專(zhuān)利名稱：一種防治水產(chǎn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)的中藥制劑及制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)動(dòng)物疾病防治(漁藥)技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)的中藥制劑，同時(shí)還涉及一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)的中藥溶液劑的制備方法，還涉及一種防治水產(chǎn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)的中藥制劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
魚(yú)類(lèi)寄生蟲(chóng)是水產(chǎn)養(yǎng)殖中的常見(jiàn)病、多發(fā)病，魚(yú)體被寄生蟲(chóng)感染發(fā)病后，輕者體質(zhì)消瘦，餌料系數(shù)上升，重者攝食、行動(dòng)困難，甚至引起大面積死亡，給漁業(yè)生產(chǎn)造成重大損失，近年來(lái)，隨著養(yǎng)殖密度的增加，養(yǎng)殖水環(huán)境的惡化，魚(yú)類(lèi)寄生蟲(chóng)也呈多發(fā)、頻發(fā)、多樣及不易根治的趨勢(shì)。由于魚(yú)類(lèi)寄生蟲(chóng)疾病的危害日趨嚴(yán)重，化學(xué)合成藥物的大量應(yīng)用，造成抗藥性、安全性、特種水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的藥敏性以及對(duì)養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境條件的破壞等問(wèn)題日益突出，而使得應(yīng)用植物源殺蟲(chóng)劑的呼聲越來(lái)越高。目前，作為經(jīng)驗(yàn)性的配方，利用天然植物防治魚(yú)類(lèi)寄生蟲(chóng)疾病，在水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)踐中已得到一定程度的應(yīng)用，如利用苦楝防治魚(yú)類(lèi)棘頭蟲(chóng)??；利用苦楝、毛莨合劑防治魚(yú)類(lèi)指環(huán)蟲(chóng)?。焕脵壚?、貫眾防治魚(yú)類(lèi)吸蟲(chóng)、線蟲(chóng)病等。但長(zhǎng)期以來(lái)，植物源殺蟲(chóng)劑在水產(chǎn)上的應(yīng)用更多體現(xiàn)在口頭流傳和水產(chǎn)養(yǎng)殖習(xí)慣用法上，實(shí)際生產(chǎn)中由于對(duì)寄生蟲(chóng)的生活史了解不夠，導(dǎo)致許多錯(cuò)誤配方長(zhǎng)期使用；同時(shí)由于對(duì)殺蟲(chóng)植物的了解不夠，許多經(jīng)驗(yàn)性配方尚未真正發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)，因此，需尋找新的對(duì)環(huán)境無(wú)污染易降解的天然植物殺蟲(chóng)藥以及從天然植物中分離殺蟲(chóng)活性成分，進(jìn)而進(jìn)行仿生合成，更符合人類(lèi)對(duì)健康的要求。同時(shí)，也有利于植物資源的合理利用和開(kāi)發(fā)。經(jīng)過(guò)多年研究發(fā)現(xiàn)，狼毒素對(duì)指環(huán)蟲(chóng)等魚(yú)類(lèi)寄生蟲(chóng)具有很好的殺滅作用。狼毒大戟又名“東北狼毒”、“貓眼花根”、“狼毒”，為大戟科植物，主要分布于黑龍江、內(nèi)蒙古、吉林、遼寧、河北等地，其全株有毒，用藥部分主要為根。狼毒大戟為多年生草本，高達(dá)40cm，有白色乳液。其昧辛，性平，有毒。入肺、肝、脾，具有逐水祛痰、散結(jié)殺蟲(chóng)的功效。最新研究還發(fā)現(xiàn)，其具抗腫瘤、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等活作用。徐德昌等研究表明，O. 3%狼毒大戟水劑對(duì)甘監(jiān)夜盜進(jìn)行室內(nèi)殺蟲(chóng)實(shí)驗(yàn),殺蟲(chóng)率達(dá)100%，用O. 3%狼毒大戟水劑500-650倍防治蔬菜桃蚜，效果為90%_97%，利用大戟狼毒浸提殘?jiān)鼘?duì)蠐螬進(jìn)行室內(nèi)喂養(yǎng)殺蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)，殺蟲(chóng)率為100%。王彬等探討了植物狼毒大戟對(duì)釘螺及血吸蟲(chóng)毛蝴的影響，狼毒大戟狼毒大戟根水煮液在濃度為2. 5g/L時(shí)經(jīng)過(guò)24h，48h，72h浸殺釘螺的死亡率分別為36. 7%, 66. 7%, 93. 3%。而以70%乙醇提取液經(jīng)過(guò)相同時(shí)間浸殺釘螺的死亡率分別為43. 3%, 86. 7%, 96. 7%。同時(shí)被狼毒大戟水煮液浸殺的釘螺體內(nèi)糖原含量明顯下降，減少幅度從9. 61%到33. 60%，表明狼毒大戟通過(guò)影響釘螺的能量代謝而抑制其生長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)的中藥制劑，性價(jià)比高，效果顯著，為植物源性藥物，能夠減少耐藥性發(fā)生幾率，解決化學(xué)殺蟲(chóng)藥容易引起高耐藥性的問(wèn)題，避免因高耐藥性而不斷增加藥物用量，降低對(duì)環(huán)境的污染。
本發(fā)明的另一目的是在于提供一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)的中藥制劑的制備方法，該方法將狼毒大戟?dú)⑾x(chóng)活性成分分離出來(lái)，提高療效，且該方法易行，操作方便，尤其適用于當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖的集約化、規(guī)?；a(chǎn)的需要。本發(fā)明還有一個(gè)目的是在于提供了一種防治水產(chǎn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)的中藥制劑的應(yīng)用。狼毒大戟提取物對(duì)鯽魚(yú)和草魚(yú)的安全濃度分別為2. 6Ippm和2. 38ppm,高于最佳有效濃度2倍多，說(shuō)明該狼毒大戟提取物對(duì)魚(yú)類(lèi)是比較安全的，可以應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中指環(huán)蟲(chóng)的防治。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)的中藥溶液制劑，由下列組分按比例構(gòu)成(g/ml)狼毒大戟乙酸乙酯分步提取物3-10g，乳化劑(0P-10或656-A)5-10g，穩(wěn)定劑(丙二醇)l_3g,丙酮定容至100ml,所述試劑均為工業(yè)純。
一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，由下列組分按比例構(gòu)成(最佳配比):狼毒大戟乙酸乙酯提取物5g，乳化劑(0P-10或656_A)5g，穩(wěn)定劑(丙二醇)lg，溶齊U (丙酮)定容至IOOml。一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)中藥溶液劑的制備方法，其步驟是1、稱取50g干燥的狼毒大戟(中藥飲片)粉碎至20目，用80%乙醇(v/v)進(jìn)行索氏提取，收集提取液，回收乙醇，得到濃縮原液IOOml ；2、濃縮原液用石油醚萃取四次，每次200ml，分離石油醚層，留水相；3、水相用乙酸乙酯萃取五次，每次300ml，合并萃取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸發(fā)乙酸乙酯，得到固體殘?jiān)?、步驟3)中的固體殘?jiān)蒙倭?0%乙醇(v/v)洗脫，于水浴鍋上揮發(fā)溶劑，得到褐色固形物，即狼毒大戟乙酸乙酯提取物；5、稱取3-10g提取物,用60ml丙酮完全溶解后,加5_10g的乳化劑和l_2g的穩(wěn)定齊U，最后用丙酮定容到100ml。一種狼毒大戟提取物在制備防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑的應(yīng)用，實(shí)驗(yàn)證明狼毒大戟提取物在O. 25ppm沒(méi)有殺蟲(chóng)效果，在O. 5ppm顯示殺蟲(chóng)效果；當(dāng)濃度達(dá)到Ippm時(shí),其殺蟲(chóng)率可達(dá)到90%以上；當(dāng)達(dá)到2ppm時(shí),殺蟲(chóng)率達(dá)到100%。甲苯咪唑在O. lppm、
O.2ppm、0. 4ppm時(shí)均未見(jiàn)明顯殺蟲(chóng)效果，當(dāng)濃度為O. 8ppm時(shí),顯示有一定殺蟲(chóng)效果但殺蟲(chóng)率只有50%左右，且在第5天開(kāi)始出現(xiàn)草魚(yú)、鯽魚(yú)死亡；甲苯咪唑1. 6ppm組，顯示有效果，但殺蟲(chóng)率也不高，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)魚(yú)死亡嚴(yán)重，未到第6d已全部死亡。從狼毒大戟和甲苯咪唑作用時(shí)間與效果看，二者在96h時(shí)殺蟲(chóng)效果要好于48h時(shí)的殺蟲(chóng)效果，說(shuō)明，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間可提高其殺蟲(chóng)效果，但對(duì)于二者作用時(shí)間達(dá)到96h后，再延長(zhǎng)時(shí)間，效果提高不明顯。狼毒大戟提取物對(duì)鯽魚(yú)和草魚(yú)的安全濃度分別為2. 6Ippm和2. 38ppm,高于最佳有效濃度2倍多，說(shuō)明該狼毒大戟提取物對(duì)魚(yú)類(lèi)是比較安全的，可以應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中指環(huán)蟲(chóng)的防治。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果
A、首次將狼毒大戟應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)的防治中；B、采用分步提取法，將狼毒大戟中殺蟲(chóng)有效成分分離出來(lái)，使效果更加顯著；C、為植物源性殺蟲(chóng)劑，能夠解決化學(xué)殺蟲(chóng)藥造成高耐藥性的問(wèn)題；D、避免了化學(xué)藥物因耐藥性不斷增加用量的問(wèn)題，從而減少對(duì)水域環(huán)境的污染。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述試劑或原料，如未特別說(shuō)明，市售均可使用。實(shí)施例1:
一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，其組成如下狼毒大戟乙酸乙酯提取物5g，乳化劑(0P-10或656-A) 5g，穩(wěn)定劑(丙二醇)Ig,丙酮定容至100ml。其制備方法如下I)稱取50g狼毒大戟粉碎至20目，用80%乙醇(v/v)進(jìn)行索氏提取(中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[S].北京化學(xué)工業(yè)出版社，2005.)，收集提取液，回收乙醇，得到濃縮原液約IOOml ；2)用石油醚萃取四次，每次200ml，分離石油醚層，留水相；3)水相用乙酸乙酯萃取五次，每次300ml，合并萃取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙酸乙酯得到固體殘?jiān)?)步驟3)中的固體殘?jiān)?0%v/v乙醇洗脫，于水浴鍋上揮發(fā)溶劑，得到褐色固形物，即狼毒大戟乙酸乙酯提取物；6)先將5g的狼毒大戟乙酸乙酯提取物，用60ml丙酮完全溶解；7)溶解之后加入5g的乳化劑和Ig的穩(wěn)定劑；8)混勻后用丙酮定容至100ml，混合均勻，最終制得防治水產(chǎn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)中藥溶液劑。實(shí)施例2 一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，其組成如下狼毒大戟乙酸乙酯提取物3g，乳化劑^56_A)5g，穩(wěn)定劑(丙二醇)lg，丙酮定容至IOOmlo其制備方法除原料重量不同外，同實(shí)施例1。實(shí)施例3 一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，其組成如下狼毒大戟乙酸乙酯提取物10g，乳化劑(0P-10) 10g，穩(wěn)定劑(丙二醇)3g，丙酮定容至 IOOml ο其制備方法除原料重量不同外，同實(shí)施例1。實(shí)施例4 一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，其組成如下狼毒大戟乙酸乙酯提取物6. 5g,乳化劑(0P-10) 7. 5g,穩(wěn)定劑(丙二醇)2g,丙酮定容至100ml。其制備方法除原料重量不同外，同實(shí)施例1。
實(shí)施例5 狼毒大戟乙酸乙酯提取物對(duì)魚(yú)類(lèi)指環(huán)蟲(chóng)的殺滅效果實(shí)驗(yàn)I材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)藥物狼毒大戟乙酸乙酯提取物，見(jiàn)實(shí)施例1。1. 2實(shí)驗(yàn)魚(yú)實(shí)驗(yàn)用草魚(yú)、鯽魚(yú)均購(gòu)自武漢市水產(chǎn)科學(xué)研究所漢南養(yǎng)殖基地，規(guī)格均一、健壯，草魚(yú)平均25g左右，鯽魚(yú)平均體重15g左右。按照指環(huán)蟲(chóng)模型建立方法(王高學(xué)，徐鈺，王建華等.29種天然植物提取物對(duì)指環(huán)蟲(chóng)殺滅作用的研究.淡水漁業(yè)，2006，36 (3) :3_8.)感染 本地中型指環(huán)蟲(chóng)，當(dāng)實(shí)驗(yàn)魚(yú)鰓部中型指環(huán)蟲(chóng)感染數(shù)量平均20 40個(gè)/尾時(shí)進(jìn)行藥效實(shí)驗(yàn)。1. 3濃度設(shè)定及殺蟲(chóng)活性測(cè)定使用體積為50cmX40cmX40cm玻璃水族缸，盛人充分曝氣自來(lái)水，pH6. 5 7. 2，控制水溫(20±1) °C，分別投放感染有中型指環(huán)蟲(chóng)的實(shí)驗(yàn)魚(yú)40尾。根據(jù)狼毒大戟提取物預(yù)試結(jié)果,從O. 25ppm濃度開(kāi)始按等倍關(guān)系設(shè)置5個(gè)濃度梯度(分別為0. 25ppm、0. 5ppm、lppm、2ppm、4ppm),甲苯咪唑從O.1ppm濃度開(kāi)始按等倍關(guān)系設(shè)置5個(gè)濃度梯度(O. lppm、
0.2ppm、0. 4ppm、0. 8ppm>1. 6ppm)分別加入并攪拌均勻，然后在48h、96h、144h分別在每個(gè)實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組隨機(jī)抽檢10尾實(shí)驗(yàn)魚(yú)全鰓制片、鏡檢，觀察樣品在各實(shí)驗(yàn)濃度及實(shí)驗(yàn)時(shí)間下對(duì)指環(huán)蟲(chóng)的殺滅效果，并統(tǒng)計(jì)計(jì)算殺蟲(chóng)率，以及96h最低有效濃度、最佳有效濃度、最聞殺蟲(chóng)率等。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,并設(shè)對(duì)照組。殺蟲(chóng)率(％)=(對(duì)照組的指環(huán)蟲(chóng)平均存活數(shù)量-實(shí)驗(yàn)組的指環(huán)蟲(chóng)平均存活數(shù)量)/對(duì)照組的指環(huán)蟲(chóng)平均存活數(shù)量X100%殺蟲(chóng)率在20% 30%的藥物濃度表示為最低有效濃度；殺蟲(chóng)率在20%以下藥物濃度的表不為無(wú)效濃度；達(dá)到最聞殺蟲(chóng)率且魚(yú)不中毒時(shí)為最佳殺蟲(chóng)濃度，藥物濃度引起實(shí)驗(yàn)魚(yú)側(cè)游無(wú)力以及死亡的濃度為藥物對(duì)魚(yú)的中毒濃度。1. 4殺蟲(chóng)活性評(píng)價(jià)在設(shè)定殺蟲(chóng)時(shí)間點(diǎn)取供試魚(yú)全鰓制片、鏡檢觀察并統(tǒng)計(jì)指環(huán)蟲(chóng)從鰓部脫落情況，如果沒(méi)有脫落，觀察是否死亡，蟲(chóng)體頭腺周?chē)谄髟贗 2min不發(fā)生收縮者，示為死亡，若鰓部無(wú)蟲(chóng)或蟲(chóng)已死亡均確定殺蟲(chóng)率為100 ;如果部分脫落，統(tǒng)計(jì)每尾魚(yú)鰓部存活寄生蟲(chóng)數(shù)量，計(jì)算平均值，并與對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比，計(jì)算殺滅率，以此來(lái)評(píng)價(jià)殺蟲(chóng)效果。2結(jié)果與分析從表I表2可以看出狼毒大戟提取物在O. 25ppm沒(méi)有殺蟲(chóng)效果，在O. 5ppm顯示殺蟲(chóng)效果；當(dāng)濃度達(dá)到Ippm時(shí),其殺蟲(chóng)率可達(dá)到90%以上；當(dāng)達(dá)到2ppm時(shí)，殺蟲(chóng)率達(dá)到100%ο甲苯咪唑在O. lppm、0. 2ppm、0. 4ppm時(shí)均未見(jiàn)明顯殺蟲(chóng)效果，當(dāng)濃度為O. 8ppm時(shí),顯示有一定殺蟲(chóng)效果但殺蟲(chóng)率只有50%左右，且在第5天開(kāi)始出現(xiàn)草魚(yú)、鯽魚(yú)死亡；甲苯咪唑
1.6ppm組，顯示有效果，但殺蟲(chóng)率也不高，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)魚(yú)死亡嚴(yán)重，未到第6d已全部死亡。從狼毒大戟和甲苯咪唑作用時(shí)間與效果看，二者在96h時(shí)殺蟲(chóng)效果要好于48h時(shí)的殺蟲(chóng)效果，說(shuō)明，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間可提高其殺蟲(chóng)效果，但對(duì)于二者作用時(shí)間達(dá)到96h后，再延長(zhǎng)時(shí)間，效果提高不明顯。表I狼毒大戟提取物對(duì)草魚(yú)指環(huán)蟲(chóng)的殺滅效果實(shí)驗(yàn)
權(quán)利要求
1.一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，由下列組分按比例構(gòu)成狼毒大戟乙酸乙酯提取物3-10 g，乳化劑5-10 g，穩(wěn)定劑1-3 g，丙酮定容至100 ml ；所述的乳化劑為=OP-1O或656-A ；所述的穩(wěn)定劑為丙二醇；所述的一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，其制備過(guò)程是1)稱取50g干燥的狼毒大戟粉碎至20目，用80%乙醇v/v進(jìn)行索氏提取，收集提取液，回收乙醇，得到濃縮原液100 ml ；2)用石油醚萃取四次，每次200ml，分離石油醚層，留水相；3)水相用乙酸乙酯萃取五次，每次300ml，合并萃取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙酸乙酯，得到固體殘?jiān)?)步驟3)中的固體殘?jiān)?0%乙醇v/v洗脫，于水浴鍋上揮發(fā)溶劑，得到褐色固形物， 即狼毒大戟乙酸乙酯提取物；5)稱取3-10g步驟4)中得到的提取物，用60 ml丙酮完全溶解后，加5_10 g的乳化劑和1-2 g的穩(wěn)定劑,最后用丙酮定容到100 ml ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，由下列組分按比例構(gòu)成狼毒大戟乙酸乙酯提取物5g,乳化劑5 g,穩(wěn)定劑lg，丙酮定容至100 ml ο
3.權(quán)利要求1所述的一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，其狼毒大戟乙酸乙酯提取物在制備防治水產(chǎn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種防治水產(chǎn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)的中藥制劑及制備方法和應(yīng)用，一種防治水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病的中藥制劑，其制備步驟是1)狼毒大戟用80%乙醇進(jìn)行索氏提取，收集提取液；2)用石油醚萃取；3)用乙酸乙酯萃取，得固體殘?jiān)?)固體殘?jiān)靡掖枷疵?，揮發(fā)溶劑得到狼毒大戟乙酸乙酯提取物；5)稱取3-10g步驟4)中得到的提取物，用丙酮完全溶解后，加5-10g的乳化劑和1-2g的穩(wěn)定劑，丙酮定容100ml。該方法將狼毒大戟?dú)⑾x(chóng)活性成分分離出來(lái)，方法易行，操作方便，狼毒大戟提取物對(duì)鯽魚(yú)和草魚(yú)的安全濃度分別為2.61ppm和2.38ppm，對(duì)魚(yú)類(lèi)是比較安全的，可以應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中水產(chǎn)動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病，適用于集約化、規(guī)?；a(chǎn)養(yǎng)殖的需要。
文檔編號(hào)A61K36/47GK102988462SQ20121055451
公開(kāi)日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月19日
發(fā)明者艾桃山, 喻運(yùn)珍, 高強(qiáng)林, 余姣龍, 余少梅 申請(qǐng)人:武漢中博水產(chǎn)生物技術(shù)有限公司