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載脂蛋白ciii(apociii)表達(dá)的調(diào)節(jié)的制作方法

文檔序號:1247146閱讀:663來源:國知局
載脂蛋白ciii(apociii)表達(dá)的調(diào)節(jié)的制作方法
【專利摘要】本文提供了用于在動(dòng)物中降低ApoCIII?mRNA和蛋白的表達(dá)的方法、化合物和組合物。本文還提供了用于在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率并減少血漿脂質(zhì)和血漿葡萄糖的方法、化合物和組合物。所述方法、化合物和組合物可用于治療、預(yù)防、延遲或改善心血管疾病或代謝性疾患或其癥狀中的任何一種或多種。
【專利說明】載脂蛋白Clll (APOCI I I)表達(dá)的調(diào)節(jié)
[0001]序列表
[0002]本申請與電子格式的序列表一同提交。序列表以于2012年4月27日創(chuàng)建的命名為B10L0130W0SEQ.TXT的文件來提供,其大小為8Kb。序列表的電子格式中的信息以其整體通過引用并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
[0003]本文提供了用于在動(dòng)物中降低載脂蛋白CIII (Ap0CIII)mRNA和蛋白的表達(dá)和升高HDL或HDL活性的方法、化合物和組合物。而且,本文提供了用于在動(dòng)物中減少ApoCIII相關(guān)疾病或病癥的方法、ApoCIII抑制劑化合物和ApoCIII抑制劑組合物。
[0004]背景
[0005]脂蛋白是由被兩親性蛋白、磷脂和膽固醇包被所圍繞的?;视秃湍懝檀减サ姆菢O性核心組成的球狀的、膠團(tuán)樣的顆粒?;诠δ芎臀锢硇再|(zhì)已將脂蛋白分類為5種寬泛的種類:乳糜微粒、極低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。乳糜微粒將飲食脂質(zhì)從腸轉(zhuǎn)運(yùn)到組織。VLDL、IDL和LDL均將三?;视秃湍懝檀紡母无D(zhuǎn)運(yùn)到組織。HDL將內(nèi)源性膽固醇從組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝。
[0006]脂蛋白顆粒經(jīng)歷連續(xù)的代謝過程并具有可變的性質(zhì)和組成。脂蛋白密度增加,但不增加顆粒直徑,因?yàn)槠渫鈱影晃锏拿芏刃∮谄鋬?nèi)核的密度。已知脂蛋白的蛋白成分為載脂蛋白。在多種人類脂蛋白中至少9種載脂蛋白是大量分布的。
[0007]載脂蛋白C-1II (ApoCIII)是HDL和富甘油三酯(TG)脂蛋白的成分。升高的ApoCIII與高甘油三酯血癥相關(guān)聯(lián)。因此,ApoCIII在高甘油三酯血癥中具有作用,是冠狀動(dòng)脈病的風(fēng)險(xiǎn)因子(Davidsson 等,J.Lipid Res.2005.46:1999-2006)。ApoCIII顯示了通過憑借脂蛋白脂肪酶的抑制和通過干擾脂蛋白與細(xì)胞表面葡糖胺聚糖基質(zhì)結(jié)合兩者來抑制脂解作用而對富甘油三酯脂蛋白進(jìn)行清除((Shachter, Curr.0pin.Lipidol.,2001, 12,297-304)。
[0008]在1984年三個(gè)研究組克隆了編碼人載脂蛋白C-1II (也稱作AP0C3、APOC-1II,ApoCIII 和 APO C-1II)的基因(Levy-Wilson 等,DNA, 1984,3,359-364 ;Protter等,DNA, 1984,3,449-456 ;Sharpe 等,Nucleic Acids Res.,1984,12,3917-3932)。編碼序列被3個(gè)內(nèi)含子所隔開(Protter等,DNA,1984,3,449-456)。人類ApoCIII基因位于載脂蛋白A-1基因的3’方向約2.6kb,且該兩種基因是會(huì)聚轉(zhuǎn)錄的(Karathanasis, Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.,1985,82,6374-6378)。還從具有異常高水平的血清載脂蛋白C-1II的患者中克隆了含Thr74到Ala74的突變的人載脂蛋白C-1II的變體。因?yàn)門hr74是O-糖基化的,因此Ala74突變體導(dǎo)致了缺少碳水化合物部分的血清ApoCIII的水平升高((Maeda等,J.Lipid Res.,1987,28,1405-1409)。后來鑒定了可調(diào)節(jié)Apo CIII表達(dá)的其它變體或多態(tài)型。多態(tài)型中的一些提高了 ApoCIII。升高的ApoCIII水平與升高的甘油三酯水平和諸如心血管疾病、代謝綜合征、肥胖和糖尿病之類的疾病相關(guān)聯(lián)(Chan等,Int J ClinPract, 2008, 62:799-809 ;0nat 等,Atherosclerosis, 2003, 168:81-89 ;Mendivil 等,Circulation, 2011,124:2065-2072)。
[0009]在基因的啟動(dòng)子區(qū)中已鑒定了 5種多態(tài)型:C(位于基因的第-641位)變成A、G(位于基因的第-630位)變成A、T (位于基因的第-625位)缺失、C (位于基因的第-482位)變成T以及T (位于基因的第-455位)變成C。這些多態(tài)型均與3’非翻譯區(qū)中的SstI多態(tài)型連鎖不平衡。SstI多態(tài)性位點(diǎn)使SI和S2等位基因區(qū)分開來,且S2等位基因已同升高的血漿甘油三酯水平相關(guān)聯(lián)(Dammerman 等,Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.,1993,90,4562-4566)。ApoCIII啟動(dòng)子被胰島素下調(diào),且該多態(tài)性位點(diǎn)消除了胰島素調(diào)控。因此由于失去胰島素調(diào)控導(dǎo)致的ApoCIII的可能的過表達(dá)可能是與S2等位基因相關(guān)聯(lián)的聞甘油二酷的發(fā)生的促進(jìn)因子(Li等,J.Clin.1nvest.,1995,96,2601-2605) J(基因的第-455位)變成C的多態(tài)型已與冠狀動(dòng)脈病的升高的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)(Olivieri等,J.Lipid Res.,2002, 43,1450-1457)。已與升高的ApoCIII和/或甘油三酯表達(dá)相關(guān)聯(lián)的人ApoCIII基因中的其它多態(tài)型包括:C (第1100位)變成T、C (第3175位)變成G、T (第3206位)變成G、C (第3238位)變成G 等。(Tilly 等,J.Lipid Res.,2003,44:430-436 ;Waterworth 等,Arterioscler ThrombVasc Biol, 2000,20:2663-2669 ;Petersen 等,N Engl J Med, 2010,362:1082-1089)。
[0010]除胰島素之外,已鑒定了 ApoCIII基因表達(dá)的其它調(diào)控子。核孤獨(dú)受體rev-erba的應(yīng)答元件已位于ApoCIII啟動(dòng)子區(qū)域中的基因的第-23至第-18位。Rev_erb α降低7 ApoCIII 啟動(dòng)子活性(Raspe 等,J.Lipid Res.,2002,43,2172-2179)?;虻?86 位至第-74位的ApoCIII啟動(dòng)子區(qū)域?yàn)閮蓚€(gè)核因子CIIIbl和CIIIB2所識別(Ogami等,J.Biol.Chem.,1991,266,9640-9646)。ApoCIII表達(dá)還被經(jīng)由類視黃醇X受體起作用的類視黃醇上調(diào),且類視黃醇X受體豐度的改變影響ApoCIII轉(zhuǎn)錄(Vu-Dac等,J.Clin.1nvest.,1998,102,625-632)。特異性蛋白I (Spl)和肝細(xì)胞核因子-4 (HNF-4)已顯示協(xié)同作用以經(jīng)由HNF-4結(jié)合位點(diǎn)反式激活載脂蛋白C-1II啟動(dòng)子(Kardassis等,Biochemistry, 2002, 41,1217-1228)。HNF-4還與 SMAD3-SMAD4 結(jié)合作用以反式激活 ApoCIII 啟動(dòng)子(Kardassis 等,J.Biol.Chem.,2000,275,41405-41414)。
[0011]轉(zhuǎn)基因和基因敲除小鼠已進(jìn)一步確定了 ApoCIII在脂解作用中的作用。轉(zhuǎn)基因小鼠中ApoCIII的過表達(dá)導(dǎo)致了高甘油三酯血癥和受損的VLDL-甘油三酯的清除(deSilva 等,J.Biol.Chem.,1994,269,2324-2335 ;Ito 等,Science, 1990,249,790-793)。完全缺乏ApoCIII蛋白的敲除小鼠與野生型小鼠相比較表現(xiàn)出顯著降低的血漿膽固醇和甘油三酯水平并受到保護(hù)以防患上餐后高甘油三酯血癥(Maeda等,J.Biol.Chem.,1994,269,23610-23616)。
[0012]已鑒定總血漿ApoCIII水平為血清甘油三酯的主要決定因素,并且流行病學(xué)研究已證明ApoCIII和具有ApoCIII成分的ApoB脂蛋白可獨(dú)立地預(yù)測冠心病(Sacks等,Circulation.2000.102:1886-1892 ;Lee等,Arterioscler Thromb Vasc Biol.2003.23:853-858)。研究還證明ApoCIII是富甘油三酯脂蛋白和其在包括內(nèi)臟肥胖癥、胰島素抗性和代謝綜合征的高甘油三酯血癥狀態(tài)中的殘留物的清除的關(guān)鍵決定因素(Mauger等,J.Lipid Res.2006.47:1212-1218 ;Chan 等,Clin.Chem.2002.278-283 ;0oi 等,Clin.Sc1.2008.114:611-624)。
[0013]高甘油三酯血癥是與心臟代謝疾病(Hegele等2009,Hum MolGenet, 18:4189-4194 ;Hegele 和 Pollex2009, Mol Cell Biochem, 326:35-43)以及最嚴(yán)重的形式的急性膜腺炎的發(fā)生(Toskesl990, Gastroenterol Clin North Am, 19:783-791 ;Gaudet 等 2010,Atherosclerosis Supplements, 11:55-60 ;Catapano 等 2011,Atherosclerosis, 217S:S1-S44 ;Tremblay 等 2011, J Clin Lipidol, 5:37-44)的風(fēng)險(xiǎn)升高相關(guān)聯(lián)的常見臨床特征。心臟代謝疾病的例子包括但不限于糖尿病、代謝綜合征/胰島素抗性和遺傳疾患,諸如家族性乳糜微粒血癥、家族性混合性高脂血癥和家族性高甘油三酯血癥。[0014]高甘油三酯血癥是富甘油三酯(TG)脂蛋白:VLDL和較低程度上的乳糜微粒(CM)的產(chǎn)生增加和/或分解代謝減少或延遲的結(jié)果。邊界高TG (150-199mg/dL)常見于一般群體中且是代謝綜合征/胰島素抗性狀態(tài)的常見成分。對于高TG (200-499mg/dL)也是相同的,不同的是隨著血漿TG水平升高,潛在的遺傳因素起著越來越重要的病因?qū)W作用。非常高的TG 500mg/dL)也最常與升高的CM水平相關(guān)聯(lián),且伴隨急性胰腺炎的風(fēng)險(xiǎn)升高。若TG超過880mg/dL OlOmmol),則胰腺炎的風(fēng)險(xiǎn)被認(rèn)為是臨床上顯著的,并且歐洲動(dòng)脈粥樣硬化學(xué)會(huì)/歐洲心臟病學(xué)學(xué)會(huì)(EAS/ESC) 2011指南規(guī)定:預(yù)防急性胰腺炎的行為是強(qiáng)制性的(Catapano 等 2011,Atherosclerosis, 217S: S1-S44)。根據(jù) EAS/ESC2011 指南,高甘油三酯血癥是近10%的所有胰腺炎病例的原因,且胰腺炎的發(fā)生會(huì)在TG水平介于440-880mg/dL之間時(shí)發(fā)生?;趤碜耘R床研究的證明升高的TG水平是動(dòng)脈粥樣硬化CVD的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素的證據(jù),來自國家膽固醇教育計(jì)劃成人治療組III(NCEP2002,Circulation,106:3143-42I)和美國糖尿病協(xié)會(huì)(ADA2008,Diabetes Care, 31:S12_S54.)兩者的指南為降低心血管風(fēng)險(xiǎn)推薦目標(biāo)TG水平小于150mg/dL。
[0015]ApoCIII基因敲除的小鼠具有正常的腸脂質(zhì)吸收和肝VLDL三?;视头置冢珡难獫{快速清除VLDL三?;视秃蚔LDL膽固醇酯可解釋所觀察到的血脂過少癥(Gerr itsen等,J.Lipid Res.2005.46:1466-1473 Jong 等,J.Lipid Res.2001.42:1578-1585)。具有ApoCIII的VLDL顆粒被認(rèn)為在鑒定高甘油三酯血癥中的冠心病的高風(fēng)險(xiǎn)中起著重要作用(Campos 等,J.Lipid Res.2001.42:1239-1249)。全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)Lancaster Amish人中天然存在的ApoCIII無效突變展示了有利的脂質(zhì)分布和明顯的心臟保護(hù),而無明顯的不利作用(Pollin等,Science.2008.322:1702-1705)。觀察到突變載體具有較低的空腹和餐后血清甘油三酯和LDL-膽固醇,和較高水平的HDL-膽固醇。
[0016]脂蛋白的HDL種類包含最致密和最小尺寸的異源和多分散性顆粒群(Havel 和 Kane.1n, The Metabolic&Molecular Bases of Inherited Disease.第 8版.McGraw-Hill, New York, 2001:2705 - 16)。HDL是脂質(zhì)(膽固醇、甘油三酯和磷脂)和蛋白(載脂蛋白和酶)的大分子復(fù)合物。HDL的表面主要含有載脂蛋白A、C和E。這些載脂蛋白中的一些功能在于將HDL從外周組織指引到肝臟。血清HDL水平可能受潛在的遺傳因素影響(Weissglas-Volkov 和 Pajukanta, J Lipid Res, 2010,51:2032-2057)。
[0017]流行病學(xué)研究已表明HDL的水平升高能預(yù)防心血管疾病或冠心病(Gordon等,Am.J.Med.1977.62:707-714)。HDL-膽固醇的這些作用與甘油三酯和LDL-膽固醇濃度無關(guān)。在臨床實(shí)踐中,低的血漿HDL-膽固醇更常與會(huì)升高血漿甘油三酯的其它疾患相關(guān)聯(lián),所述疾患例如有向心性肥胖、胰島素抗性、2型糖尿病和腎病(慢性腎衰竭或腎病蛋白尿)(Kashyap.Am.J.Cardiol.1998.82:42U_48U)。
[0018]目前,沒有已知的可影響ApoCIII功能的直接治療劑。已假定了貝特類藥物的降血脂作用通過其中過氧化物酶體增生物激活受體(PPAR)介導(dǎo)HNF-4從載脂蛋白C-1II啟動(dòng)子發(fā)生的位移從而導(dǎo)致載脂蛋白C-1II的轉(zhuǎn)錄抑制的機(jī)制而發(fā)生(Hertz等,J.Biol.Chem.,1995,270, 13470-13475)。抑制素種類的降血脂藥物還通過一種未知的機(jī)制來降低甘油三酯水平,這種機(jī)制導(dǎo)致脂蛋白脂肪酶mRNA增加,并導(dǎo)致載脂蛋白C-1II的血漿水平降低(Schoonjans等,F(xiàn)EBS Lett.,1999,452, 160-164)。因此,對能夠有效抑制載脂蛋白C-1II功能的另外的藥劑仍存在長期需求。
[0019]反義技術(shù)正作為一種降低某些基因產(chǎn)物的表達(dá)的有效方式而興起,且因此會(huì)被證明在有關(guān)調(diào)節(jié)ApoCIII的大量治療、診斷和研究應(yīng)用中是特別有用的。
[0020]我們先前在US20040208856 (美國專利 7,598,227)、US20060264395 (美國專利7,750,141)和W02004/093783中已公開了用于通過反義化合物抑制ApoCIII的組合物和方法。在本申請中,我們公開了如下意外結(jié)果=Ap0CIII的反義抑制導(dǎo)致了 HDL水平的升高和餐后甘油三酯水平的降低。該結(jié)果將是有用的,例如,可用于治療、預(yù)防、延遲、減少或改善任何一種或多種疾病,諸如心血管疾病(例如,冠心病或動(dòng)脈粥樣硬化疾病)。例如,已鑒定升高的餐后(非空腹)甘油三酯水平是心血管疾病的重要風(fēng)險(xiǎn)因素(Bansal等,JAMA, 2007, 298:309-16 ;Nordestgaard 等,JAMA, 2007, 298:299-308)。并且,在本申請中,ApoCIII表達(dá)的抑制意外 地導(dǎo)致了乳糜微粒清除率升高且因此在預(yù)防乳糜微粒血癥中是重要的(Chait等,1992,Adv Intern Med.1992,37:249-73),乳糜微粒血癥是由乳糜微粒甘油三酯的不適清除導(dǎo)致的血脂異常狀態(tài)。嚴(yán)重形式的乳糜微粒血癥會(huì)導(dǎo)致胰腺炎,它是一種會(huì)危及生命的病癥。通過抑制腸ApoCIII,將會(huì)降低對脂蛋白脂肪酶的抑制,且將會(huì)提高乳糜微粒甘油三酯清除率,從而預(yù)防胰腺炎。
[0021]發(fā)明概述
[0022]本文提供了通過向動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物而升高HDL水平的方法。
[0023]某些實(shí)施方案提供了在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善心血管疾病、疾患或病癥、延遲其發(fā)作或降低其風(fēng)險(xiǎn)的方法,其包括向該動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物。施用于該動(dòng)物的該化合物通過升高該動(dòng)物的HDL水平而預(yù)防、治療、改善心血管疾病、疾患或病癥、延遲其發(fā)作或降低其風(fēng)險(xiǎn)。
[0024]某些實(shí)施方案提供了在動(dòng)物中降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)的方法,其包括向該動(dòng)物施用治療有效量的包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物,其中所述修飾的寡核苷酸與ApoCIII核酸互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,ApoCIII核酸如SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:2中所示。在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含由12至30個(gè)連接的核苷組成,并具有包含ISIS304801 (SEQ ID NO:3)的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列的修飾的寡核苷酸。在另外的實(shí)施方案中,施用于動(dòng)物的化合物通過升高HDL水平降低了心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。
[0025]某些實(shí)施方案提供了在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,其包括向該動(dòng)物施用治療有效量的包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物,其中所述修飾的寡核苷酸與ApoCIII核酸互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,ApoCIII核酸如SEQ ID N0:1或SEQ ID NO: 2中所示。在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含由12至30個(gè)連接的核苷組成,并具有包含ISIS304801 (SEQ ID NO:3)的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列的修飾的寡核苷酸。在另外的實(shí)施方案中,施用于動(dòng)物的化合物在該動(dòng)物中通過升高該動(dòng)物的HDL水平來預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀。[0026]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用由ISIS304801 (SEQ ID N0:3)組成的化合物以升高該動(dòng)物的HDL水平而升高該動(dòng)物的HDL水平的方法。
[0027]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用由ISIS304801 (SEQ ID N0:3)組成的化合物以通過升高該動(dòng)物的HDL水平而在該動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀,從而在該動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法。
[0028]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用具有SEQ ID N0:3(ISIS304801)的序列的修飾的寡核苷酸而升高該動(dòng)物的HDL水平的方法,其中所述修飾的寡核苷酸包含:由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙區(qū)段;由5個(gè)連接的核苷組成的5’翼狀區(qū)段;由5個(gè)連接的核苷組成的3’翼狀區(qū)段;其中所述間隙區(qū)段緊鄰5’翼狀區(qū)段和3’翼狀區(qū)段定位并位于兩者之間,且其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-0_甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵,其中所述修飾的寡核苷酸升高該動(dòng)物的HDL水平。
[0029]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用具有ISIS304801(SEQ ID N0:3)的序列的修飾的寡核苷酸而在該動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,其中所述修飾的寡核苷酸包含:由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的間隙區(qū)段;由5個(gè)連接的核苷組成的5’翼狀區(qū)段;由5個(gè)連接的核苷組成的3’翼狀區(qū)段;其中所述間隙區(qū)段緊鄰5’翼狀區(qū)段和3’翼狀區(qū)段定位并位于兩者之間,且其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-0_甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’ -甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵,其中所述修飾的寡核苷酸通過升高動(dòng)物的HDL水平而預(yù)防、治療、改善或減少患有心血管疾病的動(dòng)物的至少一個(gè)癥狀。
[0030]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物而升高該動(dòng)物的HDL水平的方法,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQ IDNO:1或SEQ ID NO: 2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ),以升高該動(dòng)物的HDL水平。
[0031]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物而在該動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ),以通過升高該動(dòng)物的HDL水平而在該動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀。
[0032]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物而降低CETP水平的方法。在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含由12至30個(gè)連接的核苷組成,并具有與ApoCIII核酸互補(bǔ)的核堿基序列的修飾的寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中,核堿基序列包含ISIS304801 (SEQ ID NO:3)的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基。在某些實(shí)施方案中,所述化合物由ISIS304801 (SEQ ID N0:3)的核堿基組成。 [0033]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物而提高ΑροΑ1、Ρ0Ν1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率或HDL的方法。在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含由12至30個(gè)連接的核苷組成,并具有與ApoCIII核酸互補(bǔ)的核堿基序列的修飾的寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中,核堿基序列包含ISIS304801 (SEQ ID N0:3)的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基。在某些實(shí)施方案中,所述化合物由ISIS304801 (SEQ ID N0:3)的核堿基組成。[0034]某些實(shí)施方案提供了預(yù)防、延遲或改善胰腺炎的方法,包括:Ca)選擇患有胰腺炎或處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物,和(b)向該動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物,其中所述胰腺炎得到預(yù)防、延遲或改善。
[0035]某些實(shí)施方案提供了預(yù)防、延遲或改善胰腺炎的方法,包括:Ca)選擇患有胰腺炎或處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物,和(b)向該動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物,從而提高乳糜微粒清除率,其中所述胰腺炎得到預(yù)防、延遲或改善。
[0036]在某些實(shí)施方案中,動(dòng)物患有高甘油三酯血癥或處于高甘油三酯血癥風(fēng)險(xiǎn)中。在某些實(shí)施方案中,高甘油三酯血癥是Fredrickson II型、IV型或V型。在某些實(shí)施方案中,動(dòng)物具有導(dǎo)致高甘油三酯血癥的遺傳缺陷。在某些實(shí)施方案中,遺傳缺陷是雜合的LPL缺陷或ApoCIII多態(tài)型。在某些實(shí)施方案中,動(dòng)物具有> 500mg/dL的甘油三酯水平和雜合的LPL缺陷。[0037]在某些實(shí)施方案中,動(dòng)物具有100-200mg/dL、100_300mg/dL、100_400mg/dL、100-500mg/dL、200-500mg/dL、300-500mg/dL、400-500mg/dL、500-1000mg/dL、600-1000mg/dL、700-1000mg/dL、800-1000mg/dL、900-1000mg/dL、500-1500mg/dL、1000-1500mg/dL、100-2000mg/dL、150-2000mg/dL、200-2000mg/dL、300-2000mg/dL、400-2000mg/dL、500-2000mg/dL、600-2000mg/dL、700-2000mg/dL、800-2000mg/dL、900-2000mg/dL、1000-2000mg/dL、I100_2000mg/dL、1200_2000mg/dL、1300_2000mg/dL、1400_2000mg/dL 或1500-2000mg/dL之間的甘油三酯水平。
[0038]在某些實(shí)施方案中,升高的乳糜微粒清除率增強(qiáng)了餐后甘油三酯的清除和/或降低了餐后甘油三酯。
[0039]某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物通過升高HDL水平而用于預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的用途。
[0040]某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于在動(dòng)物中升高HDL水平的用途。
[0041]某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來在動(dòng)物中升高HDL水平的藥物的用途。
[0042]某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來改善TG與HDL的比率的藥物的用途。
[0043]發(fā)明詳述
[0044]應(yīng)理解的是,如要求保護(hù)的,上述一般說明和以下的詳細(xì)描述僅是示例性的和闡釋性的,而并非對本發(fā)明的限制。在本文中,除非另外明確指明,否則單數(shù)的使用包括復(fù)數(shù)。如本文所用,除非另外指明,否則“或”的使用意味著“和/或”。此外,術(shù)語“包括(including)”以及其它形式,例如“包括(includes)”和“包括(included)”的使用,是非限制性的。同樣,除非另外特別指明,否則術(shù)語諸如“要素”或“組分”涵蓋含一個(gè)單位的要素和組分,和含一個(gè)以上子單位的要素和組分。
[0045]本文所用的章節(jié)標(biāo)題僅用于組織的目的,并不應(yīng)被解釋為限制所描述的標(biāo)的。該申請中所引用的所有文獻(xiàn)或文獻(xiàn)的部分,包括但不限于專利、專利申請、文章、書籍和論文,關(guān)于本文所討論的文獻(xiàn)的部分及其整體通過引用清楚地并入本文。
[0046]定義
[0047]除非提供特定的定義,否則關(guān)于本文所描述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)和醫(yī)藥化學(xué)所用的命名及其程序和技術(shù)是本領(lǐng)域中熟知和常用的那些。標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算可用于化學(xué)合成和化學(xué)分析。當(dāng)被允許時(shí),所有專利、申請、公布的申請和其它出版物、GENBANK登錄號和通過諸如國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)的數(shù)據(jù)庫可獲得的相關(guān)的序列信息和貫穿本文的公開內(nèi)容中提及的其它數(shù)據(jù),關(guān)于本文所討論的文獻(xiàn)的部分及其整體通過引用并入。
[0048]除非另外指明,否則以下的術(shù)語具有下面的含義 :
[0049]“2’-O-甲氧乙基”(也為 2’_M0E、2’-O(CH2)2-OCH3 和 2’-0-(2-甲氧基乙基))指巖藻糖基環(huán)的2’位置的O-甲氧基-乙基修飾。2’ -O-甲氧基乙基修飾的糖是修飾的糖。
[0050]“2’ -O-甲氧乙基核苷酸”意為含2’ -O-甲氧乙基修飾的糖部分的核苷酸。
[0051]“3’靶位”指與特定的反義化合物的3’ -最末端核苷酸互補(bǔ)的靶核酸的核苷酸。
[0052]“5’靶位”指與特定的反義化合物的5’ -最末端核苷酸互補(bǔ)的靶核酸的核苷酸。
[0053]“5-甲基胞嘧啶”意為具有與5’位置連接的甲基修飾的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是修飾的核堿基。
[0054]“約”意為值的土 10%之內(nèi)。例如,若稱,“可將標(biāo)志物增加約50%”,則這意味著可將標(biāo)志物增加45%-55%之間。
[0055]“活性藥劑”意為藥物組合物中當(dāng)被施用于個(gè)體時(shí)提供治療益處的物質(zhì)。例如,在某些實(shí)施方案中,靶向ApoCIII的反義寡核苷酸是活性藥劑。
[0056]“活性靶區(qū)域”或“靶區(qū)域”意為一種或多種活性反義化合物所靶向的區(qū)域?!盎钚苑戳x化合物”意為降低靶核酸水平或蛋白水平的反義化合物。
[0057]“同時(shí)施用”指兩種劑以任何方式的共施用,其中二者的藥理作用在患者中同時(shí)顯現(xiàn)。同時(shí)施用不需要兩種劑在單一的藥物組合物中、在相同的劑型中或通過相同的施用路徑來施用。兩種劑的作用不必同時(shí)顯現(xiàn)。作用僅需要重疊一段時(shí)間且不必在時(shí)間上共同延長。
[0058]“施用”意為向個(gè)體提供藥劑,且包括但不限于通過醫(yī)學(xué)專業(yè)人員和自行施用來施用。
[0059]“藥劑”意為當(dāng)被施用于動(dòng)物時(shí)可提供治療益處的活性物質(zhì)?!暗谝凰巹币鉃楸景l(fā)明的治療化合物。例如,第一藥劑可以是靶向ApoCIII的反義寡核苷酸?!暗诙巹币鉃楸景l(fā)明的第二治療化合物(例如,靶向ApoCIII的第二反義寡核苷酸)和/或非ApoCIII治療化合物。
[0060]“改善”指相關(guān)的疾病、疾患或病癥的至少一種指征、病征或癥狀的減輕。指征的嚴(yán)重度可通過主觀的或客觀的測量來確定,這對于本領(lǐng)域中的技術(shù)人員是已知的。
[0061]“動(dòng)物”指人類或非人動(dòng)物,包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、貓、豬和非人靈長類,包括但不限于猴子和黑猩猩。
[0062]“反義活性”意為可歸因于反義化合物與其靶核酸的雜交的任何可檢測的或可測量的活性。在某些實(shí)施方案中,反義活性是靶核酸或由所述靶核酸編碼的蛋白的量或表達(dá)的降低。
[0063]“反義化合物”意為能夠經(jīng)歷通過氫鍵合與靶核酸雜交的低聚化合物。如本文所用,術(shù)語“反義化合物”涵蓋本文所描述的化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物。
[0064]“反義抑制”意為與在不存在反義化合物的情況下的靶核酸水平或靶蛋白水平相比較,在存在與靶核酸互補(bǔ)的反義化合物的情況下靶核酸水平或靶蛋白水平的降低。[0065]“反義寡核苷酸”意為具有允許與靶核酸的對應(yīng)區(qū)域或片段雜交的核堿基序列的單鏈寡核苷酸。如本文所用,術(shù)語“反義寡核苷酸”涵蓋本文所描述的化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物。
[0066]“ApoCIII”意為編碼ApoCIII的任何核酸或蛋白序列。例如,在某些實(shí)施方案中,ApoCIII包括編碼ApoCIII的DNA序列、從編碼ApoCIII的DNA轉(zhuǎn)錄的RNA序列(包括含內(nèi)含子和外顯子的基因組DNA)、編碼ApoCIII的mRNA序列、或編碼ApoCIII的肽序列。
[0067]“ApoCIII mRNA” 意為編碼 ApoCIII 蛋白的 mRNA。
[0068]“ApoCIII蛋白”意為編碼ApoCIII的任何蛋白序列。
[0069]“動(dòng)脈粥樣硬化”意為影響大型和中型大小的動(dòng)脈的動(dòng)脈硬化,并以存在脂肪沉積為特征。脂肪沉積被稱作“動(dòng)脈粥樣化”或“斑”,其主要由膽固醇和其它脂肪、鈣和疤痕組織組成,并損害動(dòng)脈的里層。
[0070]“雙環(huán)糖”意為由兩個(gè)非偕位環(huán)原子的橋連所修飾的巖藻糖基環(huán)。雙環(huán)糖是修飾的糖。
[0071]“雙環(huán)核酸”或“BNA”指核苷或核苷酸,其中核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括連接呋喃糖環(huán)上的兩個(gè)碳原子的橋,從而形成雙環(huán)系統(tǒng)。
[0072]“帽子結(jié)構(gòu)”或“末端帽子部分”意為已在反義化合物的任一末端被摻入的化學(xué)修飾。
[0073]“心血管疾病”或“心血管疾患”指與心臟、血管或循環(huán)相關(guān)的病癥的組。心血管疾病的例子包括但不限于動(dòng)脈瘤、心絞痛、心律失常、動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管疾病(中風(fēng))、冠心病、聞血壓、血脂異常、聞脂血癥、聞甘油二酷血癥和聞膽固醇血癥。
[0074]“化學(xué)上不同的區(qū)域”指以某些方式在化學(xué)上不同于相同的反義化合物的另一區(qū)域的反義化合物的區(qū)域。例如,具有2’ -O-甲氧基乙基核苷酸的區(qū)域在化學(xué)上不同于具有無2’ -O-甲氧基乙基修飾的核苷酸的區(qū)域。
[0075]“嵌合反義化合物”意為具有至少兩個(gè)化學(xué)上不同的區(qū)域的反義化合物。
[0076]“膽固醇”是發(fā)現(xiàn)于所有動(dòng)物組織的細(xì)胞膜中的固醇分子。膽固醇必定通過脂蛋白在動(dòng)物血漿中轉(zhuǎn)運(yùn),所述脂蛋白包括極低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)?!把獫{膽固醇”指血漿或血清中存在的酯化的和/或非酯化的膽固醇的所有脂蛋白(VDL、IDL、LDL、HDL)的總和。
[0077]“膽固醇吸收抑制劑”意為抑制從飲食中獲得的外源性膽固醇的吸收的劑。
[0078]“共施用”意為兩種或多種藥劑對個(gè)體的施用。兩種或多種藥劑可以在單一的藥物組合物中,或可以在分離的藥物組合物中。兩種或多種藥劑中每一種可通過相同的或不同的施用路徑來施用。共施用涵蓋并行施用或相繼施用。
[0079]“互補(bǔ)性”意為第一核酸和第二核酸的核堿基之間配對的能力。在某些實(shí)施方案中,第一和第二核酸之間的互補(bǔ)新可在兩個(gè)DNA鏈之間、在兩個(gè)RNA鏈之間或在DNA與RNA鏈之間。在某些實(shí)施方案中,一個(gè)鏈上的核堿基中的一些與另一鏈上的互補(bǔ)的氫鍵合堿基匹配。在某些實(shí)施方案中,一個(gè)鏈上的全部核堿基與另一鏈上的互補(bǔ)的氫鍵合堿基匹配。在某些實(shí)施方案中,第一核酸是反義化合物且第二核酸是靶核酸。在某些這樣的實(shí)施方案中,反義寡核苷酸是第一核酸且靶核酸是第二核酸。
[0080]“連續(xù)核堿基”意為彼此緊鄰的核堿基。[0081]“受限的乙基”或“cET”指具有呋喃糖基糖的雙環(huán)核苷,其包含介于4’和2’碳原子之間的甲基(亞甲氧基)(4’ -CH(CH3)-0-2’)橋連基。
[0082]“交叉反應(yīng)性”意為靶向一個(gè)核酸序列的寡聚化合物可與不同的核酸序列雜交。例如,在一些情況下靶向人ApoCIII的反義寡核苷酸可與鼠類ApoCIII交叉反應(yīng)。寡聚化合物是否與除其指定的靶標(biāo)之外的核酸序列交叉反應(yīng)取決于該化合物與非靶標(biāo)核酸序列具有的互補(bǔ)性程度。寡聚化合物和非靶標(biāo)核酸之間的互補(bǔ)性越高,寡聚化合物越可能將會(huì)與核酸交叉反應(yīng)。
[0083]“治愈”意為恢復(fù)健康的方法或?qū)膊〉奶幏街委煛?br> [0084]“冠心病(CHD)”意為向心臟供給血液和氧的小血管變狹窄,這常為動(dòng)脈粥樣硬化的結(jié)果。
[0085]“脫氧核苷酸”意為在核苷酸的糖部分的2’位置處具有氫的核苷酸。脫氧核苷酸可被多種取代基中的任一修飾。
[0086]“糖尿病(diabetes mellitus)”或“糖尿病(diabetes)”是以由于不足的胰島素水平或降低的胰島素敏感性導(dǎo)致的無序的代謝和異常高的血糖(高血糖)為特征的綜合征。特征性癥狀為由于高血糖水平導(dǎo)致的過量的尿產(chǎn)生(多尿癥)、試圖補(bǔ)償增加的排尿的過度口渴和增加的流體攝取(煩渴)、由于高血糖對眼睛光學(xué)的影響導(dǎo)致的視力模糊、原因不明的體重減輕和嗜睡癥。
[0087]“糖尿病性血脂異?!被颉鞍檠惓5?型糖尿病”意為以2型糖尿病、降低的HDL-C、升高的甘油三酯和 升高的小的、致密的LDL顆粒為特征的病癥。
[0088]“稀釋劑”意為組合物中無藥理學(xué)活性,但是是制藥必需的或需要的成分。例如,注射的組合物中的稀釋劑可以是液體,例如,鹽溶液。
[0089]“血脂異?!敝钢|(zhì)和/或脂蛋白代謝的疾患,包括脂質(zhì)和/或脂蛋白生產(chǎn)過?;蛉狈ΑQ惓?杀憩F(xiàn)為脂質(zhì)諸如乳糜微粒、膽固醇和甘油三酯以及脂蛋白諸如低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的升高。血脂異常的例子是乳糜微粒血癥。
[0090]“劑量單位”意為提供藥劑的形式,例如,丸劑、片劑或本領(lǐng)域中已知的其它劑量單位。在某些實(shí)施方案中,劑量單位是包含凍干的反義寡核苷酸的小瓶。在某些實(shí)施方案中,劑量單位是包含重新配成的反義寡核苷酸的小瓶。
[0091]“劑量”意為在單次施用中或在特定的時(shí)間段中提供的藥劑的特定的量。在某些實(shí)施方案中,劑量可在一個(gè)、兩個(gè)或更多個(gè)大丸劑、片劑或注射劑中施用。例如,在需要皮下施用的某些實(shí)施方案中,需要的劑量需要并非單次注射所容易容納的量,因此,可使用兩次或更多次注射來實(shí)現(xiàn)需要的量。在某些實(shí)施方案中,藥劑通過延長的時(shí)間段內(nèi)的輸注或連續(xù)地輸注來施用。劑量可表示為每小時(shí)、每天、每周或每月藥劑的量。劑量還可以mg/kg或g/kg表不。
[0092]“有效量”或“治療有效量”意為在需要藥劑的個(gè)體中足以實(shí)現(xiàn)需要的生理結(jié)果的活性藥劑的量。視待治療的個(gè)體的健康和身體狀況、待治療的個(gè)體的分類群、組合物的配制、個(gè)體醫(yī)療條件的評估和其它相關(guān)因素而定,有效量在個(gè)體之間可有所不同。
[0093]“Fredrickson”系統(tǒng)用于將血脂異常的原發(fā)性(遺傳)原因分類為數(shù)個(gè)亞組或類型。可接受利用本文所公開的化合物的治療的血脂異常類型包括但不限于Fredrickson II型、IV型和V型。[0094]“Fredrickson I型”以數(shù)種形式存在:1a型是由于LPL的缺陷或改變的apoC-1I導(dǎo)致的脂蛋白脂肪酶缺陷;Ib型是家族性載脂蛋白CII缺陷,它是一種由于脂蛋白脂肪酶活化子的缺失導(dǎo)致的病癥;和IC型是由于脂蛋白脂肪酶的循環(huán)抑制劑導(dǎo)致的乳糜微粒血癥。I型是?,F(xiàn)于兒童的罕見的疾患。其以乳糜微粒的劇烈升高和極度升高的TG水平(常會(huì)達(dá)到遠(yuǎn)超過lOOOmg/dL且不是偶爾升高至10,OOOmg/dL或更高)為特征,伴隨腹痛、復(fù)發(fā)性急性胰腺炎、暴發(fā)性皮膚黃瘤和肝脾腫大的發(fā)作?;颊吆币姷仫@現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化,可能是因?yàn)槠溲\(zhòng)脂蛋白顆粒太大而不能進(jìn)入動(dòng)脈內(nèi)膜(Nordestgaard等,J LipidRes, 1988, 29:1491-1500 ;Nordestgaard 等,Arteriosclerosis, 1988,8:421-428)。I 型通常由于LPL基因的突變或基因輔因子apoCII的突變而引起,導(dǎo)致了受累個(gè)體不能產(chǎn)生功能上有活性的LPL?;颊邔@些突變來說是純合的,或是復(fù)合雜合的。一般群體中患病率為約百萬分之一,且由于建立者效應(yīng)而在南非和東部魁北克要高得多。患者對降低TG的藥物反應(yīng)極小或根本沒反應(yīng)(Tremblay 等,J Clin Lipidol, 2011, 5:37-44 ;Brisson等,Pharmacogenet Genom, 2010, 20:742-747)且因此使用20克/天或更低的飲食脂肪限制來控制該罕見疾患的癥狀。
[0095]“Fredrickson II型”是原發(fā)性高脂血癥最常見的形式。其進(jìn)一步分類為IIa型和IIb型,主要取決于是否除LDL膽固醇(LDL-C)外存在VLDL的升高。IIa型(家族性高膽固醇血癥)可以是散發(fā)性的(由于飲食因素)、多基因性的、或由于19號染色體上的LDL受體基因的突變(群體的0.2%)或載脂蛋白B (apoB)基因的突變(0.2%)而導(dǎo)致的真正家族性的。家族性形式以腱黃瘤、黃斑瘤和早熟的心血管疾病為特征。該病的發(fā)生率對于雜合子為約500分之一,且對于純合子為約1,000, 000分之一。IIb型(也稱作家族性混合性高脂蛋白血癥)是混合性高脂血癥(高膽固醇和TG水平),是由于LDL-C和VLDL升高而導(dǎo)致。高VLDL水平是由于包括TG、乙酰CoA的底物的過量產(chǎn)生和B-100合成的增加而導(dǎo)致。其也可能是由于LDL清除率的降低而導(dǎo)致。群體中的患病率為約10%。
[0096]“Fredrickson III型”(也稱作異常β脂蛋白血癥)是殘留物清除病(remnantremoval disease)或?qū)?β 病(Fern 等,J Clin Pathol, 2008,61:1174-118)。其由于富膽固醇的VLDL (β-VLDL)而導(dǎo)致。通常,患有該病癥的患者由于乳糜微粒和VLDL殘留物(例如,IDL)的清除受損而具有升高的血漿膽固醇和TG水平。該清除受損是由于載脂蛋白E (apoE)的缺陷而導(dǎo)致。殘留物上所含的功能正常的apoE將能夠與LDL受體結(jié)合并從循環(huán)中去除。受累個(gè)體體內(nèi)的殘留物累積會(huì)導(dǎo)致黃瘤癥和早熟的冠狀血管病和/或外周血管病。III型的最常見的原因是apoE E2/E2基因型的存在。已評估其患病率為約10,000分之一 O
[0097]“Fredrickson IV型”(也稱作家族性高甘油三酯血癥)是發(fā)生于約1%的群體中的常染色體顯性病癥。由于VLDL的過量的肝臟產(chǎn)生或雜合的LPL缺陷導(dǎo)致TG水平的升高,但幾乎總是小于1000mg/dL。血清膽固醇水平通常在正常限度內(nèi)。疾患是異源的且表型受環(huán)境因素的強(qiáng)烈影響,尤其是碳水化合物和乙醇消耗。
[0098]“Fredrickson V型”具有高VLDL和乳糜微粒。其特征為功能丟失的LPL基因變體的攜帶者,伴隨LPL活性為至少20%(即,與Fredrickson I型相比較部分LPL缺陷)。由于乳糜微粒和VLDL,這些患者呈現(xiàn)乳狀血漿和嚴(yán)重的高甘油三酯血癥。TG水平常大于1000mg/dL且總膽固醇水平常升高。LDL-C水平通常是低的。其還與急性胰腺炎、葡萄糖耐受不良和高尿酸血癥的風(fēng)險(xiǎn)升高相關(guān)聯(lián)。癥狀通常存在于成人(>35歲)且雖然患病率相對罕見,其比純合的或復(fù)合雜合的LPL缺陷患者常見得多。
[0099]“完全互補(bǔ)”或“ 100%互補(bǔ)”意為第一核酸的核堿基序列的每個(gè)核堿基在第二核酸的第二核堿基序列中具有互補(bǔ)的核堿基。在某些實(shí)施方案中,第一核酸是反義化合物且第二核酸是靶核酸。[0100]“間隙聚體(gapmer) ”意為嵌合的反義化合物,其中具有支持RNase H裂解的多個(gè)核苷的內(nèi)部區(qū)域位于具有一個(gè)或多個(gè)核苷的外部區(qū)域之間,其中構(gòu)成內(nèi)部區(qū)域的核苷在化學(xué)上不同于構(gòu)成外部區(qū)域的核苷。內(nèi)部區(qū)域可被稱為“間隙”或“間隙區(qū)段”且外部區(qū)域可被稱為“翼部”或“翼狀區(qū)段”。
[0101]“間隙變寬”意為嵌合的反義化合物,其具有位于具有I至6個(gè)核苷的5’和3’翼狀區(qū)段之間并與這些翼狀區(qū)段緊鄰的12個(gè)或更多個(gè)連續(xù)的2’ -脫氧核苷的間隙區(qū)段。
[0102]“葡萄糖”是被細(xì)胞用作能量和炎性中間體的來源的單糖?!把獫{葡萄糖”指血漿中存在的葡萄糖。
[0103]“高密度脂蛋白-C (HDL-C)”意為與高密度脂蛋白顆粒相結(jié)合的膽固醇。血清(或血漿)中HDL-C的濃度通常以mg/dL或nmol/L來定量。“HDL-C”和“血漿HDL-C”分別意為血清和血漿中的HDL-C。
[0104]“HMG-CoA還原酶抑制劑”意為通過抑制酶HMG-CoA還原酶起作用的藥劑,比如阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀。
[0105]“雜交”意為互補(bǔ)核酸分子的退火。在某些實(shí)施方案中,互補(bǔ)核酸分子包括反義化合物和靶核酸。
[0106]“高膽固醇血癥”意為按照有關(guān)成人高膽固醇的治療的檢測、評估的國家膽固醇教育計(jì)劃(NCEP)的專門組報(bào)告的指南(參見,Arch.1nt.Med.(1988) 148,36-39),以升高的膽固醇或循環(huán)(血漿)膽固醇、LDL-膽固醇和VLDL-膽固醇為特征的病癥。
[0107]“高脂血癥”或“高脂血”是以升高的血清脂質(zhì)或循環(huán)(血漿)脂質(zhì)為特征的病癥。該病癥表現(xiàn)為異常高的脂肪濃度。循環(huán)血液中的脂質(zhì)級分是膽固醇、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白、乳糜微粒和甘油三酯。高脂血癥的Fredrickson分類以如通過電泳或超速離心所測量的TG和富膽固醇的脂蛋白顆粒的型式為基礎(chǔ),并通常用于表征高脂血癥諸如高甘油三酯血癥的原發(fā)性原因(Fredrickson和Lee, Circulation, 1965,31:321-327 ;Fredrickson 等,New Eng J Med, 1967, 276(I):34 - 42)。
[0108]“高甘油三酯血癥”意為以升高的甘油三酯水平為特征的病癥。其病因包括原發(fā)性(即,遺傳原因)和繼發(fā)性(其它潛在的原因諸如糖尿病、代謝綜合征/胰島素抗性、肥胖、機(jī)體遲鈍、吸煙、過量飲酒和極高碳水化合物的飲食)因素或,更常見的為二者的組合(Yuan等CMAJ, 2007,176:1113-1120)。
[0109]“鑒定”或“選擇患有代謝性疾病或心血管疾病的動(dòng)物”意為鑒定或選擇易患或已被診斷患有代謝性疾病、心血管疾病或代謝性綜合征的受試者;或鑒定或選擇具有代謝性疾病、心血管疾病或代謝性綜合征的任何癥狀的受試者,包括但不限于高膽固醇血癥、高血糖、高脂血癥、高甘油三酯血癥、高血壓、升高的胰島素抗性、降低的胰島素敏感性、超正常的體重和/或超正常的體脂含量或其任何組合。此類鑒定可通過任何方法來實(shí)現(xiàn),包括但不限于標(biāo)準(zhǔn)的臨床測試或評估,諸如測量血清或循環(huán)(血漿)膽固醇、測量血清或循環(huán)(血漿)血糖、測量血清或循環(huán)(血漿)甘油三酯、測量血壓、測量體脂含量、測量體重等等。
[0110]“改良的心血管結(jié)果”意為不良心血管事件或其風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生的減少。不良心血管事件的例子包括但不限于死亡、再梗塞、中風(fēng)、心源性休克、肺水腫、心跳停止和房性心律失常。
[0111]“緊鄰”意為在緊鄰的要素之間,例如,在區(qū)域、區(qū)段、核苷酸和/或核苷之間不存在介入要素。
[0112]“提高HDL”或“升高HDL”意為與未施用任何化合物的動(dòng)物的HDL水平相比較在施用本發(fā)明的至少一種化合物之后在動(dòng)物中升高HDL的水平。
[0113]“個(gè)體”或“受試者”或“動(dòng)物”意為對于治療或療法所選定的人類或非人類動(dòng)物。
[0114]“誘導(dǎo)”、“抑制”、“加強(qiáng)”、“升高”、“提高”、“降低”、“減少”等等指兩種狀態(tài)之間的定
量的差異。例如,“有效抑制ApoCIII的活性或表達(dá)的量”意為被處理的樣品中的ApoCIII的活性或表達(dá)的水平將不同于未處理的樣品中的ApoCIII活性或表達(dá)的水平。這樣的術(shù)語應(yīng)用于例如,表達(dá)的水平和或活性的水平。
[0115]“抑制表達(dá)或活性”指RNA或蛋白的表達(dá)或活性的降低或阻遏,且不一定指表達(dá)或活性的完全消除。
[0116]“胰島素抗性”被定義為其中正常的胰島素的量不足以從脂肪細(xì)胞、肌肉細(xì)胞和肝細(xì)胞產(chǎn)生正常胰島素反應(yīng)的病癥。脂肪細(xì)胞中的胰島素抗性導(dǎo)致存儲(chǔ)的甘油三酯水解,這升高了血漿中的游離脂肪酸。肌肉中的胰島素抗性降低了葡萄糖攝取,而肝中的胰島素抗性減少了葡萄糖存儲(chǔ),二者均起作用以升高血糖。由于胰島素抗性導(dǎo)致的胰島素和葡萄糖的高血漿水平常導(dǎo)致了代謝綜合征和2型糖尿病。
[0117]“胰島素敏感性”是個(gè)體有效地加工葡萄糖的程度的量度。具有高胰島素敏感性的個(gè)體有效地加工葡萄糖,而具有低胰島素敏感性的個(gè)體不能有效地加工葡萄糖。
[0118]“核苷間鍵”指核苷之間的化學(xué)鍵。
[0119]“靜脈內(nèi)施用”意為施用到靜脈內(nèi)。
[0120]“連接的核苷”意為鍵合在一起的相鄰核苷。
[0121]“脂質(zhì)降低”意為在受試者中減少一種或多種脂質(zhì)?!爸|(zhì)升高”意為在受試者中升高脂質(zhì)(例如,HDL)。脂質(zhì)降低或脂質(zhì)升高可隨時(shí)間利用一次或多次給藥而發(fā)生。
[0122]“脂質(zhì)降低療法”或“脂質(zhì)降低劑”意為提供給受試者以在受試者中減少一種或多種脂質(zhì)的治療方案。在某些實(shí)施方案中,提供脂質(zhì)降低療法以在受試者中減少CETP、ApoB、總膽固醇、LDL-C、VLDL-C、IDL-C、非HDL-C、甘油三酯、小致密LDL顆粒和Lp (a)中的一者或多者。脂質(zhì)降低療法的例子包括抑制素、貝特類(fibrates)、MTP抑制劑。
[0123]“脂蛋白”,諸如VLDL、LDL和HDL,指一組發(fā)現(xiàn)于血清、血漿和淋巴中的蛋白,并對脂質(zhì)運(yùn)輸是重要的。每種脂蛋白的化學(xué)組成不同,原因?yàn)镠DL具有較高的蛋白比脂質(zhì)的比例,而VLDL具有較低的蛋白比脂質(zhì)的比例。
[0124]“低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)”意為低密度脂蛋白顆粒中攜帶的膽固醇。血清(或血漿)中的LDL-C的濃度通常以mg/dL或nmol/L來定量?!把錖DL-C”和“血漿LDL-C”分別意為血清和血漿中的LDL-C。
[0125]“主要風(fēng)險(xiǎn)因子”指導(dǎo)致特定的疾病或病癥的高風(fēng)險(xiǎn)的因子。在某些實(shí)施方案中,冠心病的主要風(fēng)險(xiǎn)因子包括但不限于吸煙、高血壓、低HDL-C、冠心病家族史、年齡和本文所公開的其它因子。[0126]“代謝性疾患”或“代謝性疾病”指以代謝功能的改變或失調(diào)為特征的病癥?!按x的”和“代謝”是本領(lǐng)域中熟知的術(shù)語且通常包括在活有機(jī)體中發(fā)生的生物過程的整個(gè)范圍。代謝性疾患包括但不限于高血糖、前驅(qū)糖尿病、糖尿病(I型和2型)、肥胖、胰島素抗性、代謝綜合征和由于2型糖尿病引起的血脂異常 。
[0127]“代謝綜合征”意為以代謝來源的脂質(zhì)和非脂質(zhì)心血管風(fēng)險(xiǎn)因子的聚類為特征的病癥。在某些實(shí)施方案中,通過以下因子中的任何3個(gè)的存在來鑒定代謝綜合征:男性中腰圍大于102cm或女性中腰圍大于88cm ;至少150mg/dL的血清甘油三酯;男性中HDL-C小于40mg/dL或女性中小于50mg/dL ;至少130/85mmHg的血壓;和至少110mg/dL的空腹葡萄糖。這些決定因素可在臨床實(shí)踐中容易地測量(JAMA,2001, 285:2486-2497)。
[0128]“錯(cuò)配”或“非互補(bǔ)性核堿基”指當(dāng)?shù)谝缓怂岬暮藟A基不能夠與第二核酸或靶核酸的相應(yīng)核堿基配對的情況。
[0129]“混合性血脂異?!币鉃橐陨叩哪懝檀己蜕叩母视腿樘卣鞯牟“Y。
[0130]“修飾的核苷間鍵”指來自天然存在的核苷間鍵的取代或任何變化。例如,硫代磷酸酯鍵是修飾的核苷間鍵。
[0131]“修飾的核堿基”指不是腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸苷或尿嘧啶的任何核堿基。例如,5-甲基胞嘧啶是修飾的核堿基。“未修飾的核堿基”意為嘌呤堿基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)以及嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。
[0132]“修飾的核苷”意為具有至少一個(gè)修飾的糖部分和/或修飾的核堿基的核苷。
[0133]“修飾的核苷酸”意為具有至少一個(gè)修飾的糖部分、修飾的核苷間鍵和/或修飾的核堿基的核苷酸。
[0134]“修飾的寡核苷酸”意為含至少一個(gè)修飾的核苷酸的寡核苷酸。
[0135]“修飾的糖”指天然糖的取代或改變。例如,2’ -O-甲氧基乙基修飾的糖是修飾的糖。
[0136]“基序”意為反義化合物中化學(xué)上不同的區(qū)域的型式。
[0137]“天然存在的核苷間鍵”意為3’至5’磷酸二酯鍵合。
[0138]“天然的糖部分”意為發(fā)現(xiàn)于DNA (2’ -H)或RNA (2’ -0H)中的糖。
[0139]“核酸”指由單體核苷酸組成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)、單鏈核酸(ssDNA)、雙鏈核酸(dsDNA)、小干擾核糖核酸(siRNA)和微RNA (miRNA)。核酸還可包含單一分子中的這些要素的組合。
[0140]“核堿基”意為能夠與另一核酸的堿基配對的雜環(huán)部分。
[0141]“核堿基互補(bǔ)性”指能夠與另一核堿基堿基配對的核堿基。例如,在DNA中,腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)互補(bǔ)。例如,在RNA中,腺嘌呤(A)與尿嘧啶(U)互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,互補(bǔ)性堿基指能夠與其靶核酸的核堿基堿基配對的反義化合物的核堿基。例如,若反義化合物的某位置的核堿基能夠與靶核酸的某位置的核堿基氫鍵鍵合,則認(rèn)為寡核苷酸和靶核酸在該核堿基配對處是互補(bǔ)的。
[0142]“核堿基序列”意為不依賴于任何糖、連接或核堿基修飾的連續(xù)核堿基的順序。
[0143]“核苷”意為與糖連接的核堿基。
[0144]“核苷模擬物”包括用于在寡聚化合物的一個(gè)或多個(gè)位置處置換糖或糖和堿基且不一定要置換鍵的那些結(jié)構(gòu);例如具有嗎啉代、環(huán)己烯基、環(huán)己基、四氫吡喃基、雙環(huán)或三環(huán)糖模擬物,比如,非呋喃糖單元的核苷模擬物。
[0145]“核苷酸”意為具有與核苷的糖部分共價(jià)連接的磷酸基的核苷。
[0146]“核苷酸模擬物”包括用于在寡聚化合物的一個(gè)或多個(gè)位置處替換核苷和鍵的那些結(jié)構(gòu),諸如例如肽核酸或嗎啉代類(由-N(H)-C(=0)-0-或其它非磷酸二酯鍵連接的嗎啉代類)。
[0147]“寡聚化合物”或“寡聚體”意為連接的單體亞單位的聚合物,其能夠與核酸分子的區(qū)域雜交。在某些實(shí)施方案中,寡聚化合物是寡核苷。在某些實(shí)施方案中,寡聚化合物是寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中,寡聚化合物是反義化合物。在某些實(shí)施方案中,寡聚化合物是反義寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中,寡聚化合物是嵌合的寡核苷酸。
[0148]“寡核苷酸”意為連接的核苷的聚合物,其各自可被修飾或未被修飾,彼此無關(guān)。
[0149]“胃腸外施用”意為通過注射或輸注來施用。胃腸外施用包括皮下施用、靜脈內(nèi)施用、肌內(nèi)施用、動(dòng)脈內(nèi)施用、腹膜內(nèi)施用或顱內(nèi)施用,例如,鞘內(nèi)或腦室內(nèi)施用。施用可以是連續(xù)的、長期的、短期的或間歇的。
[0150]“肽”意為通過由酰胺鍵連接至少兩個(gè)氨基酸而形成的分子。肽指多肽和蛋白。
[0151 ] “藥劑”意為當(dāng)被施用于個(gè)體時(shí)提供治療益處的物質(zhì)。例如,在某些實(shí)施方案中,靶向ApoCIII的反義寡核苷酸為藥劑。
[0152]“藥物組合物”或“組合物”意為適合施用于個(gè)體的物質(zhì)的混合物。例如,藥物組合物可包含一種或多種活性劑和藥學(xué)上的載體,比如無菌水溶液。
[0153]“藥學(xué)上可接受的載體”意為不會(huì)干擾化合物結(jié)構(gòu)的介質(zhì)或稀釋劑。這些載體中的某些使藥物組合物能被配制為,例如,片劑、丸劑、糖衣丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿料、懸浮液和錠劑以便由受試者口服攝入。這些載體中的一些使藥物組合物能被配制為用于注射、輸注或局部施用。例如,藥學(xué)上可接受的載體可以是無菌水溶液。
[0154]“藥學(xué)上可接受的衍生物”或“鹽”涵蓋本文所描述的化合物的衍生物,比如溶劑合物、水合物、酯、前藥、多晶型物、異構(gòu)體、同位素標(biāo)記的變體、藥學(xué)上可接受的鹽和本領(lǐng)域中已知的其它衍生物。
[0155]“藥學(xué)上可接受的鹽”意為反義化合物的生理學(xué)或藥學(xué)上可接受的鹽,即,保留母體化合物的所需生物活性且不會(huì)賦予不想要的毒理學(xué)效應(yīng)的鹽。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”或“鹽”包括由藥學(xué)上可接受的無毒酸或堿(包括無機(jī)的或有機(jī)的酸和堿)制備的鹽。本文所描述的化合物的“藥學(xué)上可接受的鹽”可通過本領(lǐng)域中熟知的方法來制備。關(guān)于藥學(xué)上可接受的鹽的綜述,參見Stahl和Wermuth, Handbook of PharmaceuticalSalts:Properties, Selection and Use (ffiley-VCH, ffeinheim, Germany, 2002) ? 反義寡核苷酸的鈉鹽對于人類的治療施用來說是有用的并且完全可被接受。因此,在一個(gè)實(shí)施方案中,本文所描述的化合物為鈉鹽形式。
[0156]“硫代磷酸酯鍵”意為核苷之間的鍵,其中磷酸二酯鍵通過用硫原子置換非橋連氧原子之一而被修飾。硫代磷酸酯鍵是修飾的核苷間鍵。
[0157]“部分”意為核酸 的確定數(shù)目的連續(xù)(即,連接的)核堿基。在某些實(shí)施方案中,部分是靶核酸的確定數(shù)目的連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方案中,部分是反義化合物的確定數(shù)目的連續(xù)核堿基。
[0158]“預(yù)防”指延遲或阻止疾病、疾患或病癥的發(fā)作或發(fā)展達(dá)到從數(shù)分鐘到無限期的時(shí)間段。預(yù)防還意為降低患上疾病、疾患或病癥的風(fēng)險(xiǎn)。
[0159]“前藥”意為以無活性形式制備的治療劑,其在體內(nèi)或其細(xì)胞內(nèi)通過內(nèi)源性酶或其它化學(xué)物品或條件的作用而轉(zhuǎn)化為活性形式(即,藥物)。
[0160]“升高”意為量的增加。例如,升高血漿HDL水平意為增加血漿中的HDL的量。
[0161]“TG與HDL的比率”意為相對于HDL水平的TG水平。高TG和/或低HDL的出現(xiàn)與心血管疾病發(fā)生、結(jié)果和死亡相關(guān)?!案纳芓G與HDL的比率”意為降低TG水平和/或升高HDL水平。[0162]“降低”意為降低至較小的程度、大小、量或數(shù)目。例如,降低血漿甘油三酯水平意為降低血漿中的甘油三酯的量。
[0163]“區(qū)域”或“靶區(qū)域”被定義為具有至少一種可鑒定的結(jié)構(gòu)、功能或特性的靶核酸的部分。例如,靶區(qū)域可涵蓋3’UTR、5’UTR、外顯子、內(nèi)含子、外顯子/內(nèi)含子接合點(diǎn)、編碼區(qū)、翻譯起始區(qū)、翻譯終止區(qū)或其它確定的核酸區(qū)域。ApoCIII的結(jié)構(gòu)確定的區(qū)域可通過來自諸如NCBI的序列數(shù)據(jù)庫的登錄號來獲得且這樣的信息通過引用并入本文。在某些實(shí)施方案中,靶區(qū)域可涵蓋從靶區(qū)域內(nèi)的一個(gè)靶區(qū)段的5’靶位至該靶區(qū)域內(nèi)的另一靶區(qū)段的3’靶位的序列。
[0164]“核糖核苷酸”意為在核苷酸的糖部分的2’位置具有羥基的核苷酸。核糖核苷酸可利用多種取代基中的任一者來修飾。
[0165]“第二藥劑”或“第二治療劑”意為可與“第一藥劑”組合使用的藥劑。第二治療劑可包括但不限于siRNA或反義寡核苷酸,包括靶向ApoCIII的反義寡核苷酸。第二藥劑還可包括抗ApoCIII抗體、ApoCIII肽抑制劑、膽固醇降低劑、脂質(zhì)降低劑、葡萄糖降低劑和消炎劑。
[0166]“區(qū)段”被定義為核酸內(nèi)區(qū)域的較小的亞部分。例如,“靶區(qū)段”意為一種或多種反義化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列。“5’靶位”指靶區(qū)段的5’-最末端核苷酸?!?’靶位”指靶區(qū)段的3’ -最末端核苷酸。
[0167]本文教導(dǎo)的反義寡核苷酸或靶核酸的“縮短”或“截短”的形式有一個(gè)、兩個(gè)或多個(gè)核苷缺失。
[0168]“副作用”意為可歸因于治療的不是所需作用的生理反應(yīng)。在某些實(shí)施方案中,副作用包括注射部位反應(yīng)、肝功能測試異常、腎功能異常、肝毒性、腎毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、肌病和不適。例如,血清中升高的轉(zhuǎn)氨酶水平可指示肝毒性或肝功能異常。例如,升高的膽紅素可指示肝毒性或肝功能異常。
[0169]“單鏈寡核苷酸”意為未與互補(bǔ)鏈雜交的寡核苷酸。
[0170]“可特異性雜交的”指對靶核酸具有足夠程度的互補(bǔ)性以誘導(dǎo)所需效應(yīng),同時(shí)在體內(nèi)檢測和治療性處理的情況下在需要特異性結(jié)合的條件下,即,在生理?xiàng)l件下對非靶核酸表現(xiàn)出極小的作用或無作用的反義化合物。
[0171]“抑制素”意為抑制HMG-CoA還原酶活性的藥劑。
[0172]“皮下施用”意為僅在皮膚下面施用。
[0173]“受試者”意為對于治療或療法所選定的人類或非人類動(dòng)物。
[0174]“心血管疾病或疾患的癥狀”意為由心血管疾病或疾患引起并伴隨心血管疾病或疾患并充當(dāng)其跡象的現(xiàn)象。例如,心絞痛;胸痛;氣短;心悸;虛弱;眩暈;惡心;出汗;心動(dòng)過速;心動(dòng)過緩;心律失常;房顫;下肢腫脹;發(fā)紺;疲乏;昏厥;臉麻木;四肢麻木;跛行或肌肉痙攣;腹脹;或發(fā)燒是心血管疾病或疾患的癥狀。
[0175]“靶向”或“被靶向”意為將與靶核酸特異性雜交并誘導(dǎo)所需效應(yīng)的反義化合物的設(shè)計(jì)和選擇的過程。
[0176]“靶核酸”、“靶RNA”和“靶RNA轉(zhuǎn)錄”均指能夠由反義化合物靶向的核酸。
[0177]“治療性生活方式變化”意為旨在降低脂肪/脂肪組織質(zhì)量和/或膽固醇的飲食和生活方式變化。此類變化會(huì)降低患上心臟病的風(fēng)險(xiǎn),并可包括每日總卡路里、總脂肪、飽和脂肪、多不飽和脂肪、單不飽和脂肪、碳水化合物、蛋白、膽固醇、不溶纖維的飲食攝取的推薦,以及身體活動(dòng)的推薦。
[0178]“治療”指施用本發(fā)明的化合物以實(shí)現(xiàn)疾病、疾患或病癥的改變或改良。 [0179]“甘油三酯”或“TG”意為由與三個(gè)脂肪酸分子結(jié)合的甘油組成的脂質(zhì)或中性脂肪。
[0180]“2型糖尿病”(也稱作“2型糖尿病”、“糖尿病,2型”、“非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)”、“肥胖相關(guān)糖尿病”或“成人發(fā)作糖尿病”)是代謝性疾患,主要以胰島素抗性、相對胰島素缺乏和高血糖為特征。
[0181]“未修飾的核苷酸”意為由天然存在的核堿基、糖部分和核苷間鍵組成的核苷酸。在某些實(shí)施方案中,未修飾的核苷酸是RNA核苷酸(即,β -D-核糖核苷)或DNA核苷酸(SP,β -D-脫氧核糖核苷)。
[0182]“翼狀區(qū)段”意為被修飾以賦予寡核苷酸特性,諸如增強(qiáng)的抑制活性、增加的對靶核酸的結(jié)合親和力、或?qū)w內(nèi)核酸酶的降解的抗性的一種或多種核苷。
[0183]某些實(shí)施方案
[0184]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物從而降低ApoCIII水平而在該動(dòng)物中降低ApoCIII水平的方法。在某些實(shí)施方案中,降低肝臟或小腸中的ApoCIII 水平。
[0185]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用化合物而在該動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率的方法,其中化合物靶向ApoCIII并提高了 HDL水平并且/或者改善了TG與HDL的比率。
[0186]某些實(shí)施方案提供了在動(dòng)物中預(yù)防、延遲或改善心血管疾病、疾患、病癥或其癥狀的方法,其包括向該動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物,其中施用于該動(dòng)物的該化合物通過在該動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而預(yù)防、治療或改善該心血管疾病、疾患、病癥或癥狀。
[0187]某些實(shí)施方案提供了在動(dòng)物中預(yù)防、延遲或改善胰腺炎的方法,其包括向該動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物,其中施用于該動(dòng)物的該化合物通過在該動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而在該動(dòng)物中預(yù)防、延遲或改善胰腺炎。在某些實(shí)施方案中,胰腺炎是急性胰腺炎。
[0188]某些實(shí)施方案提供了在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善心血管疾病、疾患或病癥、延遲其發(fā)作或降低其風(fēng)險(xiǎn)的方法,其包括向該動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物,其中該化合物通過在該動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而在該動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善心血管疾病、疾患或病癥、延遲其發(fā)作或降低其風(fēng)險(xiǎn)
[0189]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物而降低CETP水平的方法。
[0190]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物而升高ΑροΑ1、Ρ0Ν1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率和/或HDL的方法。某些實(shí)施方案提供了改善TG與HDL的比率的方法。
[0191]在某些實(shí)施方案中,ApoCIII核酸是以GENBANK登錄號NM_000040.1(作為SEQ IDNO:1并入本文),和GENBANK登錄號NT_033899.8從核苷酸20262640至20266603截短(作為SEQ ID NO:2并入本文)所列的序列中的任何。
[0192]在某些實(shí)施方案中,靶向ApoCIII的化合物是修飾的寡核苷酸。在另外的實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸具有包含ISIS304801 (SEQ ID NO:3)的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中,修飾的核苷酸與SEQ ID NO:1或SEQ ID N0:2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互補(bǔ)。
[0193]在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸由單鏈的修飾的寡核苷酸組成。
[0194]在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸由12-30個(gè)連接的核苷組成。
[0195]在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。
[0196]在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含至少一個(gè)修飾的核苷間鍵。在某些實(shí)施方案中,核苷間鍵是硫代磷酸酯核苷間鍵。
[0197]在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含含修飾的糖的至少一種核苷。在某些實(shí)施方案中,至少一種修飾的糖是雙環(huán)糖。在某些實(shí)施方案中,至少一種修飾的糖包含2’-0_甲氧
基乙基。
[0198]在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含至少一種含修飾的核堿基的核苷。在某些實(shí)施方案中,修飾的核堿基是5-甲基胞嘧啶。
[0199]在某些實(shí)施方案中,含修飾的寡核苷酸的化合物包含:(i)間隙區(qū)段,由連接的脫氧核苷組成;(ii) 5’翼狀區(qū)段,由連接的核苷組成;(iii) 3’翼狀區(qū)段,由連接的核苷組成,其中所述間隙區(qū)段緊鄰5’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段和3’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段定位并位于兩者之間,且其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含修飾的糖。
[0200]在某些實(shí)施方案中,含修飾的寡核苷酸的化合物包含:(i)間隙區(qū)段,由8-12個(gè)連接的脫氧核苷組成;(ii) 5’翼狀區(qū)段,由1-5個(gè)連接的核苷組成;(iii) 3’翼狀區(qū)段,由1-5個(gè)連接的核苷組成,其中所述間隙區(qū)段緊鄰5’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段和3’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段定位并位于兩者之間,其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’ -O-甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’ -甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。
[0201]在某些實(shí)施方案中,含修飾的寡核苷酸的化合物包含:(i)間隙區(qū)段,由10個(gè)連接的脫氧核苷組成;(ii) 5’翼狀區(qū)段,由5個(gè)連接的核苷組成;(iii) 3’翼狀區(qū)段,由5個(gè)連接的核苷組成,其中所述間隙區(qū)段緊鄰5’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段和3’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段定位并位于兩者之間,其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’ -O-甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’ -甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。
[0202]在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸具有含ISIS304801 (SEQ ID N0:3)的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列。
[0203]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用治療有效量的含由12-30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物而在該動(dòng)物中降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)的方法,其中所述修飾的寡核苷酸與ApoCIII核酸互補(bǔ)且其中所述修飾的寡核苷酸升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率。在某些實(shí)施方案中,ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2。在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互補(bǔ)。在另外的實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸包含ISIS304801(SEQ ID NO:3)的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基。
[0204]某些實(shí)施方案提供了在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,其包括向該動(dòng)物施用治療有效量的包含由12-30個(gè)連接的核苷組成并與ApoCIII核酸互補(bǔ)的修飾的寡核苷酸的化合物。在某些實(shí)施方案中,ApoCIII核酸是SEQID NO:1或SEQ ID NO: 2。在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO:1或SEQ IDNO: 2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互補(bǔ)。在另外的實(shí)施方案中,施用于該動(dòng)物的該化合物通過升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀。在另外的實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸包含ISIS304801 (SEQ ID NO:3)的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基。
[0205]在另外的實(shí)施方案中,心血管疾病的癥狀包括但不限于心絞痛;胸痛;氣短;心悸;虛弱;眩暈;惡心;出汗;心動(dòng)過速;心動(dòng)過緩;心律失常;房顫;下肢腫脹;發(fā)紺;疲乏;昏厥;臉麻木;四肢麻木;跛行或肌肉痙攣;腹脹;或發(fā)燒。
[0206]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用由ISIS304801 (SEQ ID N0:3)的核堿基序列組成的化合物而在該動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率的方法。另外的實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用由ISIS304801 (SEQ ID NO:3)的核堿基序列組成的化合物從而在該動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而在該動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法。
[0207]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用具有ISIS304801的序列的修飾的寡核苷酸而升高該動(dòng)物的HDL水平和/或改善TG與HDL的比率的方法,其中所述修飾的寡核苷酸包含:(i)間隙區(qū)段,由10個(gè)連接的脫氧核苷組成;(ii)5’翼狀區(qū)段,由5個(gè)連接的核苷組成;
(iii)3’翼狀區(qū)段,由5個(gè)連接的核苷組成,其中所述間隙區(qū)段緊鄰5’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段和3’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段定位并位于兩者之間,其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-0_甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’ -甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。
[0208]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用具有ISIS304801 (SEQ ID N0:3)的序列的修飾的寡核苷酸而在該動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,其中所述化合物的所述修飾的寡核苷酸包含:(i)間隙區(qū)段,由10個(gè)連接的脫氧核苷組成;
(ii)5’翼狀區(qū)段,由5個(gè)連接的核苷組成;(iii) 3’翼狀區(qū)段,由5個(gè)連接的核苷組成,其中所述間隙區(qū)段緊鄰5’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段和3’翼部區(qū)段翼狀區(qū)段定位并位于兩者之間,其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。
[0209]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用包含由12-30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物而升高該動(dòng)物的HDL水平和/或改善TG與HDL的比率的方法,其中所述修飾的寡核苷酸與ApoCIII核酸互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ ID N0:2。在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸與SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互補(bǔ)。[0210]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用包含由12-30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物而在該動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,其中所述修飾的寡核苷酸與ApoCIII核酸互補(bǔ),并升高該動(dòng)物的HDL水平。在某些實(shí)施方案中,ApoCIII核酸是SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:2。在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互補(bǔ)。[0211]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物而降低CETP水平的方法。在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含由12-30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸,其中所述修飾的寡核苷酸與ApoCIII核酸互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,ApoCIII核酸是SEQID NO:1或SEQ ID NO: 2。在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO:1或SEQ IDNO: 2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含由12-30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸并具有包含ISIS304801(SEQ ID N0:3)的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中,所述化合物由ISIS304801 (SEQ ID N0:3)的核堿基組成。
[0212]某些實(shí)施方案提供了通過向動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物而升高ΑροΑ1、Ρ0Ν1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率和/或HDL的方法。在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含由12-30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸,其中所述修飾的寡核苷酸與ApoCIII核酸互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,ApoCII I核酸是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2。在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,所述化合物包含由12-30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸并具有包含ISIS304801 (SEQ ID NO:3)的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中,所述化合物由ISIS304801 (SEQ ID N0:3)的核堿基組成。
[0213]在某些實(shí)施方案中,動(dòng)物是人。
[0214]在某些實(shí)施方案中,心血管疾病是動(dòng)脈瘤、心絞痛、心律失常、動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管疾病、冠心病、高血壓、血脂異常、高脂血癥、高甘油三酯血癥或高膽固醇血癥。在某些實(shí)施方案中,血脂異常是乳糜微粒血癥。
[0215]在某些實(shí)施方案中,動(dòng)物處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中。在某些實(shí)施方案中,降低肝臟和/或小腸中的ApoCIII水平預(yù)防胰腺炎。在某些實(shí)施方案中,升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率預(yù)防胰腺炎。
[0216]在某些實(shí)施方案中,降低肝臟和/或小腸中的ApoCIII水平增強(qiáng)了餐后甘油三酯的清除。在某些實(shí)施方案中,升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率增強(qiáng)了餐后甘油三酯的清除。在某些實(shí)施方案中,降低肝臟和/或小腸中的ApoCIII水平降低了餐后甘油三酯。在某些實(shí)施方案中,升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率降低了餐后甘油三酯。
[0217]在某些實(shí)施方案中,降低肝臟和/或小腸中的ApoCIII水平改善了 HDL與TG的比率。
[0218]在某些實(shí)施方案中,所述化合物是胃腸外施用的。在另外的實(shí)施方案中,胃腸外施用是皮下方式。
[0219]在某些實(shí)施方案中,所述化合物與第二藥劑共施用。在某些實(shí)施方案中,第二藥劑是葡萄糖降低劑。在某些實(shí)施方案中,第二藥劑是LDL、TG或膽固醇降低劑。
[0220]在某些實(shí)施方案中,所述化合物和第二藥劑是同時(shí)施用或相繼施用的。
[0221]在某些實(shí)施方案中,所述化合物是鹽形式,在另外的實(shí)施方案中,所述化合物還包含藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑 。
[0222]某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來在動(dòng)物中降低ApoCIII水平的藥物的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于在動(dòng)物中降低ApoCIII水平的用途。在某些實(shí)施方案中,降低肝臟或小腸中的ApoCIII水平。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來通過升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的藥物的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于通過升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率的藥物的用途。在某些實(shí)施方案中,所述化合物與ApoCIII核酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ ID N0:2。在某些實(shí)施方案中,所述化合物是修飾的寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸具有包含ISIS304801 (SEQ ID NO:3)的至少8個(gè)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中,修飾的寡核苷酸具有ISIS304801 (SEQ ID N0:3)的核堿基序列。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來治療患有胰腺炎或處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物的藥物的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于治療患有胰腺炎或處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來降低肝臟和/或小腸中的ApoCIII水平的藥物的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于降低肝臟和/或小腸中的ApoCIII水平的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來預(yù)防胰腺炎的藥物的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于預(yù)防胰腺炎的用途。
[0223]某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來在患有高甘油三酯血癥的動(dòng)物中降低肝臟和/或小腸中的ApoCIII水平的藥物的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于在患有高甘油三酯血癥的動(dòng)物中降低肝臟和/或小腸中的ApoCIII水平的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來增強(qiáng)餐后甘油三酯的清除的藥物的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于增強(qiáng)餐后甘油三酯的清除的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制備用來降低餐后甘油三酯的藥物的用途。某些實(shí)施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于降低餐后甘油三酯的用途。
[0224]反義化合物
[0225]寡聚化合物包括但不限于寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸類似物、寡核苷酸模擬物、反義化合物、反義寡核苷酸和siRNA。寡聚化合物對于靶核酸可以是“反義的”,意味著能夠通過氫鍵鍵合與靶核酸進(jìn)行雜交。
[0226]在某些實(shí)施方案中,反義化合物具有核堿基序列,當(dāng)以5’到3’方向書寫時(shí),所述核堿基序列包含其所靶向的靶核酸的靶區(qū)段的反向互補(bǔ)物。在某些此類實(shí)施方案中,反義寡核苷酸具有核堿基序列,當(dāng)以5’到3’方向書寫時(shí),所述核堿基序列包含其所靶向的靶核酸的靶區(qū)段的反向互補(bǔ)物。
[0227]在某些實(shí)施方案中,靶向ApoCIII核酸的反義化合物長度為12至30個(gè)核苷酸。換言之,反義化合物是12至30個(gè)連接的核堿基。在另外的實(shí)施方案中,反義化合物包含由8至80、10至80、12至50、15至30、18至24、19至22或20個(gè)連接的核堿基組成的修飾的寡核苷酸。在某些此類實(shí)施方案中,反義化合物包含由長度為8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、
67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80個(gè)(或由上述值中任何兩個(gè)界定的范圍內(nèi)的數(shù)目)的連接的核堿基組成的修飾的寡核苷酸。在一些實(shí)施方案中,反義化合物是反義寡核苷酸。 [0228]在某些實(shí)施方案中,反義化合物包含縮短的或截短的修飾的寡核苷酸??s短的或截短的修飾的寡核苷酸可有一個(gè)或多個(gè)核苷從5’端缺失(5’截短),有一個(gè)或多個(gè)核苷從3’端缺失(3’截短),或有一個(gè)或多個(gè)核苷從中央部分缺失??蛇x地,缺失的核苷可遍及修飾的寡核苷酸而分布,例如,在有一個(gè)核苷從5’端缺失并有一個(gè)核苷從3’端缺失的反義化合物中。
[0229]當(dāng)單一的另外的核苷存在于延長的寡核苷酸中時(shí),另外的核苷可位于寡核苷酸的中央部分、5’或3’端。當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)另外的核苷存在時(shí),添加的核苷可彼此相鄰,例如,在有兩個(gè)核苷添加到寡核苷酸的中央部分、添加到其5’端(5’添加)、或可選地添加到其3’端(3’添加)的寡核苷酸中?;蛘撸砑拥暮塑湛杀榧胺戳x化合物而分布,例如,在有一個(gè)核苷添加到5’端且有一個(gè)亞單位添加到3’端的寡核苷酸中。
[0230]增加或減小反義化合物諸如反義寡核苷酸的長度、和/或引入錯(cuò)配堿基而不消除活性是可能的。例如,在 Woolf 等(Proc.Natl.Acad.Sc1.USA89:7305-7309、1992)中,在卵母細(xì)胞注射模型中測試了長度為13-25個(gè)核堿基的一系列反義寡核苷酸誘導(dǎo)靶RNA的裂解的能力??拷戳x寡核苷酸的末端具有8或11個(gè)錯(cuò)配堿基的長度為25個(gè)核堿基的反義寡核苷酸能夠指導(dǎo)靶mRNA的特異性裂解,不過程度小于不含錯(cuò)配的反義寡核苷酸。相似地,利用13個(gè)核堿基的反義寡核苷酸(包括具有I個(gè)或3個(gè)錯(cuò)配的寡核苷酸)實(shí)現(xiàn)了靶向特異性裂解。
[0231]Gautschi 等(J.Natl.Cancer Inst.93:463-471, March2001)證明了與 bcl_2mRNA具有100%互補(bǔ)性且具有與bcl-xL mRNA的3個(gè)錯(cuò)配的寡核苷酸在體外和體內(nèi)降低bcl_2和bcl-xL的表達(dá)的能力。此外,該寡核苷酸在體內(nèi)證明了有效的抗腫瘤活性。
[0232]Maher 和 Dolnick (Nuc.AcicL Res.16:3341-3358,1988)分別測試了一系列串聯(lián)的14個(gè)核堿基反義寡核苷酸,和由兩個(gè)或三個(gè)串聯(lián)的反義寡核苷酸的序列組成的28個(gè)和42個(gè)核堿基反義寡核苷酸阻止人類DHFR在兔網(wǎng)織紅細(xì)胞中的翻譯的能力。三種14個(gè)核堿基反義寡核苷酸中的每一個(gè)單獨(dú)地能夠抑制翻譯,不過水平比28或42個(gè)核堿基反義寡核苷酸更適度。
[0233]反義化合物基序
[0234]在某些實(shí)施方案中,靶向ApoCIII核酸的反義化合物具有以型式或基序排列的經(jīng)化學(xué)修飾的亞單位,以賦予反義化合物諸如增強(qiáng)的抑制活性、增加的對靶核酸的結(jié)合親和力、或?qū)w內(nèi)核酸酶的降解的抗性的性質(zhì)。
[0235]嵌合的反義化合物通常含有至少一個(gè)經(jīng)修飾的區(qū)域以賦予增加的對核酸酶降解的抗性、增加的細(xì)胞攝取、增加的對靶核酸的結(jié)合親和力、和/或增加的抑制活性。嵌合的反義化合物的第二區(qū)域可任選地充當(dāng)細(xì)胞核酸內(nèi)切酶RNase H的底物,其使RNA = DNA雙鏈體的RNA鏈裂解。
[0236]具有間隙聚體基序的反義化合物被認(rèn)為是嵌合的反義化合物。在間隙聚體中,具有支持RNaseH裂解的多個(gè)核苷酸的內(nèi)部區(qū)域位于具有化學(xué)上不同于內(nèi)部區(qū)域的核苷的多個(gè)核苷酸的外部區(qū)域之間。在具有間隙聚體基序的反義寡核苷酸的情況下,間隙區(qū)段通常充當(dāng)核酸內(nèi)切酶裂解的底物,而翼狀區(qū)段包含修飾的核苷。在某些實(shí)施方案中,間隙聚體的區(qū)域根據(jù)構(gòu)成每個(gè)不同的區(qū)域的糖部分的類型來區(qū)分。用于區(qū)分間隙聚體的區(qū)域的糖部分的類型在一些實(shí)施方案中可包括β -D-核糖核苷、β -D-脫氧核糖核苷、2’-修飾的核苷(此類2’ -修飾的核苷尤其可包括2’ -MOE和2’ -O-CH3)和雙環(huán)糖修飾的核苷(此類雙環(huán)糖修飾的核苷可包括具有4’ _(CH2)n-0-2’橋連基(其中n=l或n=2)的那些)。優(yōu)選地,每個(gè)不同的區(qū)域包含統(tǒng)一的糖部分。翼部-間隙-翼部基序通常被描述為“X-Y-Z”,其中“X”代表5’翼狀區(qū)域的長度,“Y”代表間隙區(qū)域的長度,且“Z”代表3’翼狀區(qū)域的長度。如本文所用,被描述為“X-Y-Z”的間隙聚體具有使得間隙區(qū)段位于5’ -翼狀區(qū)段和3’翼狀區(qū)段之間并與5’翼狀區(qū)段和3’翼狀區(qū)段中的每一個(gè)緊鄰的構(gòu)型。因此,在5’翼狀區(qū)段與間隙區(qū)段之間、或間隙區(qū)段與3’翼狀區(qū)段之間無介入核苷酸存在。本文所描述的反義化合物中的任一者可具有間隙聚體基序。在一些實(shí)施方案中,X和Z是相同的,在另外的實(shí)施方案中它們是不同的。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,Y在8與15個(gè)核苷酸之間。X、Y或Z可以 是 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30個(gè)或更多個(gè)核苷酸中的任一者。因此,間隙聚體包括但不限于例如,5-10-5、4-8_4、
4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、卜18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、6-8-6、
5-8-5、1-8-1、2-6-2、2-13-2、1-8-2、2-8-3、3-10-2、1-18-2或 2-18-2。
[0237]在某些實(shí)施方案中,反義化合物作為“翼狀聚體”基序,具有翼部-間隙或間隙-翼部構(gòu)型,即,如以上關(guān)于間隙聚體構(gòu)型所描述的X-Y或Y-Z構(gòu)型。因此,翼狀聚體構(gòu)型包括但不限于例如,5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13 或 5-13。
[0238]在某些實(shí)施方案中,靶向ApoCIII核酸的反義化合物具有5_10_5間隙聚體基序。
[0239]在某些實(shí)施方案中,靶向ApoCIII核酸的反義化合物具有間隙-增寬的基序。
[0240]靶核酸、靶區(qū)域和核苷酸序列
[0241]編碼ApoCIII的核苷酸序列包括但不限于以下項(xiàng):GENBANK登錄號NM_000040.1(作為SEQ ID NO:1并入本文)和GENBANK登錄號:NT_033899.8 (從核苷酸20262640至20266603截短)(作為SEQ ID N0:2并入本文)。
[0242]應(yīng)理解的是本文所含的實(shí)施例中的每個(gè)SEQ ID NO中所列出的序列與對糖部分、核苷間鍵或核堿基的任何修飾無關(guān)。因此,由SEQ ID NO定義的反義化合物可獨(dú)立地包含,對糖部分、核苷間鍵或核堿基的一種或多種修飾。由Isis編號(Isis No)所描述的反義化合物指示核堿基序列和基序的組合。
[0243]在某些實(shí)施方案中,靶區(qū)域是靶核酸的結(jié)構(gòu)確定的區(qū)域。例如,靶區(qū)域可涵蓋3’ UTR、5’ UTR、外顯子、內(nèi)含子、外顯子/內(nèi)含子接合點(diǎn)、編碼區(qū)域、翻譯起始區(qū)域、翻譯終止區(qū)域或其它確定的核酸區(qū)域。ApoCIII的結(jié)構(gòu)確定的區(qū)域可通過來自諸如NCBI的序列數(shù)據(jù)庫的登錄號來獲得,且該信息通過引用并入本文。在某些實(shí)施方案中,靶區(qū)域可涵蓋從靶區(qū)域內(nèi)的一個(gè)靶區(qū)段的5’靶位至該靶區(qū)域內(nèi)的另一靶區(qū)段的3’靶位的序列。
[0244]在某些實(shí)施方案中,“靶區(qū)段”是核酸內(nèi)靶區(qū)域的較小的亞部分。例如,靶區(qū)段可以是一種或多種反義化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列?!?’靶位”指靶區(qū)段的5’最末端核苷酸。“3’靶位”指靶區(qū)段的3’最末端核苷酸。
[0245]靶區(qū)域可含有一個(gè)或多個(gè)靶區(qū)段。靶區(qū)域內(nèi)的多個(gè)靶區(qū)段可以是重疊的?;蛘?,它們可以是非重疊的。在某些實(shí)施方案中,靶區(qū)域內(nèi)的靶區(qū)段被不超過約300個(gè)核苷酸所隔開。在某些實(shí)施方案中,靶區(qū)域內(nèi)的靶區(qū)段被大量核苷酸所隔開,所述大量核苷酸為,為約,不超過,不超過約靶核酸上的250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10個(gè)或由前述值中任何兩個(gè)所界定的范圍內(nèi)的數(shù)目的核苷酸。在某些實(shí)施方案中,靶區(qū)域內(nèi)的靶區(qū)段被不超過或不超過約靶核酸上的5個(gè)核苷酸所隔開。在某些實(shí)施方案中,靶區(qū)段是連續(xù)的。考慮的是由具有為本文所列的5’靶位或3’靶位中任一者的起始核酸的范圍所界定的靶區(qū)域。 [0246]靶向包括確定與反義化合物雜交以使所需作用發(fā)生的至少一個(gè)靶區(qū)段。在某些實(shí)施方案中,所需作用是mRNA靶核酸水平降低。在某些實(shí)施方案中,所需作用是靶核酸編碼的蛋白的水平的降低或與靶核酸關(guān)聯(lián)的表型變化。
[0247]適宜的靶區(qū)段可發(fā)現(xiàn)于5’ UTR、編碼區(qū)域、3’ UTR、內(nèi)含子、外顯子或外顯子/內(nèi)含子接合點(diǎn)內(nèi)。含有起始密碼子或終止密碼子的靶區(qū)段也是適宜的靶區(qū)段。適宜的靶區(qū)段可特異性地排除某些結(jié)構(gòu)上確定的區(qū)域諸如起始密碼子或終止密碼子。
[0248]適宜的靶區(qū)段的確定可包括靶核酸的序列與整個(gè)基因組中的其它序列的比較。例如,可使用BLAST算法來鑒定不同的核酸之間的相似性的區(qū)域。該比較可避免可能以非特異性方式與除所選擇的靶核酸外的序列雜交的反義化合物序列(即,非靶序列或脫靶序列)的選擇。
[0249]活性靶區(qū)域內(nèi)的反義化合物的活性(例如,如由靶核酸水平的降低百分比所定義)可能存在變化。在某些實(shí)施方案中,ApoCIII mRNA水平的降低指示ApoCIII表達(dá)的抑制。ApoCIII蛋白水平的降低可指示靶mRNA表達(dá)的抑制。此外,表型變化可指示ApoCIII表達(dá)的抑制。例如,HDL水平的升高、LDL水平的降低或甘油三酯水平的降低是可關(guān)于ApoCIII表達(dá)的抑制來測定的表型變化之一。其它表型跡象,例如,與心血管疾病相關(guān)聯(lián)的癥狀,也可被評估;例如,心絞痛;胸痛;氣短;心悸;虛弱;眩暈;惡心;出汗;心動(dòng)過速;心動(dòng)過緩;心律失常;房顫;下肢腫脹;發(fā)紺;疲乏;昏厥;臉麻木;四肢麻木;跛行或肌肉痙攣;腹脹;或發(fā)燒。
[0250]雜交
[0251]在一些實(shí)施方案中,雜交發(fā)生在本文所公開的反義化合物和ApoCIII核酸之間。最常見的雜交機(jī)制包括核酸分子的互補(bǔ)核堿基之間的氫鍵結(jié)合(例如,Watson-Crick、Hoogsteen或反向的Hoogsteen氫鍵合)。
[0252]雜交可在不同的條件下發(fā)生。嚴(yán)格的條件是序列依賴性的且由待被雜交的核酸分子的性質(zhì)和組成決定。
[0253]確定序列是否可與靶核酸特異性雜交的方法是本領(lǐng)域中熟知的(Sambrooke和Russell, Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第三版,2001)。在某些實(shí)施方案中,本文提供的反義化合物可與ApoCIII核酸特異性雜交。
[0254]互補(bǔ)性
[0255]當(dāng)反義化合物的足夠數(shù)目的核堿基可與靶核酸相應(yīng)的核堿基氫鍵結(jié)合時(shí),反義化合物和靶核酸彼此互補(bǔ),以使所需效應(yīng)(例如,靶核酸諸如ApoCIII核酸的反義抑制)發(fā)生。
[0256]反義化合物可跨越ApoCIII核酸的一個(gè)或多個(gè)區(qū)段雜交,以使插入的或相鄰的區(qū)段不參與雜交事件(例如,環(huán)結(jié)構(gòu)、錯(cuò)配或發(fā)夾結(jié)構(gòu))。
[0257]在某些實(shí)施方案中,本文所提供的反義化合物,或其特定的部分與ApoCIII核酸、靶區(qū)域、靶區(qū)段或其特定的部分為,或至少為70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%互補(bǔ)。反義化合物與靶核酸的互補(bǔ)性百分比可利用常規(guī)方法來測定。
[0258]例如,反義化合物的20個(gè)核堿基中的18個(gè)與靶區(qū)域互補(bǔ),且因此將特異性雜交的反義化合物將代表90%互補(bǔ)性。在該例中,其余的非互補(bǔ)核堿基可與互補(bǔ)的核堿基的聚集或散布在一起,且不必彼此連續(xù)或與互補(bǔ)核堿基連續(xù)。因此,長度為18個(gè)核堿基、具有4個(gè)非互補(bǔ)核堿基,所述非互補(bǔ)核堿基側(cè)接與靶核酸完全互補(bǔ)的兩個(gè)區(qū)域的反義化合物將與靶核酸具有77.8%的整體互補(bǔ)性且因此將屬于本發(fā)明的范圍。反義化合物與靶核酸的區(qū)域的互補(bǔ)性百分比可利用本領(lǐng)域中已知的BLAST程序(基本局部比對搜索工具)和PowerBLAST程序來常規(guī)地測定(Altschul 等,J.Mol.Biol., 1990, 215, 403410 ;Zhang Madden, GenomeRes.,1997,7,649656)。同源性、序列同一性或互補(bǔ)性百分比可通過例如使用Smith和Waterman 的算法(Adv.Appl.Math., 1981, 2, 482489)的 Gap 程序(Wisconsin SequenceAnalysis Package,針對 Unix 的版本 8,Genetics Computer Group, University ResearchPark, Madison ffis.)利用默認(rèn)設(shè)置來測定。
[0259]在某些實(shí)施方案中,本文所提供的反義化合物或其特定的部分與靶核酸或其特定的部分完全互補(bǔ)(即,100%互補(bǔ))。例如,反義化合物可與ApoCIII核酸或其靶區(qū)域或靶區(qū)段或靶序列完全互補(bǔ)。如本文所用,“完全互補(bǔ)”意為反義化合物的每個(gè)核堿基能夠與靶核酸的相應(yīng)的核堿基精確的堿基配對。例如,20個(gè)核堿基的反義化合物與400個(gè)核堿基長的靶序列完全互補(bǔ),只要存在與反義化合物完全互補(bǔ)的靶核酸的對應(yīng)的20個(gè)核堿基部分即可。完全互補(bǔ)還可關(guān)于第一和/或第二核酸的特定的部分來使用。例如,30個(gè)核堿基反義化合物的20個(gè)核堿基部分可以與400個(gè)核堿基長度的靶序列“完全互補(bǔ)”。若靶序列具有對應(yīng)的20個(gè)核堿基部分,其中每個(gè)核堿基與反義化合物的20個(gè)核堿基部分互補(bǔ),則30個(gè)核堿基寡核苷酸的20個(gè)核堿基部分與靶序列完全互補(bǔ)。同時(shí),視反義化合物的其余10個(gè)核堿基是否也與靶序列互補(bǔ)而定,整個(gè)30個(gè)核堿基反義化合物可能或可能不與靶序列完全互補(bǔ)。
[0260]非互補(bǔ)性核堿基的位置可在反義化合物的5’端或3’端?;蛘?,非互補(bǔ)性核堿基可在反義化合物的內(nèi)部位置。當(dāng)存在兩個(gè)或多個(gè)非互補(bǔ)性核堿基時(shí),其可以是連續(xù)的(即,連接的)或非連續(xù)的。在一個(gè)實(shí)施方案中,非互補(bǔ)性核堿基位于間隙聚體反義寡核苷酸的翼狀區(qū)段中。
[0261]在某些實(shí)施方案中,長度為或長度最多為12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)核堿基的反義化合物相對于靶核酸諸如ApoCIII核酸或其特定的部分包含不超過4個(gè)、不超過3個(gè)、不超過2個(gè)或不超過I個(gè)非互補(bǔ)性核堿基。[0262]在某些實(shí)施方案中,長度為或長度最多為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個(gè)核堿基的反義化合物相對于靶核酸諸如ApoCIII核酸或其特定的部分包含不超過6個(gè)、不超過5個(gè)、不超過4個(gè)、不超過3個(gè)、不超過2個(gè)或不超過I
個(gè)非互補(bǔ)性核堿基。
[0263]本文提供的反義化合物還包括與靶核酸的一部分互補(bǔ)的那些。如本文所用,“部分”指靶核酸的區(qū)域或區(qū)段中確定數(shù)目的連續(xù)的(即,連接的)核堿基?!安糠帧边€可指反義化合物的確定數(shù)目的連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方案中,反義化合物與靶區(qū)段的至少8個(gè)核堿基部分互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,反義化合物與靶區(qū)段的至少10個(gè)核堿基部分互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,反義化合物與靶區(qū)段的至少12個(gè)核堿基部分互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中,反義化合物與靶區(qū)段的至少15個(gè)核堿基部分互補(bǔ)。還考慮的是與靶區(qū)段的至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個(gè),或由這些值中的任何兩個(gè)界定的范圍內(nèi)的數(shù)目的核堿基部分互補(bǔ)的反義化合物。
[0264]同一性
[0265]本文提供的反義化合物還可與特定的核苷酸序列、SEQ ID NO或由特定的Isis編號表示的化合物的序列或其部分具有確定的同一性百分比。如本文所用,若具有相同的核堿基配對能力,則反義化合物與本文所公開的序列相同。例如,含有尿嘧啶以代替公開的DNA序列中的胸苷的RNA將會(huì)被認(rèn)為與該DNA序列是相同的,因?yàn)槟蜞奏ず托剀諆烧吲c腺嘌呤配對。還考慮了本文所描述的反義化合物的縮短的或延長的形式以及相對于本文所提供的反義化合物具有非相同的堿基的化合物。非相同的堿基可以是彼此相鄰的或散布在整個(gè)反義化合物中。根據(jù)相對與之作比較的序列具有相同的堿基配對的堿基的數(shù)目計(jì)算反義化合物的同一'I"生百分比。
[0266]在某些實(shí)施方案中,這些反義化合物或其部分與本文公開的反義化合物或SEQ IDNO或其一部分中的一個(gè)或多個(gè)具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性。
[0267]修飾
[0268]核苷是堿基-糖組合。核苷的核堿基(也稱作堿基)部分通常是雜環(huán)堿基部分。核苷酸是還包括與核苷的糖部分共價(jià)連接的磷酸基團(tuán)的核苷。對于包括戊呋喃糖基糖的那些核苷,磷酸基團(tuán)可與糖的2’、3’或5’羥基部分連接。通過相鄰的核苷相互的共價(jià)鍵合形成線性聚合的寡核苷 酸而形成寡核苷酸。在寡核苷酸結(jié)構(gòu)內(nèi),常涉及磷酸基團(tuán)形成寡核苷酸的核苷間鍵。
[0269]對反義化合物的修飾涵蓋對核苷間鍵、糖部分或核堿基的取代或改變。由于需要的性質(zhì)諸如,例如,增強(qiáng)的細(xì)胞攝入、對核酸靶標(biāo)的增強(qiáng)的親和力、在核酸酶的存在下增強(qiáng)的穩(wěn)定性或升高的抑制活性,修飾的反義化合物常優(yōu)于天然的形式。
[0270]還可采用化學(xué)修飾的核苷來升高縮短的或截短的反義寡核苷酸對于其靶核酸的結(jié)合親和力。因此,利用具有此類化學(xué)修飾的核苷的較短的反義化合物??色@得相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果O
[0271]修飾的核苷間鍵
[0272]RNA和DNA的天然存在的核苷間鍵是3’至5’磷酸二酯鍵。由于需要的性質(zhì)諸如,例如,增強(qiáng)的細(xì)胞攝入、對靶核酸的增強(qiáng)的親和力和在核酸酶的存在下增強(qiáng)的穩(wěn)定性,具有一個(gè)或多個(gè)修飾的,即,非天然存在的核苷間鍵的反義化合物常優(yōu)于具有天然存在的核苷間鍵的反義化合物而被選擇。
[0273]具有修飾的核苷間鍵的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷間鍵以及不具有磷原子的核苷間鍵。含核苷間鍵的代表性磷包括但不限于磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯和硫代磷酸酯。制備含磷鍵和含非磷鍵的方法是熟知的。
[0274]在某些實(shí)施方案中,靶向ApoCIII核酸的反義化合物包含一個(gè)或多個(gè)修飾的核苷間鍵。在某些實(shí)施方案中,修飾的核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。在某些實(shí)施方案中,反義化合物的每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯核苷間鍵。
[0275]修飾的糖部分
[0276]本發(fā)明的反義化合物可任選地含有其中糖基團(tuán)已被修飾的一個(gè)或多個(gè)核苷。此類糖修飾的核苷可賦予反義化合物增強(qiáng)的核酸酶穩(wěn)定性、升高的結(jié)合親和力或一些其它有利的生物性質(zhì)。在某些實(shí)施方案中,核苷包含經(jīng)化學(xué)修飾的呋喃核糖環(huán)部分。經(jīng)化學(xué)修飾的呋喃核糖環(huán)的例子包括但不限于取代基(包括5’和2’取代基團(tuán))的添加;非偕位環(huán)原子的橋連以形成雙環(huán)核酸(BNA);S、N(R)或C(R1) (R2) (R^R1和R2各自獨(dú)立地為HX1-C12烷基或保護(hù)基)對核糖基環(huán)氧原子的置換;和其組合。經(jīng)化學(xué)修飾的糖的例子包括,2’ -F-5’ -甲基取代的核苷(關(guān)于其它公開的5’、2’ -雙取代的核苷,參見,于8/21/08公布的PCT國際申請W02008/101157),或S對核糖基環(huán)氧原子的置換并在2’-位置具有另外的取代(參見,于2005年6月16日公開的美國專利申請US2005-0130923),或可選地,BNA的5’-取代(參見,于11/22/07公布的PCT國際申請W02007/134181,其中LNA被例如5’ -甲基或5’ -乙烯基所取代)。
[0277]具有修飾的糖部分的核苷的例子包括但不限于包含5’ -乙烯基、5’ -甲基(R 或 S)、4’ -S、2’ -F、2’ -0CH3、2’ -OCH2CH3,2j -OCH2CH2F 和 2’ -O(CH2)2OCH3 取代基的核苷。2’位置的取代基還可選自烯丙基、氨基、疊氮基、硫代、O-烯丙基、O-C1-Cltl烷基、0CF3、OCH2F, O(CH2)2SCH3^ O(CH2)2-O-N(Rm) (Rn)、O-CH2-C (=0) -N(Rm) (Rn)和O-CH2-C (=0) -N (R1) - (CH2) 2-N (Rm) (Rn),其中每個(gè)札、Rm和Rn獨(dú)立地為H或取代的或未取代的C1-C10 烷基。
[0278]如本文所用,“雙環(huán)核苷”指包含雙環(huán)糖部分的修飾的核苷。雙環(huán)核苷的例子包括但不限于在4’和2’核糖基環(huán)原子之間包含橋連基的核苷。在某些實(shí)施方案中,本文提供的反義化合物包括一個(gè)或多個(gè)包含4’至2’橋的雙環(huán)核苷。此類4’至2’橋接的雙環(huán)核苷的例子包括但不限于以下式中之一:4’ _(CH2)-0-2’ (LNA) ;4’ _(CH2)-S-2’ ;4’ -(CH2)2-0-2>(ENA) ;4,-CH(CH3)-0-2,和 4,-CH(CH2OCH3)-0-2’ 和其類似物(參見,于 2008 年 7 月 15 日公布的美國專利7, 399,845) ;4,-C(CH3) (CH3)-0-2,和其類似物(參見于2009年I月8日公開的國際申請W0/2009/006478) ;4’ -CH2-N(OCH3)-2’和其類似物(參見2008年12月11日公開的國際申請W0/2008/150729) ;4’-CH2-0-N(CH3)-2’(參見于2004年9月2日公開的美國專利申請US2004-0171570) ;4,-CH2-N(R)-0-2’,其中R是H、C1-C12烷基或保護(hù)基(參見,于2008年9月23日公布的美國專利7,427,672) ;4’-CH2-C(H) (CH3)-2’(參見,Chattopadhyaya 等,J.0rg.Chem.,2009,74,118-134);和 4,-CH2-C(=CH2)-2’ 和其類似物(參見,于2008年12月8日公開的國際申請W02008/154401)。
[0279]與雙環(huán)核苷相關(guān)的另外的報(bào)道還可見于公開的文獻(xiàn)中(參見,例如=Singh等,Chem.Commun., 1998, 4, 455-456 ;Koshkin 等,Tetrahedron,1998, 54,3607-3630 ;Wahlestedt 等,Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A., 2000, 97, 5633-5638 ;Kumar 等,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222 ;Singh 等,J.0rg.Chem.,1998,63,10035-10039 ;Srivastava 等,J.Am.Chem.Soc., 2007, 129(26) 8362-8379 ;Elayadi 等,Curr.0pinionInvest.Drugs, 2001, 2, 558-561 ;Braasch 等,Chem.Biol., 2001, 8, 1-7 ;和 Orum 等,Curr.0pinion Mol.Ther.,2001,3,239-243 ;美國專利第 6,268,490 號;第 6,525,191 號;第6,670,461 號;第 6,770,748 號;第 6,794,499 號;第 7,034,133 號;第 7,053,207 號;第7,399,845號;第7,547,684號和第7,696,345號;美國專利公開第US2008-0039618號;第US2009-0012281 號;美國專利序列號 60/989,574 ;61/026,995 ;61/026,998 ;61/056,564 ;61/086,231 ;61/097,787 和 61/099,844 ;公開的 PCT 國際申請 W01994/014226 ;W02004/106356 ;W02005/021570 ;W02007/134181 ;W02008/150729 ;W02008/154401 和W02009/006478。前述雙環(huán)核苷的每一個(gè)可被制備為具有一個(gè)或多個(gè)立體化學(xué)糖構(gòu)型,包括例如,a -L-呋喃核糖和β -D-呋喃核糖(參見于1999年3月25日作為W099/14226公開的 PCT 國際申請 PCT/DK98/00393)。
[0280]在某些實(shí)施方案中,BNA核苷的雙環(huán)糖部分包括但不限于在戊呋喃糖基糖部分的4’和2’位置之間具有至少一個(gè)橋連基的化合物,其中所述橋連基獨(dú)立地包含I個(gè)或從2個(gè)至4個(gè)連接的基團(tuán),所述連接的基團(tuán)獨(dú)立地選自-[C (Ra) (Rb)Jn-,-C (Ra) =C (Rb) -、-C (Ra) =N-、-C (=0) -、-C (=NRa) -、-C (=S) -、-O-、-Si (Ra) 2_、-S (=0) χ-和-N (Ra)-;
[0281]其中:
[0282]x 是 0、1 或 2;
[0283]n 是 1、2、3 或 4;
[0284]每個(gè)艮和Rb獨(dú)立地為H、保護(hù)基、羥基、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C2tl芳基、取代的C5-C2tl芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、C5-C7脂環(huán)基、取代的C5-C7脂環(huán)基、鹵素、OJ1^NJ1J2,SJ1、NpCOOJ1、酰基(c=(=0)-H)書、取代的酰基、0隊(duì)磺?;?S(=0)O2-J1)或硫氧基(S(=O)-J1);且
[0285]每個(gè)J1和J2獨(dú)立地為HX1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C2tl芳基、取代的C5-C2tl芳基、?;?C(=0)-H)、取代的?;?、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、C1-C12氨基烷基、取代的C1-C12氨基烷基或保護(hù)基。
[0286]在某些實(shí)施方案中,雙環(huán)糖部分的橋連基是-[C(Ra) (Rb) ]n->-[C(Ra) (Rb)Jn-O-,-C(RaRb) -N (R) -O-或-C (RaRb) -O-N (R)-。在某些實(shí)施方案中,橋連基是 4 ’ _CH2_2 ’、4 ’ - (CH2) 2_2 ’、4,_ (CH2) 3_2,、4’ _CH2_0_2,、4,_ (CH2) 2_0_2,、4,_CH2_0_N(R) _2’ 和 4,_CH2_N(R) _0_2,_,其中每個(gè)R獨(dú)立地為H、保護(hù)基或C1-C12烷基。
[0287]在某些實(shí)施方案中,雙環(huán)核苷進(jìn)一步由同分異構(gòu)構(gòu)型定義。例如,含4’-2’亞甲基-氧基橋連基的核苷可以為a-L構(gòu)型或β-D構(gòu)型。先前,已將a-L-亞甲基氧基(4,-CH2-0-2’ )BNA摻入到顯示反義活性的反義寡核苷酸中(Frieden等.,Nucleic AcidsResearch, 2003, 21, 6365-6372)。
[0288]在某些實(shí)施方案中,雙環(huán)核苷包括但不限于如以下所描述的㈧a-L-亞甲基氧基(4,-CH2-0-2’)BNA、⑶ β -D-亞甲基氧基(4,-CH2-0-2’)BNA、(C)亞乙基氧基(4,- (CH2) 2-0-2,)BNA、(D)氨基氧基(4,-CH2-O-N (R)-2 ’ )BNA、(E)氧氨基(4,-CH2-N (R)-0-2’)BNA、(F)甲基(亞甲基氧基)(4,-CH (CH3)-0-2,)BNA、(G)亞甲基-硫代(4,-CH2-S-2,)BNA、(H)亞甲基-氨基(4,-CH2-N (R)-2’)BNA、(I)甲基碳環(huán)(4,-CH2-CH(CH3)-2,)BNA 和(J)丙烯基碳環(huán)(4,-(CH2)3_2,)BNA。
[0289]
P^0 ^ ^0Vbx ^0Vbx
^bx 好(9
(A)(B)(C)
Bx 丨1^0 Bx 丨一\ OvyBx
識 5/ ,? 、\vvW


TTi
(D)(E)(F)
h O BxX.0 Bx 丨^Bx
姑^ I
~(G)~xR~CH3




(1)
卜 VVbx
P
~(J)
[0290]其中Bx是堿基部分且R獨(dú)立地為H、保護(hù)基或C1-C12烷基。
[0291]在某些實(shí)施方案中,提供具有式I的雙環(huán)核苷:
[0292]
【權(quán)利要求】
1.一種升高HDL水平或改善TG與HDL的比率的方法,其通過以下來進(jìn)行: (a)選擇需要其的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向Ap0CIII的化合物, 由此使HDL水平升高或TG與HDL的比率得到改善。
2.—種在動(dòng)物中預(yù)防、延遲或改善心血管疾病、疾患、病癥或其癥狀或心血管疾病、疾患、病癥或其癥狀的發(fā)作的方法,其包括: (a)選擇需要其的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向Ap0CIII的化合物, 從而在所述動(dòng)物中升高HDL水平,其中所述心血管疾病、疾患、病癥或癥狀或所述心血管疾病、疾患、病癥或其癥狀得以預(yù)防、延遲或改善。
3.—種在動(dòng)物中降低心血管疾病、疾患、病癥或癥狀的風(fēng)險(xiǎn)的方法,其包括: (a)選擇需要其的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向Ap0CIII的化合物, 從而在所述動(dòng)物中升高HDL水 平,其中所述心血管疾病、疾患、病癥或其癥狀的風(fēng)險(xiǎn)被降低。
4.一種通過向動(dòng)物施用靶向Ap0CIII的化合物來降低CETP水平的方法,其中CETP水平被降低。
5.一種升高ApoAl、P0N1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率和/或HDL的方法,其包括: (a)選擇需要其的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向Ap0CIII的化合物, 其中ΑροΑ1、Ρ0Ν1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率和/或HDL被升高。
6.一種預(yù)防、延遲或改善胰腺炎的方法,其包括: (a)選擇患有胰腺炎或處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向Ap0CIII的化合物, 其中所述胰腺炎得以預(yù)防、延遲或改善。
7.一種預(yù)防、延遲或改善胰腺炎的方法,其包括: (a)選擇患有胰腺炎或處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向Ap0CIII的化合物, 從而升高乳糜微粒清除率,其中所述胰腺炎得以預(yù)防、延遲或改善。
8.一種靶向ApoCIII的化合物,所述化合物通過以下步驟而用于升高HDL水平或改善TG與HDL的比率: (a)選擇需要其的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物, 由此使HDL水平升高或TG與HDL的比率得到改善。
9.一種祀向ApoCIII的化合物,所述化合物用于在動(dòng)物中預(yù)防、延遲或改善心血管疾病、疾患、病癥或其癥狀或心血管疾病、疾患、病癥或其癥狀的發(fā)作,包括: (a)選擇需要其的動(dòng)物,和(b)向所述動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物, 從而在所述動(dòng)物中升高HDL水平,其中所述心血管疾病、疾患、病癥或癥狀或所述心血管疾病、疾患、病癥或其癥狀的發(fā)作得以預(yù)防、延遲或改善。
10.一種靶向ApoCIII的化合物,所述化合物用于在動(dòng)物中降低心血管疾病、疾患、病癥或癥狀的風(fēng)險(xiǎn),包括: (a)選擇需要其的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物, 從而在所述動(dòng)物中升高HDL水平,其中所述心血管疾病、疾患、病癥或其癥狀的風(fēng)險(xiǎn)被降低。
11.一種靶向Ap0CIII的化合物,所述化合物用于通過向動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物來降低CETP水平,其中CETP水平被降低。
12.—種靶向ApoCIII的化合物,所述化合物用于升高ΑροΑ1、Ρ0Ν1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率和/或HDL,包括: (a)選擇需要其的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物, 其中ΑροΑ1、Ρ0Ν1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率和/或HDL被升高。
13.—種祀向ApoCIII的化合物,所述化合物用于預(yù)防、延遲或改善胰腺炎,包括: (a)選擇患有胰腺炎或處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物, 其中所述胰腺炎得以預(yù)防、延遲或改善。
14.一種祀向ApoCIII的化合物,所述化合物用于預(yù)防、延遲或改善胰腺炎,包括: (a)選擇患有胰腺炎或處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物,和 (b)向所述動(dòng)物施用靶向ApoCIII的化合物, 從而升高乳糜微粒清除率,其中所述胰腺炎得以預(yù)防、延遲或改善。
15.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中所述動(dòng)物患有高甘油三酯血癥或處于高甘油三酯血癥風(fēng)險(xiǎn)中。
16.如權(quán)利要求15所述的方法或用途,其中所述動(dòng)物具有介于100-200mg/dL之間、100-300mg/dL 之間、100_400mg/dL 之間、100_500mg/dL 之間、200_500mg/dL 之間、300-500mg/dL 之間、400_500mg/dL 之間、500_1000mg/dL 之間、600_1000mg/dL 之間、700-1000mg/dL 之間、800_1000mg/dL 之間、900_1000mg/dL 之間、500_1500mg/dL 之間、1000-1500mg/dL 之間、100_2000mg/dL 之間、150_2000mg/dL 之間、200_2000mg/dL 之間、300-2000mg/dL 之間、400_2000mg/dL 之間、500_2000mg/dL 之間、600_2000mg/dL 之間、700-2000mg/dL 之間、800_2000mg/dL 之間、900_2000mg/dL 之間、1000_2000mg/dL 之間、1100-2000mg/dL 之間、1200_2000mg/dL 之間、1300_2000mg/dL 之間、1400_2000mg/dL 之間或1500-2000mg/dL之間的甘油三酯水平。
17.如權(quán)利要求15所述的方法或用途,其中所述高甘油三酯血癥是FredricksonII型、IV型或V型。
18.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中所述動(dòng)物具有導(dǎo)致高甘油三酯血癥的遺傳缺陷。
19.如權(quán)利要求18所述的方法或用途,其中所述遺傳缺陷是雜合的LPL缺陷或ApoCI 11多態(tài)型。
20.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中所述動(dòng)物具有>500mg/dL的甘油三酯水平和雜合的LPL缺陷。
21.如權(quán)利要求5、7、12或14所述的方法或用途,其中所述升高的乳糜微粒清除率增強(qiáng)了餐后甘油三酯的清除和/或降低了餐后甘油三酯。
22.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中ApoCIII具有如SEQID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核酸序列。
23.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中所述靶向ApoCIII的化合物是修飾的寡核苷酸。
24.如權(quán)利要求23所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:3的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列。
25.如權(quán)利要求23所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQID NO:1或SEQ ID NO: 2的核堿基序列80%互補(bǔ)。
26.如權(quán)利要求23所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQID NO:1或SEQ ID NO:2的核堿基序列90%互補(bǔ)。
27.如權(quán)利要求23所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQID NO:1或SEQ ID N0:2的核堿基序列100%互補(bǔ)。
28.如權(quán)利要求23-27中任一項(xiàng)所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸由單鏈的修飾的寡核苷酸組成。
29.如權(quán)利要求23-28中任一項(xiàng)所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成。
30.如權(quán)利要求29所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。
31.如權(quán)利要求23-30中任一項(xiàng)所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷間鍵是修飾的核苷間鍵。
32.如權(quán)利要求31所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸的每個(gè)修飾的核苷間鍵是硫代磷酸酯核苷間鍵。
33.如權(quán)利要求23-32中任一項(xiàng)所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含修飾的糖。
34.如權(quán)利要求33所述的方法或用途,其中至少一個(gè)修飾的糖是雙環(huán)糖。
35.如權(quán)利要求33所述的方法或用途,其中至少一個(gè)修飾的糖包含2’-0_甲氧基乙基。
36.如權(quán)利要求23-33中任一項(xiàng)所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含修飾的核堿基。
37.如權(quán)利要求36所述的方法或用途,其中所述修飾的核堿基是5-甲基胞嘧啶。
38.如權(quán)利要求23所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸包含: (a)間隙區(qū)段,其由連接的脫氧核苷組成; (b)5’翼狀區(qū)段,其由連接的核苷組成;(c)3’翼狀區(qū)段,其由連接的核苷組成; 其中所述間隙區(qū)段緊鄰所述5’翼狀區(qū)段和所述3’翼狀區(qū)段定位且位于兩者之間,且其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含修飾的糖。
39.如權(quán)利要求23所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸包含: (a)間隙區(qū)段,其由8-12個(gè)連接的脫氧核苷組成; (b)5’翼狀區(qū)段,其由1-5個(gè)連接的核苷組成; (c)3’翼狀區(qū)段,其由1-5個(gè)連接的核苷組成; 其中所述間隙區(qū)段緊鄰所述5’翼狀區(qū)段和所述3’翼狀區(qū)段定位且位于兩者之間,其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-0_甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。
40.如權(quán)利要求23所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸包含: (a)間隙區(qū)段,其由10個(gè)連接的脫氧核苷組成; (b)5’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; (c)3’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; 其中所述間隙區(qū)段緊鄰所述5’翼狀區(qū)段和所述3’翼狀區(qū)段定位且位于兩者之間,且其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵。
41.如權(quán)利要求38-40所述的方法或用途,其中所述修飾的寡核苷酸具有包含SEQIDNO:3的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列。
42.一種在動(dòng)物中降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)的方法,其包括:向所述動(dòng)物施用治療有效量的包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQ ID ΝΟ:1或SEQ ID NO: 2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ),且其中施用于所述動(dòng)物的所述化合物通過升高HDL水平來降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。
43.一種在動(dòng)物中降低心血管疾病或胰腺炎的風(fēng)險(xiǎn)的方法,其包括:向所述動(dòng)物施用治療有效量的包含修飾的寡核苷酸的化合物,所述修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成并具有包含SEQ ID N0:3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列,且其中施用于所述動(dòng)物的所述化合物通過升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率來降低心血管疾病或胰腺炎的風(fēng)險(xiǎn)。
44.一種在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,其包括:向所述動(dòng)物施用治療有效量的包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ),且其中施用于所述動(dòng)物的所述化合物通過升高HDL水平而在所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少所述心血管疾病的至少一個(gè)癥狀。
45.一種在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,其包括:向所述動(dòng)物施用治療有效量的包含修飾的寡核苷酸的化合物,所述修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成并具有包含SEQ ID NO: 3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列,且其中施用于所述動(dòng)物的所述化合物通過在所述動(dòng)物中升高HDL水平而在所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少所述心血管疾病的至少一個(gè)癥狀。
46.一種包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ),所述化合物用于在動(dòng)物中降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn),且其中所述化合物通過升高HDL水平來降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。
47.一種包含修飾的寡核苷酸的化合物,其中所述修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成并具有包含SEQ ID NO:3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列,所述化合物用于在動(dòng)物中降低心血管疾病或胰腺炎的風(fēng)險(xiǎn),其中所述化合物通過升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率來降低心血管疾病或胰腺炎的風(fēng)險(xiǎn)。
48.一種包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ),所述化合物用于在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀,且其中所述化合物通過升高HDL水平而在所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少所述心血管疾病的至少一個(gè)癥狀。
49.一種包含修飾的寡核苷酸的化合物,其中所述修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成并具有包含SEQ ID NO:3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列,所述化合物用于在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀,其中所述化合物通過在所述動(dòng)物中升高HDL水平而在所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少所述心血管疾病的至少一個(gè)癥狀。
50.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中所述癥狀可以是以下中的任一項(xiàng),但不限于:心絞痛;胸痛;氣短;心悸;虛弱;眩暈;惡心;出汗;心動(dòng)過速;心動(dòng)過緩;心律失常;房顫;下肢腫脹;發(fā)紺;疲乏;昏厥;臉麻木;四肢麻木;跛行或肌肉痙攣;腹脹;或發(fā)Jyti ο
51.一種在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率的方法,所述方法通過向所述動(dòng)物施用由SEQ ID NO: 3 組成的化合物以在所述動(dòng)物中升高所述HDL水平和/或改善TG與HDL的所述比率來進(jìn)行。
52.—種在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,所述方法通過向所述動(dòng)物施用由SEQ ID N0:3組成的化合物以通過在所述動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而在所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少所述心血管疾病的至少一個(gè)癥狀來進(jìn)行。
53.一種在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率的方法,所述方法通過向所述動(dòng)物施用具有SEQ ID NO:3的序列的修飾的寡核苷酸來進(jìn)行,其中所述修飾的寡核苷酸包含: (a)間隙區(qū)段,其由10個(gè)連接的脫氧核苷組成; (b)5’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; (c)3’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; 其中所述間隙區(qū)段緊鄰所述5’翼狀區(qū)段和所述3’翼狀區(qū)段定位且位于兩者之間,其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’ -O-甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’ -甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵,其中所述修飾的寡核苷酸在所述動(dòng)物中升高所述HDL水平和/或改善TG與HDL的所述比率。
54.—種在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,所述方法通過向所述動(dòng)物施用具有SEQ ID NO:3的序列的修飾的寡核苷酸來進(jìn)行,其中所述修飾的寡核苷酸包含: (a)間隙區(qū)段,其由10個(gè)連接的脫氧核苷組成; (b)5’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; (c)3’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; 其中所述間隙區(qū)段緊鄰所述5’翼狀區(qū)段和所述3’翼狀區(qū)段定位且位于兩者之間,其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’ -O-甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’ -甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵,其中所述修飾的寡核苷酸通過在所述動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而在患有所述心血管疾病的所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少至少一個(gè)癥狀。
55.一種在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率的方法,所述方法通過向所述動(dòng)物施用包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物以在所述動(dòng)物中升高所述HDL水平和/或改善TG與HDL的所述比率來進(jìn)行,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ)。
56.—種在動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀的方法,所述方法通過向所述動(dòng)物施用包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物以通過升高所述動(dòng)物的所述HDL水平和/或改善TG與HDL的所述比率而在所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少所述心血管疾病的至少一個(gè)癥狀來進(jìn)行,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQID NO:1或SEQ ID NO: 2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ)。
57.一種降低CETP水平的方法,所述方法通過向動(dòng)物施用具有包含SEQ ID N0:3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列的化合物來進(jìn)行,其中CETP水平被降低。
58.一種升高ApoAl、P0N1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL的方法,所述方法通過向動(dòng)物施用具有包含SEQ ID NO: 3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列的化合物來進(jìn)行,其中ApoAl、PONl、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL被升高。
59.一種降低CETP水平的方法,所述方法通過向動(dòng)物施用具有由SEQ ID N0:3組成的核堿基序列的化合物來進(jìn)行,其中CETP水平被降低。
60.一種升高ApoAl、P0N1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL的方法,所述方法通過向動(dòng)物施用由SEQ ID NO:3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基組成的化合物來進(jìn)行,其中ApoAl、P0N1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL被升高。
61.一種由SEQ ID NO: 3組成的化合物,所述化合物用于在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率。
62.一種由SEQ ID NO:3組成的化合物,所述化合物用于通過在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而在所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀。
63.一種具有SEQ ID NO:3的序列的修飾的寡核苷酸,其中所述修飾的寡核苷酸包含: (a)間隙區(qū)段,其由10個(gè)連接的脫氧核苷組成; (b)5’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; (c)3’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; 其中所述間隙區(qū)段緊鄰所述5’翼狀區(qū)段和所述3’翼狀區(qū)段定位且位于兩者之間,其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-0_甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵,所述修飾的寡核苷酸用于在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率。
64.一種具有SEQ ID NO:3的序列的修飾的寡核苷酸,其中所述修飾的寡核苷酸包含: (a)間隙區(qū)段,其由10個(gè)連接的脫氧核苷組成; (b)5’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; (c)3’翼狀區(qū)段,其由5個(gè)連接的核苷組成; 其中所述間隙區(qū)段緊鄰所述5’翼狀區(qū)段和所述3’翼狀區(qū)段定位且位于兩者之間,其中每個(gè)翼狀區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-0_甲氧基乙基糖,其中每個(gè)胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶,且其中每個(gè)核苷間鍵是硫代磷酸酯鍵,所述修飾的寡核苷酸用于通過在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而在所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀。
65.一種包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物,所述化合物用于在動(dòng)物中升高HDL水平和/或改善TG與HDL的比率,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQID NO:1或SEQ ID NO: 2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ)。
66.一種包含由12至30個(gè)連接的核苷組成的修飾的寡核苷酸的化合物,所述化合物用于通過升高動(dòng)物的HDL水平和/或改善TG與HDL的比率而在所述動(dòng)物中預(yù)防、治療、改善或減少心血管疾病的至少一個(gè)癥狀,其中所述修飾的寡核苷酸與如SEQ ID NO:1或SEQ IDNO: 2中所示的ApoCIII核酸互補(bǔ)。
67.一種具有包含SEQ ID N0:3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列的化合物,所述化合物用于在動(dòng)物中降低CETP水平。
68.一種具有包含SEQ ID N0:3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基的核堿基序列的化合物,所述化合物用于在動(dòng)物中升高ApoAl、P0N1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL。
69.一種具有由SEQ ID NO:3組成的核堿基序列的化合物,所述化合物用于在動(dòng)物中降低CETP水平。
70.一種由SEQ ID N0:3的至少8個(gè)連續(xù)的核堿基組成的化合物,所述化合物用于在動(dòng)物中升高ApoAl、P0N1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL。
71.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中所述動(dòng)物是人。
72.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中所述心血管疾病是動(dòng)脈瘤、心絞痛、心律失常、動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管疾病、冠心病、高血壓、血脂異常、高脂血癥、高甘油三酯血癥或高膽固醇血癥。
73.如權(quán)利要求72所述的方法或用途,其中所述血脂異常是乳糜微粒血癥。
74.如權(quán)利要求73所述的方法或用途,其中所述動(dòng)物處于胰腺炎風(fēng)險(xiǎn)中。
75.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中降低ApoCIII水平可預(yù)防、治療或改善胰腺炎。
76.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中降低ApoCIII水平可增強(qiáng)餐后甘油三酯的清除。
77.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中降低ApoCIII水平可降低餐后甘油三酯。
78.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中所述化合物是胃腸外施用的。
79.如權(quán)利要求78所述的方法或用途,其中所述胃腸外施用是皮下施用。
80.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其還包含第二藥劑。
81.如權(quán)利要求80所述的方法或用途,其中所述第二藥劑選自=Ap0CIII降低劑、膽固醇降低劑、非HDL脂質(zhì)降低劑、LDL降低劑、TG降低劑、膽固醇降低劑、HDL升高劑、魚油、煙酸、貝特、抑制素、DCCR (二氮嗪的鹽)、降糖劑或抗糖尿病劑。
82.如權(quán)利要求81所述的方法或用途,其中所述動(dòng)物不能對最大耐受劑量的所述第二藥劑起反應(yīng)。
83.如權(quán)利要求80所述的方法或用途,其中所述第二藥劑是與所述化合物同時(shí)施用或相繼施用的。
84.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其中所述化合物是鹽形式。
85.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法或用途,其還包含藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
【文檔編號】A61P3/06GK103547271SQ201280024206
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2012年4月27日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月27日
【發(fā)明者】A·慕利克, 羅桑尼·M·克魯克, 馬克·J·格雷厄姆, K·W·多比, T·A·貝爾, R·李 申請人:Isis制藥公司
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