專利名稱：一種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥方劑及其用途，具體地，涉及一種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑及其用途。
背景技術(shù)：
慢性腎臟病(Chronic kidney disease, CKD)是臨床上除急性腎炎和急性尿路感染(腎臟急性炎癥性疾病)外多種腎臟疾病的共同臨床病理過程，病程遷延，最終會(huì)發(fā)展為終末期腎臟病(End stage renal disease,ESRD) 0美 國腎臟病數(shù)據(jù)表明，終末期腎臟疾病的發(fā)病人數(shù)在不斷增加，從1998年至2002年由39.4人/百萬上升至98.3人/百萬。據(jù)此估計(jì)，未來10年該數(shù)據(jù)將以每年4.1%的上升。在我國，成年人群CKD總患病率已達(dá)10.8%。因此，如何對(duì)CKD進(jìn)行早期防治、延緩病情進(jìn)展，是各國腎臟病研究者面臨的重要課題。慢性腎功能衰竭是嚴(yán)重腎臟疾病的最終歸宿。據(jù)報(bào)道我國每年約有13萬人會(huì)發(fā)生慢性腎衰。雖然血透、腹透及腎移植術(shù)的開展為此提供了新途徑，有效延長了病人的生命，但由于存在費(fèi)用高、腎源不足及各種并發(fā)癥的問題，尚難完全普及，尋找非透析療法對(duì)此疾病的防治無疑十分關(guān)鍵。與此同時(shí)，馬兜鈴酸腎病是近年 來發(fā)現(xiàn)的主要以腎小管間質(zhì)性病變?yōu)橹鞯募膊。洳∏檫M(jìn)展迅速，預(yù)后較差，臨床上尚無有效的治療方法，目前多以糖皮質(zhì)激素治療為主，但是用藥適應(yīng)證及具體用藥方案還未有定論。由于含馬兜鈴酸成分的中草藥及其成藥在某些疾病的治療方面有其獨(dú)特的療效，還不可能將其完全限制使用。探討此疾病的發(fā)病機(jī)制及尋找有效的預(yù)防和治療措施是關(guān)鍵需要解決的問題。臨床資料顯示:目前我國CKD患者中IgA腎病(IgA nephropathy, IgAN)患者約占原發(fā)性腎小球疾病的30% -40%。積極尋找延緩或阻斷腎小球硬化發(fā)生發(fā)展過程對(duì)于CKD患者的治療是當(dāng)前腎臟病學(xué)者共同關(guān)注的話題。另外，雖然目前以葡萄球菌腸毒素B(Staphylococcal Enterotoxin B, SEB)或以SEB為主誘導(dǎo)的模型接近人類IgAN發(fā)病過程，反映其部分病理改變特點(diǎn)，但是該模型的不足之處在于腎小球硬化形成時(shí)間較長且難以控制。因此，尋找一種近似人類IgAN發(fā)病規(guī)律且腎小球硬化出現(xiàn)時(shí)間較早的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型也是IgAN研究過程中一需要迫切解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于防治慢性腎臟病的中藥復(fù)方制劑，針對(duì)目前慢性腎臟病治療的不足，提供新型慢性腎臟病的治療方法，該方法能夠更好的提高目前慢性腎臟病治療療效的研究現(xiàn)狀。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑，該中藥復(fù)方制劑的原料包含以下成分:肉蓯蓉15-30g、仙靈脾15-30g、桃仁10-15g、紅花10-15g、牡丹皮10-15g。肉蓯蓉:性味甘咸、溫性；歸腎、大腸經(jīng)，有補(bǔ)腎助陽，潤腸通便作用。仙靈脾:性味辛甘、溫性；歸腎、肝經(jīng)，有補(bǔ)腎壯陽，祛風(fēng)除濕作用。桃仁:性味苦甘；歸心、肝、大腸經(jīng)，有活血化瘀，潤腸通便，止咳平喘作用。紅花:性味苦、溫性；歸心、肝經(jīng)，有活血通經(jīng)，祛瘀止痛作用。牡丹皮:性味苦辛，微寒；歸心、肝、腎經(jīng)，有清熱涼血，活血祛瘀作用。肉蓯蓉、仙靈脾為君藥，協(xié)同作用，桃仁、紅花為臣藥，協(xié)同作用，丹皮為佐藥。該中藥復(fù)方實(shí)際也可根據(jù)需要添加其他輔料。上述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑，其中，所述的中藥復(fù)方制劑的原料由以下成分組成:肉蓯蓉30g、仙靈脾15g、桃仁15g、紅花15g、牡丹皮15g。上述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑，其中，所述的中藥復(fù)方制劑的用法為用水煎服。所述的用水煎服具體過程包含:水加入后，泡上30分鐘左右再煎。一般先用武火(大火)，煎沸后再用文火(小火)，保持沸的狀態(tài)，避免藥液外溢及過快熬干。煎藥時(shí)不宜頻頻打開鍋蓋，盡量防止氣味走失，減少揮發(fā)成分的外溢。一般武火5-10分鐘，文火煎20分種左右可以把藥液倒出來，然后加水 (和第一次相當(dāng)或少點(diǎn))再如上法煎一次，把此煎煮的藥液混合后分2-3次/日服用。本發(fā)明還提供了一種上述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑的用途，其中，所述的用途包含用于馬兜鈴酸腎病發(fā)病機(jī)制的研究，以及用于對(duì)相應(yīng)的馬兜鈴酸腎病的防治。上述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑的用途，其中，所述的用途還包含用于對(duì)IgAN腎小球硬化大鼠模型進(jìn)行干預(yù)和研究。本發(fā)明提供的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑具有以下優(yōu)點(diǎn): (I)CKD防治是目前腎臟病研究領(lǐng)域的難題，本發(fā)明在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)規(guī)范治療基礎(chǔ)上，積極
探索中醫(yī)藥在此領(lǐng)域的應(yīng)用。根據(jù)中醫(yī)“久病多虛”、“久病多瘀”理論，通過溫陽活血防治CKD，研究證實(shí)本發(fā)明具有顯著臨床療效；并在此基礎(chǔ)上展開實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步闡明其作用機(jī)制。因此，具備研究可行性及合理性。(2)本發(fā)明提供的溫陽活血方是經(jīng)過長期臨床治療的經(jīng)驗(yàn)方，相較于國內(nèi)其他單位所用中藥方劑，具有藥味少(由肉蓯蓉、仙靈脾、桃仁、紅花、牡丹皮五味藥組成)、用藥合理(溫涼并用、攻補(bǔ)兼施，使“補(bǔ)而不滯邪，瀉而不傷正”)、成本低、效果好等特點(diǎn)，因此易于推廣使用。目前我們已在臨床對(duì)其進(jìn)行推廣應(yīng)用，而國內(nèi)外同類研究的治療用藥，多局限于臨床或者實(shí)驗(yàn)研究階段。(3)在馬兜鈴酸腎病發(fā)病機(jī)制研究方面，國內(nèi)外同類研究多集中于馬兜鈴酸對(duì)腎小管上皮細(xì)胞的影響等方面，而馬兜鈴酸對(duì)腎血管尤其是腎間質(zhì)微血管的影響卻鮮有研究報(bào)道。因此，我們用關(guān)木通成功復(fù)制了大鼠慢性馬兜鈴酸腎病模型，通過施用本發(fā)明在該模型上研究慢性馬兜鈴酸腎病大鼠腎缺血損傷機(jī)制，對(duì)可能參與該過程的細(xì)胞因子Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF、BMP-7、Caspase-3和CD34進(jìn)行了探討，初步揭示了腎缺血損傷機(jī)制在慢性馬兜鈴酸腎病進(jìn)展中的作用。(4)本發(fā)明還通過復(fù)合感染聯(lián)合5/6腎切除方法構(gòu)建出的IgAN腎小球硬化動(dòng)物模型驗(yàn)證了溫陽活血方可延緩IgAN腎小球硬化模型的進(jìn)展。


圖1為實(shí)施例二的實(shí)驗(yàn)流程示意圖。圖2為實(shí)施例二的各組4周腎組織電鏡(X 5000)示意圖。圖3為實(shí)施例二的各組8周腎組織電鏡(X 5000)示意圖。圖4為實(shí)施例二的各組12周腎組織電鏡(X 5000)示意圖。圖5為實(shí)施例二的HIF-1 α表達(dá)的蛋白免疫印跡(Western blot)檢測結(jié)果示意圖。圖6為實(shí)施例二的TGF-β I表達(dá)的Western blot檢測結(jié)果示意圖。圖7為實(shí)施例二的MMP-9表達(dá)的Western blot檢測結(jié)果示意圖。圖8為實(shí)施例二的 ΜΡ-1表達(dá)的Western blot檢測結(jié)果示意圖。圖9為實(shí)施例三的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)流程示意圖。圖10-1和圖10-2為實(shí)施例三的體外實(shí)驗(yàn)流程示意圖。圖11為實(shí)施例三的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)各組大鼠腎小球電鏡結(jié)果示意圖(X4200)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖12為實(shí)施例三的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)各組大鼠腎小管電鏡結(jié)果示意圖(X 11500)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方 組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖13為實(shí)施例三的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)各組大鼠腎間質(zhì)電鏡結(jié)果示意圖(X 11500)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖14為實(shí)施例三的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)各組大鼠腎組織BMP-7表達(dá)情況免疫組化染色示意圖(X 250)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖15為實(shí)施例三的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)各組大鼠腎組織Caspase-3表達(dá)情況免疫組化染色示意圖(X 250)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖16為實(shí)施例三的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)各組大鼠腎組織⑶34表達(dá)情況免疫組化染色示意圖(X 250)，A正常組、B模型組、C溫陽活血方組、D科素亞組、E溫陽活血方+科素亞組。圖17為實(shí)施例三的體外實(shí)驗(yàn)倒置顯微鏡下觀察NRK-52E細(xì)胞正常形態(tài)示意圖。圖18為實(shí)施例三的體外實(shí)驗(yàn)各組透射電鏡觀察示意圖。圖19為實(shí)施例三的體外實(shí)驗(yàn)各組免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α -SM)的表達(dá)結(jié)果示意圖。圖20為實(shí)施例四的實(shí)驗(yàn)流程示意圖。圖21為實(shí)施例四的各組大鼠免疫熒光的表達(dá)結(jié)果示意圖(Χ400)，N假手術(shù)組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫(yī)結(jié)合組。圖22為實(shí)施例四的各組大鼠糖原染色(PAS)光鏡觀察示意圖(Χ400)，N假手術(shù)組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫(yī)結(jié)合組。圖23為實(shí)施例四的各組大鼠透射電鏡觀察示意圖(X 5000)，N假手術(shù)組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫(yī)結(jié)合組。圖24為實(shí)施例四的各組大鼠TGF-β I免疫組化結(jié)果示意圖(X 200)，N假手術(shù)組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫(yī)結(jié)合組。
圖25為實(shí)施例四的各組大鼠FN免疫組化結(jié)果示意圖(X 200)，N假手術(shù)組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫(yī)結(jié)合組。圖26為實(shí)施例四的各組大鼠a -SMA免疫組化結(jié)果示意圖(X 200)，N假手術(shù)組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫(yī)結(jié)合組。圖27為實(shí)施例四的各組大鼠I3DGF免疫組化結(jié)果示意圖(X 200 )，N假手術(shù)組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫(yī)結(jié)合組。圖28為實(shí)施例四的各組大鼠FGF-1免疫組化結(jié)果示意圖(X200)，N假手術(shù)組、M模型組、W溫陽活血方組、L科素亞組、W+L中西醫(yī)結(jié)合組。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步地說明。實(shí)施例一:用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑(溫陽活血方)改善CKD的臨床研究。通過采用溫陽活血方治療CKD2-3期陽虛血瘀型患者，觀察其對(duì)腎功能:包括血清肌酐(血清Scr)、血清胱抑素C (Cys-C)、尿素氮(BUN)、24小時(shí)蛋白定量、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)、腎小球?yàn)V過濾(eGFR)等，血常規(guī):包括血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)等，肝功能:包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)等，心電圖(EKG)等實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的影響，旨在進(jìn)一步了解溫陽活血方在治療CKD2-3期陽虛血瘀型患者的臨床療效和安全性，探求慢性腎臟病的優(yōu)化治療方案。選取213例CKD2-3期陽虛血瘀型患者，采用隨機(jī)對(duì)照方法將其分為溫陽活血方組(108例)和西醫(yī)一體化治療 組(105例)，其中西醫(yī)一體化治療組給予西醫(yī)基礎(chǔ)治療，溫陽活血方組在西醫(yī)基礎(chǔ)治療的基礎(chǔ)上加用溫陽活血方，療程為12周，連續(xù)觀察一個(gè)療程后檢測兩組治療前后腎功能(血清Scr、BUN、Cys-C)、24h尿蛋白定量，Ccr、eGFR,血常規(guī)(Hb、RBC、WBC、PLT)、肝功能(ALT、AST)、心電圖、中醫(yī)癥候積分及臨床癥狀積分的變化情況。觀察過程中定期隨訪，如實(shí)填寫臨床病例觀察表及癥狀積分表。根據(jù)以上數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及有效性評(píng)價(jià)。本實(shí)施例所選213例病例均為2010年I月至2012年7月就診于上海市普陀區(qū)中心醫(yī)院、上海市利群醫(yī)院、上海市第六人民醫(yī)院腎內(nèi)科門診及住院患者。一.診斷標(biāo)準(zhǔn)。西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn):2005年，國際腎臟病學(xué)會(huì)提高腎臟病整體預(yù)后工作組(KDIGO)明確提出了慢性腎臟病(CKD)的定義:(1)腎臟損傷(腎臟結(jié)構(gòu)或功能異常)>3個(gè)月，伴或不伴有腎小球?yàn)V過率(GFR)下降，腎臟病理學(xué)檢查異?；蚰I臟損傷(血、尿成分或影像學(xué)檢查異常)；(2)eGFR <60ml*min-l* (1.73m2)-1彡3個(gè)月，有或無腎臟損傷證據(jù)。慢性腎臟病的臨床分期見表I。表I 慢性腎臟病的分期標(biāo)準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑，其特征在于，該中藥復(fù)方制劑的原料包含以下成分: 肉蓯蓉15-30g、仙靈脾15-30g、桃仁10-15g、紅花10_15g以及牡丹皮10_15g。
2.權(quán)利要求1所述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑，其特征在于，所述的中藥復(fù)方制劑的原料由以下成分組成: 肉蓯蓉30g、仙靈脾15g、桃仁15g、紅花15g以及牡丹皮15g。
3.權(quán)利要求1所述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑，其特征在于，所述的中藥復(fù)方制劑的用法為用水煎服。
4.種如權(quán)利要求f 3中任意一項(xiàng)所述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑的用途，其特征在于，所述的用途包含用于馬兜鈴酸腎病發(fā)病機(jī)制的研究。
5.權(quán)利要求4所述的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑的用途，其特征在于，所述的用途 還包含用于對(duì)IgAN腎小球硬化大鼠模型進(jìn)行干預(yù)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑及用途，該中藥復(fù)方制劑的原料由以下成分組成肉蓯蓉15-30g、仙靈脾15-30g、桃仁10-15g、紅花10-15g以及牡丹皮10-15g。該中藥復(fù)方制劑的用法為用水煎服。本發(fā)明還提供該用于防治慢性腎臟病的中藥復(fù)方制劑的用途，即用于馬兜鈴酸腎病發(fā)病機(jī)制研究的用途，和用于對(duì)IgAN腎小球硬化大鼠模型進(jìn)行干預(yù)的用途。本發(fā)明提供的用于防治慢性腎臟病的溫陽活血中藥復(fù)方制劑，針對(duì)目前慢性腎臟病治療的不足，提供了一種新型慢性腎臟病的治療和研究方法，能夠更好的提高目前慢性腎臟病治療療效的研究現(xiàn)狀。
文檔編號(hào)A61K36/736GK103083434SQ20131005674
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2013年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月22日
發(fā)明者彭文, 何立群, 王云滿, 王浩, 王利, 付文成, 池楊峰 申請(qǐng)人:上海市普陀區(qū)中心醫(yī)院, 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院