專利名稱：一種ex527靶向多功能介孔硅納米粒子的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的介孔硅納米粒子載藥的制備方法，具體涉及一種可示蹤的攜載抗腫瘤藥物EX527的多功能介孔硅納米粒子作為熒光探針及藥物傳輸工具的制備方法。
背景技術(shù)：
介孔材料具有高比表面積、大孔道容量，在多相催化、傳感器、吸附與分離等眾多領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，已成為一個(gè)新興的蓬勃發(fā)展的跨學(xué)科研究領(lǐng)域。介孔二氧化硅納米粒子(MSNs)集中了納米材料和多孔材料的多種性能于一體，并且具有毒副作用小、生物相容性好和易于修飾等優(yōu)點(diǎn)，適于用作雜化發(fā)光材料和熒光化學(xué)傳感材料的基底。單分散的介孔二氧化硅納米粒子還可以作為其它納米材料的硬模板，并且其內(nèi)部孔道和外部表面都可以作為模板反應(yīng)的場(chǎng)所，是制備核殼材料的優(yōu)良載體。其孔徑在2.0 50.0nm之間由合成條件任意調(diào)節(jié)等結(jié)構(gòu)特征，從而賦予其許多獨(dú)特的性能，該納米尺度所固有的獨(dú)特性質(zhì)，在癌癥的無創(chuàng)診斷與治療方面起到了積極重要的作用。自1992Mobil公司通過液晶做模板合成了MCM-S系列以來，由于該類材料具有有序的孔道結(jié)構(gòu)，較大的比表面積，窄且可調(diào)節(jié)的孔徑分布，較好的生物相容性和無毒害等特征，引起了研究者極大的興趣。不同孔道結(jié)構(gòu)、形貌的MCM-S材料被相繼合成，而且被廣泛地應(yīng)用于催化、吸附、分離以及醫(yī)藥控釋等領(lǐng)域.為了能更有效地將這類材料應(yīng)用于藥物的可控釋放，研究者對(duì)孔道以及納米微球表面的修飾技術(shù)也開展了深入的研究，比如將孔道表面結(jié)合不同官能團(tuán)的功能修飾劑。藥物分子可以通過物理吸附或者化學(xué)吸附，或者直接以藥物作為模板，原位合成介孔材料，通過改變外界環(huán)境達(dá)到控釋。最近研究者也采用在藥物被吸附后，以表面修飾的具有特殊要求的納米微粒進(jìn)行孔道封鎖，達(dá)到藥物控釋。

截止目前，使用MCM-S系列材料作為載體時(shí)，明顯存在著介孔載體可實(shí)際利用的有效空間較小的問題，吸附藥物分子的有效部位只能是在孔道的端口部位和納米微粒表面，而孔道內(nèi)大部分的空間貯藏藥物的能力則受孔徑影響較大，故通常制備的孔材料在緩釋方面效果并不理想。針對(duì)該問題，Shi等人利用混合模板，即以CTAB為主模板齊U，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)為副模板，通過PVP相互團(tuán)聚，在外層形成有序多孔殼層，通過煅燒去除有機(jī)物，合成出空腔介孔二氧化娃納米微粒(HNS)。Park等人利用IgepalC0-520 ( α - (4_壬基苯基)-ω -輕基-聚(氧化_1，2_聯(lián)乙燒))為表面修飾劑，通過微乳液法合成二氧化硅后，堿液腐蝕得到空腔材料。這些空腔材料大大增加了載藥能力。近些年來，介孔二氧化硅納米粒子作為藥物傳遞系統(tǒng)的應(yīng)用已經(jīng)成為納米醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。這主要是由于其具有介孔結(jié)構(gòu)、無毒的本質(zhì)、大的表面積和孔體積、良好的穩(wěn)定性及靈活多樣的表面修飾方法等特點(diǎn)。此外，二氧化硅干凝膠和氣凝膠可以是塊體、片狀體甚至是薄膜，這些形態(tài)對(duì)納米復(fù)合材料的實(shí)際應(yīng)用具有非常重要意義。通過組裝、包覆、摻雜等方式，將金顆粒、磁性粒子、熒光分子等功能材料與二氧化硅基質(zhì)復(fù)合，構(gòu)筑出具有多功能特性的納米輸送系統(tǒng)，可同時(shí)將熒光成像、磁共振成像、特異性標(biāo)記等技術(shù)連用，以實(shí)現(xiàn)對(duì)癌癥的多模式成像、同步診斷與治療。6-氯-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-甲酰胺(簡(jiǎn)稱:EX527)是一種新型的針對(duì)STRl和STR2的小分子抗腫瘤藥物。EX527通過抑制SIRTl的去乙酰化酶活性可有效抑制特異性小分子SIRTl的活性，IC50為38nM，這種作用存在濃度依賴性，抑制SIRT2和SIRT3時(shí)，效果低很多，IC50分別為19.6 μ M和48.7 μ Μ, ΕΧ527濃度高達(dá)100 μ M時(shí)也不抑制SIRT4-7和Ι/ΙΙ類HDAC的活性。ΕΧ527按10 μ g劑量作用于小鼠，可通過抑制下丘腦SIRTl活性而提高下丘腦乙?；疨53水平，當(dāng)I μ M的ΕΧ527單獨(dú)作用于NC1-H460細(xì)胞，不能檢測(cè)Ρ53在lysine382位點(diǎn)的乙?；饔?，然而當(dāng)EX527作用于受遺傳毒性試劑Etoposide、AdriamyciruHydroxyurea和H202影響的NC1-H460細(xì)胞，人類乳腺上皮細(xì)胞U-20S或MCF-7細(xì)胞時(shí)，可顯著提高乙?；疨53的量，但是EX527在p53控制的基因表達(dá)、細(xì)胞存活、細(xì)胞增殖方面沒有檢測(cè)效果。EX527在0.1%血清而不是10%血清中處理7天，作用于HCT116細(xì)胞，顯著提高細(xì)胞數(shù)，提高達(dá)90%，說明在無細(xì)胞因子的情況下SirTl是細(xì)胞增殖的顯著調(diào)節(jié)器。EX527作用于INS-1E細(xì)胞可廢除白藜蘆醇對(duì)葡萄糖的反應(yīng)的影響，且抑制白藜蘆醇誘導(dǎo)的Glut2、葡萄糖激酶、Pdx-1和Tfam的上調(diào)，這是由于EX527和白藜蘆醇作用于SIRTl脫乙?；富钚缘淖饔檬窍喾吹?。近幾年在國(guó)際頂級(jí)雜志中已有EX527的相關(guān)文章發(fā)表，唯一利用的是DMSO對(duì)其進(jìn)行溶解，但是這樣容易造成血糖水平提高從而限制它臨床的進(jìn)一步研究。由于EX527水溶性差等問題，導(dǎo)致其在體抗腫瘤效果非常差，因此對(duì)其給藥方式的改變一直是其研究的一個(gè)重要方向。目前，大部分專利都是涉及關(guān)于介孔硅分子篩的制備及應(yīng)用。如:中國(guó)發(fā)明專利“有序介孔硅膠整體 柱及其制法和用途”(CN1456387)公開了一種由溶膠-凝膠(sol-gel)技術(shù)制得整體柱材料的方法；中國(guó)發(fā)明專利“雙介孔硅鋁復(fù)合分子篩及其制備方法”(CN1304875)公開了采用溶膠一凝膠途徑在溫和的反應(yīng)條件下合成具有催化活性及雙介孔分布特征的硅鋁復(fù)合分子篩的方法；中國(guó)發(fā)明專利“一種介孔硅磷酸鋁分子篩及其制備”(CN1362365)公開了一種采用十六烷基三甲基氯化銨(CTMAC)為主要模板劑，低溫水熱合成的制備方法；中國(guó)專利文獻(xiàn)“一種介孔硅樹脂及其制備方法”(CN102417605A)公開了采用甲基苯基硅氧烷樹脂(MPS)為樹脂基體，嵌段共聚物聚二甲基硅氧烷-聚氧乙烯(PDMS-PEO)為模板劑，以四氫呋喃(THF)為溶劑，通過溶劑揮發(fā)誘導(dǎo)自組裝方法制得介孔硅樹脂的制備方法。而關(guān)于一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子的相關(guān)專利還沒有類似報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明旨在提供一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子的制備方法，其表面經(jīng)過氨基的修飾，作為熒光探針及藥物傳輸工具在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:(I)稱取2mg 20g的羅丹明或異硫氰酸熒光素，并與與IOul IOOOul的氨丙基三乙氧基硅烷在有機(jī)溶劑中避光過夜反應(yīng)，得到羅丹明或異硫氰酸熒光素-氨丙基三乙氧基娃燒；(2)將0.1g IOOg的溴烷胺溶解在Iml IOOOml稀的強(qiáng)堿溶液中，水浴加熱，并向混合液中滴加0.1ml IOml的正娃酸乙酯和IOul IOOOul的羅丹明或異硫氰酸突
光素_氨丙基二乙氧基娃燒;(3)待混合液反應(yīng)10 60min，保持溫度不變，在磁力攪拌條件下，滴加乙酸乙酯，反應(yīng)5 50min,靜置10 90min后,進(jìn)行離心、洗漆并回流,得到復(fù)合突光介孔娃納米粒子;(4)稱取0.2mg 200mg復(fù)合突光介孔娃納米粒子分散在60ml 600ml的有機(jī)溶劑中，回流30 300min，加入0.1ml IOOml的氨丙基三乙氧基硅烷，進(jìn)行離心、洗滌，制備出表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；(5)將所述介孔硅納米粒子與IOml IOOOml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌，得到EX527靶向介孔硅納米粒子；(6)稱取0.1mg IOOmg所述EX527革巴向介孔娃納米粒子,加入0.1 IOOml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向介孔硅納米粒子。作為一種優(yōu)選的方案，所述的強(qiáng)堿溶液為KOH、NaOH、CsOH、Ba(OH)2, Ca(OH)2或FrOH中的任意一種。需要說明的是，所述水浴溫度為20°C 95°C，所述滴加的滴速為每分鐘0.0lml 70ml ο需要說明的是，所述滴加乙酸乙酯滴速為每分鐘0.0lml 90ml，其純度為30% 99.5%。作為一種優(yōu)選的方案，所述的有機(jī)溶劑為甲醇、氯仿、丙酮、二甲基亞砜、乙醇或四氯乙烷中的任意一種。需要說明的是，將所述EX527水溶液濃度為0.1 100mg/ml。本發(fā)明有益效果在于:1、本發(fā)明所涉及到的合成方法簡(jiǎn)便易操作，納米粒子具有比表面積大、粒徑小且單分散性良好等優(yōu)點(diǎn)；2、本發(fā)明所合成的多功能介孔納米粒子具有穩(wěn)定的熒光特性、介孔性和良好的靶向性；3、本發(fā)明所合成的多功能介孔納米粒子的載藥量高達(dá)97%，生物利用度高；而且提供了表面修飾功能基團(tuán)的合成方法，同時(shí)在介孔硅層表面還可以復(fù)合多種其他種類的功能基團(tuán)，為生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用提供了多種多功能的復(fù)合納米粒子的制備方法；4、本發(fā)明所合成的多功能介孔納米粒子具有重要的應(yīng)用價(jià)值，尤其是在腫瘤靶向治療方面，表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。


圖1為本發(fā)明制備攜載EX527的多功能介孔硅納米粒子的過程原理圖2為本發(fā)明實(shí)例4所制得的攜載EX527的多功能介孔硅納米粒子的透射電鏡圖和粒徑分布圖；圖3為本發(fā)明實(shí)例5所制得的攜載EX527的多功能介孔硅納米粒子的N2吸收和釋放譜線；圖4為本發(fā)明實(shí)例8所制得的攜載EX527的多功能介孔硅納米粒子的熒光顯微鏡圖和熒光光譜圖；圖5為本發(fā)明實(shí)例9所制得的攜載EX527的介孔硅納米粒子在PBS中釋放EX527的特性曲線；圖6為本發(fā)明實(shí)例8所制得的攜載EX527的多功能介孔硅納米粒子對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制情況；
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。如圖1所示，本法明為一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:(1)稱取2mg 20g的羅丹明或異硫氰酸熒光素，并與與IOul IOOOul的氨丙基三乙氧基硅烷在有機(jī)溶劑中避光過夜反應(yīng)，得到羅丹明或異硫氰酸熒光素-氨丙基三乙氧基娃燒；(2)將0.1g IOOg的溴烷胺溶解在Iml IOOOml稀的強(qiáng)堿溶液中，水浴加熱，并向混合液中滴加0.1ml IOml的正娃酸乙酯和IOul IOOOul的羅丹明或異硫氰酸突
光素_氨丙基二乙氧基娃燒;(3)待混合液反應(yīng)10 60min，保持溫度不變，在磁力攪拌條件下，滴加乙酸乙酯，反應(yīng)5 50min,靜置10 90min后,進(jìn)行離心、洗漆并回流,得到復(fù)合突光介孔娃納米粒子;(4 )稱取0.2mg 200mg復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在60ml 600ml的有機(jī)溶劑中，回流30 300min，加入0.1ml IOOml的氨丙基三乙氧基硅烷，進(jìn)行離心、洗滌，制備出表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；(5)將所述介孔硅納米粒子與IOml IOOOml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌，得到EX527靶向介孔硅納米粒子；(6)稱取0.1mg IOOmg所述EX527革巴向介孔娃納米粒子,加入0.1 IOOml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向介孔硅納米粒子。作為一種優(yōu)選的方案，所述的強(qiáng)堿溶液為KOH、NaOH、CsOH、Ba(OH)2, Ca(OH)2或FrOH中的任意一種。需要說明的是，所述水浴溫度為20°C 95°C，所述滴加的滴速為每分鐘0.0lml 70ml ο 需要說明的是，所述滴加乙酸乙酯滴速為每分鐘0.0lml 90ml，其純度為30% 99.5%。
作為一種優(yōu)選的方案，所述的有機(jī)溶劑為甲醇、氯仿、丙酮、二甲基亞砜、乙醇或四氯乙烷中的任意一種。需要說明的是，將所述EX527水溶液濃度為0.1 100mg/ml。下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。為了簡(jiǎn)便，下述化合物使用英文簡(jiǎn)稱:1、羅丹明:RITC ;2、異硫氰酸熒光素:FITC ;3、氨丙基三乙氧基硅烷:APTES) ;4、溴烷胺:CTAB ;5、正硅酸乙酯:TE0S。實(shí)施例一稱取2mg RITC與IOul的APTES在乙醇中避光過夜反應(yīng)，得到RITC-APTES; 0.1g的CTAB溶解在Iml稀NaOH溶液中，水浴加熱至20°C，0.1ml的TEOS和IOul的RITC - APTES滴加到上述混合溶液中，滴速為每分鐘0.0lml ;反應(yīng)5min,保持溫度不變，向混合液中滴加純度為30%的乙酸乙酯，滴速為每分鐘0.0lml,以80r/min的轉(zhuǎn)速攪拌5min，靜置lOmin，離心、洗滌并回流，制得復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；取0.1mg上述制備的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在60ml的甲醇中，回流30min，加入0.1ml的APTES，離心、洗滌，得到表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；將其與IOml濃度為0.lmg/ml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌；取0.1mg上述制備的一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子，加入0.1ml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向多功能介孔硅納米粒子。實(shí)施例二稱取150mgFITC與50ul的APTES在乙醇中避光過夜反應(yīng)，得到FITC-APTES; Ig的CTAB溶解在40ml稀KOH溶液 中，水浴加熱至25°C，0.8ml的TEOS和80ul的FITC - APTES滴加到上述混合溶液中，滴速為每分鐘0.1ml ;反應(yīng)15min,保持溫度不變，向混合液中滴加純度為35%的乙酸乙酯，滴速為每分鐘0.5ml,以140r/min的轉(zhuǎn)速攪拌lOmin，靜置20min，離心、洗滌并回流，制得復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；取Img上述制備的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在150ml的丙酮中，回流60min，加入Iml的APTES，離心、洗滌，得到表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；將其與80ml濃度為0.5mg/ml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗漆；取5mg上述制備的一種EX527祀向多功能介孔娃納米粒子,加入8ml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向多功能介孔硅納米粒子。實(shí)施例三稱取2gFITC與IOOul的APTES在乙醇中避光過夜反應(yīng)，得到FITC-APTES; IOg的CTAB溶解在150ml稀Ba(OH)2溶液中，水浴加熱至35 °C，1.6ml的TEOS和200ul的FITC-APTES滴加到上述混合溶液中，滴速為每分鐘Iml ;反應(yīng)20min，保持溫度不變，向混合液中滴加純度為47%的乙酸乙酯，滴速為每分鐘5ml，以210r/min的轉(zhuǎn)速攪拌15min，靜置30min,離心、洗漆并回流,制得復(fù)合突光介孔娃納米粒子；取IOmg上述制備的復(fù)合突光介孔硅納米粒子分散在200ml的二甲基亞砜中，回流90min，加入IOml的APTES，離心、洗滌，得到表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；將其與260ml濃度為0.8mg/ml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌；取15mg上述制備的一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子，加入20ml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向多功能介孔硅納米粒子。實(shí)施例四
稱取6gRITC與300ul的APTES在乙醇中避光過夜反應(yīng)，得到RITC-APTES; 30g的CTAB溶解在350ml稀Ca(OH)2溶液中，水浴加熱至40°C，3.5ml的TEOS和350ul的RITC-APTES滴加到上述混合溶液中，滴速為每分鐘IOml ;反應(yīng)26min，保持溫度不變，向混合液中滴加純度為56%的乙酸乙酯，滴速為每分鐘15ml，以300r/min的轉(zhuǎn)速攪拌20min，靜置40min，離心、洗滌并回流，制得復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；取30mg上述制備的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在260ml的四氯乙烷中，回流120min，加入30ml的APTES，離心、洗滌，得到表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；將其與400ml濃度為lmg/ml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌；取3511^上述制備的一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子，加入40ml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向多功能介孔硅納米粒子。實(shí)施例五稱取IOgFITC與500ul的APTES在乙醇中避光過夜反應(yīng)，得到FITC-APTES; 50g的CTAB溶解在500ml稀NaOH溶液中，水浴加熱至57°C，5ml的TEOS和500ul的FITC-APTES滴加到上述混合溶液中，滴速為每分鐘35ml ;反應(yīng)35min,保持溫度不變，向混合液中滴加純度為65%的乙酸乙酯，滴速為每分鐘45ml，以390r/min的轉(zhuǎn)速攪拌27min，靜置50min，離心、洗滌并回流，制得復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；取50mg上述制備的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在330ml的氯仿中，回流165min，加入50ml的APTES，離心、洗滌，得到表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；將其與500ml濃度為5mg/ml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌；取50mg上述制備的一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子，加入50ml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向多功能介孔硅納米粒子。實(shí)施例六稱取12gRITC與600ul的APTES在乙醇中避光過夜反應(yīng)，得到RITC-APTES; 70g的CTAB溶解在600ml稀FrOH溶液中，水浴加熱至65°C，6ml的TEOS和600ul的RITC - APTES滴加到上述混合溶液中，滴速為每分鐘45ml ;反應(yīng)40min,保持溫度不變，向混合液中滴加純度為70%的乙酸乙酯，滴速·為每分鐘65ml，以450r/min的轉(zhuǎn)速攪拌30min，靜置60min，離心、洗滌并回流，制得復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；取70mg上述制備的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在420ml的乙醇中，回流180min，加入65ml的APTES，離心、洗滌，得到表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；將其與660ml濃度為20mg/ml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌；取60mg上述制備的一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子，加入65ml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向多功能介孔硅納米粒子。實(shí)施例七稱取14gFITC與700ul的APTES在乙醇中避光過夜反應(yīng)，得到FITC-APTES; 80g的CTAB溶解在780ml稀CsOH溶液中，水浴加熱至75°C，7ml的TEOS和750ul的FITC - APTES滴加到上述混合溶液中，滴速為每分鐘60ml ;反應(yīng)50min,保持溫度不變，向混合液中滴加純度為80%的乙酸乙酯，滴速為每分鐘75ml，以540r/min的轉(zhuǎn)速攪拌35min，靜置70min，離心、洗滌并回流，制得復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；取80mg上述制備的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在540ml的丙酮中，回流210min，加入78ml的APTES，離心、洗滌，得到表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；將其與700ml濃度為50mg/ml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌；取75mg上述制備的一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子，加入80ml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向多功能介孔硅納米粒子。實(shí)施例八稱取18gFITC與800ul的APTES在乙醇中避光過夜反應(yīng)，得到FITC-APTES; 90g的CTAB溶解在850ml稀Ca (OH) 2溶液中，水浴加熱至85°C，8ml的TEOS和850ul的FITC-APTES滴加到上述混合溶液中，滴速為每分鐘65ml ;反應(yīng)55min,保持溫度不變，向混合液中滴加純度為90%的乙酸乙酯，滴速為每分鐘80ml，以650r/min的轉(zhuǎn)速攪拌40min，靜置80min，離心、洗滌并回流，制得復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；取90mg上述制備的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在560ml的氯仿中，回流260min，加入94ml的APTES，離心、洗滌，得到表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；將其與850ml濃度為80mg/ml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌；取85mg上述制備的一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子，加入90ml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向多功能介孔硅納米粒子。實(shí)施例九稱取20gRITC與IOOOul的APTES在乙醇中避光過夜反應(yīng)，得到RITC-APTES; IOOg的CTAB溶解在IOOOml稀Ba(OH)2溶液中，水浴加熱至95°C，IOml的TEOS和IOOOul的RITC - APTES滴加到上述混合溶液中，滴速為每分鐘70ml ;反應(yīng)60min，保持溫度不變，向混合液中滴加純度為99.5%的乙酸乙酯，滴速為每分鐘90ml，以700r/min的轉(zhuǎn)速攪拌50min，靜置90min，離心、洗滌并回流，制得復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；取IOOmg上述制備的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在600ml的二甲基亞砜中，回流300min，加入IOOml的APTES，離心、洗滌，得到表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；將其與IOOOml濃度為100mg/ml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌；取IOOmg上述制備的一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子，加入IOOml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向多功能介孔娃納米粒子。如圖2所示，本發(fā)明制得的納米粒子比表面積大、形態(tài)均一且單分散性良好。如圖3所示，知本發(fā)明制得的攜載EX527的多功能介孔硅納米粒子釋放緩慢，完全滿足體內(nèi)給藥的要求。如圖4所示，本發(fā)明制得的攜載EX527的多功能介孔硅納米粒子具有一定的熒光性能和穩(wěn)定的熒光特性。如圖5所示，本發(fā)明制得的攜載EX527的多功能介孔硅納米粒子具有良好的緩釋性。如圖6所示，EX527經(jīng)過改變給藥方式后，對(duì)胃癌的治療具有明顯抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:利用本發(fā)明制備的介孔硅載藥粒子粒徑大小均勻且孔道成六邊形，熒光分布非常清晰；一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子具有良好的抗腫瘤特性、靶向性和控釋性，其抑制腫瘤細(xì)胞的效果是EX527的5倍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明制備的一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子做為熒光探針和藥物傳輸工具具有良好應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，可根據(jù)以上描述的技術(shù)方案以及構(gòu)思，做出其它各種相應(yīng)的改變以 及變形，而所有的這些改變以及變形都應(yīng)該屬于本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟: (1)稱取2mg 20g的羅丹明或異硫氰酸熒光素與IOul IOOOul的氨丙基三乙氧基硅烷在有機(jī)溶劑中避光過夜反應(yīng)，得到羅丹明或異硫氰酸熒光素-氨丙基三乙氧基硅烷； (2)將0.1g IOOg的溴烷胺溶解在Iml IOOOml稀的強(qiáng)堿溶液中，水浴加熱，并向混合液中滴加0.1ml IOml的正娃酸乙酯和IOul IOOOul的羅丹明或異硫氰酸突光素_氨丙基二乙氧基娃燒; (3)待混合液反應(yīng)10 60min，保持溫度不變，在磁力攪拌條件下，滴加乙酸乙酯，反應(yīng)5 50min，靜置10 90min后，進(jìn)行離心、洗滌并回流，得到復(fù)合熒光介孔硅納米粒子； (4)稱取0.2mg 200mg復(fù)合熒光介孔硅納米粒子分散在60ml 600ml的有機(jī)溶劑中，回流30 300min，加入0.1ml IOOml的氨丙基三乙氧基硅烷，進(jìn)行離心、洗滌，制備出表面氨基功能化的復(fù)合熒光介孔硅納米粒子； (5)將所述介孔硅納米粒子與IOml IOOOml的EX527水溶液混合，振蕩、離心并洗滌，得到EX527靶向介孔硅納米粒子； (6)取0.1mg IOOmg上述一種EX527革巴向介孔娃納米粒子,加入0.1 IOOml的葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，即得到EX527靶向介孔硅納米粒子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的強(qiáng)堿溶液為KOH、NaOH、CsOH、Ba (OH)2, Ca (OH) 2 或 FrOH 中的任意一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述水浴溫度為20°C 95°C，所述滴加的滴速為每分鐘0.0lml 70ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述滴加乙酸乙酯滴速為每分鐘0.0lml 90ml，其純度為 30% 99.5%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑為甲醇、氯仿、丙酮、二甲基亞砜、乙醇或四氯乙烷中的任意一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述EX527水溶液濃度為0.1 100mg/ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種EX527靶向多功能介孔硅納米粒子的制備方法；將熒光染料和氨基化合物在有機(jī)溶劑中避光條件下過夜反應(yīng)，得到熒光染料混合液；介孔模板劑加入到稀的強(qiáng)堿溶液中攪拌，加熱至一定溫度后，滴加硅源和熒光染料混合液反應(yīng)，滴加有機(jī)溶劑，靜置、離心并洗滌，制備復(fù)合熒光介孔硅納米粒子；取納米粒子與適量的氨基化合物反應(yīng)，過濾并數(shù)次透析，制備出表面氨基功能化的復(fù)合熒光的介孔硅納米粒子；將其與EX527溶液混合振蕩，離心并洗滌，得到氨基修飾的EX527復(fù)合介孔硅納米粒子；加入葉酸，活化羧基并振蕩過夜，透析離心后，得到EX527靶向多功能介孔硅納米粒子。本發(fā)明粒徑小，單分散性與穩(wěn)定性好，載藥量高，熒光性能穩(wěn)定，安全性高，良好的主動(dòng)靶向性能等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK103230603SQ201310162740
公開日2013年8月7日 申請(qǐng)日期2013年5月3日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月3日
發(fā)明者詹勇華, 韓青林, 孫玉林, 梁繼民, 田捷 申請(qǐng)人:西安電子科技大學(xué)