專利名稱：一種雞傳染性支氣管炎疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于家禽疫苗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雞傳染性支氣管炎活疫苗。
背景技術(shù)：
雞傳染性支氣管炎(IB)是由傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種急性高度接觸性呼吸道疾病，以氣管啰音、咳嗽、打噴嚏；幼雞流鼻涕，產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋量減少和蛋的品質(zhì)下降為特征；患病的雞常因呼吸道、腎臟或消化道感染而引起死亡。本病于1931年首先由Schalk等報道于美國，1936年由Beach和Hudson確定本病的病原為病毒。至今本病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，給養(yǎng)雞業(yè)帶來嚴重危害。在我國，鄺榮祿(1972)在廣東首次發(fā)現(xiàn)本病；到上世紀70年代后期，鄭福榮等在杭州、吳志達等在上海、艾國光等在北京、辛朝安等在廣 州分別自種用雞群中分離出IBV。榮駿弓等(1997)在患有腺胃腫大的病雞中分離到腺胃型雞傳染性支氣管炎病毒D971株，用該毒株回歸SPF雛雞引起典型腎炎及腺胃炎病變，并從人工感染SPF雛雞中回收到雞傳染性支氣管炎病毒。王玉東、范根成等(1998)在山東省某患有腺胃腫大發(fā)病雞群中采集病料，通過雞胚連續(xù)傳5 6代，經(jīng)電鏡觀察、動物回歸和免疫保護試驗、用氣管環(huán)組織培養(yǎng)進行理化特性測定、毒價測定、中和試驗等，證明目前流行的以腺胃腫大為主要特征的傳染病的病原是冠狀病毒，將該毒株命名為腺胃型雞傳染性支管炎病毒QX株。在歐洲，首先分別于2001年俄羅斯東部及2002年俄羅斯西部分離到IBV類QX株(Bochkov etal，2006)，該毒株能引起雞患腺胃炎、腎炎，與QX株相似。從2003年起許多歐洲國家相繼分離到IBV類QX株包括德國、荷蘭、比利時、法國、意大利(Worthington etal, 2008 ；Monne et al, 2008)、波蘭(Domanska-Blicharz et al, 2006)、英國(Gough etal，2008)和西班牙(Dolz et al，2009)。各種相關(guān)研究報道表明整個歐洲地區(qū)都有類QX株病毒的存在。顯然，IB類QX株對于禽養(yǎng)殖來說是很大的威脅，而目前尚無專門針對IB類QX株的疫苗。國外學(xué)者將類QX毒株在雞胚上連續(xù)傳代80余代致弱的IB L1148毒株制成IB類QX株的活疫苗，并進行相關(guān)的效力和安全性試驗。表明對于SPF雞亦或是攜有母源抗體的雞，經(jīng)IB LI 148株制成的活苗免后對類QX株D388的攻毒都能提供有效保護。免疫接種是防治雞傳染性支氣管炎的最有效手段。目前，國內(nèi)外用于預(yù)防腺胃型傳染性支氣管炎疫苗的研究較多，但均尚未商品化。同時由于IBV血清型眾多，市場上一直未有交叉保護力好的弱毒株，腺胃型IB得不到有效控制。因此，篩選獲得新的具有較好保護力的IB弱毒株，并制備疫苗就顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種雞傳染性支氣管炎活疫苗，即由新的腺胃型雞傳染性支氣管炎弱毒疫苗株作為抗原制備的疫苗，本發(fā)明的疫苗對目前中國流行腺胃型雞傳染性支氣管炎病毒的攻擊能夠提供良好的免疫保護效力。本發(fā)明的疫苗，由抗原和疫苗輔劑組成，其中抗原為保藏編號為CGMCCNo. 6752的雞傳染性支氣管炎病毒株。上述的疫苗的制備方法，是將雞傳染性支氣管炎病毒接種雞胚后，收獲胚液獲得病毒擴大培養(yǎng)液；然后將雞傳染性支氣管炎病毒擴大培養(yǎng)液加入疫苗輔劑制成的。所述的疫苗輔劑為蔗糖和明膠，其在疫苗中的終濃度分別為5%和1%。本發(fā)明制備的疫苗可預(yù)防腺胃型雞傳染性支氣管炎。而且，組成本發(fā)明篩選的雞傳染性支氣管炎病毒為多次傳代獲得的弱毒株，減少了現(xiàn)有傳染性支氣管炎病毒作為抗原所帶來的副作用。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明精神和范圍的前提下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍。一、本發(fā)明所用到的雞傳染性支氣管炎弱毒YB160株的篩選使用l(Tll日齡SPF雞胚對傳染性支氣管炎強毒進行連續(xù)傳代致弱，每代通過尿囊腔接種4枚SPF雞胚，連傳至160代，進行致弱評價。取10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160傳代接種的病毒株感染I日齡的SPF雞。結(jié)果從第80代病毒株開始無死亡雞，第90代毒株接種雞開始無眼觀病變，第130代接種雞開始無組織學(xué)病變。說明IBV第130代已經(jīng)完全致弱，對雞只具有良好的安全性。同時用本發(fā)明毒株130、140、150160代毒分別免疫3日齡SPF雞,于免疫后14日，用同源強毒攻擊。免疫組分毒率0/10 1/10，保護率9/10 10/10，對照組分毒率10/10。結(jié)果說明本發(fā)明毒株具有良好的免疫保護性。為了便于同以前毒株區(qū)分，將傳代160代弱化的雞胚毒定為原始種子El代，并將該致弱毒株命名為ΥΒ160株。本發(fā)明篩選的雞傳染性支氣管炎病毒(Avian infectiousbronchitis virus) YB160株，該病毒株于2012年10月31日保藏在北京市朝陽區(qū)北辰西 路I號院3號中國科學(xué)院中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 6752。二、IBV YB160株的安全性檢測毒力返強試驗將保藏編號為CGMCC No. 6752的弱毒株El代(YB160株)在SPF雞體上人工感染和同居感染分別連續(xù)傳5代(E2-E5)，試驗雞均一切正常，接種后5天剖檢氣管、腺胃、腎臟等均未見肉眼病理變化；試驗發(fā)現(xiàn)病毒分離氣管棉拭子和腺胃第4代起分不到病毒，腎臟從第3代起分不到病毒，肝臟從第2代起分不到病毒。試驗雞氣管、腺胃、腎臟等組織勻衆(zhòng)中分尚不出病毒。器官病毒分尚率不同，氣管、腺胃病毒分尚率較聞，說明該毒株主要在氣管、腺胃兩個器官增殖。隨著代次的增加病毒向外排泄也逐漸減少，分毒率逐漸降低。水平感染試驗也出現(xiàn)人工感染同樣的規(guī)律，只是同居感染的同代次分毒率相對人工感染低。以上試驗結(jié)果證明該毒株無論人工感染還是水平傳播感染在雞體連續(xù)傳代，均未見毒力返強現(xiàn)象，遺傳性穩(wěn)定，符合雞傳染性支氣管炎弱毒疫苗株無毒力返強的標準，可以作為疫苗毒株進行商品化開發(fā)。IBV YB160株毒種安全性試驗取 YB160 株的E2、E4、E7、E10、E13 代毒種以 IO5 ciEID5tl滴鼻I滴(約O. 03ml)，分別接種1、3日齡SPF雞，連續(xù)觀察10日。結(jié)果接種雞只均健活，均無任何異常反應(yīng)。結(jié)果見表1、2。
表IIBV YB160株毒種的安全性試驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種雞傳染性支氣管炎活疫苗，由抗原和疫苗凍干保護劑組成，其中抗原為保藏編號為CGMCC No. 6752的雞傳染性支氣管炎病毒株。
2.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的疫苗凍干保護劑為蔗糖和明膠，其在疫苗中的終濃度分別為5%和1%。
3.權(quán)利要求1所述的疫苗的制備方法，是將雞傳染性支氣管炎病毒接種雞胚后，收獲胚液獲得病毒擴大培養(yǎng)液；將雞傳染性支氣管炎病毒擴大培養(yǎng)液加入疫苗凍干保護劑制成的。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述的疫苗凍干保護劑為蔗糖和明膠，其在疫苗中的終濃度分別為5%和1%。
5.權(quán)利要求1所述的疫苗用于預(yù)防雞傳染性支氣管炎病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雞傳染性支氣管炎活疫苗，由抗原和疫苗輔劑組成，其中抗原為保藏編號為CGMCC No.6752的雞傳染性支氣管炎病毒株。本發(fā)明制備的疫苗可預(yù)防腺胃型雞傳染性支氣管炎。而且，組成本發(fā)明篩選的雞傳染性支氣管炎病毒為多次傳代獲得的弱毒株，減少了現(xiàn)有傳染性支氣管炎病毒作為抗原所帶來的副作用。
文檔編號A61K39/215GK103007272SQ20121059449
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者宋新宇, 范根成, 杜元釗, 王紅, 李曉林, 郭偉偉, 馬爽 申請人:青島易邦生物工程有限公司