專利名稱：一種替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種替加環(huán)素的新制劑，具體涉及一種替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑及其制法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
替加環(huán)素是第一個甘氨酰環(huán)素類抗生素，英文名稱Tigecycline，2005年獲得美國FDA批準(zhǔn)上市?；瘜W(xué)名稱為(4S、4aS、5aR，12aS)-9- [2-(叔-丁氨基)乙氨基]4，7bis (二甲氛基)_1，4, 4a, 5, 5a, 6, 11, 12a-八氧-3, 10, 12, 12a-四輕基 _1，11- 二氧-2-并四苯竣胺，為新一類抗生素一甘氨酰四環(huán)素。分子式為C19H39N5O8，分子量為585. 65，結(jié)構(gòu)式為
h3C\ ,CH3Hr
Hs\ .CH3 HHH
命認(rèn)ir
H3COH OOH OO替加環(huán)素的作用機制與四環(huán)素類抗生素相似，都是通過與細(xì)菌30S核糖體結(jié)合，阻止轉(zhuǎn)移RNA的進入，使得氨基酸無法結(jié)合成肽鏈，最終起到阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，限制細(xì)菌生長的作用。不過，替加環(huán)素與核糖體的結(jié)合能力要比四環(huán)素或米諾環(huán)素強5倍。替加環(huán)素與米諾環(huán)素在分子結(jié)構(gòu)上很相似，其主要區(qū)別在于前者在9位上增加了一個甘氨酰氨基。到目前為止，這種9位上的甘氨酰氨基取代為替加環(huán)素所獨有。在其他天然或半合成四環(huán)素類抗生素中均未出現(xiàn)過，它使得替加環(huán)素能夠克服由外排及核糖體保護介導(dǎo)的耐藥(與四環(huán)素類抗生素有關(guān)的兩種主要耐藥機制)，從而可以用于治療四環(huán)素耐藥菌株所致的感染。目前已知，其他一些耐藥機制，如￠-內(nèi)酰胺酶(包括廣譜￠-內(nèi)酰胺酶)、作用靶位的修飾、大環(huán)內(nèi)酯外排泵、酶靶位的改變(如螺旋酶/拓?fù)洚悩?gòu)酶)等都不會影響替加環(huán)素的活性。替加環(huán)素被批準(zhǔn)用于18歲及18歲以上復(fù)雜皮膚和皮膚結(jié)構(gòu)感染或者復(fù)雜腹內(nèi)感染患者的治療。包括復(fù)雜闌尾炎、燒傷感染、腹內(nèi)膿腫、深部軟組織感染及潰瘍感染。因為替加環(huán)素口服的生物利用度非常有限，僅能用于注射給藥。由于其分子中的酚羥基易發(fā)生氧化降解，使溶液顏色加深，在水溶液中極不穩(wěn)定，因此替加環(huán)素主要制備成凍干粉針劑，以增加其穩(wěn)定性。專利文獻CN101167732A、CN1985835A、CN102258476A、CN101401812A，均公開了替加環(huán)素凍干粉針劑的制備方法；專利文獻CN101919816A公開了一種采用溶媒結(jié)晶法制備而成的替加環(huán)素?zé)o菌粉末。目前上市銷售的替加環(huán)素制劑為惠氏公司生產(chǎn)的凍干粉針劑，也是采用普通的凍干粉針劑的制備方法制備而成。但使用上述方法制備的替加環(huán)素注射齊U，其分子中酚羥基的穩(wěn)定性仍然不夠理想，導(dǎo)致藥物含量減少，有關(guān)物質(zhì)增加，影響療效。由于上述現(xiàn)有技術(shù)存在所述的缺點，替加環(huán)素作為活性藥物在溶解性、穩(wěn)定性、生物利用度、毒副作用等方面仍然具有改進的空間。
人們通過研究發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體作為藥物的載體能夠控制藥物的釋放，提高藥物靶向性，減少藥物毒性和副作用，提高藥物療效。如果能將替加環(huán)素制成脂質(zhì)體注射劑，則有望克服現(xiàn)有的替加環(huán)素注射劑存在的一系列問題，提高藥物的溶解性和穩(wěn)定性，延長藥物在體內(nèi)的保留時間，長久發(fā)揮藥效，提高生物利用度，降低毒副作用，降低不良反應(yīng)的發(fā)生率，改進治療速度和治療效果。
脂質(zhì)體是用于各種目的密封脂質(zhì)微囊。確切地說，通過脂質(zhì)體的全身給藥，脂質(zhì)體可以用來運送治療劑到達靶部位或細(xì)胞。已經(jīng)證實脂質(zhì)體特別可用于緩沖藥物毒性和改變某些治療化合物的藥動學(xué)參數(shù)。藥物脂質(zhì)體制劑的穩(wěn)定性和有效貯存是脂質(zhì)體產(chǎn)品的重要方面。具體來說，重要的是脂質(zhì)體制劑在適當(dāng)條件下長期貯存而不發(fā)生包封的藥物的不當(dāng)損失或脂質(zhì)體大小的改變。不過，有種擔(dān)心是當(dāng)脂質(zhì)體被脫水時或者冷凍隨后融化時，可能發(fā)生微囊融合和/或包容物的滲漏。保護微囊在脫水和冷凍期間完整的通常方法是在脂質(zhì)體制劑中包括一種低溫防護劑，例如糖(Harrigan等《脂質(zhì)的化學(xué)與物理學(xué)》52 :139-149 (1990))。低溫防護劑保持脂質(zhì)的完整，防止微囊融合和微囊內(nèi)容物的損失。例如，美國專利No. 4，927，571涉及從凍干形式再生的、含有阿霉素的脂質(zhì)體組合物，它包括I %至10%的一種低溫防護劑，例如海藻糖或乳糖，用于防護冷凍損害。不過，制備脂質(zhì)體的挑戰(zhàn)在于選擇適當(dāng)?shù)闹|(zhì)體組成成分和制法。由于脂質(zhì)體的性質(zhì)如穩(wěn)定性、包封率、起效時間、在體內(nèi)的循環(huán)時間、生物利用度和毒副作用等與脂質(zhì)體的組成直接地密切相關(guān)，而脂質(zhì)體的組成與所要包封的藥物性質(zhì)直接地密切相關(guān)，因此，選擇什么樣的成分形成具有良好品質(zhì)的替加環(huán)素脂質(zhì)體是亟待解決的課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人經(jīng)過長期研究發(fā)現(xiàn)，通過選用特定重量配比的替加環(huán)素、氫化蛋黃卵磷月旨、膽固醇、聚氧乙烯烷基胺、焦亞硫酸鈉和右旋糖酐，可以形成品質(zhì)優(yōu)異的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，從而完成本發(fā)明。作為用于形成脂質(zhì)體的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括磷脂酰乙醇胺、蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、蛋黃磷脂酰甘油、蛋黃磷脂酰絲氨酸、蛋黃磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰絲氨酸、和大豆磷脂酰肌醇等。合成磷脂為二油酰磷脂酰膽堿(D0PC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二豆蘧酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二月桂酰磷脂酰膽堿(DLPC)、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二肉豆蘧酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油等。在本發(fā)明中，作為藥物活性成分的替加環(huán)素分子結(jié)構(gòu)中有酚羥基易發(fā)生氧化降解，針對替加環(huán)素特點，本發(fā)明人在大量的篩選實驗時，發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用磷脂和膽固醇簡單組合難以形成其品質(zhì)優(yōu)良的脂質(zhì)體，所得脂質(zhì)體在高溫40°C、相對濕度75%±5%的加速試驗下，包封率、穩(wěn)定性、和滲漏率等性質(zhì)較差，必須對其膜材料進行修飾。在本發(fā)明的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑中，使用氫化蛋黃卵磷脂和膽固醇作為脂質(zhì)體膜的基本成分，使用聚氧乙烯烷基胺對其膜材料進行修飾，以進一步改進脂質(zhì)體膜的穩(wěn)定性和藥物的包封率。聚氧乙烯烷基胺是一種非離子表面活性劑，當(dāng)用于替加環(huán)素脂質(zhì)體膜中時，能改善膜材料的性質(zhì)和替加環(huán)素的溶解性，從而提高包封率，而且能提高該雙層膜之間的化學(xué)能，從而提高脂質(zhì)體在水性液體中的化學(xué)穩(wěn)定性，進而提高替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑的穩(wěn)定性。在本發(fā)明的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑中，相對于I重量份的替加環(huán)素而言，氫化蛋黃卵磷脂的用量為1-4份，膽固醇的用量為0. 5-4份，聚氧乙烯烷基胺的用量為0. 1-2份。如果聚氧乙烯烷基胺的用量低于0. I重量份，則由于其用量過低導(dǎo)致對替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑的穩(wěn)定性改進不夠，反之，如果聚氧 乙烯烷基胺的用量高于2重量份，則用于其用量過高而導(dǎo)致脂質(zhì)體膜易于替加環(huán)素泄露。在本發(fā)明的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑中，焦亞硫酸鈉不僅僅具有抗氧化的作用，還可以用于進一步調(diào)節(jié)脂質(zhì)體的膜穩(wěn)定性。不受理論限制，本發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，加入焦亞硫酸鈉可以改變膜穩(wěn)定性，改善替加環(huán)素脂質(zhì)體的藥學(xué)性質(zhì)。經(jīng)研究，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)焦亞硫酸鈉優(yōu)于亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、硫脲、維生素C和沒食子酸丙酯，相對于I重量份的替加環(huán)素而言，最優(yōu)選的用量為0. 01-0. I份。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用上述特定量的替加環(huán)素、氫化蛋黃卵磷脂、膽固醇、聚氧乙烯烷基胺和焦亞硫酸鈉時，可以得到品質(zhì)優(yōu)良的替加環(huán)素脂質(zhì)體，其包封率和穩(wěn)定性都很高，毒性低，生物利用度高。在本發(fā)明的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑中，使用右旋糖酐作為賦形劑，對替加環(huán)素脂質(zhì)體具有保護作用，尤其在凍干時，可用于形成穩(wěn)定的注射劑。本發(fā)明的目的在于提供一種穩(wěn)定的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，主要由替加環(huán)素、氫化蛋黃卵磷脂、膽固醇、聚氧乙烯烷基胺、焦亞硫酸鈉和右旋糖酐制成。本發(fā)明的脂質(zhì)體注射劑具有良好的制劑穩(wěn)定性，凍干過程中脂質(zhì)體不會因脫水、融合、冰晶等發(fā)生破裂，水合復(fù)溶后，外觀均勻，脂質(zhì)體不聚集物結(jié)晶，脂質(zhì)體同樣保持良好的包封率和穩(wěn)定性，減少了毒副作用，提高了制劑產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)明解決的技術(shù)方案如下本發(fā)明提供一種替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，其主要由替加環(huán)素、氫化蛋黃卵磷脂、膽固醇、聚氧乙烯烷基胺、焦亞硫酸鈉和右旋糖酐制成。本發(fā)明提供的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，其中單位劑量的替加環(huán)素的規(guī)格為50mg。本發(fā)明提供的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，主要由以下重量份數(shù)比的成分制成
替加環(huán)素I份
氣化蛋黃印鱗脂1-4份
膽固醇0.5-4份
聚氧乙締燒基胺0.1-2份
焦亞硫酸納0.01-0.1份
右旋糖酐1-5份 本發(fā)明提供的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，優(yōu)選的重量組分為替加環(huán)素I份
氫化蛋黃卵磚脂1.6-4份
膽固醇0.8-3份
聚氧乙婦烷基胺0.4-1.6份
焦亞硫酸鈉0.02-0.08份
右旋糖酐1.4-4份。本發(fā)明還提供了一種替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑的制備方法，包括如下步驟(I)按重量組分稱取替加環(huán)素、氫化蛋黃卵磷脂、膽固醇、聚氧乙烯烷基胺和焦亞 硫酸鈉置于梨形瓶中，加入有機溶劑，加熱攪拌使其溶解，然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓除去有機溶劑，在瓶壁上形成均勻透明磷脂膜；(2)在氮氣保護下，向瓶中加入pH6. 0 6. 6的緩沖溶液，輕搖，使磷脂膜洗脫并分散到介質(zhì)中溶脹水合，然后在IOObar到600bar做梯度均質(zhì)4 6遍,0. 22 y m微孔濾膜過濾，制得替加環(huán)素脂質(zhì)體；(3)將右旋糖酐加入到上述脂質(zhì)體中，超濾膜除去細(xì)菌及熱源，無菌條件下灌裝， 冷凍干燥，制得替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑。 上述的制備方法，其中所述的有機溶劑選自苯甲醇、甲醇、正丁醇、異丙醇、丙酮、乙腈、正己烷和二氯甲烷中的一種或幾種，優(yōu)選為體積比為1:1的甲醇和丙酮的混合溶液。上述的制備方法，其中所述的緩沖溶液選自枸櫞酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液中的一種，優(yōu)選為pH為6. 2的枸櫞酸鹽緩沖溶液。本發(fā)明制得的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，不僅提高了制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，減少了毒副作用，增加了藥物在體循環(huán)中的保留時間，提高了藥物的生物利用度，療效明顯提高；并且制備方法簡單，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。


圖I是替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑的血藥濃度-時間曲線。其中+上市例+實施例I +實施例2 _實施例3—卜對比例I對比例2 _丨_對比例具體實施例方式以下通過實施例進一步解釋和說明本發(fā)明，但本發(fā)明不限于以下實施例，并且在不偏離本文上述和下文所述意圖的情況下，可以進行各種修改，并且這些修改也包括在本發(fā)明的技術(shù)范圍內(nèi)。實施例I替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑處方(1000瓶)替加環(huán)素5 Og
氫化蛋黃卵磷脂120g
膽固醇40g
聚氧乙婦烷基胺50g
焦亞疏酸鈉3g
·右旋糖酐120g制備工藝(I)按重量組分稱取50g替加環(huán)素、120g氫化蛋黃卵磷脂、40g膽固醇、50g聚氧乙烯烷基胺和3g焦亞硫酸鈉置于梨形瓶中，加入5000ml體積比為1:1的甲醇和丙酮的混合溶液，50°C加熱攪拌使其溶解，然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓除去有機溶劑，在瓶壁上形成均勻透明磷脂膜；(2)在氮氣保護下，向瓶中加入5000ml的pH為6. 2的枸櫞酸鹽緩沖溶液，輕搖，使磷脂膜洗脫并分散到介質(zhì)中溶脹水合，然后在IOObar到600bar做梯度均質(zhì)4 6遍，0. 22um微孔濾膜過濾，制得替加環(huán)素脂質(zhì)體；(3)將120g右旋糖酐加入到上述脂質(zhì)體中，超濾膜除去細(xì)菌及熱源，無菌條件下灌裝，冷凍干燥，制得替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑。實施例2替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑處方(1000瓶)
替加環(huán)素50g
氫化蛋黃卵磷脂2OOg
膽固醇90g
聚氧乙烯烷基胺20g
焦亞碗< 酸鈉4g
右旋糖酐200g制備工藝(I)按重量組分稱取50g替加環(huán)素、200g氫化蛋黃卵磷脂、90g膽固醇、20g聚氧乙烯烷基胺和4g焦亞硫酸鈉置于梨形瓶中，加入5000ml體積比為1:1的甲醇和丙酮的混合溶液，50°C加熱攪拌使其溶解，然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓除去有機溶劑，在瓶壁上形成均勻透明磷脂膜；(2)在氮氣保護下，向瓶中加入5000ml的pH為6. 2的枸櫞酸鹽緩沖溶液，輕搖，使磷脂膜洗脫并分散到介質(zhì)中溶脹水合，然后在IOObar到600bar做梯度均質(zhì)4 6遍，0. 22um微孔濾膜過濾，制得替加環(huán)素脂質(zhì)體；(3)將200g右旋糖酐加入到上述脂質(zhì)體中，超濾膜除去細(xì)菌及熱源，無菌條件下灌裝，冷凍干燥，制得替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑。實施例3替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑
處方(1000瓶)
替加環(huán)素SOg
氫化蛋黃卵磷脂80g
膽固醇150g
聚氧乙婦烷基胺80g
焦亞硫酸鈉Ig
右旋糖酐70g制備工藝(I)按重量組分稱取50g替加環(huán)素、80g氫化蛋黃卵磷脂、150g膽固醇、80g聚氧乙烯烷基胺和Ig焦亞硫酸鈉置于梨形瓶中，加入5000ml體積比為1:1的甲醇和丙酮的混合溶液，50°C加熱攪拌使其溶解，然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓除去有機溶劑，在瓶壁上形成均勻透明磷脂膜；(2)在氮氣保護下，向瓶中加入5000ml的pH為6. 2的枸櫞酸鹽緩沖溶液，輕搖，使磷脂膜洗脫并分散到介質(zhì)中溶脹水合，然后在IOObar到600bar做梯度均質(zhì)4 6遍，
0.22um微孔濾膜過濾，制得替加環(huán)素脂質(zhì)體；(3)將70g右旋糖酐加入到上述脂質(zhì)體中，超濾膜除去細(xì)菌及熱源，無菌條件下灌裝，冷凍干燥，制得替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑。對比例1-3替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑的制備采用分別與實施例1-3中的生產(chǎn)工藝，將如下表I中所示的對比例1-3中的成分分別制成替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑表I對比例1-3中所用原輔料成分
權(quán)利要求
1.一種替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，其特征在于主要由替加環(huán)素、氫化蛋黃卵磷脂、膽固醇、聚氧乙烯烷基胺、焦亞硫酸鈉和右旋糖酐制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，其特征在于單位劑量的替加環(huán)素的規(guī)格為50mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2任一所述的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，其特征在于由以下重量份數(shù)比的成分制成替加環(huán)素I份 氫化蛋黃卵磷脂1-4份膽固醇0.5-4份 聚氧乙烯烷基胺O. I-2份 焦亞破u酸鈉0.01-0.1份 右旋糖酐1-5份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，其特征在于主要由以下重量份數(shù)比的成分制成替加環(huán)素I份氫化蛋黃卵碡脂1.6-4份 膽固醇0.8-3份 聚氧乙締烷基胺0.4-1.6份焦亞硫酸鈉0.02-0.08份右旋糖酐1.4-4份。
5.一種制備替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑的方法，其特征在于包括如下步驟 (1)按重量組分稱取替加環(huán)素、氫化蛋黃卵磷脂、膽固醇、聚氧乙烯烷基胺和焦亞硫酸鈉置于梨形瓶中，加入有機溶劑，加熱攪拌使其溶解，然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓除去有機溶齊U，在瓶壁上形成均勻透明磷脂膜； (2)在氮氣保護下，向瓶中加入pH6.O 6. 6的緩沖溶液，輕搖，使磷脂膜洗脫并分散到介質(zhì)中溶脹水合，然后在IOObar到600bar做梯度均質(zhì)4 6遍,O. 22 μ m微孔濾膜過濾,制得替加環(huán)素脂質(zhì)體； (3)將右旋糖酐加入到上述脂質(zhì)體中，超濾膜除去細(xì)菌及熱源，無菌條件下灌裝，任選地冷凍干燥，制得替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述的有機溶劑選自苯甲醇、甲醇、正丁醇、異丙醇、丙酮、乙腈、正己烷和二氯甲烷中的一種或幾種，優(yōu)選為體積比為I : I的甲醇和丙酮的混合溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的緩沖溶液選自枸櫞酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液中的一種，優(yōu)選為pH為6. 2的枸櫞酸鹽緩沖溶液。
8.權(quán)利要求1-7任一項所述的替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑在制備復(fù)雜皮膚和皮膚結(jié)構(gòu)感染或者復(fù)雜腹內(nèi)感染患者的治療的藥物中的應(yīng)用，所述疾病包括復(fù)雜闌尾炎、燒傷感染、腹內(nèi)膿腫、深部軟組織感染及 潰瘍感染。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種替加環(huán)素脂質(zhì)體注射劑，主要由替加環(huán)素、氫化蛋黃卵磷脂、膽固醇、聚氧乙烯烷基胺、焦亞硫酸鈉和右旋糖酐制成。本發(fā)明的脂質(zhì)體注射劑具有良好的制劑穩(wěn)定性，凍干過程中脂質(zhì)體不會因脫水、融合而破裂，水合復(fù)溶后，脂質(zhì)體同樣保持良好的包封率和穩(wěn)定性；本發(fā)明的脂質(zhì)體注射劑提高了制劑產(chǎn)品質(zhì)量，減少了替加環(huán)素的毒副作用，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號A61K47/34GK102727439SQ20121022399
公開日2012年10月17日 申請日期2012年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月29日
發(fā)明者廖愛國 申請人:海南美大制藥有限公司