藥物載體及其制備方法和藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種藥物載體及其制備方法和藥物組合物及其應(yīng)用。本發(fā)明所述的介孔二氧化硅包金納米棒(Au@SiO2)載體的特征是金納米棒外包裹著一層介孔二氧化硅殼。本發(fā)明中Au@SiO2載體是以十六烷基三甲基溴化銨包裹的金納米棒為原料，由正硅酸酯水解聚合制備而成，可以包載各種藥物及探針分子，并將之輸運到疾病部位，實現(xiàn)靶向治療。本發(fā)明中的Au@SiO2載體，或其載藥之后的納米粒子，在吸收近紅外激光后，能夠放射出熒光并將部分光能轉(zhuǎn)化為熱量，因此能夠應(yīng)用于生物成像，光控藥物釋放（化療）和熱療。本發(fā)明的Au@SiO2載體制備工藝簡單，其具備的多項腫瘤診療功能可以聯(lián)合使用，有利于克服單一腫瘤診療方法的缺陷，尤其適合應(yīng)用于有復雜需要的腫瘤的診斷和治療。
【專利說明】藥物載體及其制備方法和藥物組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物載體及其制備方法和藥物組合物及其應(yīng)用。具體地，涉及一種藥物載體及其制備方法、一種在所述藥物載體上負載了藥物的藥物組合物以及所述藥物載體和所述藥物組合物在制備用于診斷和/或治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]傳統(tǒng)的癌癥治療方法，由于缺乏針對癌組織的靶向性，發(fā)揮治療效果的同時也會傷害到非病變組織，往往具有很大的副作用。近些年來，納米技術(shù)在增強抗癌藥物的藥理活性及降低毒性方面表現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢。癌變組織中由于具有血管豐富、血管壁間隙較寬、結(jié)構(gòu)完整性差以及淋巴回流缺失的特點，而使大分子和脂質(zhì)顆粒具有高通透性和滯留性效應(yīng)。納米藥物也可以利用此效應(yīng)，通過血液循環(huán)選擇性地富集于癌組織周圍(稱為“被動靶向性”)，這樣能夠有效地提高抗癌藥物活性并降低副作用。除此之外，帶有靶向分子的納米藥物還可以特異性地識別癌細胞或癌組織，通過主動靶向增強抗癌的效果。納米技術(shù)用于腫瘤的臨床治療已于2005年被美國國立衛(wèi)生研究院列為未來10年納米醫(yī)學發(fā)展的戰(zhàn)略目標之一 O
[0003]在最近幾年納米材料應(yīng)用于癌癥診療研究的探索中，金納米顆粒表現(xiàn)出令人矚目的性質(zhì)和優(yōu)勢。由于其可調(diào)節(jié)的表面等離子共振效應(yīng)，金納米粒子不僅在細胞成像方面具有廣闊的應(yīng)用前景，還可以通過光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)在激光照射時成為局域化的熱源。產(chǎn)生的熱量一方面可以用來做癌癥熱療，另一方面當納米粒子用作抗癌藥物載體的時候，也可以觸發(fā)藥物的釋放，即實現(xiàn)化療。因此，金納米粒子有可能在一個載體中同時實現(xiàn)成像、化療和熱療三種癌癥診療功能。另外，其中的各項功能還可能協(xié)同作用，產(chǎn)生新的治療模式，比如成像介導的藥物傳輸和熱療，或者化療和熱療共同起作用的組合治療。構(gòu)建這種多功能的納米載體有利于對需要復雜處理的癌癥進行針對性的治療。
[0004]相對于球形金納米粒子而言，金納米棒的縱向表面等離子共振效應(yīng)可以方便地通過改變其長徑比而進行控制，使得其最大吸收波長位于近紅外區(qū)。由于近紅外光能夠穿透較深的人體組織，所以通過外部激光照射而實現(xiàn)各種功能的金納米棒尤其適用于乳腺癌等淺表性癌癥的診斷和治療。
[0005]盡管金納米棒在癌癥的診斷和治療中有著良好的應(yīng)用前景，但仍然面臨一個問題:金納米棒不易攜載藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中金納米棒不易攜載藥物的問題，提供一種新型的藥物載體及其制備方法，該新型的藥物載體含有金納米棒，并且藥物負載量大。
[0007]本發(fā)明的目的還在于提供一種含有上述新型的藥物載體的藥物組合物。
[0008]本發(fā)明的目的還在于提供上述藥物組合物在診斷和/或治療腫瘤中的應(yīng)用。
[0009]即，本發(fā)明提供了一種藥物載體，其中，該藥物載體包括金納米棒，以及包裹在金納米棒表面的介孔二氧化硅層。
[0010]本發(fā)明還提供了一種藥物載體的制備方法，其中，該方法包括以下步驟:在含有十六烷基三甲基溴化銨的金納米棒水溶液中，在PH值為8.5-11的條件下，加入硅酸酯的醇溶液進行反應(yīng)，并進行固液分離，得到表面包覆有介孔二氧化硅層的金納米棒。
[0011]本發(fā)明還提供 了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括上述載體和負載在上述載體上的藥物。
[0012]本發(fā)明還提供了上述藥物載體和上述藥物組合物在制備用于診斷和/或治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0013]本發(fā)明提供的藥物組合物具有診斷，化療和熱療等多項功能，這些功能可以聯(lián)合應(yīng)用。
[0014]根據(jù)本發(fā)明所提供的新型的藥物載體，由于在金納米棒表面包裹有介孔二氧化硅層，可以有效地防止藥物載體在水溶液中發(fā)生團聚，并且藥物負載量大。另外，在該載體上負載藥物后得到的藥物組合物，可以同時實現(xiàn)腫瘤的診斷，以及化療和熱療兩種治療方式。其中，兩種治療方式的選擇以及具體的治療方法，可以根據(jù)診斷的結(jié)果有針對性地進行；而治療的結(jié)果則可由載體的診斷功能進行報告，以確定后續(xù)的治療方案?；熀蜔岑焹煞N治療方式的聯(lián)合運用，有助于克服兩種治療方式各自的缺點，取得最優(yōu)的治療效果。
[0015]本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的【具體實施方式】部分予以詳細說明。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1為實施例1所得到的金納米棒的透射電子顯微鏡圖；
[0017]圖2為實施例1所得到的藥物載體的透射電子顯微鏡圖；
[0018]圖3為實施例3所得到的藥物載體的透射電子顯微鏡圖；
[0019]圖4為實施例5所涉及的溫度-照射時間曲線圖；
[0020]圖5為實施例6所涉及的包載了阿霉素的藥物載體(Au@Si02-D0X)的釋藥曲線圖；
[0021]圖6為實施例7所涉及的包載了紫杉醇的藥物載體的釋藥曲線圖；
[0022]圖7為實施例8所涉及的組合圖，其中，圖7中的A為阿霉素(DOX)與溶酶體共定位圖；圖7中的B為載體Au@Si02與溶酶體(Lyso)共定位圖；圖7中的C為載體Au@Si02與阿霉素(DOX)共定位圖；圖7中的D為載體AuOSiO2，阿霉素(DOX)與溶酶體(Lyso)共定位圖；
[0023]圖8為實施例9所涉及的組合圖，其中，圖8中的A為阿霉素與線粒體(Mito)共定位圖；圖8中的B為載體Au@Si02與線粒體(Mito)共定位圖；圖8中的C為載體Au@Si02與阿霉素(DOX)共定位圖；圖8中的D為載體AuOSiO2，阿霉素(DOX)與線粒體(Mito)共定位圖；
[0024]圖9為實施例10所涉及的組合圖，其中，圖9中的A為阿霉素與溶酶體(Lyso)共定位圖；圖9中的B為載體Au@Si02與溶酶體(Lyso)共定位圖；圖9中的C為載體Au@Si02與阿霉素(DOX)共定位圖；圖9中的D為載體AuOSiO2，阿霉素(DOX)與溶酶體(Lyso)共定位圖；
[0025]圖10為實施例11所涉及的組合圖，其中，圖10中的A為阿霉素(DOX)與線粒體(Mito)共定位圖；圖10中的B為載體AuOSiO2與線粒體(Mito)共定位圖；圖10中的C為載體AuOSiO2與阿霉素(DOX)共定位圖；圖10中的D為載體AuOSiO2，阿霉素(DOX)與線粒體(Mito)共定位圖；
[0026]圖11為實施例12所涉及的細胞攝入阿霉素(DOX)的趨勢圖；
[0027]圖12為實施例13所涉及的阿霉素(DOX)濃度與細胞活力的關(guān)系圖；
[0028]圖13為實施例13所涉及的包載了阿霉素的介孔二氧化硅包金納米棒載體(Au@SiO2-DOX,濃度以負載的阿霉素計)濃度與細胞活力的關(guān)系圖；
[0029]圖14為實施例14所涉及的激光控制藥物組合物在細胞內(nèi)釋藥的效果圖；
[0030]圖15為表示實施例15所涉及激光照射誘導的熱療對溶酶體膜完整性的影響的圖；[0031]圖16為表示實施例16所涉及低功率激光照射引起藥物釋放的化療對7種腫瘤細胞活力的影響的圖；
[0032]圖17為表示實施例17所涉及高功率激光照射誘導的熱療和藥物釋放的化療協(xié)同作用對細胞活力的影響的圖；
[0033]圖18為表示實施例18所涉及的藥物組合物在動物腫瘤組織內(nèi)的分布的圖?！揪唧w實施方式】
[0034]以下對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細說明。應(yīng)當理解的是，此處所描述的【具體實施方式】僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0035]本發(fā)明的藥物載體包括金納米棒，以及包裹在金納米棒表面的介孔二氧化硅層。
[0036]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體，通常情況下，所述金納米棒的長度可以為5-200納米，優(yōu)選情況下，所述金納米棒長度為10-150納米；從有利于細胞攝入上來考慮，更優(yōu)選所述金納米棒長度為15-120納米；進一步優(yōu)選所述金納米棒長度為20-100納米；更進一步優(yōu)選所述金納米棒長度為30-80納米。
[0037]更優(yōu)選地，所述金納米棒的長徑比為1.5-20 ;從有利于細胞攝入并適于通過遠紅外激光控制上來考慮，進一步優(yōu)選所述金納米棒的長徑比為2-10 ;更進一步優(yōu)選所述金納米棒的長徑比為2.5-6，最優(yōu)選3-4.5。
[0038]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體，所述金納米棒的表面包裹有介孔二氧化硅層。優(yōu)選情況下，所述介孔二氧化硅層的厚度為3-50納米；從易于制備和適于細胞攝入上來考慮，更優(yōu)選所述介孔二氧化硅層的厚度為5-45納米；進一步優(yōu)選所述介孔二氧化硅層的厚度為10-40納米；更進一步優(yōu)選為15-35納米。
[0039]優(yōu)選情況下，所述介孔二氧化硅層的孔徑為1-20納米；從易于制備和增加穩(wěn)定性上來考慮，更優(yōu)選所述介孔二氧化硅層的孔徑為1.2-15納米；進一步優(yōu)選所述介孔二氧化硅層的孔徑為1.5-10納米；更進一步為2-8納米；更進一步優(yōu)選為3-4納米。
[0040]更優(yōu)選地，所述介孔藥物載體的比表面積為1-150平方米/克，孔體積為0.05-10立方厘米/克；從易于制備增加穩(wěn)定性上來考慮，進一步優(yōu)選所述藥物載體的比表面積為30-120平方米/克，孔體積為0.5-5立方厘米/克；更進一步優(yōu)選所述藥物載體的比表面積為60-100平方米/克，孔體積為0.6-2立方厘米/克；更進一步優(yōu)選所述藥物載體的比表面積為65-95平方米/克，孔體積為0.65-1.3立方厘米/克。
[0041]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體，優(yōu)選情況下，其最大吸收峰在600-1500納米的范圍內(nèi)，更優(yōu)選650-1000納米的范圍內(nèi)。
[0042]具有上述結(jié)構(gòu)的本發(fā)明的藥物載體，在水溶液中不容易發(fā)生團聚，并且藥物載體的藥物負載量大。
[0043]本發(fā)明還提供了一種藥物載體的制備方法，其中，該方法包括以下步驟:在含有十六烷基三甲基溴化銨的金納米棒溶液中，在PH值為8.5-11的條件下，加入硅酸酯的醇溶液進行反應(yīng)，并進行固液分離，得到表面包覆有介孔二氧化硅層的金納米棒。
[0044] 根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，制備所述金納米棒水溶液的方法可以采用本領(lǐng)域的常規(guī)方法進行。例如可以采用種子生長法來制備，其步驟為在十六烷基三甲基溴化銨的存在下，用硼氫化鈉還原氯金酸，得到金納米顆粒的種子溶液，在十六烷基三甲基溴化銨存在下將該種子溶液加入由抗壞血酸還原氯金酸得到的一價金離子溶液中生長得到金納米棒。另外，在種子生長中，可以通過調(diào)節(jié)硝酸銀溶液和硫酸溶液的量來控制金納米棒的長度和長徑比。
[0045]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，所述金納米棒水溶液中含有十六烷基三甲基溴化銨。優(yōu)選情況下，所述金納米棒水溶液中的十六烷基三甲基溴化銨的濃度為0.3-8毫摩爾/升；更優(yōu)選所述金納米棒水溶液中的十六烷基三甲基溴化銨的濃度為0.5-1.2毫摩爾/升。當通過上述方法制備得到的金納米棒水溶液中十六烷基三甲基溴化銨的濃度高于上述優(yōu)選濃度時，可以通過離心洗滌來得到所需十六烷基三甲基溴化銨濃度的金納米棒水溶液。離心洗滌的方法可以采用本領(lǐng)域所公知的方法來進行。
[0046]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，優(yōu)選情況下，所述金納米棒的水溶液中，以金元素計的金納米棒濃度為10微摩爾/升1.5毫摩爾/升；從易于制備上來考慮，更優(yōu)選所述金納米棒水溶液中，以金元素計的金納米棒濃度為0.1毫摩爾/升~I毫摩爾/升；進一步優(yōu)選所述金納米棒水溶液中，以金元素計的金納米棒濃度為0.15^0.5毫摩爾/升。
[0047]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，通常情況下，所述金納米棒的長度可以為5-200納米，優(yōu)選情況下，所述金納米棒長度為10-150納米；從有利于細胞攝入上來考慮，更優(yōu)選所述金納米棒長度為15-120納米；進一步優(yōu)選所述金納米棒長度為20-100納米；更進一步優(yōu)選所述金納米棒長度為30-80納米。
[0048]更優(yōu)選地，所述金納米棒的長徑比為1.5-20 ;從有利于細胞攝入并適于通過遠紅外激光控制上來考慮，進一步優(yōu)選所述金納米棒的長徑比為2-10 ;更進一步優(yōu)選所述金納米棒的長徑比為2.5-6，最優(yōu)選3-4.5。
[0049]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，所述硅酸酯的用量可以根據(jù)所述金納米棒水溶液中的金納米棒的量來選擇。優(yōu)選情況下，分別以金元素和硅元素計，所述金納米棒的水溶液中的金納米棒與所述硅酸酯的摩爾比為1:1-50 ;從增加二氧化硅層厚度和強度上來考慮，更優(yōu)選分別以金元素和硅元素計，所述金納米棒的水溶液中的金納米棒與所述硅酸酯的摩爾比為1:2-10 ;進一步優(yōu)選分別以金元素和硅元素計，所述金納米棒的水溶液中的金納米棒與所述硅酸酯的摩爾比為1:3-5。
[0050]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，優(yōu)選情況下，以金元素計的所述金納米棒，與十六烷基三甲基溴化銨的摩爾比為1:1-20 ;從二氧化硅層的厚度和強度上來考慮，更優(yōu)選以金元素計的所述金納米棒的水溶液，與十六烷基三甲基溴化銨的摩爾比為1:1.5-10 ;進一步優(yōu)選以金元素計的所述金納米棒的水溶液，與十六烷基三甲基溴化銨的摩爾比為1:2-4.
[0051]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，對所述硅酸酯與金納米棒水溶液的接觸方式?jīng)]有特別的限定，例如可以將所述硅酸酯加入到所述金納米棒水溶液中。對加入的方式也沒有特別的限定，可以是一次性加入，也可以分批加入，當從得到的介孔二氧化硅層的均勻性上來考慮，優(yōu)選分批加入。從操作性上來考慮，優(yōu)選2-5次，更優(yōu)選各次加入的間隔時間相同。
[0052]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，所述硅酸酯與金納米棒水溶液的接觸在pH值為8.5-11的條件下進行，優(yōu)選情況下，硅酸酯與金納米棒水溶液的接觸在pH值為9-10.5的條件下進行。PH值的調(diào)節(jié)可以采用堿性pH值調(diào)節(jié)劑來實現(xiàn)，所述堿性pH值調(diào)節(jié)劑可以為本領(lǐng)域所常用的堿性化合物，例如可以使用氫氧化鈉、氫氧化鉀等。
[0053]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，所述硅酸酯與金納米棒水溶液的接觸條件還包括:接觸的溫度為4-95°C，接觸的時間為0.04-10天；優(yōu)選情況下，接觸的溫度為10-50°C，接觸的時間為1-3天。
[0054]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，所述硅酸酯可以為硅酸烷基酯；優(yōu)選所述烷基為碳原子數(shù)為1-4的烷基；更優(yōu)選為碳原子數(shù)為1-3的烷基。上述硅酸酯中，優(yōu)選硅酸四甲酯、娃酸四乙酯、娃酸四丙酯和娃酸四丁酯中的一種或多種。
[0055]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，所述醇溶劑只要是易于溶解所述硅酸酯且易溶于水的溶劑即可。例如可以為甲醇、乙醇或其他分子量小于200、常溫常壓下為液體的醇類中的一種或多種；優(yōu)選為甲醇和/乙醇。
[0056]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法，該方法包括通過離心分離，得到表面包覆有介孔二氧化硅層的金納米棒。所述離心分離的條件只要能夠充分沉降表面包覆有介孔二氧化硅層的金納米棒即可。一般情況下，所述離心的速度可以為3000-15000轉(zhuǎn)/分鐘；上述離心的時間可以為5-100分鐘。
[0057]根據(jù)本發(fā)明的藥物載體的制備方法所得到的藥物載體，優(yōu)選情況下，其最大吸收峰在620-1200納米的范圍內(nèi)，更優(yōu)選650-1000納米的范圍內(nèi)。
[0058]本發(fā)明還提供一種藥物組合物，所述藥物組合物包括上述載體和負載在上述載體上的藥物。
[0059]根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，對所述載體上負載的藥物的類型沒有特別的限定，可以根據(jù)實際的需要來負載各種類型的藥物。例如可以負載親水性和疏水性的藥物。優(yōu)選情況下，所述藥物為阿霉素、紫杉醇、長春堿、順鉬、喜樹堿、DNA、小干擾RNA和蛋白質(zhì)藥物中的一種或多種。
[0060]根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，優(yōu)選的情況下，以所述載體的重量為基準，所述藥物組合物的載藥率為1-40重量％ ;更優(yōu)選以所述載體的重量為基準，所述藥物組合物的載藥率為5-30重量％，進一步優(yōu)選以所述載體的重量為基準，所述藥物組合物的載藥率為10-20重量％。
[0061]載藥率的計算公式為:
[0062]載藥率(重量％)=(載體上藥物的重量)/載體的重量X 100%。
[0063]在本發(fā)明中，對將藥物負載在上述載體上的方法沒有特別的限定，只要是能夠?qū)⒁欢康乃幬镓撦d到載體上的方法均可，可以采用公知的各種方法。例如，所述將藥物負載在載體上的方法可以為將藥物溶液與所述藥物載體接觸。
[0064]將藥物溶液與所述藥物載體接觸的方法中，所述藥物溶液的用量可以根據(jù)所述藥物載體的量來選擇。具體地，所述藥物載體與所述藥物溶液中的藥物的重量比可以為1:
0.1-10 ;優(yōu)選為1:0.5-5。另外，對所述藥物溶液的濃度沒有特別的限定，但優(yōu)選為0.01-5暈克/毫升；更優(yōu)選為0.05-1.5暈克/毫升。
[0065]此外，將藥物溶液與所述藥物載體接觸的條件包括:接觸的溫度為1_50°C，接觸的時間為1-4天。優(yōu)選所述接觸在攪拌下進行。
[0066]將藥物溶液與所述藥物載體接觸的方法中，對所述藥物溶液中的藥物的類型沒有特別的限定，可以根據(jù)實際的需要來選擇。例如可以為親水性或疏水性類型的藥物。優(yōu)選情況下，所述藥物為阿霉素、紫杉醇、長春堿、順鉬、喜樹堿、DNA和小干擾RNA和蛋白質(zhì)藥物中的一種或多種。
[0067]根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其包括本發(fā)明上述結(jié)構(gòu)的載體，由于該載體可以生物成像，可以用于各種疾病的診斷；此外，由于該載體可以吸收近紅外區(qū)的激光，并發(fā)射出熒光和將部分光能轉(zhuǎn)化成熱量，因此，可通過近紅外激光控制藥物的釋放，從而用于各種疾病的治療，例如可以用于癌癥等疾病的化療。
[0068]本發(fā)明還提供上述藥物載體和上述藥物組合物在制備用于診斷和/或治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0069]本發(fā)明提供的藥物組合物具有診斷，化療和熱療等多項功能，這些功能可以聯(lián)合應(yīng)用。
[0070]如上所述，本發(fā)明的藥物組合物包括本發(fā)明上述結(jié)構(gòu)的載體，由于該載體可以生物成像，可以用于各種疾病的診斷；此外，由于該載體可以吸收近紅外區(qū)的激光，并發(fā)射出熒光和將部分光能轉(zhuǎn)化成熱量，因此，可通過近紅外激光控制藥物的釋放，從而用于各種疾病的治療。特別是可以將其用于診斷和/或治療腫瘤。將其用于診斷和治療腫瘤時，可以同時實現(xiàn)腫瘤的診斷，以及化療和熱療兩種治療方式。
[0071]作為腫瘤的種類沒有特別的要求，只要根據(jù)腫瘤的類型負載適合的藥物即可。例如可應(yīng)用的診斷和治療的腫瘤包括:乳腺癌、肺癌、黑色素瘤、肝癌、皮膚癌、宮頸癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌等。
[0072]以下將通過實施例對本發(fā)明進行詳細描述，但本發(fā)明并不僅限于下述實施例。
[0073]以下實施例中氯金酸、十六烷基三甲基溴化銨、硝酸銀、抗壞血酸、硼氫化鈉、正硅酸四乙酯均購自國藥集團化學試劑有限公司。鹽酸阿霉素(DOX)購自濟南偉都醫(yī)藥原料有限公司。如無特別說明，本發(fā)明中所有用水均為二次蒸餾水。
[0074]以下實施例中，金納米棒的棒長、金納米棒長徑比、介孔二氧化硅層厚度、介孔二氧化硅層的孔徑采用透射電子顯微鏡(購于美國FEI公司，Tecnai G2F20S-TWIN型號)進行測定。
[0075]介孔二氧化硅包金納米棒載體經(jīng)凍干以后，使用美國麥克儀器公司生產(chǎn)的Tristar II3020型全自動比表面積分析儀測量其比表面積，孔徑和孔體積。以下實施例中，最大吸收波長使用美國FEI公司生產(chǎn)的Tecan Infinite M200型連續(xù)光譜多功能酶標儀進行測量。
[0076]實施例1[0077]本實施例用于說明藥物組合物的制備。
[0078]I)藥物載體的制備
[0079]在20毫升的燒杯中，將7.5毫升的十六烷基三甲基溴化銨水溶液的濃度為0.1摩爾/升與250微升的氯金酸水溶液(濃度為0.01摩爾/升)混合，加水至總體積為9.4毫升；然后加入冰水冷卻過的0.6毫升的硼氫化鈉水溶液(濃度為0.01摩爾/升);在25°C下攪拌3小時，得到金納米顆粒種子溶液。
[0080]在150毫升的燒瓶中，加入100毫升的十六烷基三甲基溴化銨(濃度為0.1摩爾/升)，5毫升的氯金酸水溶液(濃度為0.01摩爾/升)，0.8毫升的硝酸銀水溶液(濃度為0.01摩爾/升)，2毫升的硫酸水溶液(濃度為0.5摩爾/升)，以及800微升的抗壞血酸水溶液(濃度為0.1摩爾/升)；然后加入240微升的上述得到的金納米顆粒種子溶液，反應(yīng)在30°C下進行24小時，得到金納米棒水溶液。通過圖1可知,金納米棒的棒長大約為50納米，金納米棒長徑比為3.6，最大吸收波波長為759納米。
[0081]接著，將40毫升上述制備的金納米棒溶液離心洗滌2次，兩次均使殘余體積為
2.53毫升。第一次離心完成后加水至40毫升重新分散，第二次離心完成后加水至20毫升重新分散，最終得到的金納米棒水溶液中十六烷基三甲基溴化銨濃度為0.8毫摩爾/升，且以金元素計的金納米棒濃度為0.25毫摩爾/升。然后，在攪拌下加入0.1摩爾/升的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)PH值為10，接著每隔30分鐘加入60微升的正硅酸乙酯甲醇溶液(濃度為20重量％)，總共加入三次。反應(yīng)在攪拌下于27°C下進行2天，得到表面包覆有介孔二氧化硅層的金納米棒(即藥物載體，以下也稱為AulgSiO2)溶液，然后用水進行離心洗滌2次以除去溶液中的十六烷基三甲基溴化銨，得到離心洗滌后的AulgSiO2，將AulgSiO2進行凍干得到
9.5毫克干燥后的Au@Si02。通過圖2可知，介孔二氧化硅層厚度為30納米，介孔二氧化硅層的孔徑為3-4納米；此外，得到的AulgSiO2的比表面積為80平方米/克，孔體積為0.8立方厘米/克；此外，得到的藥物載體的最大吸收波長為770納米。
[0082]2)藥物組合物的制備
[0083]在燒杯中，將1.6暈克干燥后的AuOSiO2分散于4毫升的阿霉素水溶液(阿霉素的濃度為0.1毫克/毫升)中，用鋁箔紙避光，并在25°C下攪拌4天，得到含有藥物組合物的溶液，然后經(jīng)過離心干燥得到藥物組合物(以下也稱為Au@Si02-D0X)。該藥物組合物的載藥率為14.5重量％。
[0084]上述載藥率采用以下方法進行測定:在上述離心干燥前，取少量載藥溶液離心，測量上清液中阿霉素于480納米處的特征吸收，通過比對阿霉素的濃度-吸收標準曲線，得到含有藥物組合物的溶液中未負載藥物的量。并通過以下公式計算得出載藥率:
[0085]載藥率(重量％)=(投入藥物的重量-未負載藥物的重量)/載體的重量X 100%。
[0086]此外，得到的藥物組合物的最大吸收波長為790納米。
[0087]實施例2
[0088]本實施例用于說明藥物組合物的制備。
[0089]I)藥物載體的制備
[0090]在20毫升的燒杯中，將7.5毫升的十六烷基三甲基溴化銨水溶液(十六烷基三甲基溴化銨的濃度為0.1摩爾/升)與250微升的氯金酸水溶液(濃度為0.01摩爾/升)混合，加水至總體積為9.4毫升；然后加入冰水冷卻過的0.6毫升的硼氫化鈉水溶液(濃度為0.01摩爾/升)；在25°C下攪拌3小時，得到金納米顆粒種子溶液。
[0091]在150毫升的燒瓶中，加入100毫升的十六烷基三甲基溴化銨(濃度為0.1摩爾/升)，5毫升的氯金酸水溶液(濃度為0.01摩爾/升)，2毫升的硝酸銀水溶液(濃度為0.01摩爾/升)，4毫升的硫酸水溶液(濃度為0.5摩爾/升)，以及800微升的抗壞血酸水溶液(濃度為0.1摩爾/升)；然后加入240微升的上述得到的金納米顆粒種子溶液金納米顆粒，反應(yīng)在30°C下進行24小時，得到金納米棒水溶液。通過透射電子顯微鏡圖片可知，金納米棒的棒長為60納米，金納米棒長徑比為4 ;此外，金納米棒的最大吸收波波長為800納米。
[0092]接著，將40毫升上述制備的金納米棒溶液離心洗滌2次，兩次均使殘余體積為
2.83毫升。第一次離心完成后加水至40毫升重新分散，第二次離心完成后加水至20毫升重新分散，最終得到的金納米棒水溶液中十六烷基三甲基溴化銨濃度為I毫摩爾/升，且以金元素計的金納米棒濃度為0.5毫摩爾/升。然后，在攪拌下加入0.1摩爾/升的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)PH值為9.0，接著每隔30分鐘加入70微升的正硅酸乙酯甲醇溶液(濃度為20重量％)，總共加入三次。反應(yīng)在攪拌下于35°C下進行2天，得到表面包覆有介孔二氧化硅層的金納米棒(即藥物載體，以下也稱為AulgSiO2)溶液，然后用水進行離心洗滌2次以除去溶液中的十六烷基三甲基溴化銨，得到離心洗滌后的AulgSiO2，將AulgSiO2進行凍干得到13.2毫克干燥后的Au@Si02。介孔二氧化硅層的厚度為40納米，介孔二氧化硅層的孔徑為5-7納米；此外，得到的Au@Si02的比表面積為95平方米/克，孔體積為1.05立方厘米/克。得到的藥物載體的最大吸收波波長為820納米。
[0093]2)藥物組合物的制備
[0094]在燒杯中，將2.4毫克干燥后的AulgSiO2分散于4毫升的紫杉醇水溶液(紫杉醇的濃度為0.2毫克/毫升)中，用鋁箔紙避光，并在25°C下攪拌3天，得到含有藥物組合物的溶液，然后經(jīng)過離心干燥得到藥物組合物。該藥物組合物的載藥率為17重量％。
[0095]上述載藥率采用以下方法進行測定:在上述離心干燥前，取少量載藥溶液離心，使用高效液相色譜儀測量上清液中紫杉醇的量，得到含有藥物組合物的溶液中未負載藥物的量。并通過以下公式計算得出載藥率，
[0096]載藥率(重量％)=(投入藥物的量-未負載藥物的量)/載體的重量X 100%。
[0097]此外，得到的藥物組合物的最大吸收波長為840納米。
[0098]實施例3
[0099]本實施例用于說明藥物組合物的制備。
[0100]I)藥物載體的制備
[0101]在20毫升的燒杯中，將7.5毫升的十六烷基三甲基溴化銨水溶液(十六烷基三甲基溴化銨的濃度為0.1摩爾/升)與250微升的氯金酸水溶液(濃度為0.01摩爾/升)混合，加水至總體積為9.4毫升；然后加入冰水冷卻過的0.6毫升的硼氫化鈉水溶液(濃度為
0.01摩爾/升)；在25°C下攪拌3小時，得到金納米顆粒種子溶液。
[0102]在150毫升的燒瓶中，加入100毫升的十六烷基三甲基溴化銨(濃度為0.1摩爾/升)，5毫升的氯金酸水溶液(濃度為0.01摩爾/升)，2毫升的硝酸銀水溶液(濃度為0.01摩爾/升)，4毫升的硫酸水溶液(濃度為0.5摩爾/升)，以及800微升的抗壞血酸水溶液(濃度為0.1摩爾/升)；然后加入240微升的上述得到的金納米顆粒種子溶液金納米顆粒，反應(yīng)在30°C下進行24小時，得到金納米棒水溶液。通過透射電子顯微鏡圖片可知，金納米棒的棒長為70納米，金納米棒長徑比為4.2 ;此外，金納米棒的最大吸收波波長為850納米。
[0103]接著，將40毫升上述制備的金納米棒溶液離心洗滌2次，兩次均使殘余體積為
2.19毫升。第一次離心完成后加水至40毫升重新分散，第二次離心完成后加水至20毫升重新分散，最終得到的金納米棒水溶液中十六烷基三甲基溴化銨濃度為0.6毫摩爾/升，且以金元素計的金納米棒濃度為0.5毫摩爾/升。然后，在攪拌下加入0.1摩爾/升的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)PH值為10.5，接著每隔30分鐘加入50微升的正硅酸乙酯甲醇溶液(濃度為20重量％)，總共加入三次。反應(yīng)在攪拌下于26°C下進行1.5天，得到表面包覆有介孔二氧化硅層的金納米棒(即藥物載體，以下也稱為Au@Si02)溶液，然后用水進行離心洗滌2次以除去溶液中的十六烷基三甲基溴化銨，得到離心洗滌后的AulgSiO2，將AulgSiO2進行凍干得到14.5毫克干燥后的Au@Si02。通過藥物載體的透射電子顯微鏡圖3可知，介孔二氧化硅層的厚度為15納米，介孔二氧化硅層的孔徑為2-5納米；此外，得到的AulgSiO2的比表面積為65平方米/克，孔體積為0.65立方厘米/克。得到的藥物載體的最大吸收波波長為870納米。
[0104]2)藥物組合物的制備
[0105]在燒杯中，將3.0毫克干燥后的AulgSiO2分散于4毫升的小干擾RNA水溶液(濃度為1.0毫克/毫升)中，用鋁箔紙避光，并在25°C下攪拌2天，得到含有藥物組合物的溶液，然后經(jīng)過離心干燥得到藥物組合物。該藥物組合物的載藥率為18重量％。
[0106]上述 載藥率采用以下方法進行測定:在上述離心干燥前，取少量載藥溶液離心，使用HPLC測量上清液中小干擾RNA的量，得到含有藥物組合物的溶液中未負載藥物的量。并通過以下公式計算得出載藥率，
[0107]載藥率(重量％)=(投入藥物的量-未負載藥物的量)/載體的重量X 100%。
[0108]此外，得到的藥物組合物的最大吸收波波長為890納米。
[0109]實施例4
[0110]本實施例用于說明藥物組合物的制備。
[0111]I)藥物載體的制備
[0112]按照實施例1中金納米棒的制備方法進行，不同的是使用2.5毫升的硝酸銀水溶液(濃度為0.01摩爾/升)，5毫升的硫酸水溶液(濃度為0.5摩爾/升)，同樣地制備出金納米棒的棒長為80納米，長徑比為4.5的金納米棒溶液，其中含有0.09摩爾/升的十六烷基三甲基溴化銨，其最大吸收波長為870納米。
[0113]接著，將40毫升上述制備的金納米棒溶液離心洗滌2次，兩次均使殘余體積為
3.26毫升。第一次離心完成后加水至40毫升重新分散，第二次離心完成后加水至20毫升重新分散，最終得到的金納米棒水溶液中十六烷基三甲基溴化銨濃度為1.2毫摩爾/升，且以金元素計的金納米棒濃度為0.5毫摩爾/升。然后，在攪拌下加入0.1摩爾/升的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)PH值為11，接著每隔30分鐘加入80微升的硅酸四甲酯的甲醇溶液(濃度為20重量％)，總共加入三次。反應(yīng)在攪拌下于45°C下進行I天，得到表面包覆有介孔二氧化硅層的金納米棒(即藥物載體，以下也稱為AulgSiO2)溶液，然后用水進行離心洗滌2次以除去溶液中的十六烷基三甲基溴化銨，得到離心洗滌后的AulgSiO2，將AulgSiO2進行凍干得到17毫克干燥后的Au@Si02。通過藥物載體的透射電子顯微鏡圖可知，介孔二氧化硅層的厚度為25納米，介孔二氧化硅層的孔徑為3-4納米；此外，得到的AulgSiO2的表面積為85平方米/克，孔體積為1.2立方厘米/克。得到的藥物載體的最大吸收波波長為885納米。
[0114]2)藥物組合物的制備
[0115]在燒杯中，將3毫克干燥后的AulgSiO2分散于4毫升的順鉬的二甲基亞砜溶液(順鉬的濃度為0.5毫克/毫升)中，用鋁箔紙避光，并在15°C下攪拌2天，得到含有藥物組合物的溶液，然后經(jīng)過離心干燥得到藥物組合物。該藥物組合物的載藥率為12重量％。
[0116]上述載藥率采用以下方法進行測定:在上述離心干燥前，取少量載藥溶液離心，通過高壓液相色譜測量上清液中順鉬的含量，得到含有藥物組合物的溶液中未負載藥物的量。并通過以下公式計算得出載藥率，
[0117]載藥率(重量％)=(投入藥物的量-未負載藥物的量)/載體的重量X 100%。
[0118]此外，得到的藥物組合物的最大吸收波波長為895納米。
[0119]實施例5[0120]本實施例用于說明本發(fā)明的藥物載體的光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)
[0121]將實施例1中制備的藥物載體分散于20毫升的水中，取200微升放入96孔板。使用光斑直徑為2毫米，功率為150毫瓦或者250毫瓦，波長為780納米的激光照射。用溫敏溫度計記錄溶液的溫度，并繪制出溫度-照射時間曲線(圖4)。如圖4所示，在150毫瓦激光照射下，納米粒子溶液的溫度最高可升至38度，而在250毫瓦激光照射下，最高可升至48度。
[0122]實施例6
[0123]本實施例用于說明本發(fā)明的藥物組合物的釋藥。
[0124]取實施例1中制備的藥物組合物，分兩組進行釋藥實驗。
[0125]第一組:將實施例1中制備的藥物組合物3份(每份0.5毫克)分別用pH=7.4,6.0、4.5的磷酸鹽緩沖溶液1.0毫升分散，置于37°C搖床中開始釋藥實驗。每隔I小時取出一次，離心，收集上清，并通過480納米處的特征吸收，測算已釋放出的阿霉素質(zhì)量。殘余物用相同的緩沖溶液分散，放回搖床，繼續(xù)進行藥物釋放實驗。釋藥實驗共進行12小時。實驗結(jié)束后，計算出每小時的釋藥量占總藥物包載量的比例，按照累計釋藥率-釋藥時間畫出釋藥曲線，具體如圖5所示。
[0126]第二組:將實施例1中制備的藥物組合物3份(每份0.5毫克)分別用pH=7.4,6.0、
4.5的磷酸鹽緩沖溶液1.0毫升分散,用波長為760納米,功率為250暈瓦,光斑直徑為2暈米的激光照射，使溶液溫度升至48°C，進行釋藥實驗。每隔I小時取出一次，離心，收集上清，并通過480納米處的特征吸收，測算已釋放出的阿霉素質(zhì)量。殘余物用相同的緩沖溶液分散，重新用激光照射，繼續(xù)進行藥物釋放實驗。釋藥實驗共進行12小時。實驗結(jié)束后，計算出每小時的釋藥量占總藥物包載量的比例，按照累計釋藥率-釋藥時間畫出釋藥曲線，具體如圖5所示。
[0127]通過圖5可知，在37 °C時，藥物釋放速度很慢，雖然在低pH比中性條件下釋藥速度稍快，但是并無明顯差異。但對比第一組釋藥實驗可知，在激光照射使溶液溫度升高后，釋藥速度大大加快；PH越低，釋藥速度加快的更多，因此，本發(fā)明所述的藥物組合物可通過外在的激光照射控制其釋藥的速度，并能響應(yīng)于腫瘤組織內(nèi)部特有的弱酸性環(huán)境。
[0128]實施例7
[0129]本實施例用于說明本發(fā)明的藥物組合物的釋藥。[0130]取實施例2中制備的藥物組合物，分兩組進行釋藥實驗。
[0131]第一組:將實施例2中制備的藥物組合物3份(每份0.5毫克)分別用pH=7.4,6.0、4.5的磷酸鹽緩沖溶液1.0毫升分散，置于37°C搖床中開始釋藥實驗。每隔I小時取出一次，離心，收集上清，并使用高效液相色譜儀，測算已釋放出的紫杉醇的質(zhì)量。殘余物用相同的緩沖溶液分散，放回搖床，繼續(xù)進行藥物釋放實驗。釋藥實驗共進行12小時。實驗結(jié)束后，計算出每小時的釋藥量占總藥物包載量的比例，按照累計釋藥率-釋藥時間畫出釋藥曲線，具體如圖6所示。
[0132]第二組:將實施例2中制備的藥物組合物3份(每份0.5毫克)分別用pH=7.4,6.0、4.5的磷酸鹽緩沖溶液1.0毫升分散,用波長為840納米,功率為250暈瓦,光斑直徑為2暈米的激光照射，使溶液溫度升至48°C，進行釋藥實驗。每隔I小時取出一次，離心，收集上清，并使用高效液相色譜儀測算已釋放出的紫杉醇質(zhì)量。殘余物用相同的緩沖溶液分散，重新用激光照射，繼續(xù)進行藥物釋放實驗。釋藥實驗共進行12小時。實驗結(jié)束后，計算出每小時的釋藥量占總藥物包載量的比例，按照累計釋藥率-釋藥時間畫出釋藥曲線，具體如圖6所示。
[0133]通過圖6可知，在37 °C時，藥物釋放速度很慢，雖然在低pH比中性條件下釋藥速度稍快，但是并無明顯差異。但對比第一組釋藥實驗可知，在激光照射使溶液溫度升高后，釋藥速度大大加快；PH越低，釋藥速度加快的更多，因此，本發(fā)明所述的藥物組合物可通過外在的激光照射控制其釋藥的速度，并能響應(yīng)于腫瘤組織內(nèi)部特有的弱酸性環(huán)境。
[0134]實施例8
[0135]本實施例用于說明本發(fā)明的藥物載體及藥物組合物用于癌細胞成像。
[0136]I)人肺癌A549細胞的培養(yǎng)
[0137]將人肺癌A549細胞接種于35毫米共聚焦成像培養(yǎng)皿中，使用DMEM液體培養(yǎng)基(含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)于37°C，5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，磷酸鹽緩沖溶液洗滌兩次。然后分別加入含有5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X (實施例1制備)和含有Au@Si02 (實施例1制備，其用量與5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X中所含有的Au@Si02相同)的完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)，并分別處理細胞12小時。
[0138]2)溶酶體內(nèi)共定位
[0139]丟棄細胞培養(yǎng)基,加入含100納摩爾/升的溶酶體染料(LysoTracker Green)的無血清DMEM培養(yǎng)基于37°C孵育細胞45分鐘。用磷酸鹽緩沖溶液洗滌細胞三次，加入無血清DMEM液體培養(yǎng)基，顯微鏡下觀察。單光子模式成像:488納米激光激發(fā)，收集530納米熒光信號為細胞器定位信息，并在580-610納米通道區(qū)域原位收集DOX的紅色熒光信號。雙光子模式成像:將激發(fā)光源調(diào)節(jié)到雙光子模式，780納米飛秒激光(fs-pulse, Maitai of SpectraPhysics in USA)，收集530納米發(fā)射光信號。由此，得到組合圖7。其中，圖7中的A為阿霉素(D0X)與溶酶體(Lyso)共定位圖，同一細胞內(nèi)的阿霉素(D0X，用紅色表示)照片與溶酶體(Lyso，用綠色表示)照片重疊后，可以觀察到黃色的斑點，表明細胞內(nèi)的阿霉素定位于溶酶體內(nèi)；圖7中的B為Au@Si02載體與溶酶體(Lyso)共定位圖，同一細胞內(nèi)的Au@Si02載體(用藍色表示)照片與溶酶體(Lyso，用綠色表示)照片重疊后，可以觀察到藍綠色的斑點，表明細胞內(nèi)的Au@Si02定位于溶酶體內(nèi)；圖7中的C為Au@Si02與阿霉素(DOX)共定位圖，同一細胞內(nèi)的AulgSiO2載體(用藍色表示)照片與阿霉素(D0X，用紅色表示)照片重疊后，可以觀察到粉紅色的斑點，表明細胞內(nèi)的Au@Si02與阿霉素在細胞內(nèi)處于同一位點；圖7中的D為AuOSiO2、阿霉素(DOX)及溶酶體(Lyso)三者共定位圖，同一細胞內(nèi)的AuOSiO2載體(用藍色表示)照片、阿霉素(D0X，用紅色表示)照片與溶酶體(Lyso，用綠色表示)重疊后，可以觀察到白色的斑點，表明細胞內(nèi)的Au@Si02與阿霉素一起定位于溶酶體內(nèi)。由圖7可以看出，通過納米載體Au@Si02本身的雙光子致熒光效應(yīng)確定其進入A549細胞后會蓄積于溶酶體(Lyso)中。
[0140] 實施例9
[0141 ] 本實施例用于說明本發(fā)明的藥物載體及藥物組合物用于癌細胞成像。
[0142]1)人肺癌A549細胞的培養(yǎng)
[0143]將人肺癌A549細胞接種于35毫米共聚焦成像培養(yǎng)皿中，使用DMEM液體培養(yǎng)基(含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)于37°C，5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，磷酸鹽緩沖溶液洗滌兩次。然后分別加入含有5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X (實施例1制備)和含有Au@Si02 (實施例1制備，其用量與5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X中所含有的Au@Si02相同)的完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)，并分別處理細胞12小時。
[0144]2)線粒體內(nèi)共定位
[0145]丟棄細胞培養(yǎng)基，加入含100納摩爾/升的線粒體染料(MitoTracker Green)的無血清DMEM培養(yǎng)基37°C孵育細胞45分鐘。用磷酸鹽緩沖溶液洗滌細胞三次，加入無血清DMEM液體培養(yǎng)基，顯微鏡下觀察。單光子模式成像:488納米激光激發(fā)，收集530納米熒光信號為細胞器定位信息，并在580-610納米通道區(qū)域原位收集阿霉素的紅色熒光信號。雙光子模式成像:將激發(fā)光源調(diào)節(jié)到雙光子模式，780納米飛秒激光(fs-pulse, Maitai ofSpectra Physics in USA),收集530納米發(fā)射光信號。由此,得到組合圖8。其中，圖8中的A為阿霉素(DOX)與線粒體(Mito)共定位圖，同一細胞內(nèi)的阿霉素(D0X，用紅色表示)照片與線粒體(Mito，用綠色表示)照片重疊后，未觀察到黃色的斑點，表明細胞內(nèi)的阿霉素不定位于線粒體內(nèi)；圖8中的B為Au@Si02載體與線粒體(Mito)共定位圖，同一細胞內(nèi)的AuOSiO2載體(用藍色表示)照片與線粒體(Mito，用綠色表示)照片重疊后，僅觀察到少量藍綠色的斑點，表明細胞內(nèi)只有少量Au@Si02定位于線粒體內(nèi)；圖8中的C為Au@Si02與阿霉素(DOX)共定 位圖，同一細胞內(nèi)的Au@Si02載體(用藍色表示)照片與阿霉素(D0X，用紅色表示)照片重疊后，可以觀察到粉紅色的斑點，表明細胞內(nèi)的AuigSiO2與阿霉素在細胞內(nèi)處于同一位點；圖8中的D為Au@Si02，阿霉素(DOX)及線粒體(Mito)三者共定位圖，同一細胞內(nèi)的AuiSiO2載體(用藍色表示)照片、阿霉素(D0X，用紅色表示)照片與線粒體(Mito，用綠色表示)重疊后，可以觀察到明顯的粉紅色斑點和極少量白色斑點，表明細胞內(nèi)的AulgSiO2與阿霉素處于同一位點，而僅有極少量Au@Si02與阿霉素一起定位于線粒體內(nèi)。由圖8可以看出，通過納米載體AulgSiO2本身的雙光子效應(yīng)可確定其進入A549細胞后會有少量蓄積于線粒體中。
[0146]實施例10[0147]本實施例用于說明本發(fā)明的藥物載體及藥物組合物用于癌細胞成像。
[0148]將實施例8中的肺癌細胞更換為人乳腺癌細胞MCF-7，其他步驟相同，得到組合圖9，其中，圖9中的A為阿霉素(DOX)與溶酶體(Lyso)共定位圖，同一細胞內(nèi)的阿霉素(D0X，用紅色表示)照片與溶酶體(Lyso，用綠色表示)照片重疊后，可以觀察到黃色的斑點，表明細胞內(nèi)的阿霉素定位于溶酶體內(nèi)；圖9中的B為Au@Si02載體與溶酶體(Lyso)共定位圖，同一細胞內(nèi)的AulgSiO2載體(用藍色表示)照片與溶酶體(Lyso，用綠色表示)照片重疊后，可以觀察到藍綠色的斑點，表明細胞內(nèi)的Au@Si02定位于溶酶體內(nèi)；圖9中的C為Au@Si02與阿霉素(DOX)共定位圖，同一細胞內(nèi)的Au@Si02載體(用藍色表示)照片與阿霉素(D0X，用紅色表示)照片重疊后，可以觀察到粉紅色的斑點，表明細胞內(nèi)的AulgSiO2與阿霉素在細胞內(nèi)處于同一位點；圖9中的D為Au@Si02，阿霉素(DOX)及溶酶體三者共定位圖，同一細胞內(nèi)的AulgSiO2載體(用藍色表示)照片、阿霉素(D0X，用紅色表示)照片與溶酶體(Lyso，用綠色表示)重疊后，可以觀察到白色的斑點，表明細胞內(nèi)的AulgSiO2與阿霉素一起定位于溶酶體內(nèi)。由圖9可以看出，通過納米載體Au@Si02本身的雙光子效應(yīng)可確定其進入人乳腺癌細胞MCF-7細胞后會富集于溶酶體中。
[0149]實施例11
[0150]本實施例用于說明本發(fā)明的藥物載體及藥物組合物用于癌細胞成像。
[0151]將實施例8中的肺癌細胞更換為人乳腺癌細胞MCF-7，其他步驟相同，得到組合圖10，其中，圖10中的A為阿霉素(DOX)與線粒體(Mito)共定位圖，同一細胞內(nèi)的阿霉素(D0X，用紅色表示)照片與線粒體(Mito，用綠色表示)照片重疊后，僅觀察到黃色的斑點，表明細胞內(nèi)的阿霉素僅有少量進入線粒體內(nèi)；圖10中的B為Au@Si02載體與溶酶體(Mito)共定位圖，同一細胞內(nèi)的AulgSiO2載體(用藍色表示)照片與線粒體(Mito，用綠色表示)照片重疊后，僅觀察到少量藍綠色的斑點，表明細胞內(nèi)只有少量AulgSiO2S位于線粒體內(nèi)；圖10中的C為Au@Si02與阿霉素(DOX)共定位圖，同一細胞內(nèi)的Au@Si02載體(用藍色表示)照片與阿霉素(D0X，用紅色表示)照片重疊后，可以觀察到粉紅色的斑點，表明細胞內(nèi)的AulgSiO2與阿霉素在細胞內(nèi)處于同一位點；圖10中的D為AuOSiO2，阿霉素(DOX)及線粒體(Mito)三者共定位圖，同一細胞內(nèi)的AulgSiO2載體(用藍色表示)照片、阿霉素(D0X，用紅色表示)照片與線粒體(Mito，用綠色表示)重疊后，可以觀察到明顯的粉紅色斑點和極少量白色斑點，表明細胞內(nèi)的Au@Si02與阿霉素處于同一位點，而僅有極少量Au@Si02與阿霉素一起定位于線粒體內(nèi)。由圖10可以看出，通過納米載體Au@Si02本身的雙光子效應(yīng)可確定其進入A549細胞后會有少量富集于線粒體中。
[0152]通過上述實施例8-11可知，由于金納米棒可被780納米的近紅外飛秒脈沖激光激發(fā)，發(fā)射熒光信號在450-600納米，但不被單光子488納米激光激發(fā)，可以區(qū)別金納米棒和染料的信號。并可利用軟件對細胞器、DOX和金納米棒共定位。
[0153]實施例12
[0154]本實施例用于說明癌細胞對本發(fā)明的藥物組合物的攝入。
[0155]1)人肺癌A549細胞的培養(yǎng)
[0156]將人肺癌A549細胞接種于35毫米共聚焦成像培養(yǎng)皿中，使用DMEM液體培養(yǎng)基(含有10重量％胎牛血清，I重量％青霉素和100單位/毫升的鏈霉素，2毫摩爾/升的谷氨酰胺)于37°C, 5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。[0157]2)細胞攝入量測定
[0158]將步驟I中培養(yǎng)的細胞接種于6孔板中，8萬細胞/孔，加入2毫升完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)，置于37°C，5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。然后在新配制的DMEM液體培養(yǎng)基中，分別加入5微摩爾/升的DOX和5微摩爾/升等效DOX濃度的AuOSiO2-DOX (實施例1制備)，混勻后各取2毫升加入6孔板中，每種濃度設(shè)置4個平行孔，37 °C, 5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在不同時間點(3、6、12、24小時)分別用胰蛋白酶消化細胞，800g離心，0.5毫升hanks緩沖液重懸配制細胞懸液，然后用流式細胞儀檢測細胞內(nèi)熒光值。檢測參數(shù):實驗過程中采取固定的流式激光電壓，488納米激光激發(fā)，收集FL2通道檢測信號。采集I萬個細胞的平均熒光值，將幾個平行樣計算平均值，為該時間點該細胞攝入阿霉素(DOX)和Au@Si02-D0X的熒光定量值。取熒光定量值，Origin軟件作圖，分析細胞攝入阿霉素(DOX)的趨勢，如圖11。
[0159]通過圖11可以看出相對于單獨使用抗癌藥物阿霉素，用本發(fā)明所述的載體AuOSiO2包載阿霉素可以將細胞攝入量增加大約5倍。
[0160]實施例13
[0161]本實施例用于說明本發(fā)明的藥物載體及藥物組合物對細胞活力的影響。
[0162]1)細胞培養(yǎng)
[0163]將人肺癌A549細胞分別培養(yǎng)于完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)中，置于37°C，5% 二氧 化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
[0164]2)細胞活力測定
[0165]以6000細胞/孔密度，將細胞接種于96孔板中。貼壁24小時后，分別加入含濃度為0.1、1.0,5.0、10微摩爾/升的阿霉素和Au@Si02-D0X(實施例1制備，濃度以負載的阿霉素計)的完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)。在處理24小時、48小時、72小時后，撤掉培養(yǎng)基；每孔加入110微升，含10% (體積比)CCK-8的細胞培養(yǎng)液，在培養(yǎng)箱中孵育2小時后；在酶標儀上測定在450納米處吸光度，600納米處吸光值為參比波長。每組吸光值扣除空白溶液吸光值后，每孔對應(yīng)值除以對照組作為細胞活力。每組設(shè)置6個平行孔，每組實驗重復三次。細胞活力測定結(jié)果如圖12和圖13所示。圖12為阿霉素濃度與細胞活力的關(guān)系圖；圖13為Au@Si02-D0X濃度(濃度以負載的阿霉素計)與細胞活力的關(guān)系圖。對比圖12和圖13，可以看出，相對于單獨使用等濃度的抗癌藥物阿霉素，本發(fā)明所述載體AulgSiO2具有減緩阿霉素降低細胞活力的作用，說明阿霉素從載體中緩慢釋放的效果。此特點說明該載體特別適用于要求藥物緩釋的治療需要。
[0166]實施例14
[0167]本實施例用于說明激光照射后的細胞活力。
[0168]I)細胞培養(yǎng)
[0169]將人肺癌A549細胞以3000細胞/孔密度，接種于96孔板中。使用DMEM液體培
養(yǎng)基(含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)于37°C，5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中，貼壁24小時后，分別加入含有5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X (實施例1制備)和含有Au@Si02 (實施例1制備，其用量與5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X中所含有的Au@Si02相同)的完全培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基為DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)，并分別處理細胞12小時。
[0170]2)細胞存活率測定
[0171]激光照射前，細胞用磷酸鹽緩沖溶液洗滌2次，用波長為780納米、功率為24瓦/平方厘米的激光照射8分鐘。照射后，繼續(xù)培養(yǎng)12小時、24小時，用LIVE-DEAD試劑盒(Invitrogen公司)對細胞染色，死細胞染為紅色，活細胞染為綠色，檢測細胞存活率，結(jié)果如圖14。
[0172]通過圖14可以看出，對照組與空白載體AuOSiOdi經(jīng)激光照射后，細胞存活率無明顯下降；而包載藥物的載體Au@Si02-D0X經(jīng)激光照射后12小時和24小時，細胞存活率將逐漸下降。這說明載體Au@Si02-D0X在激光照射后，將包載的阿霉素釋放，起到了殺死癌細胞的作用。對照組為不給任何藥物處理的細胞，空白載體Au@Si02組為Au@Si02處理的細胞，載體組為5微摩爾/升等效濃度的Au@Si02-D0X處理的細胞。
[0173]實施例15
[0174]本實施例用于說明激光照射細胞后細胞膜完整性評價
[0175]I)細胞培養(yǎng)
[0176]將人肺癌A549細胞接種于35毫米共聚焦成像培養(yǎng)皿中，使用DMEM液體培養(yǎng)基(含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)于37°C，5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，磷酸鹽緩沖溶液洗滌兩次。
[0177]2)細胞膜完整性檢測
[0178]雙光子共聚焦顯微鏡用于研究溶酶體膜的完整性。
[0179](I)加入含實施例1中制備的5微摩爾/升等效阿霉素濃度的Au@Si02-D0X的DMEM液體培養(yǎng)基(含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)處理細胞12小時；
[0180](2)用含5微克/毫升吖啶橙(AO)的DMEM液體培養(yǎng)基于37°C孵育細胞15分鐘，磷酸鹽緩沖溶液洗滌3次，然后加入無血清DMEM液體培養(yǎng)基；
[0181](3)利用雙光子熒光顯微鏡的近紅外激光(780納米波長，飛秒脈沖Maitai激光器，顯微鏡為01ympusBX61Wl，Japan)照射，激光功率密度為24和48瓦/平方厘米，照射時間為0、3、8分鐘；
[0182](4)共聚焦顯微鏡下觀察，488納米激發(fā)，分別在537納米和615納米收集發(fā)射信號。紅色膜泡結(jié)構(gòu)為完整的溶酶體；如果胞漿內(nèi)膜泡狀結(jié)構(gòu)的紅色信號減弱，同時在溶酶體周圍出現(xiàn)紅綠相間或者綠色膜狀結(jié)構(gòu)，表明溶酶體膜結(jié)構(gòu)受到損傷。此外，觀察細胞膜邊緣的冒泡結(jié)構(gòu)，分析細胞膜的完整性程度，如圖15。
[0183]通過圖15可以看出，攝入Au@Si02-D0X的癌細胞經(jīng)高功率(48瓦/平方厘米)激光照射后，溶酶體膜破裂，細胞死亡；低功率(24瓦/平方厘米)以下激光對溶酶體膜無明顯影響，說明本發(fā)明中所述載體能將激光轉(zhuǎn)化為熱，通過破壞溶酶體膜殺死癌細胞。
[0184]實施例16
[0185]本實施例用于說明細胞內(nèi)的低功率激光控制藥物釋放對腫瘤細胞活力的影響。本實施例選擇不同類型腫瘤細胞、不同低功率的激光、不同照射時間考察激光熱療和藥物釋放誘導的化療效果。
[0186]I)細胞培養(yǎng)
[0187]選擇多種人源腫瘤細胞包括人肺癌細胞(A549)、人乳腺癌細胞(MCF-7)、人乳腺癌細胞(MDA-MB-231)、人黑色素瘤細胞(A375)、人宮頸癌細胞(HeLa)、人肝癌細胞(!fepG2)和人前列腺癌細胞(LNCap)，以3000細胞/孔密度，將這些細胞分別接種于96孔板中，使用DMEM液體培養(yǎng)基(含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2暈摩爾/升的谷氨酰胺)于37°C，5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，磷酸鹽緩沖溶液洗滌兩次。分別加入含有5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X(實施例1制備)和含有Au@Si02(實施例1制備，其用量與5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X中所含有的Au@Si02相同)的完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)，并分別處理細胞12小時。
[0188]2)激光照射
[0189]丟棄細胞培養(yǎng)基，加入完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2暈摩爾/升的谷氨酰胺)。選擇A549細胞、MCF-7細胞、MDA-MB-231細胞、A375細胞進行照射，近紅外激光器照射孔板中的細胞(飛秒激光780納米，功率密度:24瓦/平方厘米)，照射時間為3、5、8分鐘。選擇HeLa細胞、!fepG2細胞、HNCap細胞進行照射，近紅外激光器照射孔板中的細胞(飛秒激光780納米，功率密度:12瓦/平方厘米)，照射時間為5、lOmin。各設(shè)一實驗組為攝入藥物組(分別為上述5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X處理的細胞組和Au@Si02處理的細胞組)，攝入藥物并激光照射組，并有對照組(無藥物處理和無激光照射組)，另設(shè)一實驗組為加I微摩爾/升阿霉素。
[0190]3)細胞活力測定
[0191]照射后24小時分別利用CCK-8試劑盒測試細胞的活力。每孔加入110微升混合液，混合液含90體積％完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2暈摩爾/升的谷氨酰胺)和10體積％CCK_8的細胞培養(yǎng)液，在培養(yǎng)箱中孵育2小時后。在酶標儀上測定在450納米處吸光度，600納米處吸光值為參比波長；每組吸光值扣除空白溶液吸光值后，每孔對應(yīng)值除以對照組作為細胞活力。每組設(shè)置6個平行孔，每組實驗重復三次。
[0192]評價激光照射后，AuiSiO2和Au@Si02-D0X對細胞活力的影響；分析細胞活力變化是否為藥物釋放引起。通過圖16 (A，B)可看出，Au@Si02組經(jīng)低功率(24瓦/平方厘米和12瓦/平方厘米)激光照射后，細胞活力均無明顯下降，表明載體將兩種功率的激光轉(zhuǎn)化成的熱量不足以殺死癌細胞；而411略102-0(?組經(jīng)兩種功率激光照射后，細胞活力在后續(xù)的24小時內(nèi)均逐漸下降，說明其中包載的阿霉素在激光照射后逐漸釋放，造成了細胞活力的下降，達到化療的效果。
[0193]實施例17
[0194]本實施例用于說明高功率激光同時實現(xiàn)熱療和細胞內(nèi)藥物釋放的化療雙重模式對腫瘤細胞活力的影響。
[0195]I)細胞培養(yǎng)[0196]選擇三種人源腫瘤細胞包括人肺癌細胞(A549)、人乳腺癌細胞(MCF-7)、人黑色素瘤細胞(A375)等細胞，以3000細胞/孔密度，將這些細胞分別接種于96孔板中，使用完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)于37°C，5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，磷酸鹽緩沖溶液洗滌兩次。分別加入含有5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X (實施例1制備)和含有Au@Si02 (實施例1制備，其用量與5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X中所含有的Au@Si02相同)的完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2毫摩爾/升的谷氨酰胺)，并分別處理細胞12小時。
[0197]2)激光照射
[0198]丟棄細胞培養(yǎng)基，加入完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2暈摩爾/升的谷氨酰胺)，選擇A549、MCF-7、A375細胞，使用近紅外激光器照射孔板中的細胞(飛秒激光780納米，功率密度:48瓦/平方厘米)，照射時間為12分鐘。各設(shè)一實驗組為攝入藥物組(分別為上述5微摩爾/升等效阿霉素的Au@Si02-D0X處理的細胞組和Au@Si02處理的細胞組)，攝入藥物并激光照射組，并有對照組(無藥物處理和無激光照射組)。[0199]3)細胞活力測定
[0200]照射后12小時分別利用CCK-8試劑盒測試細胞的活力。每孔加入110微升混合液，混合液含90體積％完全培養(yǎng)基(DMEM液體培養(yǎng)基，其含有10重量％胎牛血清、I重量％青霉素、100單位/毫升的鏈霉素、2暈摩爾/升的谷氨酰胺)和10體積％CCK_8的細胞培養(yǎng)液，在培養(yǎng)箱中孵育2小時后。在酶標儀上測定在450納米處吸光度，600納米處吸光值為參比波長；每組吸光值扣除空白溶液(只加入90體積％完全培養(yǎng)基和10體積％CCK，無細胞)的吸光值后，每孔對應(yīng)值除以對照組(無藥物處理、無激光照射的細胞組)作為細胞活力。每組設(shè)置6個平行孔，每組實驗重復三次。
[0201]評價高功率激光照射后，AuiSiO2和Au@Si02-D0X對細胞活力的影響；分析細胞活力變化是否為熱療、熱輔助藥物釋放的協(xié)同作用引起。通過圖17可看出，AulgSiO2組經(jīng)48瓦/平方厘米高功率激光照射后，細胞活力明顯下降，表明載體將此功率激光轉(zhuǎn)化成的熱可殺死大部分的癌細胞；同時經(jīng)激光照射后，相比載體，Au@Si02-D0X組細胞活力在后續(xù)12小時內(nèi)顯著下降，說明其殺死腫瘤細胞方式是光熱和藥物釋放化療的協(xié)同效應(yīng)，一方面載體能夠光熱轉(zhuǎn)換，殺死大部分腫瘤細胞，起主導作用；另一方面包載的阿霉素在激光照射后迅速釋放，也降低了細胞活力。
[0202]實施例18
[0203]本實施例用于說明Au@Si02-D0X在腫瘤動物模型上抑制腫瘤生長的作用。
[0204]I)動物接種
[0205]取6、7周齡，體重為17-19克的雄性Balb C小鼠。將對數(shù)生長期的細胞個數(shù)(大約IO6個)人類乳腺癌細胞(MCF-7)接種于小鼠上肢腋部皮下，每日觀察并記錄腫瘤生長狀況。接種腫瘤10-14天后，待腫瘤塊生長至直徑在2毫米~20毫米較為合適。
[0206]2)激光照射
[0207]通過尾靜脈注射向荷瘤小鼠的腫瘤部位給予實施例1中制備的Au@Si02-D0X (用藥量相當于50毫克/千克體重)，然后用波長780納米，功率600毫瓦，光斑2毫米的激光掃描性均勻照射腫瘤部位，每處部位照射15分鐘。
[0208]2)激光照射后腫瘤生長抑制情況
[0209]激光照射后，分別在攝入藥物24小時、72小時、120小時，測定腫瘤平均直徑分別為8毫米、5毫米和2毫米。而未用藥小鼠對照組(接種腫瘤，給予生理鹽水注射)的腫瘤平均直徑分別為10暈米、12暈米和15暈米。然后,按本地動物處置規(guī)范處死小鼠,取出腫瘤組織，稱重，通過觀察確認腫瘤壞死。將部分腫瘤組織在10%福爾馬林中固定24小時，用石蠟包埋，切片(5微米厚度)，在倒置顯微鏡下觀察腫瘤組織切片中Au@Si02-D0X的聚集狀況，如圖18。
[0210]通過圖18可以看出本發(fā)明所述載體Au@Si02-D0X進入荷瘤小鼠體內(nèi)后，能夠蓄積在腫瘤組織中；并且在激光照射后，能夠造成載體周邊的腫瘤組織壞死。
[0211]以上詳細描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實施方式中的具體細節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0212]另外需要說明的是，在上述【具體實施方式】中所描述的各個具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重復，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。
[0213]此外 ，本發(fā)明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。
【權(quán)利要求】
1.一種藥物載體，其特征在于，該藥物載體包括金納米棒，以及包覆在金納米棒表面的介孔二氧化硅層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物載體，其中，所述金納米棒的長度為5-200納米；所述金納米棒的長徑比為1.5-20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物載體，其中，所述介孔二氧化硅層的厚度為3-50納米。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物載體，其中，所述介孔二氧化硅層的孔徑為1-20納米，所述藥物載體的比表面積為1-150平方米/克，孔體積為0.05-10立方厘米/克。
5.一種藥物載體的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟:在含有十六烷基三甲基溴化銨的金納米棒水溶液中，在PH值為8.5-11的條件下，加入硅酸酯的醇溶液進行反應(yīng)，并進行固液分離，得到表面包覆有介孔二氧化硅層的金納米棒。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述金納米棒的水溶液中，以金元素計的金納米棒濃度為10微摩爾/升1.5毫摩爾/升，所述金納米棒的長度為5-200納米；所述金納米棒的長徑比為1.5-20。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其中，分別以金元素和硅元素計，所述金納米棒的水溶液中的金納米棒與所述硅酸酯的摩爾比為1:1-50 ;以金元素計的所述金納米棒與十六烷基三甲基溴化銨的摩爾比為1:1_20。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述反應(yīng)的條件還包括:接觸的溫度為4-95°C，接觸的時間為0.04-10天。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述硅酸酯為硅酸四甲酯、硅酸四乙酯，硅酸四丙酷和娃酸四丁酷中的一種或多種。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述醇為甲醇、乙醇或其他分子量小于200、常溫常壓下為液體的醇類中的一種或多種。
11.一種藥物組合物，所述藥物組合物包括載體和負載在載體上的藥物，其特征在于，所述載體為權(quán)利要求1-4中任意一項所述的藥物載體，或者為通過權(quán)利要求5-10中任意一項所述方法所制備的藥物載體。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其中，所述藥物為阿霉素、紫杉醇、長春堿、順鉬、喜樹堿、DNA和小干擾RNA中的一種或多種。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的藥物組合物，其中，以所述載體的重量為基準，所述藥物組合物的載藥率為1-40重量％。
14.權(quán)利要求1-4中任意一項所述的藥物載體和/或權(quán)利要求11-13中任意一項所述的藥物組合物在制備用 于診斷和/或治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K47/04GK103893764SQ201210572112
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2012年12月25日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月25日
【發(fā)明者】陳春英, 仉振江, 王靜, 王黎明, 吳曉春 申請人:國家納米科學中心