專利名稱：一種含二甲基砜生物降解微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物緩釋載體技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種含二甲基砜生物降解微球及其制備方法。
背景技術(shù)：
骨性關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis, 0A)是一種嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量和工作的常見病、多發(fā)病，系關(guān)節(jié)軟骨的退變和繼發(fā)性骨質(zhì)增生所致的一種慢性骨關(guān)節(jié)病，膝關(guān)節(jié)OA發(fā)病率最高。由于其病因病理尚不完全清楚，因此，OA治療成為臨床治療的難題之一。國內(nèi)的初步調(diào)查顯示，骨性關(guān)節(jié)炎的總患病率約為15%，40歲人群的患病率為10 17%，60歲以上則達(dá)50%，而在75歲以上人群中，80%患有骨性關(guān)節(jié)炎，該病的最終致殘率為53%。我國骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病情況約占總?cè)丝诘?0%，為I億人左右，1990年，我國只有4000多萬骨關(guān)節(jié)炎患者，而2000年已達(dá)到8000萬，目前患者人數(shù)達(dá)到了 I億多人，根據(jù)WHO預(yù)測，到2015年中國骨病患者將達(dá)到1.5億，將成為世界骨關(guān)節(jié)炎患病人數(shù)最多的國家之一。由于軟骨細(xì)胞的分裂潛能及其修復(fù)能力有限，因此應(yīng)用外源性藥物促進(jìn)軟骨損傷的修復(fù)是重要的研究方向。目前，針對不同患者、不同關(guān)節(jié)位置和不同病理階段有許多治療方法，但各種方法均有其局限性，成功率極低，不能從根本上治愈關(guān)節(jié)炎。而骨性關(guān)節(jié)炎治療中廣泛應(yīng)用的非留體抗炎藥物雖可減輕疼痛，但具有很強(qiáng)的不良反應(yīng)；激素類藥物關(guān)節(jié)腔注射有很好的緩解癥狀、改善功能的作用，但不能促進(jìn)損傷軟骨的恢復(fù)。骨骼、軟骨和結(jié)締組織的修補(bǔ)與重建均要以硫?yàn)樵?，同時硫也有助于鈣的吸收，因此有學(xué)者建議多食含硫的食物。二甲基砜是一種有機(jī)硫化物，是人體膠原蛋白合成的必要物質(zhì)，為國外常用的保健品，主要用于皮膚、毛發(fā)、骨、軟骨等輔助治療，其對糖類的代謝起促進(jìn)作用，亦能促進(jìn)傷口愈合，同時二甲基砜也是最有效的體外軟骨細(xì)胞分裂素，具有加速關(guān)節(jié)軟骨代謝，促進(jìn)軟骨再生的作用。近年來，國外陸續(xù)有采用二甲基砜口服治療膝骨關(guān)節(jié)炎的報道，而許多基礎(chǔ)研究也表明其具有很好的防治關(guān)節(jié)軟骨退變的作用，有望成為治療骨關(guān)節(jié)炎的有效方法之一。
國外使用二甲基砜口服結(jié)果表明，二甲基砜與其他治療骨性關(guān)節(jié)炎藥物有協(xié)同作用，但其單次口服劑量較大，且需多次服用，有突釋現(xiàn)象，給患者增加了負(fù)擔(dān)，并且藥物穩(wěn)定性差，其分子量較小，在體內(nèi)的半衰期較短，容易被機(jī)體代謝排出，全身或局部應(yīng)用的效果均不能滿足臨床上治療要求，因此研究二甲基砜緩釋劑對長期維持損傷局部的有效藥物濃度具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種含二甲基砜生物降解微球及其制備方法，該生物降解微球解決了二甲基砜的突釋問題。本發(fā)明提供了一種含二甲基砜生物降解微球，由二甲基砜與生物可降解性高分子組成。優(yōu)選的，所述生物可降解性高分子選自聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物與聚己內(nèi)酯中的一種。本發(fā)明還提供了一種含二甲基砜生物降解微球的制備方法，包括以下步驟:a)將二甲基砜溶于第一有機(jī)溶劑，得第一混合溶液；將生物可降解性高分子溶于第二有機(jī)溶劑，得第二混合溶液；b)將所述第一混合溶液與所述第二混合溶液混合，得到第三混合溶液，然后通過膜壓入連續(xù)相中，得到0/W型乳狀液；c)將所述0/W型乳狀液攪拌，得到含二甲基砜生物降解微球。優(yōu)選的，所述膜為微孔膜。優(yōu)選的，所述連續(xù)相為包含表面活性劑與分散劑的水溶液。優(yōu)選的，所述攪拌的速度為300 700rpm/min,攪拌的時間為6 8h。優(yōu)選的，所述第一有機(jī)溶劑選自乙醇、苯、甲醇與丙酮中的一種。優(yōu)選的，所述第二有機(jī)溶劑選自氯仿、二氯甲烷與N，N-二甲基甲酰胺中的一種。優(yōu)選的，所 述第三混合溶液中生物可降解性高分子的濃度為I 7wt%。優(yōu)選的，所述第三混合溶液中二甲基砜的濃度為I 15wt%。本發(fā)明提供了一種含二甲基砜生物降解微球及其制備方法，該方法將二甲基砜溶于第一有機(jī)溶劑，得第一混合溶液；將生物可降解性高分子溶于第二有機(jī)溶劑，得第二混合溶液；將所述第一混合溶液與所述第二混合溶液混合，得到第三混合溶液，然后通過膜壓入連續(xù)相中，繼而進(jìn)行攪拌，得到含二甲基砜生物降解微球。與現(xiàn)有技術(shù)口服二甲基砜相比，本發(fā)明利用膜乳化技術(shù)將二甲基砜與可生物降解性分子制備成含二甲基砜生物降解微球，首先，本發(fā)明利用生物可降解性高分子在體內(nèi)可生物降解的作用，延長二甲基砜在體內(nèi)的作用時間，解決了二甲基砜的突釋現(xiàn)象，達(dá)到緩釋的效果，提高了藥物作用時間減少了服藥次數(shù)，同時也提高了二甲基砜的利用效果；其次，采用膜乳化技術(shù)，使含二甲基砜生物微球具有較好的均一性及載藥量。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的含二甲基砜生物降解微球的掃描電鏡照片；圖2為本發(fā)明實(shí)施例2制備得到的含二甲基砜生物降解微球的掃描電鏡照片；圖3為本發(fā)明實(shí)施例3制備得到的含二甲基砜生物降解微球的掃描電鏡照片；圖4為本發(fā)明實(shí)施例4制備得到的含二甲基砜生物降解微球的掃描電鏡照片；圖5為本發(fā)明實(shí)施例2制備得到的含二甲基砜生物降解微球的掃描電鏡照片；圖6為本發(fā)明實(shí)施例5制備得到的含二甲基砜生物降解微球的掃描電鏡照片；圖7為本發(fā)明實(shí)施例6制備得到的含二甲基砜生物降解微球的掃描電鏡照片；圖8為本發(fā)明實(shí)施例2制備得到的含二甲基砜生物降解微球的掃描電鏡照片；圖9為本發(fā)明實(shí)施例7制備得到的含二甲基砜生物降解微球的掃描電鏡照片；圖10為本發(fā)明實(shí)施例1、2與3制備得到的含二甲基砜生物降解微球的釋藥累積率對時間的曲線圖；圖11為本發(fā)明實(shí)施例4、2與5制備得到的含二甲基砜生物降解微球的釋藥累積率對時間的曲線圖；圖12為本發(fā)明實(shí)施例4制備得到的含二甲基砜生物降解微球的激光共聚焦照片;圖13為本發(fā)明實(shí)施例2制備得到的含二甲基砜生物降解微球的激光共聚焦照片;圖14為本發(fā)明實(shí)施例5制備得到的含二甲基砜生物降解微球的激光共聚焦照片;圖15為MC3T3-E1成骨細(xì)胞與本發(fā)明實(shí)施例1、2與3制備得到的含二甲基砜生物降解微球共培養(yǎng)得到的柱形圖；圖16為MC3T3-E1成骨細(xì)胞與本發(fā)明實(shí)施例4、2與5制備得到的含二甲基砜生物降解微球共培養(yǎng)得到的柱形圖；圖17為本發(fā)明實(shí)施例6、2與7制備得到的含二甲基砜生物降解微球的直徑對攪拌速率的柱形圖?！ぁ?br> 具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種含二甲基砜生物降解微球，由二甲基砜與生物可降解性高分子組成。其中，所述二甲基砜為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的可作為藥物的二甲基砜即可，并無特殊的限制。所述生物可降解性高分子為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的生物可降解性高分子即可，并無特殊的限制，本發(fā)明中所述生物可降解性高分子優(yōu)選為聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物或聚乙內(nèi)酯。生物可降解性高分子具有良好的生物相容性、可降解性及可吸收等特性，在環(huán)境保護(hù)、組織工程、骨折內(nèi)固定和藥物控釋等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。將生物可降解性高分子應(yīng)用于藥物載體，可利用其在體內(nèi)可生物降解的特性，延長藥物在體內(nèi)的作用時間，提高藥物療效，解決二甲基砜的突釋現(xiàn)象。本發(fā)明還提供了一種上述含二甲基砜生物降解微球的制備方法，包括以下步驟:a)將二甲基砜溶于第一有機(jī)溶劑，得第一混合溶液；將生物可降解性高分子溶于第二有機(jī)溶劑，得第二混合溶液山)將所述第一混合溶液與所述第二混合溶液混合，得到第三混合溶液，然后通過膜壓入連續(xù)相中，得到0/W型乳狀液；c)將所述0/W型乳狀液攪拌，得到含二甲基砜生物降解微球。將二甲基砜與生物降解性高分子分別溶于第一有機(jī)溶劑與第二有機(jī)溶劑中，得到第一混合溶液與第二混合溶液。其中，所述第一有機(jī)溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的可溶解二甲基砜的有機(jī)溶劑即可，并無特殊的限制，本發(fā)明中優(yōu)選為乙醇、苯、甲醇或丙酮，更優(yōu)選為丙酮；所述第二有機(jī)溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的可溶解生物可降解性高分子的有機(jī)溶劑即可，并無特殊的限制，本發(fā)明中優(yōu)選為氯仿、二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺，更優(yōu)選為丙酮。得到第一混合溶液與第二混合溶液之后，將兩者混合，得到第三混合溶液即為分散相。其中，得到的第三混合溶液中生物可降解性高分子的濃度為I 7wt%，優(yōu)選為3 5wt% ;第三混合溶液中二甲基砜的濃度為I 15wt%，優(yōu)選為5 10wt%。得到第三混合溶液后，將第三混合溶液通過膜壓入連續(xù)相中，得到0/W型乳狀液。其中，所述膜為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的用于膜乳化的膜即可，并無特殊的限制，本發(fā)明中優(yōu)選為微孔膜，更優(yōu)選為SPG膜。本發(fā)明中，所述連續(xù)相為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的膜乳化法中所用的連續(xù)相即可，并無特殊的限制，優(yōu)選為包含表面活性劑與分散劑的水溶液。其中，所述表面活性劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的表面活性劑即可，并無特殊的限制，優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉或脂肪酸山梨坦；所述連續(xù)相中表面活性劑的含量優(yōu)選為0.5 6g/L，更優(yōu)選為2 4g/L ;所述分散劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的分散劑即可，并無特殊的限制，優(yōu)選為聚乙烯醇或聚山梨酯；所述連續(xù)相中分散劑的含量優(yōu)選為0.5 4g/L，更優(yōu)選為I 2g/L。兩者皆可降低表面張力和表面自由能。本發(fā)明利用膜乳化技術(shù)將二甲基砜與可生物降解性分子制備成含二甲基砜生物降解微球，首先，本發(fā)明利用生物可降解性高分子在體內(nèi)可生物降解的作用，延長二甲基砜在體內(nèi)的作用時間，解決了二甲基砜的突釋現(xiàn)象，達(dá)到緩釋的效果，提高了藥物作用時間減少了服藥次數(shù)，同時也提高了二甲基砜的利用效果；其次，采用膜乳化技術(shù)，使含二甲基砜生物微球具有較好的均一性及載藥量。得到0/W型乳狀液后，將其恒溫攪拌，在此過程中隨著分散相中的有機(jī)溶劑不斷向連續(xù)相擴(kuò)散并逐漸揮發(fā)除去，得到含二甲基砜生物降解微球。其中，所述恒溫的溫度優(yōu)選為12°C 20°C，更優(yōu)選為12°C 15°C ;所述攪拌的速度優(yōu)選為300 700rpm/min，更優(yōu)選為400 600rpm/min ;所述攪拌的時間優(yōu)選為6 8h,更優(yōu)選為7 8h。在攪拌的過程中，有機(jī)相不斷向連續(xù)相擴(kuò)散并逐漸揮發(fā)除去，逐漸有固體析出，然后固化成含二甲基砜生物降解微球，最終形成含二甲基砜生物降解微球的懸浮液，本發(fā)明優(yōu)選將此懸浮液離心，洗滌，干燥后得到含二甲基砜生物降解微球。所述離心的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為6000 9000r/min，離心的時間優(yōu)選為20 40min ;為了防止二甲基砜升華，所述干燥優(yōu)選為冷凍干燥。為了進(jìn)一步說明本發(fā)明，以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明提供的一種含二甲基砜生物降解微球及其制備方法進(jìn)行詳細(xì)描述。以下實(shí)施例中所用的試劑均為市售。實(shí)施例11.1將聚乳酸與二甲基砜分別溶于氯仿和丙酮中，并充分?jǐn)嚢瑁缓髮烧吖不?，超聲均勻，得到分散相，分散相中聚乳酸的含量?wt%，二甲基砜的含量為4.5wt%。1.2將1.1中得到的分散相加入儲存器中，在外加壓力作用下，將分散相通過多孔玻璃膜(SPG微孔膜)壓入連續(xù)相中，從而制備出單分散的0/W型乳狀液，連續(xù)相為300ml含十二烷基硫酸鈉(SDS) 2g/L和聚乙烯醇lg/L ；SPG膜孔徑為0.6 μ m。1.3將1.2中得到的0/W型乳狀液迅速轉(zhuǎn)移至15°〇恒溫槽中，500印111/1^11攪拌711，隨著分散相溶劑氯仿及丙酮不斷向連續(xù)相擴(kuò)散并逐漸揮發(fā)除去，固化成含二甲基砜生物降解微球，最終形成含二甲基砜生物降解微球的懸浮液，8000r/min離心30min，去離子水洗滌3次，冷凍干燥后得到含二甲基砜生物降解微球。取少量1.3中得到的含二甲基砜生 物降解微球懸浮于蒸餾水中，用Iml移液器吸取少量滴在硅片上，使其均勻攤開，自然晾干，用雙面膠固定在樣品臺上，真空條件下噴金處理后，利用掃描電鏡對其進(jìn)行分析，得到其掃描電鏡照片，如圖1所示，其比例尺為100 μ m0將1.3中得到的含二甲基砜生物降解微球置于蒸餾水中進(jìn)行超聲分散，采用掃描電鏡進(jìn)行觀察，通過統(tǒng)計掃描電鏡照片上200個微球的粒徑通過公式計算得到含二甲基砜生物降解微球平均粒徑和粒徑分布，平均粒徑(Dn)公式:Dn= ( Σ (Ii) /n, Cli為微球直徑，η為統(tǒng)計的微球數(shù)量，分散性(CV)的計算公式為:CV=SD/Dn，SD為標(biāo)準(zhǔn)差。1.3中得到的含二甲基砜生物降解微球的Dn=4.78 μ m，CV=26.35%。稱量20.0mg1.3中得到的含二甲基砜生物降解微球，溶于IOml硝酸中，利用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(ICP-AES)進(jìn)行分析，測定其中硫元素的含量，通過二甲基砜中硫元素所占分子量計算二甲基砜含量，取3個平行樣。含二甲基砜生物降解微球的藥物載藥量及包埋率按以下公式計算:載藥量(DL)=(微球中二甲基砜的含量/微球的質(zhì)量)X 100% ；藥物包埋率(EE)=(載藥量*微球總質(zhì)量/理論微球中二甲基砜的質(zhì)量)X 100%，得到結(jié)果見表I。將10.0mgl.3中得到的含二甲基砜生物降解微球與1.5ml PBS緩沖液(pH=7.4)混合，置于37°C恒溫振蕩器以1 20r/min的速度進(jìn)行振搖孵育，模擬生理條件下的體外藥物釋放，于1211、2411、4811、7211、9611、12011、16811、19611、24411和 504h 離心分離，取出 1.0ml 上清液，同時補(bǔ)入1.0ml新鮮PBS緩沖液，利用ICP-AES測定上清液中二甲基砜濃度，樣品每個時間點(diǎn)設(shè)3個平行樣，結(jié)果取平均值，將釋藥累積率對時間做曲線，結(jié)果如圖10中-■-所示。利用四唑藍(lán)顯色反應(yīng)藥敏實(shí)驗(yàn)(MTT實(shí)驗(yàn))檢測在含1.3中制備的含二甲基砜生物降解微球培養(yǎng)條件下成長的MC3T3-E1成骨細(xì)胞，得到柱形圖，如圖15中a所示。實(shí)施例22.1將聚乳酸與二甲基砜分別溶于氯仿和丙酮中，并充分?jǐn)嚢?，然后將兩者共混，超聲均勻，得到分散相，分散相中聚乳酸的含量?wt%，二甲基砜的含量為4.5wt%。2.2將2.1中得到的分散相加入儲存器中，在外加壓力作用下，將分散相通過多孔玻璃膜(SPG微孔膜)壓入連續(xù)相中，從而制備出單分散的0/W型乳狀液，連續(xù)相為300ml含十二烷基硫酸鈉(SDS) 2g/L和聚乙烯醇lg/L ；SPG膜孔徑為5.1 μ m。2.3將2.2中得到的0/W型乳狀液迅速轉(zhuǎn)移至15°〇恒溫槽中，500印111/1^11攪拌711，隨著分散相溶劑氯仿及丙酮不斷向連續(xù)相擴(kuò)散并逐漸揮發(fā)除去，固化成含二甲基砜生物降解微球，最終形成含二甲基砜生物降解微球的懸浮液，8000r/min離心30min，去離子水洗滌3次，冷凍干燥后得到含二甲基砜生物降解微球。取少量2.3中得到的含二甲基砜生物降解微球懸浮于蒸餾水中，用Iml移液器吸取少量滴在硅片上，使其均勻攤開，自然晾干，用雙面膠固定在樣品臺上，真空條件下噴金處理后，利用掃描電鏡對其進(jìn)行分析，得到其掃描電鏡照片，如圖2、圖5與圖8所示，圖2比例尺為100 μ m,圖5的比例尺為20 μ m,圖8的比例尺為10 μ m。將2.3中得到的含二甲基砜生物降解微球置于蒸餾水中進(jìn)行超聲分散，采用掃描電鏡進(jìn)行觀察，通過統(tǒng)計掃描電鏡照片上200個微球的粒徑通過公式計算得到含二甲基砜生物降解微球平均粒徑和粒徑分布，平均粒徑(Dn)公式:Dn= ( Σ (Ii) /n, Cli為微球直徑，η為統(tǒng)計的微球數(shù)量，分散性(CV)的計算公式為:CV=SD/Dn，SD為標(biāo)準(zhǔn)差。2.3中得到的含二甲基砜生物降解微球的Dn=26.24 μ m，CV=8.65%。稱量20.0mg2.3中得到的含二甲基砜生物降解微球，溶于IOml硝酸中，利用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(ICP-AES)進(jìn)行分析，測定其中硫元素的含量，通過二甲基砜中硫元素所占分子量計算二甲基砜含量，取3個平行樣。計算含二甲基砜生物降解微球的藥物載藥量(DL)及包埋率(EE)，得到結(jié)果見表I。將10.0mg2.3中得到的含二甲基砜生物降解微球與1.5ml PBS緩沖液(pH=7.4)混合，置于37°C恒溫振蕩器以120r/min的速度進(jìn)行振搖孵育，模擬生理條件下的體外藥物釋放，于1211、2411、4811、7211、9611、12011、16811、19611、24411和 504h 離心分離，取出 1.0ml 上清液，同時補(bǔ)入1.0ml新鮮PBS緩沖液，利用ICP-AES測定上清液中二甲基砜濃度，樣品每個時間點(diǎn)設(shè)3個平行樣，結(jié)果取平均值，將釋藥累積率對時間做曲線，結(jié)果如圖10中-.-所示與圖11中-▲-所示。由圖10及圖11可知，制備的含二甲基砜生物降解微球到達(dá)平臺期所需的時間為7 10天，生物降解微球達(dá)到50%釋放率的釋藥時間在3天以上，因此可認(rèn)為達(dá)到了良好的緩釋效果，沒有明顯的突釋現(xiàn)象，其釋藥速率隨膜孔徑的降低和聚乳酸中二甲基砜質(zhì)量比的增高而加快，由于藥物釋放的機(jī)理是由藥物擴(kuò)散和載體材料的降解同時控制，釋藥速率可能是與微球尺寸、比表面積及內(nèi)部結(jié)構(gòu)有關(guān)，但在前10天主要是由疏水的聚乳酸介導(dǎo)的藥物擴(kuò)散控制起決定作用。按上述方法制備含少量異硫氰酸熒光素(FITC)的含二甲基砜生物降解微球，將微球置于蒸餾水中超聲分散，平鋪與載玻片上，室溫干燥后采用激光共聚焦顯微鏡觀察微球內(nèi)部結(jié)構(gòu)，得到激光共聚焦照片，如圖13所示。利用四唑藍(lán)顯色反應(yīng)藥敏實(shí)驗(yàn)(MTT實(shí)驗(yàn))檢測在含2.3中制備的含二甲基砜生物降解微球培養(yǎng)條件下成長的MC3T3-E1成骨細(xì)胞，得到柱形圖，如圖15中b所示及圖16中C1所示。實(shí)施例33.1將聚乳酸與二甲基砜分別溶于氯仿和丙酮中，并充分?jǐn)嚢?，然后將兩者共混，超聲均勻，得到分散相，分散相中聚乳酸的含量?wt%，二甲基砜的含量為4.5wt%。

3.2將3.1中得到的分散相加入儲存器中，在外加壓力作用下，將分散相通過多孔玻璃膜(SPG微孔膜)壓入連續(xù)相中，從而制備出單分散的0/W型乳狀液，連續(xù)相為300ml含十二烷基硫酸鈉(SDS) 2g/L和聚乙烯醇lg/L ；SPG膜孔徑為10.1 μ m。3.3將3.2中得到的0/W型乳狀液迅速轉(zhuǎn)移至15°〇恒溫槽中，500印111/1^11攪拌711，隨著分散相溶劑氯仿及丙酮不斷向連續(xù)相擴(kuò)散并逐漸揮發(fā)除去，固化成含二甲基砜生物降解微球，最終形成含二甲基砜生物降解微球的懸浮液，8000r/min離心30min，去離子水洗滌3次，冷凍干燥后得到含二甲基砜生物降解微球。取少量3.3中得到的含二甲基砜生物降解微球懸浮于蒸餾水中，用Iml移液器吸取少量滴在硅片上，使其均勻攤開，自然晾干，用雙面膠固定在樣品臺上，真空條件下噴金處理后，利用掃描電鏡對其進(jìn)行分析，得到其掃描電鏡照片，如圖3所示，其比例尺為100 μ m0將3.3中得到的含二甲基砜生物降解微球置于蒸餾水中進(jìn)行超聲分散，采用掃描電鏡進(jìn)行觀察，通過統(tǒng)計掃描電鏡照片上200個微球的粒徑通過公式計算得到含二甲基砜生物降解微球平均粒徑和粒徑分布，平均粒徑(Dn)公式:Dn= ( Σ d,) /n, Cli為微球直徑，η為統(tǒng)計的微球數(shù)量，分散性(CV)的計算公式為:CV=SD/Dn，SD為標(biāo)準(zhǔn)差。3.3中得到的含二甲基砜生物降解微球的Dn=35.18 μ m, CV=3.24%。
稱量20.0mg3.3中得到的含二甲基砜生物降解微球，溶于IOml硝酸中，利用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(ICP-AES)進(jìn)行分析，測定其中硫元素的含量，通過二甲基砜中硫元素所占分子量計算二甲基砜含量，取3個平行樣。計算含二甲基砜生物降解微球的藥物載藥量(DL)及包埋率(EE)，得到結(jié)果見表I。將10.0mg3.3中得到的含二甲基砜生物降解微球與1.5ml PBS緩沖液(ρΗ=7.4)混合，置于37°C恒溫振蕩器以120r/min的速度進(jìn)行振搖孵育，模擬生理條件下的體外藥物釋放，于1211、2411、4811、7211、9611、12011、16811、19611、24411和 504h 離心分離，取出 1.0ml 上清液，同時補(bǔ)入1.0ml新鮮PBS緩沖液，利用ICP-AES測定上清液中二甲基砜濃度，樣品每個時間點(diǎn)設(shè)3個平行樣，結(jié)果取平均值，將釋藥累積率對時間做曲線，結(jié)果如圖10中-▲-所示。利用四唑藍(lán)顯色反應(yīng)藥敏實(shí)驗(yàn)(MTT實(shí)驗(yàn))檢測在含3.3中制備的含二甲基砜生物降解微球培養(yǎng)條件下成長的MC3T3-E1成骨細(xì)胞，得到柱形圖，如圖15中c所示。由圖15可知，隨著培養(yǎng)時間的增長，各組的細(xì)胞個數(shù)逐漸增加，在含實(shí)施例2中膜孔徑為5.1 μ m制備得到的含二甲基砜生物降解微球的條件下培養(yǎng)的細(xì)胞增殖情況優(yōu)于其他兩組，培養(yǎng)I天時，a與b比有顯著性差異(P < 0.05)，與c相比有增殖趨勢，但沒有顯著性差異；在培養(yǎng)3天時，b與其他兩組相比有增殖趨勢，但沒有顯著性差異；當(dāng)培養(yǎng)7天時，b與其他兩組相比增殖趨勢更為明顯，并有顯著性差異(P < 0.05)。表I不同膜孔徑制備的含二甲基砜生物降解微球的藥物載藥量及包埋率
權(quán)利要求
1.一種含二甲基砜生物降解微球，其特征在于，由二甲基砜與生物可降解性高分子組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含二甲基砜生物降解微球，其特征在于，所述生物可降解性高分子選自聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物與聚己內(nèi)酯中的一種。
3.一種含二甲基砜生物降解微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: a)將二甲基砜溶于第一有機(jī)溶劑，得第一混合溶液；將生物可降解性高分子溶于第二有機(jī)溶劑，得第二混合溶液； b)將所述第一混合溶液與所述第二混合溶液混合，得到第三混合溶液，然后通過膜壓入連續(xù)相中，得到0/W型乳狀液； c)將所述0/W型乳狀液攪拌，得到含二甲基砜生物降解微球。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述膜為微孔膜。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述連續(xù)相為包含表面活性劑與分散劑的水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述攪拌的速度為300 700rpm/min,攪拌的時間為6 8h。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述第一有機(jī)溶劑選自乙醇、苯、甲醇與丙酮中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述第二有機(jī)溶劑選自氯仿、二氯甲烷與N，N- 二甲基甲酰胺中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述第三混合溶液中生物可降解性高分子的濃度為I 7wt%。
10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述第三混合溶液中二甲基砜的濃度為I 15wt%0
全文摘要
本發(fā)明提供了一種含二甲基砜生物降解微球及其制備方法，該方法將二甲基砜溶于第一有機(jī)溶劑，得第一混合溶液；將生物可降解性高分子溶于第二有機(jī)溶劑，得第二混合溶液；將所述第一混合溶液與所述第二混合溶液混合，然后通過膜壓入連續(xù)相中，繼而進(jìn)行攪拌，得到含二甲基砜生物降解微球。與現(xiàn)有技術(shù)口服二甲基砜相比，首先，本發(fā)明利用生物可降解性高分子在體內(nèi)可生物降解的作用，延長二甲基砜在體內(nèi)的作用時間，解決了二甲基砜的突釋現(xiàn)象，達(dá)到緩釋的效果，提高了藥物作用時間減少了服藥次數(shù)，同時也提高了二甲基砜的利用效果；其次，采用膜乳化技術(shù)，使含二甲基砜生物微球具有較好的均一性及載藥量。
文檔編號A61K47/34GK103191066SQ20131013634
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月18日
發(fā)明者章培標(biāo), 王鑫眾, 陳學(xué)思, 唐宇鋒 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所