北冬蟲夏草提取物及其在制備治療腫瘤藥物上的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種北冬蟲夏草提取物，其中蟲草多糖與蟲草素的重量比為1－25:1。所述北冬蟲夏草提取物選自人工培育北冬蟲夏草子實(shí)體的提取物、從人工培育北冬蟲夏草培養(yǎng)基中得到的提取物，及從人工培育北冬蟲夏草培養(yǎng)基中得到的提取物加北冬蟲夏草子實(shí)體細(xì)粉的復(fù)合物。本發(fā)明還提供北冬蟲夏草提取物在制備治療腫瘤藥物上的應(yīng)用。所述腫瘤包括實(shí)體瘤和非實(shí)體瘤，例如肝癌、肺癌、乳腺癌和肉瘤中的一種或一種以上或白血病。所述藥物還具有增強(qiáng)免疫功能、協(xié)同放療或化療的治療作用和降低放療或化療藥物毒性的作用。
【專利說明】北冬蟲夏草提取物及其在制備治療腫瘤藥物上的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及北冬蟲夏草的研究，特別涉及北冬蟲夏草的活性部位及其制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]北冬蟲夏草，又名蛹蟲草，蛹草，北蟲草，蛹草菌等，在吉林省首次發(fā)現(xiàn)，經(jīng)鑒定它與冬蟲夏草為同一屬，故定名為蛹草。分類學(xué)上屬于真菌門，子囊菌亞門，核菌綱，球殼目，麥角菌科，蟲草屬。北冬蟲夏草作為傳統(tǒng)珍貴中藥材，我國人民對其藥用價值早有認(rèn)識。李時珍在《本草綱目》中指出，蟬花能主治“小兒天吊驚癇，夜啼，心悸”。據(jù)考證，當(dāng)時的“蟬花”包括了蟬蟲草和蛹蟲草等多種寄生于蟲體或蛹體上的蟲草。趙學(xué)敏在《本草綱目拾遺》中把蟲草類的藥用歸之為“能治百虛百損”?！缎氯A本草綱要》稱，蛹草“全草:味甘，性平。有益肺腎，補(bǔ)精髓，止血化痰的功能”，可見其功效與冬蟲夏草近似，故一些醫(yī)家將其作為冬蟲夏草的替代品入藥應(yīng)用。北冬蟲夏草人工栽培成功以來，隨著人們對北冬蟲夏草的滋補(bǔ)保健功效和多種藥用價值的認(rèn)識，其開發(fā)利用研究倍受關(guān)注。
[0003]《中國藥事》1985年第14卷第9期報道了人工發(fā)酵培養(yǎng)蟲草菌成功。中國專利申請201010278624.1和201010278637.9公開了復(fù)方發(fā)酵蟲草菌粉(蝙蝠蛾擬青霉Cs_4菌粉)及其組合藥物用于抗衰老、抗疲勞、耐缺氧、提高免疫力、鎮(zhèn)靜、抗休克、抗光輻射的用途。中國藥典2010年版記載有金水寶膠囊和金水寶片，都是由冬蟲夏草菌(蝙蝠蛾擬青霉Cs-4)發(fā)酵制成。其功效與主治為補(bǔ)肺益腎、秘精益氣。用于肺腎兩虛，精氣不足，久咳虛喘，神疲乏力，不寐健忘，腰膝瘦軟，月經(jīng)不調(diào)，陽痿早泄；慢性支氣管炎、慢性腎功能不全、高脂血癥、肝硬化見上述癥候者。
[0004]本 申請人:早先申請的中國專利申請CN 102037854A公開了一種北冬蟲夏草子實(shí)體的培養(yǎng)方法。該方法將接種后的培養(yǎng)容器排列堆放于可控光培養(yǎng)架上置組培室中培養(yǎng)，在避光培養(yǎng)后通過可控光培`養(yǎng)架調(diào)控光照強(qiáng)度和光照周期進(jìn)行光照培養(yǎng)，從而滿足了北冬蟲夏草正常生長對光照的需求，使出草率提高，生物轉(zhuǎn)化率提高，并通過調(diào)節(jié)出草管理階段的光照強(qiáng)度和光照周期使子實(shí)體內(nèi)有效成分含量提高和增加子實(shí)體內(nèi)生物量的積累。
[0005]本 申請人:還對北冬蟲夏草子實(shí)體和培養(yǎng)基進(jìn)行了提取精制，對提取物進(jìn)行了祛邪(抗腫瘤作用)、扶正(增強(qiáng)免疫功能)和減毒作用的藥理學(xué)研究。因此，本發(fā)明的目的是提供北冬蟲夏草提取物及其在制備治療腫瘤藥物上的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供一種北冬蟲夏草提取物，其中蟲草多糖與蟲草素的重量比為I 一25:1。
[0007]本發(fā)明提供的“北冬蟲夏草提取物”來自人工培育北冬蟲夏草子實(shí)體的提取物、從人工培育北冬蟲夏草培養(yǎng)基中得到的提取物，以及從人工培育北冬蟲夏草培養(yǎng)基中得到的提取物加北冬蟲夏草子實(shí)體細(xì)粉的復(fù)合物。[0008]本發(fā)明的北冬蟲夏草提取物中，蟲草多糖與蟲草素的重量比可為4-8:1，也可為5-10:1，或為 8-20:1。
[0009]本發(fā)明還提供這種北冬蟲夏草提取物在制備治療腫瘤藥物上的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明對北冬蟲夏草提取物的臨床前藥理學(xué)研究顯示:
[0011]北冬蟲夏草提取物在600、300、150mg/kg三個劑量下，對小鼠肝癌H22、小鼠Lewis肺癌和小鼠S180肉瘤的生長均有不同程度的抑制作用，與化療藥5FU、CDDP, CTX合用顯示了一定的相加作用，療效好于單獨(dú)用藥。北冬蟲夏草提取物單用及合并CTX對荷白血病P388小鼠的生命有一定的延長作用。
[0012]北冬蟲夏草提取物對移植于裸鼠的人體乳腺癌MDA-MB-435、人體肺癌A549成瘤后開始給藥，均具有一定的生長抑制作用，量效關(guān)系明顯。分別與化療藥Taxol和Gemzar合用，顯不了一定的相加作用。
[0013]北冬蟲夏草提取物與放療合并使用，抑瘤作用也明顯強(qiáng)于單獨(dú)放療。
[0014]北冬蟲夏草提取物對荷瘤小鼠的免疫功能有明顯的促進(jìn)作用。[0015]北冬蟲夏草提取物對大劑量環(huán)磷酰胺引起的小鼠白細(xì)胞降低有明顯的治療作用。
[0016]因此，本發(fā)明提供北冬蟲夏草提取物在制備治療腫瘤藥物上的應(yīng)用，所述腫瘤包括實(shí)體瘤和非實(shí)體瘤。實(shí)體瘤為諸如肝癌、肺癌、乳腺癌和肉瘤中的一種或一種以上。非實(shí)體瘤為諸如白血病。
[0017]本發(fā)明提供的北冬蟲夏草提取物在制備治療腫瘤藥物上的應(yīng)用，除了提供抑制腫瘤細(xì)胞的作用外，還具有增強(qiáng)免疫功能、協(xié)同放療或化療的治療作用和降低放療或化療藥物毒性的作用。
[0018]本說明書中涉及的比例或百分比，若非特別指出，均為重量比或重量百分比。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1顯示三種劑量北冬蟲夏草提取物對環(huán)磷酰胺引起的白細(xì)胞降低的影響。【具體實(shí)施方式】
[0020]以下用實(shí)驗例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。本【技術(shù)領(lǐng)域】普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，這些實(shí)驗例僅僅用于舉例說明本發(fā)明而不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制，對本發(fā)明所作的任何改變，只要不違背本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)，都將落在權(quán)利要求范圍內(nèi)。
[0021]實(shí)施例1:北冬蟲夏草提取物的制備
[0022]I)北冬蟲夏草子實(shí)體提取物的制備
[0023]將人工培育的北冬蟲夏草子實(shí)體干燥、粉碎后用去離子水浸泡20h后過濾，根據(jù)情況可重復(fù)幾次，用水量和浸泡時間漸減。濾液離心后上清液流經(jīng)732 #陽離子交換樹脂柱。將流穿液的PH調(diào)節(jié)至7.0-7.5，用截留分子量為4000的超濾膜超濾，截留液減壓濃縮干燥后得蟲草多糖提取物，其中蟲草多糖含量為60-85%。樹脂柱用lmol/L氨水洗脫至洗脫液幾近無色，將洗脫液減壓濃縮干燥后得蟲草素提取物，其中蟲草素含量為15-40%。
[0024]將人工培育北冬蟲夏草子實(shí)體的蟲草多糖提取物和蟲草素提取物合并，組成人工培育北冬蟲夏草子實(shí)體的提取物，其中蟲草多糖:蟲草素=1- 25:1。
[0025]2)北冬蟲夏草培養(yǎng)基提取物的制備[0026]將人工培育北冬蟲夏草后的培養(yǎng)基干燥、粉碎后用去離子水浸泡20h后過濾，根據(jù)提取情況可重復(fù)幾次，用水量和浸泡時間可漸減。濾液離心后上清液流經(jīng)732 #陽離子交換樹脂柱，流速為25ml/min。將流穿液的pH調(diào)節(jié)至7.0-7.5，用截留分子量為4000的超濾膜超濾，截留液減壓縮并干燥后得蟲草多糖提取物，其中蟲草多糖含量為50-80%。樹脂柱用lmol/L氨水洗脫至洗脫液幾近無色，將洗脫液減壓濃縮干燥后即得蟲草素提取物，其中蟲草素含量為15-30%。[0027]將人工培育北冬蟲夏草培養(yǎng)基的蟲草多糖提取物和蟲草素提取物合并，得到北冬蟲夏草培養(yǎng)基提取物其中蟲草多糖:蟲草素=1- 25:1。
[0028]3)北冬蟲夏草培養(yǎng)基提取物+北冬蟲夏草子實(shí)體細(xì)粉混合物的制備
[0029]按上述2)制得北冬蟲夏草培養(yǎng)基提取物。
[0030]將干燥的北冬蟲夏草子實(shí)體制成80-200目細(xì)粉。
[0031]將北冬蟲夏草培養(yǎng)基提取物和北冬蟲夏草子實(shí)體細(xì)粉均勻混合，其中蟲草多糖:蟲草素=I — 25:10
[0032]以上三種產(chǎn)品統(tǒng)稱北冬蟲夏草提取物，其中蟲草多糖:蟲草素=I 一 25:1。
[0033]以下實(shí)驗例中采用的材料和裝置:
[0034]受試藥物均為北冬蟲夏草提取物(實(shí)施例1的產(chǎn)物，淡棕色粉末，簡稱提取物，由上海國寶企業(yè)發(fā)展中心提供北冬蟲夏草，上海醫(yī)藥工業(yè)研究院中藥研究室制備提取物，批號080606 )，用蒸餾水配至所需濃度。提取物低、中、高劑量組分別為150mg/kg、300mg/kg和600mg/kg。
[0035]陽性對照藥:金水寶膠囊(江蘇濟(jì)民可信金水寶制藥有限公司，號041007，20mg/片)，用蒸餾水配至所需濃度；氟尿嘧啶注射液(5FU)(上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號080409，無色澄明液體，0.25g/10ml)、注射用順鉬(⑶DP)(錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號060604，黃色結(jié)晶性粉末，20mg/瓶)、環(huán)磷酰胺(CTX)(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，批號08041521，白色結(jié)晶，200mg/瓶)、紫杉醇注射液(Taxol)(浙江海正藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號071001，液體，30mg/5ml)、注射用鹽酸吉西他濱(健擇，Gemzar) (LillyFrance S.A.生產(chǎn)，批號A404170(2007.06-2010.05)，200mg/支)，用滅菌生理鹽水稀釋，其中紫杉醇注射液現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0036]其它材料:培養(yǎng)基RPM1-1640，Gibco產(chǎn)品，內(nèi)含15% NBS、巰基乙醇、Ifepes等；刀豆球蛋白A(ConA)，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，50 μ g/ml ；Yac-l細(xì)胞；白細(xì)胞計數(shù)液(3 %冰醋酸+數(shù)滴龍膽紫)。
[0037]實(shí)驗動物:昆明種小鼠、C57BL/6小鼠、DBA/2小鼠、BALB/C裸鼠(SPF級)，由上海斯萊克實(shí)驗動物有限責(zé)任公司供應(yīng)，生產(chǎn)許可證號=SCXK (滬)2007-0005，使用許可證號:SYXK (滬)2004-0015。
[0038]鈷60輻照裝置:鈷60 (Co60)(照射單位:第二軍醫(yī)大學(xué)；劑量率:2Gy/min ;照射劑量:4Gy)0
[0039]全自動酶標(biāo)儀(WellscanMK2):Labsystems。
[0040]預(yù)實(shí)驗顯示，北冬蟲夏草提取物中蟲草多糖與蟲草素的重量比為1-3:1或4-8:1或5-10:1或8-20:1或10:25:1時均有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫功能和減輕化、放療副作用的效果。以下采取蟲草多糖與蟲草素的重量比為4-8:1進(jìn)行藥效學(xué)試驗。[0041]實(shí)驗例1:北冬蟲夏草提取物單用及合并5FU對小鼠肝癌H22生長的抑制作用
[0042]健康昆明種小鼠，19_21g，雌雄兼用，每批試驗同一性別，共進(jìn)行兩批試驗。
[0043]第一批試驗取生長良好的小鼠肝癌H22腹水，用生理鹽水1:4稀釋后(細(xì)胞濃度約I~2 X IO7個/ml )，每只小鼠(早)腋皮下接種0.2ml，隨機(jī)分為:空白對照組、5FU (15mg/kg, ipX5)組、金水寶膠囊(600mg/kg, igX7)組、提取物低、中、高劑量組,及提取物低、中、高劑量組分別+5FU (給藥方案同單獨(dú)給藥)。
[0044]接種次日起按以上方案開始給藥,連續(xù)給藥7天,給藥體積為0.5ml/20g體重。接種第10天處死動物，稱體重后解剖取瘤塊并稱重，根據(jù)以下公式計算抑瘤率:
[0045]
【權(quán)利要求】
1.一種北冬蟲夏草提取物，其中蟲草多糖與蟲草素的重量比為I 一 25:1。
2.如權(quán)利要求1所述的北冬蟲夏草提取物，所述北冬蟲夏草提取物選自人工培育北冬蟲夏草子實(shí)體的提取物、從人工培育北冬蟲夏草培養(yǎng)基中得到的提取物，及從人工培育北冬蟲夏草培養(yǎng)基中得到的提取物加北冬蟲夏草子實(shí)體細(xì)粉的復(fù)合物。
3.權(quán)利要求1所述北冬蟲夏草提取物在制備治療腫瘤藥物上的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中所述腫瘤包括實(shí)體瘤和非實(shí)體瘤。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述實(shí)體瘤為肝癌、肺癌、乳腺癌和肉瘤中的一種或一種以上。
6.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述非實(shí)體瘤為白血病。
7.如權(quán)利要求3-6中任何一項所述的應(yīng)用，其中所述治療腫瘤藥物還具有增強(qiáng)免疫功能、協(xié)同放療或化療的治療 作用和降低放療或化療藥物毒性的作用。
【文檔編號】A61K36/068GK103520222SQ201210225528
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2012年7月2日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月2日
【發(fā)明者】唐永范, 唐亮 申請人:上海國寶企業(yè)發(fā)展中心, 上海國寶生物工程研究所