專利名稱：內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物材料與納米醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體是指由磷脂為膜材及附加劑組成的封閉囊泡，具有類似生物膜的雙分子層結(jié)構(gòu)，可包封水溶性和脂溶性藥物于囊內(nèi)而成為一種新型的藥物載體。脂質(zhì)體的基本組分——磷脂，是生物體的固有成分，可在體內(nèi)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化而降解，無毒性及免疫原性。鑒于其具有提高藥物穩(wěn)定性，減少藥物用量，降低毒性，減輕免疫反應(yīng)，延緩釋放，降低體內(nèi)消化速度，改變藥物在體內(nèi)分布等優(yōu)點，脂質(zhì)體被認(rèn)為是目前最具發(fā)展前途的藥物載體之一，可廣泛用于腫瘤、感染性疾病、心血管疾病和皮膚病等的臨床治療。半導(dǎo)體量子點(如CdSe、CdS、InAs等)因其獨特的光學(xué)性質(zhì)在現(xiàn)代生物技術(shù)中的應(yīng)用呈現(xiàn)日益增長的趨勢，但其存在的缺陷亦十分明顯，如合成條件苛刻，成本較高，具有生物毒性和環(huán)境危害等，限制了在生命科學(xué)中的應(yīng)用。目前，碳源材料被大量合成，并作為高性能材料在許多領(lǐng)域展現(xiàn)出了應(yīng)用價值，尤其是類似于半導(dǎo)體的發(fā)光碳量子點，一問世，即以其良好的光學(xué)性質(zhì)、合成方便、原料豐富和毒性小等優(yōu)點，應(yīng)用于熒光標(biāo)記、成像、傳感等生物科學(xué)領(lǐng)域。通過對脂質(zhì)體磷脂雙分子層進(jìn)行功能聚合物(如pH及熱雙敏性嵌段共聚物)修飾，然后將無機(jī)納米顆粒(如納米金、氧化鐵、量子點等)負(fù)載進(jìn)入脂質(zhì)體的內(nèi)水相和雙分子層中，獲得一種多功能化的脂 質(zhì)體藥物載體。這種新型的脂質(zhì)體-納米顆粒的復(fù)合物系統(tǒng)，可用于光學(xué)、磁共振、表面等離子共振成像，活體細(xì)胞和組織的熒光標(biāo)記和示蹤等領(lǐng)域，展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景。近年來，相關(guān)工作者一直致力于開發(fā)多功能脂質(zhì)體藥物載體的研究，尤其是在脂質(zhì)體-納米顆粒復(fù)合物方面，陸續(xù)取得了一系列的研究進(jìn)展，相關(guān)研究成果已發(fā)表在國際權(quán)威期干1J上(例如；Al_Jamal ff. T. , Kostarelos K. Liposome-nanoparticlehybrids formultifunctional diagnostic and therapeutic application. Nanomedicine. 2007，2，85 ~ 98. ；Xie J.，Huang J.，Li X.，Sun S.，Chen X.1ron oxide nanoparticle platformforbiomedical applications. Curr. Med. Chem. 2009，16，1278 1294. ；Smith A. M.，NieS.Semiconductor nanocrystals -structure， properties, and band gap engineering.Acc. Chem. Res. 2009，43，190 200. ；Pan J. ,Wan D.，Gong J. PEGylated liposome coatedQDs/mesoporous silica core-shell nanoparticles for molecular imaging. Chem.Commun. 2011，47，3442 3444.)。截至目前，有關(guān)多功能脂質(zhì)體藥物載體的制備方法已有中國專利報道。例如，儲茂泉等采用薄膜分散法制成脂質(zhì)為膜，量子點為核的脂質(zhì)體，然后加入正硅酸乙酯，在脂質(zhì)體表面形成二氧化硅，制得脂質(zhì)體包埋量子點的二氧化硅微球(公開號CN101362066A)。賀蓉等將水溶性半導(dǎo)體量子點和5-氟尿嘧啶分散在乙醇脂質(zhì)體內(nèi)部，采用薄膜擠出器分別通過聚碳酸酯膜，制備了納米乙醇脂質(zhì)體(公開號CN101327189A)。常津等將聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球內(nèi)部包載量子點與抗癌藥物，外面包覆賴氨酸/殼聚糖/十八烷基季銨鹽/膽固醇制備而成的陽離子高分子脂質(zhì)體，制得一種核/殼結(jié)構(gòu)的載藥微球體系(公開號CN102525941A)。盡管以上文獻(xiàn)和專利中涉及了負(fù)載量子點的功能化脂質(zhì)體的制備方法，但某些關(guān)鍵的技術(shù)問題依然亟待解決，如制備工藝復(fù)雜，量子點的毒性，脂質(zhì)體的多功能，以及藥物釋放的可控性等。因此，發(fā)展一種制備簡單、成本低、多功能化的脂質(zhì)體，對于發(fā)展高質(zhì)量藥物載體的基礎(chǔ)研究及最終應(yīng)用都具有十分重要的意義。迄今為止，尚未見PH及熱雙敏性聚合物表面修飾的脂質(zhì)體，水熱合成內(nèi)水相負(fù)載碳量子點/納米四氧化三鐵復(fù)合顆粒，以及具有集熒光、磁性、PH及熱敏感性于一體的新型多功能脂質(zhì)體的相關(guān)中國專利報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種方法簡單，快速、成本低的內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的PH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)一種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的PH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟(I)溶解氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代乙醇酸形成均質(zhì)水溶液，在堿性條件和65°C下反應(yīng)至出現(xiàn)大量黑色微粒，即為納米四氧化三鐵；在超聲作用下逐滴加入聚乙烯亞胺，形成帶正電的磁性納米粒； (2)葡萄糖與聚乙二醇溶解在去離子水中，轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器反應(yīng)一段時間，制得水溶性碳量子點溶液；在超聲作用下，將碳量子點溶液逐滴加入步驟(I)得到的磁性納米粒體系中，通過靜電吸附形成磁性碳量子點復(fù)合微粒；(3)聚丙烯酸PA A、十二烷胺DDA與交聯(lián)劑I溶解在有機(jī)溶劑I中，在一定的溫度I發(fā)生羧-胺反應(yīng)生成PAA-DDA接枝聚合物，將此聚合物、N-異丙基丙烯酰胺NIPAM與交聯(lián)劑II溶解在有機(jī)溶劑II中，在一定的溫度II發(fā)生聚合反應(yīng)，生成PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD ；(4)將卵磷脂、膽固醇、PNAD以一定的質(zhì)量比溶解在氯仿/甲醇的混合液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中抽真空，使溶劑完全揮發(fā)后成膜，加入去離子水，在磁力攪拌下使膜脫落，制得脂質(zhì)體懸濁液；(5)將步驟(4)所得脂質(zhì)體懸濁液與步驟(2)所得復(fù)合微粒水溶液一起放入置于恒溫水浴的高壓反應(yīng)釜中，通入二氧化碳?xì)怏w，在一定的溫度和壓力下攪拌孵化；孵化結(jié)束后，冷卻至室溫，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w，即得目標(biāo)脂質(zhì)體溶液。步驟(I)中所述的氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代乙醇酸濃度比為1:1 : 2 5:1: 6，堿性條件為pH7 8，磁性納米粒的尺寸為10 30nm，聚乙烯亞胺的加入量為所述均質(zhì)水溶液質(zhì)量的O.1 O. 5%。步驟(2)中所述的葡糖糖與聚乙二醇的質(zhì)量體積比為I 5 5 25g/mL,所述的微波反應(yīng)器的微波功率為540W，反應(yīng)時間為I lOmin。步驟(3)中所述的PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD中PNIPAM、PAA、DDA單體摩爾比為94 :1 : 5 79 :1 : 20，交聯(lián)劑I為二環(huán)己基碳二亞胺DDC，有機(jī)溶劑I為N，N’-二甲基甲酰胺DMF，溫度I為20 90°C，交聯(lián)劑II為偶氮二異丁腈AIBN，有機(jī)溶劑II為1,4- 二氧六環(huán),溫度II為50 80°C。步驟⑷中所述的卵磷脂、膽固醇、PNAD的質(zhì)量比為1:1 :1 5 :1 : O. 1，氯仿/甲醇的體積比為1:1 3 : 1，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為35 45°C。步驟(5)中所述的復(fù)合微粒水溶液與脂質(zhì)體懸濁液的質(zhì)量比為1: 5 1: 10，水浴溫度為40 50°C，設(shè)定壓力為10 30MPa，攪拌孵化時間為20 50min。本發(fā)明的效果是選用低毒碳量子點和超順磁四氧化三鐵的復(fù)合微粒為功能納米粒，PH及熱雙敏性嵌段共聚物修飾的脂質(zhì)體為載體，在內(nèi)水相中載入功能納米粒，制得集熒光、磁性、PH及熱敏性于一體的新型多功能脂質(zhì)體。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法簡單，成本較低，制備的多功能脂質(zhì)體可發(fā)展為具有磁靶向，熒光成像或示蹤功能的診斷治療劑，PH及熱控釋藥物的載藥體系，對于發(fā)展其它類型的多功能藥物載體具有重要的參考價值。


圖1為多功能脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為多功能脂質(zhì)體的紫外-可見吸收光譜與熒光發(fā)射光譜；圖3為多功能脂質(zhì)體的磁滯回線；圖4為多功能脂質(zhì)體的尺寸隨溶液pH變化的關(guān)系曲線；圖5為多功能脂質(zhì)體的透射率隨溶液溫度變化的關(guān)系曲線。
具體實施方式
下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實施例1內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)如圖1所示，詳細(xì)的制備步驟如下在快速磁力攪拌下，將溶有Imol DDC的DMF溶液逐滴加入溶有O.1mol PAA與Imol DDA的IOmL DMF溶液中，形成混合溶液，然后在60°C下反應(yīng)24h，得到PAA羧基接枝率為20%的聚合物PAA-DDA。接下來，稱取90mgNIPAM、IOmg PAA-DDA和5mgAIBN溶于1，4- 二氧六環(huán)中，在70°C下反應(yīng)12h制得PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD。將O. 2mol氯化鐵、O.1mol硫酸亞鐵與O. 3mol硫代乙醇酸溶于IOOmL去離子水,調(diào)節(jié)混合液PH為7. 5，在磁力攪拌和65°C下反應(yīng)，制得大量黑色四氧化三鐵納米粒，滴加聚乙烯亞胺至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O.1 %。用5mL聚乙二醇PEG-200溶解Ig葡萄糖后轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器，于540W功率下反應(yīng)5min，制得碳量子點，然后將其滴加至磁粒子溶液中，在超聲作用下形成碳量子點表面吸附的磁粒子。稱取200mg卵磷脂、IOOmg膽固醇、50mg PNAD溶于50mL氯仿/甲醇(2/1)混合液，在41°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至成膜。在磁力攪拌下加入5mL水使膜脫落，形成懸濁液，加入2g磁性碳量子點溶液，置于40°C恒溫水浴的高壓釜中，通入二氧化碳，保持釜內(nèi)壓力為15MPa，孵化30min，最后冷卻至室溫，釋放釜內(nèi)氣體，得到內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體溶液。采用紫外-可見分光光度計和熒光分光光度計分別測定脂質(zhì)體的紫外-可見吸收光譜和熒光發(fā)射光譜(如圖2所示)，采用振動樣磁強(qiáng)計測定脂質(zhì)體的磁滯回線(如圖3所示)，采用動態(tài)光散射儀測定脂質(zhì)體的流體力學(xué)尺寸隨體系PH變化的關(guān)系曲線(如圖4所示)，采用紫外-可見分光光度計測定脂質(zhì)體的透射率隨體系溫度變化的關(guān)系曲線(如圖5所示)。實施例2在快速磁力攪拌下，將溶有Imol DDC的DMF溶液逐滴加入溶有O.1mol PAA與
1.5mol DDA的IOmLDMF溶液中，形成混合溶液，然后在70°C下反應(yīng)24h，得到PAA羧基接枝率為30%的聚合物PAA-DDA。接下來，稱取85mg NIPAM、15mgPAA_DDA和5mg AIBN溶于1，4- 二氧六環(huán)中，在70°C下反應(yīng)12h制得PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD。將O.1mol氯化鐵、O. 05mol硫酸亞鐵與O. 15mol硫代乙醇酸溶于IOOmL去離子水，調(diào)節(jié)混合液pH為7. 5，在磁力攪拌和65°C下反應(yīng)，制得大量黑色四氧化三鐵納米粒，滴加聚乙烯亞胺至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O.1 %。用10mLPEG-200溶解2g葡萄糖后轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器，于540W功率下反應(yīng)5min，制得碳量子點，然后將其滴加至磁粒子溶液中，在超聲作用下形成碳量子點表面吸附的磁粒子。稱取IOOmg卵磷脂、50mg膽固醇、25mg PNAD溶于25mL氯仿/甲醇(2/1)混合液，在41°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至成膜。在磁力攪拌下加入5mL水使膜脫落，形成懸濁液，加入Ig磁性碳量子點溶液，置于40°C恒溫水浴的高壓釜中，通入二氧化碳，保持釜內(nèi)壓力為20MPa，孵化30min，最后冷卻至室溫，釋放釜內(nèi)氣體，得到內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體溶液。脂質(zhì)體的表征方法同實施例1。實施例3在快速磁力攪拌下，將溶有Imol DDC的DMF溶液逐滴加入溶有O.1mol PAA與
2.Omol DDA的IOm LDMF溶液中，形成混合溶液，然后在70°C下反應(yīng)24h，得到PAA羧基接枝率為40%的聚合物PAA-DDA。接下來，稱取85mg NIPAMU5mg PAA-DDA和IOmgAIBN溶于I，4- 二氧六環(huán)中，在70°C下反應(yīng)12h制得PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD。將O.1mol氯化鐵、O. 05mol硫酸亞鐵與O. 15mol硫代乙醇酸溶于IOOmL去離子水，調(diào)節(jié)混合液pH為7. 5，在磁力攪拌和65°C下反應(yīng)，制得大量黑色四氧化三鐵納米粒，滴加聚乙烯亞胺至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O.1 %。用15mL PEG-200溶解3g葡萄糖后轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器，于540W功率下反應(yīng)5min，制得碳量子點，然后將其滴加至磁粒子溶液中，在超聲作用下形成碳量子點表面吸附的磁粒子。稱取IOOmg卵磷脂、50mg膽固醇、25mg PNAD溶于25mL氯仿/甲醇(2/1)混合液，在41°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至成膜。在磁力攪拌下加入5mL水使膜脫落，形成懸濁液，加入Ig磁性碳量子點溶液，置于40°C恒溫水浴的高壓釜中，通入二氧化碳，保持釜內(nèi)壓力為25MPa，孵化30min，最后冷卻至室溫，釋放釜內(nèi)氣體，得到內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體溶液。脂質(zhì)體的表征方法同實施例1。實施例4在快速磁力攪拌下，將溶有Imol DDC的DMF溶液逐滴加入溶有O.1mol PAA與
O.5mol DDA的IOmL DMF溶液中，形成混合溶液，然后在70°C下反應(yīng)24h，得到PAA羧基接枝率為10%的聚合物PAA-DDA。接下來，稱取80mg NIPAM、2OmgPAA-DDA和5mg AIBN溶于1，4- 二氧六環(huán)中，在70°C下反應(yīng)12h制得PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD。
將O. 3mol氯化鐵、O. 15mol硫酸亞鐵與O. 45mol硫代乙醇酸溶于IOOmL去離子水，調(diào)節(jié)混合液pH為7. 5，在磁力攪拌和65°C下反應(yīng)，制得大量黑色四氧化三鐵納米粒，滴加聚乙烯亞胺至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O.1 %。用20mL PEG-200溶解4g葡萄糖后轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器，于540W功率下反應(yīng)5min，制得碳量子點，然后將其滴加至磁粒子溶液中，在超聲作用下形成碳量子點表面吸附的磁粒子。稱取50mg卵磷脂、25mg膽固醇、15mg PNAD溶于20mL氯仿/甲醇(2/1)混合液，在41°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至成膜。在磁力攪拌下加入5mL水使膜脫落，形成懸濁液，加入O. 5g磁性碳量子點溶液，置于40°C恒溫水浴的高壓釜中，通入二氧化碳，保持釜內(nèi)壓力為30MPa，孵化30min，最后冷卻至室溫，釋放釜內(nèi)氣體，得到內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體溶液。脂質(zhì)體的表征方法同實施例1。實施例5一種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟

(I)溶解氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代乙醇酸形成均質(zhì)水溶液，其中氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代乙醇酸濃度比為1:1 : 2，調(diào)節(jié)水溶液的pH7，在65°C下反應(yīng)至出現(xiàn)大量黑色微粒，即為納米四氧化三鐵；在超聲作用下逐滴加入聚乙烯亞胺，聚乙烯亞胺的加入量為所述均質(zhì)水溶液質(zhì)量的O. 1%，形成帶正電的磁性納米粒；(2)葡萄糖與聚乙二醇按質(zhì)量體積比為1: 5g/mL溶解在去離子水中，轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器反應(yīng)lmin，微波反應(yīng)器的微波功率為540W，制得水溶性碳量子點溶液；在超聲作用下，將碳量子點溶液逐滴加入步驟(I)得到的磁性納米粒體系中，通過靜電吸附形成磁性碳量子點復(fù)合微粒；(3)聚丙烯酸PAA、十二烷胺DDA與DDC溶解在DMF中，在20°C發(fā)生羧-胺反應(yīng)生成PAA-DDA接枝聚合物，將此聚合物、N-異丙基丙烯酰胺NIPAM與AIBN溶解在1，4- 二氧六環(huán)中，在50°C發(fā)生聚合反應(yīng)，生成PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD，所得PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD中PNIPAM、PAA、DDA單體摩爾比為94 :1 : 5，(4)將卵磷脂、膽固醇、PNAD以質(zhì)量比為1:1 :1溶解在氯仿/甲醇的混合液(氯仿/甲醇的體積比為1:1)，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中抽真空，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為35°c，使溶劑完全揮發(fā)后成膜，加入去離子水，在磁力攪拌下使膜脫落，制得脂質(zhì)體懸濁液；(5)將步驟(4)所得脂質(zhì)體懸濁液與步驟(2)所得復(fù)合微粒水溶液按質(zhì)量比為I 5—起放入置于40°C的恒溫水浴的高壓反應(yīng)釜中，通入二氧化碳?xì)怏w，在40°C和IOMPa壓力下攪拌孵化20min;孵化結(jié)束后，冷卻至室溫，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w，即得目標(biāo)脂質(zhì)體溶液。實施例6一種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟(I)溶解氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代乙醇酸形成均質(zhì)水溶液，其中氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代乙醇酸濃度比為5 I 6，調(diào)節(jié)水溶液的pH8，在65°C下反應(yīng)至出現(xiàn)大量黑色微粒，即為納米四氧化三鐵；在超聲作用下逐滴加入聚乙烯亞胺，聚乙烯亞胺的加入量為所述均質(zhì)水溶液質(zhì)量的O. 5%，形成帶正電的磁性納米粒；
(2)葡萄糖與聚乙二醇按質(zhì)量體積比為5 25g/mL溶解在去離子水中，轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器反應(yīng)lOmin，微波反應(yīng)器的微波功率為540W，制得水溶性碳量子點溶液；在超聲作用下，將碳量子點溶液逐滴加入步驟(I)得到的磁性納米粒體系中，通過靜電吸附形成磁性碳量子點復(fù)合微粒；(3)聚丙烯酸PAA、十二烷胺DDA與DDC溶解在DMF中，在90°C發(fā)生羧-胺反應(yīng)生成PAA-DDA接枝聚合物，將此聚合物、N-異丙基丙烯酰胺NIPAM與AIBN溶解在1，4- 二氧六環(huán)中，在80°C發(fā)生聚合反應(yīng)，生成PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD，所得PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD中PNIPAM、PAA、DDA單體摩爾比為79 :1 : 20，(4)將卵磷脂、膽固醇、PNAD以質(zhì)量比為5 I O.1溶解在氯仿/甲醇的混合液(氯仿/甲醇的體積比為3 I)，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中抽真空，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為35 45°C，使溶劑完全揮發(fā)后成膜，加入去離子水，在磁力攪拌下使膜脫落，制得脂質(zhì)體懸濁液；(5)將步驟(4)所得脂質(zhì)體懸濁液與步驟(2)所得復(fù)合微粒水溶液按質(zhì)量比為1: 10—起放入置于50°C的恒溫水浴的高壓反應(yīng)釜中，通入二氧化碳?xì)怏w，在50°C和30MPa壓力下攪拌孵化50min ;孵化結(jié)束后，冷卻至室溫，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w，即得目標(biāo)脂質(zhì)體溶液。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明原 理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的PH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟 (1)溶解氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代こ醇酸形成均質(zhì)水溶液，在堿性條件和65°C下反應(yīng)至出現(xiàn)大量黑色微粒，即為納米四氧化三鉄；在超聲作用下逐滴加入聚こ烯亞胺，形成帶正電的磁性納米粒； (2)葡萄糖與聚こニ醇溶解在去離子水中，轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器反應(yīng)一段時間，制得水溶性碳量子點溶液；在超聲作用下，將碳量子點溶液逐滴加入步驟(I)得到的磁性納米粒體系中，通過靜電吸附形成磁性碳量子點復(fù)合微粒； (3)聚丙烯酸PAA、十二烷胺DDA與交聯(lián)劑I溶解在有機(jī)溶劑I中，在一定的溫度I發(fā)生羧-胺反應(yīng)生成PAA-DDA接枝聚合物，將此聚合物、N-異丙基丙烯酰胺NIPAM與交聯(lián)劑II溶解在有機(jī)溶劑II中，在一定的溫度II發(fā)生聚合反應(yīng)，生成PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD ； (4)將卵磷脂、膽固醇、PNAD以一定的質(zhì)量比溶解在氯仿/甲醇的混合液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中抽真空，使溶劑完全揮發(fā)后成膜，加入去離子水，在磁力攪拌下使膜脫落，制得脂質(zhì)體懸濁液； (5)將步驟(4)所得脂質(zhì)體懸濁液與步驟(2)所得復(fù)合微粒水溶液一起放入置于恒溫水浴的高壓反應(yīng)釜中，通入ニ氧化碳?xì)怏w，在一定的溫度和壓カ下攪拌孵化；孵化結(jié)束后，冷卻至室溫，緩慢釋放ニ氧化碳?xì)怏w，即得目標(biāo)脂質(zhì)體溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，步驟(I)中所述的氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代こ醇酸濃度比為1:1 : 2 5 :1 : 6，堿性條件為pH7 8，磁性納米粒的尺寸為10 30nm，聚こ烯亞胺的加入量為所述均質(zhì)水溶液質(zhì)量的0.1 0. 5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的PH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的葡糖糖與聚こニ醇的質(zhì)量體積比為I 5 5 25g/mL，所述的微波反應(yīng)器的微波功率為540W，反應(yīng)時間為I lOmin。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，步驟⑶中所述的PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD中PNIPAM、PAA、DDA單體摩爾比為94 :1 : 5 79 :1 : 20，交聯(lián)劑I為ニ環(huán)己基碳ニ亞胺DDC，有機(jī)溶劑I為N，N’ - ニ甲基甲酰胺DMF，溫度I為20 90°C，交聯(lián)劑II為偶氮ニ異丁腈AIBN,有機(jī)溶劑II為I，4- ニ氧六環(huán)，溫度II為50 80°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述的卵磷脂、膽固醇、PNAD的質(zhì)量比為1:1 :1 5:1: 0. 1，氯仿/甲醇的體積比為1:1 3 : 1，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為35 45°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，步驟(5)中所述的復(fù)合微粒水溶液與脂質(zhì)體懸濁液的質(zhì)量比為1: 5 1: 10，水浴溫度為40 50°C，設(shè)定壓カ為10 30MPa，攪拌孵化時間為20 50mino
全文摘要
本發(fā)明涉及內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，該方法具體包括以下步驟1)采用共沉淀法制備納米四氧化三鐵，并用聚乙烯亞胺表面改性，微波熱解法制備碳量子點并將其加入改性的磁粒子溶液中，形成磁性碳量子點；2)采用低壓成膜-高壓孵化的方法將磁性碳量子點載入脂質(zhì)體內(nèi)水相，pH及熱敏性三嵌段共聚物通過疏水作用在脂質(zhì)體表面，制得納米粒子和聚合物改性的脂質(zhì)體。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法簡單，成本較低，制備產(chǎn)物可發(fā)展為具有磁靶向，熒光成像或示蹤功能的診斷治療劑，pH及熱控釋藥物的載藥體系，對于發(fā)展其它類型的多功能藥物載體具有重要的參考價值。
文檔編號A61K49/00GK103041409SQ20131000987
公開日2013年4月17日 申請日期2013年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月10日
發(fā)明者萬錒俊, 桂日軍, 李慧麗, 金輝 申請人:上海交通大學(xué)