到的經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮中加入乙醇水溶液，并保證茶果皮和乙醇水溶液的比例為Ig:20ml~Ig:30ml，然后在300~350W頻率下超聲提取3~4小時(shí)后離心，得到上清液；所述乙醇水溶液是PH為3.5~4.5、體積濃度為20%~30%的溶液；
[0008]步驟C:向步驟B中得到的上清液中加入丙酮，并保證上清液和丙酮的體積比為1:1~3:1,然后進(jìn)行萃取,得到萃余液；
[0009]步驟D:向步驟C中得到的萃余液中加入氯仿，并保證萃余液和氯仿的體積比為1:1~3:1,然后進(jìn)行萃取,得到萃余液；[0010]步驟E:向步驟D中得到的萃余液中加入正丁醇，并保證萃余液和正丁醇的體積比為1:1~3:1，再進(jìn)行萃取，得到正丁醇萃取液；
[0011]步驟F:將步驟E中得到的正丁醇萃取液真空干燥，即得到從茶果皮中提取的α -淀粉酶抑制劑。
[0012]在本發(fā)明中，所述步驟A和步驟B中離心的條件是:15000轉(zhuǎn)/分鐘，離心25分鐘。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0014]通過超聲提取和極性篩選從茶果皮中提取出了一種α-淀粉酶抑制劑，且本發(fā)明制備的α-淀粉酶抑制劑是一種天然α-淀粉酶抑制劑，對(duì)α-淀粉酶的抑制效果優(yōu)于阿卡波糖，另外，本發(fā)明的技術(shù)可以有效提高茶果皮資源的經(jīng)濟(jì)效益。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1為本發(fā)明實(shí)施例中提取的α -淀粉酶抑制劑對(duì)α _淀粉酶活性的抑制作用對(duì)比圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合附圖與【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述:
[0017]本發(fā)明從茶果皮中提取α -淀粉酶抑制劑的方法具體步驟包括:
[0018]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮，以茶果皮和無水乙醇為Ig:20ml~Ig:30ml的比例，向茶果皮中加入無水乙醇，并浸泡2~3小時(shí)后以15000轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘，得到經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮。
[0019]步驟B:向步驟A中得到的經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮中加入乙醇水溶液，并保證茶果皮和乙醇水溶液的比例為Ig:20ml~Ig:30ml，然后在300~350W頻率下超聲提取3~4小時(shí)后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘，得到上清液。所述乙醇水溶液是PH為3.5~
4.5、體積濃度為20%~30%的溶液。
[0020]步驟C:向步驟B中得到的上清液中加入丙酮，并保證上清液和丙酮的體積比為1:1~3:1,然后進(jìn)行萃取,得到萃余液。
[0021]步驟D:向步驟C中得到的萃余液中加入氯仿，并保證萃余液和氯仿的體積比為1:1~3:1,然后進(jìn)行萃取,得到萃余液。
[0022]步驟E:向步驟D中得到的萃余液中加入正丁醇，并保證萃余液和正丁醇的體積比為1:1~3:1，再進(jìn)行萃取，得到正丁醇萃取液。
[0023]步驟F:將步驟E中得到的正丁醇萃取液真空干燥，即得到從茶果皮中提取的α -淀粉酶抑制劑。
[0024]下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)的專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0025]實(shí)施例1
[0026]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮20g，以茶果皮和無水乙醇為Ig:20ml的比例，向茶果皮中加入無水乙醇，并浸泡3小時(shí)后，15000轉(zhuǎn)/分鐘，離心25分鐘，得到經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮；
[0027]步驟B:以步驟A中得到的經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮和乙醇水溶液為Ig:20ml的比例，向步驟A中得到的經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮中加入乙醇水溶液，并在300W頻率下超聲提取4小時(shí)后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘，得到上清液，所述乙醇水溶液是PH為3.5、體積濃度為20%的溶液；
[0028]步驟C:按步驟B中得到的上清液和丙酮的體積比為1:1的比例，向步驟B中得到的上清液中加入丙酮，然后進(jìn)行萃取，得到萃余液；
[0029]步驟D:按步驟C中得到的萃余液和氯仿的體積比為1:1的比例，向步驟C中得到的萃余液中加入氯仿，然后進(jìn)行萃取，得到萃余液；
[0030]步驟E:按步驟D中得到的萃余液和正丁醇的體積比為1:1的比例，向步驟D中得到的萃余液中加入正丁醇，進(jìn)行萃取，得到正丁醇萃取液；
[0031]步驟F:將步驟E中得到的正丁醇萃取液真空干燥，即得到從茶果皮中提取的α -淀粉酶抑制劑1.lg，得率為5.5% (占茶果皮干重)。
[0032]實(shí)施例2
[0033]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮20g，以茶果皮和無水乙醇為Ig:25ml的比例，向茶果皮中加入無水乙醇，并浸泡2.5小時(shí)后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘，得到經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮；
[0034]步驟B:以步驟A中得到的茶果皮和乙醇水溶液為Ig:25ml的比例，向步驟A中得到的經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮中加入乙醇水溶液，并在325W頻率下超聲提取3.5小時(shí)后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘，得到上清液，所述乙醇水溶液是PH為4、體積濃度為25%的溶液；
[0035]步驟C:按步驟B中得到的上清液和丙酮的體積比為2:1的比例，向步驟B中得到的上清液中加入丙酮，然后進(jìn)行萃取，得到萃余液；
[0036]步驟D:按步驟C中得到的萃余液和氯仿的體積比為2:1的比例，向步驟C中得到的萃余液中加入氯仿，然后進(jìn)行萃取，得到萃余液；
[0037]步驟E:按步驟D中得到的萃余液和正丁醇的體積比為2:1的比例，向步驟D中得到的萃余液中加入正丁醇，進(jìn)行萃取，得到正丁醇萃取液；
[0038]步驟F:將步驟E中得到的正丁醇萃取液真空干燥，即得到從茶果皮中提取的α -淀粉酶抑制劑1.9g，得率為9.5% (占茶果皮干重)。
[0039]實(shí)施例3
[0040]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮20g，以茶果皮和無水乙醇為Ig:30ml的比例，向茶果皮中加入無水乙醇，并浸泡2小時(shí)后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘；
[0041]步驟B:以步驟A中得到的茶果皮和乙醇水溶液為Ig:30ml的比例，向步驟A中得到的經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮中加入乙醇水溶液，并在350W頻率下超聲提取3小時(shí)后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘，得到上清液，所述乙醇水溶液是PH為4.5、體積濃度為30%的溶液；
[0042]步驟C:按步驟B中得到的上清液和丙酮的體積比為3:1的比例，向步驟B中得到的上清液中加入丙酮，然后進(jìn)行萃取，得到萃余液；
[0043]步驟D:按步驟C中得到的萃余液和氯仿的體積比為3:1的比例，向步驟C中得到的萃余液中加入氯仿，然后進(jìn)行萃取， 得到萃余液；
[0044]步驟E:按步驟D中得到的萃余液和正丁醇的體積比為3:1的比例，向步驟D中得到的萃余液中加入正丁醇，進(jìn)行萃取，得到正丁醇萃取液；
[0045]步驟F:將步驟E中得到的正丁醇萃取液真空干燥，即得到從茶果皮中提取的α -淀粉酶抑制劑2.6g，得率為13% (占茶果皮干重)。
[0046]將上述3個(gè)實(shí)施例的α -淀粉酶抑制劑進(jìn)行α _淀粉酶抑制效果驗(yàn)證:將從茶果皮中提取的α -淀粉酶抑制劑溶于二甲基亞砜溶液(DMSO)制成提取物溶液，取250 μ I提取物溶液和125 μ I含α -淀粉酶的磷酸鈉緩沖液，含α -淀粉酶的磷酸鈉緩沖液的PH為6.9, α-淀粉酶濃度為0.5mg/ml)。使提取物溶液和含α -淀粉酶的磷酸鈉緩沖液在25度下反應(yīng)10分鐘后，加入250 μ I含1%淀粉、PH為6.9的磷酸鈉緩沖液，在25度下繼續(xù)反應(yīng)10分鐘，然后加入0.5ml的DNS(4，4’ - 二硝基二苯乙烯_2，2’ - 二磺酸)，沸水浴5分鐘，冷卻至室溫后加5ml蒸餾水稀釋，在540nm處測定吸光度，實(shí)驗(yàn)中以不含提取物的DMSO溶劑為空白對(duì)照。其中α-淀粉酶抑制率％= (I _A#S/A對(duì)照)*100。
[0047]如圖1所示，從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)制備的α -淀粉酶抑制劑呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)抑制α -淀粉酶活性，其抑制效果優(yōu)于阿卡波糖，可以應(yīng)用在針對(duì)糖尿病或者高血糖患者開發(fā)的藥物和保健食品等領(lǐng)域。
【權(quán)利要求】
1.一種從茶果皮中提取α-淀粉酶抑制劑的方法，包括干燥和粉碎茶果皮，其特征在于，具體步驟包括: 步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮，以茶果皮和無水乙醇為Ig:20ml~Ig:30ml的比例，向茶果皮中加入無水乙醇，并浸泡2~3小時(shí)后，離心得到經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮； 步驟B:向步驟A中得到的經(jīng)無水乙醇浸泡過的茶果皮中加入乙醇水溶液，并保證茶果皮和乙醇水溶液的比例為Ig:20ml~Ig:30ml，然后在300~350W頻率下超聲提取3~4小時(shí)后離心，得到上清液；所述乙醇水溶液是PH為3.5~4.5、體積濃度為20%~30%的溶液； 步驟C:向步驟B中得到的上清液中加入丙酮，并保證上清液和丙酮的體積比為1:1~3:1，然后進(jìn)行萃取，得到萃余液； 步驟D:向步驟C中得到的萃余液中加入氯仿，并保證萃余液和氯仿的體積比為1:1~3:1，然后進(jìn)行萃取，得到萃余液； 步驟E:向步驟D中得到的萃余液中加入正丁醇，并保證萃余液和正丁醇的體積比為1:1~3:1，再進(jìn)行萃取，得到正丁醇萃取液； 步驟F:將步驟E中得到的正丁醇萃取液真空干燥，即得到從茶果皮中提取的α -淀粉酶抑制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從茶果皮中提取α-淀粉酶抑制劑的方法，其特征在于，所述步驟A和步驟B中離心`的條件是:15000轉(zhuǎn)/分鐘，離心25分鐘。
【文檔編號(hào)】A61P3/10GK103520374SQ201310433256
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月22日
【發(fā)明者】徐平, 章毅, 王岳飛 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)