Peg化的c-肽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及PEG化的C-肽衍生物，其包含連接至N末端的至少一個PEG基團，其顯示改善的體內(nèi)藥代動力學(xué)和生物學(xué)活性。
【專利說明】PEG化的C-肽
[0001] 本申請要求2011年11月17日提交的美國臨時申請?zhí)?1/561，254的權(quán)益，其公 開內(nèi)容通過引用納入本文，就好像將其全文列于本文那樣。
[0002] 發(fā)明背景

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003] 本發(fā)明涉及C-肽的修飾形式，及其應(yīng)用方法。一方面，所述C-肽的修飾形式包含 PEG化的C-肽衍生物，所述衍生物包含連接至N末端的至少一個PEG基團，其顯示優(yōu)越的體 內(nèi)藥代動力學(xué)和生物學(xué)活性。
[0004] C-肽是胰島素原分子中A-鏈和B鏈區(qū)段之間的連接肽區(qū)段。在胰腺胰島β細胞 的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中經(jīng)過切割和加工之后，產(chǎn)生胰島素和C-肽。C-肽與胰島素以等摩爾的量從胰腺 胰島β細胞共同分泌進入門靜脈循環(huán)。除其對雙鏈胰島素結(jié)構(gòu)折疊的作用以外，C-肽的 其它生物學(xué)活性在其被發(fā)現(xiàn)之后多年未能解釋。
[0005] 1型糖尿病的一般特征是胰島素和C-肽缺陷，這歸因于胰腺胰島β細胞的自體免 疫損毀。因此，患者依賴外源性胰島素以維持生命。就該疾病的病理學(xué)而言，若干因素可能 具有重要性，例如，遺傳背景、環(huán)境因素以及臨時感染后的侵襲性自體免疫反應(yīng)（Akerblom HK等：Annual Medicine29(5) :383-385, (1997))。目前對胰島素需求型患者提供已與C-肽 分離的外源性胰島素，因此這些患者不接受外源性C-肽治療。相反，大多數(shù)2型糖尿病對 象初期仍內(nèi)源性產(chǎn)生胰島素和C-肽，但一般特征為骨骼肌、脂肪組織和肝臟等組織的胰島 素抵抗。
[0006] 許多1型糖尿病患者和其它胰島素需求型患者最終發(fā)展并患上種種糖尿病長期 并發(fā)癥，在許多情況下，這相較于2型糖尿病而言更加嚴重且廣泛。例如，涉及視網(wǎng)膜、腎臟 和神經(jīng)的微血管并發(fā)癥是1型糖尿病患者患病和致死的主要原因。
[0007] 越來越多的證據(jù)支持這一觀念：C-肽缺陷可能在胰島素需求型糖尿病患者 的長期并發(fā)癥的發(fā)展中起重要作用。此外，對于糖尿病動物模型和1型糖尿病患者 的體內(nèi)和體外研究表明，C-肽具有激素活性（Wahren J等：American Journal of Physiology278:E759_E768，（2000) ;Wahren J 等：收錄于 International Textbook of Diabetes Mellitus (《糖尿病國際教科書》）Ferranninni E, Zimmet P, De Fronzo RA, Keen H編·約翰韋利父子公司（John Wiley&Sons)，（2004)，第165-182頁）。因此，C-肽作為傳 統(tǒng)胰島素治療的補充使用可能會提供對控制胰島素需求型患者的長期并發(fā)癥的有效方法。
[0008] 迄今的研究表明，C-肽的治療活性涉及C-肽與G蛋白偶聯(lián)膜受體的結(jié)合，Ca2+依 賴性胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活，以及MP激酶復(fù)合體的磷酸化，這導(dǎo)致鈉/鉀ATP酶和內(nèi)皮 型一氧化氮合酶（eNOS)的活性增加 （Hills CE等：Clin Sci(Lond) 116:565-574, (2009))。 已知后面兩種酶系統(tǒng)在糖尿病中有缺，并且與糖尿病周圍神經(jīng)病變病理學(xué)有關(guān)。C-肽對 神經(jīng)傳導(dǎo)的正效應(yīng)作用的細胞機制是基于多種不同細胞類型（特別是內(nèi)皮細胞、成纖維 細胞和腎小管細胞）中所證明C-肽與細胞膜的結(jié)合（Rigler R等：Proc Natl Acad Sci USA96:13318-13323, (1999))。
[0009] 盡管采用C-肽具有治療并預(yù)防胰島素需求型糖尿病的長期并發(fā)癥的前景，生物 學(xué)半衰期短和每天要多次通過皮下（S.C. ;s.c.)注射或靜脈內(nèi)（I.V. ;i.v.)給予完成 C-肽用藥的要求妨礙了市場開發(fā)。
[0010] 在對1型糖尿病患者進行的單劑量C-肽藥代動力學(xué)研究中，重組人C-肽以 150nmol、600nmol、1800nmol的劑量皮下給予，并以150nmol的劑量靜脈給予并伴隨至少三 天的洗脫期。該研究得到如下檢測的藥代動力學(xué)參數(shù)：
[0011] 表A-不同C-肽劑量的藥代動力學(xué)參數(shù)（平均倌土SD) (η = 12)

【權(quán)利要求】
1. 一種給予有需要的患者PEG化C-肽的方法，所述方法包括給予所述患者足以產(chǎn)生 PEG化C-肽的C平均為約0· 44nM?約I2. 2nM的PEG化C-肽。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的Ctjs是約2. OnM?約 5· 9nM〇
3. 如權(quán)利要求1?2中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的C4/>是約 0. 34nM ?約 9. OnM。
4. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的CS/>是約I. 7nM?約 4· 9nM。
5. 如權(quán)利要求1?4中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的是約 0· 5nM ?約 14. 5nM。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的是約2. 3nM?約 6· 7nM。
7. 如權(quán)利要求1?6中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的是約 1. 8?約3. 3天。
8. 如權(quán)利要求1?7中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的半衰期是 約5. 0天?約11. 2天。
9. 如權(quán)利要求1?8中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的AUCt是 約3. InM ·天?約85nM ·天。
10. 如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的AUC,是約13. 8nM ·天? 約 41. 5nM ·天。
11. 如權(quán)利要求1?10中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的分布容 積是約5. 8L?約22L。
12. 如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的分布容積是約IOL? 約 15L。
13. 如權(quán)利要求1?12中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的清除率 是約0. 8L/天?約2. 2L/天。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的清除率是約I. IL/天? 約I. 6L/天。
15. 如權(quán)利要求1?14中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的波動度 是約36 %?約50%。
16. 如權(quán)利要求1?15中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽每7天給 予一次。
17. 如權(quán)利要求1?16中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽是 CBX129801。
18. 如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述CBX129801給予的量是每7天約0. 3 毫克?約3. 3毫克。
19. 如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述CBX129801給予的量是每7天約0. 3 毫克、約0. 8毫克、約I. 0毫克、約2. 4毫克，或約3. 3毫克。
20. -種治療或預(yù)防糖尿病的一種或多種長期并發(fā)癥的方法，所述方法包括給予患者 治療劑量的PEG化C-肽，所給予的PEG化C-肽足以產(chǎn)生約0. 44nM?約12. 2nM的PEG化 C-肽的C平均。
21. 如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的Cto是約2. OnM?約 5· 9nM。
22. 如權(quán)利要求20?21中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的C最小 是約0· 34nM?約9· OnM。
23. 如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的(?+是約I. 7nM?約 4· 9nM。
24. 如權(quán)利要求20?23中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的 是約0· 5nM?約14. 5nM。
25. 如權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的是約2. 3nM?約 6· 7nM。
26. 如權(quán)利要求20?25中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的 是約1. 8?約3. 3天。
27. 如權(quán)利要求20?26中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的半衰期 是約5. 0天?約11. 2天。
28. 如權(quán)利要求20?27中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的AUC, 是約3. InM ·天?約85nM ·天。
29. 如權(quán)利要求28所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的AUCt是約 13. 8nM ·天?約 41. 5nM ·天。
30. 如權(quán)利要求20?29中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的分布容 積是約5. 8L?約22L。
31. 如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的分布容積是約10?約 15L。
32. 如權(quán)利要求20?31中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的清除率 是約0.8?約2. 2L/天。
33. 如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的清除率是約I. 1?約 I. 6L/ 天。
34. 如權(quán)利要求20?33中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的波動度 是約36 %?約50%。
35. 如權(quán)利要求20?34中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽每7天給 予一次。
36. 如權(quán)利要求20?35中任一項所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽是 CBX129801。
37. 如權(quán)利要求36所述的方法，其特征在于，所述CBX129801給予的量是每7天約0. 3 毫克?約3. 3毫克。
38. 如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述CBX129801給予的量是每7天約0. 3 毫克、約0. 8毫克、約I. 0毫克、約2. 4毫克，或約3. 3毫克。
39. 如權(quán)利要求20?38中任一項所述的方法，其特征在于，所述糖尿病的長期并發(fā) 癥選自下組：周圍神經(jīng)病變、自主神經(jīng)病變、腎病、勃起功能障礙、女性性功能障礙和視網(wǎng)膜 病。
40. 如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，所述糖尿病的長期并發(fā)癥是周圍神經(jīng)病 變。
41. 如權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，治療導(dǎo)致神經(jīng)傳導(dǎo)速度相較于開始PEG化 C-肽給予之前的神經(jīng)傳導(dǎo)速度而言提高至少Im/秒。
42. 如權(quán)利要求41所述的方法，其特征在于，治療導(dǎo)致神經(jīng)傳導(dǎo)速度相較于開始PEG化 C-肽給予之前的神經(jīng)傳導(dǎo)速度而言提高至少2m/秒。
43. 如權(quán)利要求40所述的方法，其特征在于，采用PEG化C-肽的治療相較于未治療患 者而言防止神經(jīng)傳導(dǎo)速度下降至少Im/秒。
44. 如權(quán)利要求43所述的方法，其特征在于，采用PEG化C-肽的治療相較于未治療患 者而言防止神經(jīng)傳導(dǎo)速度下降至少2m/秒。
45. 如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，所述糖尿病的長期并發(fā)癥是腎病。
46. 如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，所述糖尿病的長期并發(fā)癥是勃起功能障 礙或女性性功能障礙。
47. 如權(quán)利要求20?46中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法包括配量和給予 胰島素。
48. 如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述方法還包括如下步驟：基于監(jiān)控給予 治療劑量的PEG化C-肽之后的患者的胰島素需求變化來調(diào)節(jié)給予胰島素的劑量、類型或頻 率，其中，所述調(diào)節(jié)后的胰島素劑量減少低血糖癥的風(fēng)險、發(fā)生或嚴重性，其中所述調(diào)節(jié)后 的胰島素劑量比開始PEG化的C-肽治療之前所述患者的胰島素劑量低至少10%。
49. 如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，所述調(diào)節(jié)后的胰島素劑量比開始PEG化的 C-肽治療之前所述患者的胰島素劑量低約10%?約35%。
50. -種治療或預(yù)防糖尿病的一種或多種長期并發(fā)癥的方法，所述方法包括給予患者 治療劑量的PEG化C-肽，其中給予等摩爾量的PEG化C-肽產(chǎn)生的AUC或C tjs至少2倍于 C-肽所得。
51. 如權(quán)利要求50所述的方法，其特征在于，給予所述等摩爾摩爾量的PEG化C-肽產(chǎn) 生的AUC或Cto至少100倍于C-肽所得。
52. -種治療或預(yù)防糖尿病的一種或多種長期并發(fā)癥的方法，所述方法包括給予患者 治療劑量的PEG化C-肽，其中所述PEG化C-肽的劑量低于等效的C-肽劑量的50%。
53. 如權(quán)利要求52所述的方法，其特征在于，所述PEG化C-肽的劑量低于等效的C-肽 劑量的1%。
【文檔編號】A61K38/22GK104220086SQ201280067389
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月17日
【發(fā)明者】J·瓦倫, S·貝萊克, J·卡拉維, M·馬佐尼, H·弗伊特, M·丹尼爾斯 申請人:塞比克斯股份公司