一種用于檢測阿霉素含量的室溫磷光檢測試劑盒及檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及檢測試劑盒技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種用于檢測阿霉素含量的室溫磯光檢 測試劑盒及檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿霉素（Doxorubicin ;DXR)是一種抗腫瘤抗生素，抗瘤譜較廣，對多種腫瘤均有 作用，屬周期非特異性藥物，對各種生長周期的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用。但阿霉素有一定的 毒性作用，主要的毒性反應(yīng)有，引起遲發(fā)性嚴(yán)重屯、力衰竭，白細(xì)胞和血小板減少；100%的病 人有不同程度的毛發(fā)脫落，惡屯、、食欲減退；藥物溢出血管外可引起組織潰瘍及壞死等，另 夕F，用藥后尿液可出現(xiàn)紅色，為及時掌握和控制阿霉素用藥所引起的副作用，開發(fā)經(jīng)濟(jì)快速 的人體血清和尿液中阿霉素含量的測定方法就顯得非常重要。目前，對于阿霉素的檢測方 法主要有高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳-紫外法、巧光法、化學(xué)發(fā)光法等，但該些方法比較 耗時、或價格昂貴、或需要復(fù)雜的前處理過程、或抗干擾能力差。因此，急需檢測結(jié)果穩(wěn)定、 快速、經(jīng)濟(jì)的標(biāo)準(zhǔn)方法。而室溫磯光量子點生物傳感器能克服W往方法的缺點，其檢測速度 快，不受生物體液自體巧光和散射光的干擾，不需要復(fù)雜的前處理，檢測快速、準(zhǔn)確度高。
[0003] 巧光量子點作為一種常用的納米材料，具有制備方法簡單，尺寸可控，表面易 于修飾和表征簡便等優(yōu)點，在分析化學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。而室溫磯光量子點 (Room-temperature phosphorescence Quantum Dots)與巧光量子點相比，擁有很多優(yōu)點， 主要有檢測靈敏度高，無需低溫冷卻裝置，免除了溶劑或溶液的除氧過程，大大降低了成本 和簡化了操作步驟，并可W避免激發(fā)光和生物體液背景巧光的干擾，使得檢出限更低，并易 于實現(xiàn)連續(xù)操作和自動化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，而提供一種用于檢測阿霉 素含量的室溫磯光檢測試劑盒及檢測方法。
[0005] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的： 一種用于檢測阿霉素含量的室溫磯光檢測試劑盒，包括CTAB溶液和室溫磯光量子點 溶液。
[0006] 所述的CTAB (即；十六燒基；甲基漠化錠）溶液的濃度為l(T3-l(r2M ;所述的室溫 磯光量子點溶液為表面含駿基的鋪滲雜硫化鋒室溫磯光量子點溶液，量子點直徑為3-4nm， 其直徑偏差在5-15%之間，室溫磯光量子點溶液的濃度為2g/L-6g/l，所述室溫磯光量子點 激發(fā)波長為295nm，發(fā)射波長為590nm。
[0007] 試劑盒中還包括標(biāo)準(zhǔn)液和緩沖液，所述的標(biāo)準(zhǔn)液為鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)液，化學(xué)名稱 為10-[ (3-氨基-2, 3,6- S去氧-aA-來蘇己化喃基）-氧]-7,8,9,10-四氨-6,8,11- S 哲基-8-(哲己酷基）-1-甲氧基-5,12-蒙二酬的鹽酸鹽，標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為1-10 y M ;所述 的緩沖液為PBS緩沖液，緩沖液的濃度為0. 2M、抑為7. 4。
[000引一種通過上述試劑盒來檢測阿霉素含量的方法，包括如下步驟；1)取lOOuL室溫 磯光量子點溶液和140 y L CTAB溶液，并先后加入到500 y LPBS緩沖液中，室溫靜置5min后 得到混液A ;2)準(zhǔn)備9份溶液A，分別向9份溶液A中加入不同體積的標(biāo)準(zhǔn)液，分別為0 y L、 2. 5 y L、5. 0 y L、10. 0 y L、20. 0 y L、40. 0 y L、60. 0 y L、80. 0 y L、100. 0 y L ;最后將每份添加 了標(biāo)準(zhǔn)液的溶液A用二次水定容至5ml，室溫靜置lOmin后，得到9份溶液B ;3)在巧光分光 光度計磯光模式下分別對步驟2)中得到的9份溶液B進(jìn)行磯光強(qiáng)度測定，設(shè)定激發(fā)波長為 295nm、發(fā)射波長為590 nm ;4)根據(jù)步驟3)測定得到磯光強(qiáng)度值和空白值的磯光強(qiáng)度差值 A RTP，然后根據(jù)A RTP與設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度建立"A RTP-阿霉素濃度"的線性方程，即標(biāo) 準(zhǔn)曲線，如圖2所示(橫坐標(biāo)表示；阿霉素的濃度，縱坐標(biāo)表示；磯光強(qiáng)度測定值和空白值的 差值A(chǔ) RTP)，檢測范圍為0. 005 y M?0. 2 y M ;5)取100 y L室溫磯光量子點溶液和140 y L CTAB溶液，并先后加入到500 y LPBS緩沖液中，室溫靜置5min后得到混液A，向溶液A中加 入50 y L待測樣品，最后將添加了待測樣品的溶液A用二次水定容至5ml，室溫靜置lOmin 后，得到溶液C，其中，所述的待測樣品包括人體血清、人體尿液和藥品；6)在巧光分光光度 計磯光模式下對步驟5)中得到的溶液C進(jìn)行磯光強(qiáng)度測定，設(shè)定激發(fā)波長為295nm、發(fā)射波 長為590 nm;7)根據(jù)步驟6)的磯光強(qiáng)度測定值，帶入到步驟4)中得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計算 出待測樣品中的阿霉素濃度值。
[0009] 本發(fā)明試劑盒檢測方法的原理：采用室溫磯光量子點作為磯光信號標(biāo)記分子，將 室溫磯光量子點上的駿基與CTAB上的親水基團(tuán)通過靜電作用鏈接，形成納米復(fù)合物，使室 溫磯光信號增強(qiáng)，當(dāng)不同濃度的阿霉素加入后，形成CTAB-阿霉素復(fù)合物，磯光強(qiáng)度逐漸恢 復(fù)，通過與測定形式的標(biāo)準(zhǔn)曲線對比獲得待測阿霉素的濃度。
[0010] 阿霉素加入后，阿霉素競爭性地結(jié)合CTAB，CTAB W CTAB-阿霉素復(fù)合物的形成從 室溫磯光量子點上脫離。
[0011] 本發(fā)明的阿霉素檢測技術(shù)與量子點在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的檢測技術(shù)相關(guān)，是通過形成 室溫磯光納米復(fù)合材料改善量子點的性能的途徑實現(xiàn)對阿霉素的檢測，該技術(shù)整合了室溫 磯光量子點納米復(fù)合材料的合成，競爭式檢測技術(shù)等相關(guān)領(lǐng)域的研究。
[0012] 本發(fā)明之所W能檢測血清和尿液中阿霉素，在于采用了一種基于室溫磯光定量檢 測方法，由于磯光不受血清或尿液中背景巧光的的影響，大大提高了血清或尿液中阿霉素 的檢測能力。在室溫磯光量子點與CTAB形成納米復(fù)合材料后，改善了量子點的發(fā)光性能， 使得量子點的磯光強(qiáng)度增強(qiáng)，當(dāng)阿霉素加入后，阿霉素競爭性結(jié)合CTAB，CTAB從量子點上 脫離，量子點的磯光強(qiáng)度降低，在一定范圍內(nèi)磯光強(qiáng)度變化值與阿霉素濃度成反比。通過添 加不同濃度的阿霉素標(biāo)準(zhǔn)品可制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和各檢測樣品的磯光強(qiáng)度計算 出樣品中阿霉素的濃度值。
[0013] 其具體的技術(shù)步驟包括： (一） 室溫磯光量子點納米復(fù)合材料探針的制備；采用水溶性室溫磯光量子點，利用靜 電吸引結(jié)合的方式將CTAB連接到室溫磯光量子點表面，形成室溫磯光量子點納米復(fù)合材 料探針； (二） CTAB-阿霉素復(fù)合物的形成：在上述室溫磯光量子點納米復(fù)合材料探針中加入標(biāo) 準(zhǔn)品或待測樣品，標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品中的阿霉素競爭性地結(jié)合CTAB，形成CTAB-阿霉素復(fù) 合物； (=)定量磯光檢測：采用巧光分光光度計磯光模式測定量子點磯光強(qiáng)度，激發(fā)波長為 295nm，發(fā)射波長為590nm ;通過測定對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)樣品的磯光強(qiáng)度形成標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過與測定 形成的標(biāo)準(zhǔn)曲線對比獲得待測樣品阿霉素的濃度。
[0014] 室溫磯光量子點表面需帶有易于與CTAB連接的基團(tuán)，優(yōu)化的基團(tuán)是帶駿基的表 面官能團(tuán)，采用靜電吸引方法連接。
[0015] 由于實際待測樣品中阿霉素含量遠(yuǎn)高于本試劑盒的檢測限和檢測范圍，所W待測 樣品需用二次水稀釋到合適濃度，同時可W通過稀釋降低其它物質(zhì)的干擾。
[0016] 本發(fā)明通過對室溫磯光量子點、CTAB和阿霉素分子特性的研究，選擇合適的室溫 磯光水溶性量子點與CTAB鏈接，獲得功能性室溫磯光量子點探針，并通過競爭性反應(yīng)，達(dá) 到阿霉素快速和高靈敏定量檢測。實驗證明，本發(fā)明試劑盒用于血清和尿液阿霉素的檢測 檢出限低、靈敏度高、干擾小、速度快，準(zhǔn)確度高。由于不受血清和尿液背景巧光干擾，本發(fā) 明方法非常適用于對血清和尿液阿霉素的定量檢測，也適用于對藥品中阿霉素含量的測 定。因此，本發(fā)明在阿霉素檢測領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0017] 圖1為琉基丙酸包被的鋪滲雜硫化鋒室溫磯光量子點電鏡（TEM)圖片。
[0018] 圖2為室溫磯光量子點納米復(fù)合材料檢測阿霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實施方式】
[0019] 一種用于檢測阿霉素含量的室溫磯光檢測試劑盒，包括CTAB溶液和室溫磯光量 子點溶液。
[0020] 所述的CTAB即為十六燒基立甲基漠化錠，其溶液的濃度為l(T3-l(r 2M ;所述的室溫 磯光量子點溶液為表面含駿基的鋪滲雜硫化鋒室溫磯光量子點溶液，量子點直徑為3-4nm， 其直徑偏差在5-15%之間，室溫磯光量子點溶液的濃度為2g/L-6g/l，所述室溫磯光量子點 激發(fā)波長為295nm，發(fā)射波長為590nm，圖1為琉基丙酸包被的鋪滲雜硫化鋒室溫磯光量子 點電鏡（TEM)圖片。
[0021] 試劑盒中還包括標(biāo)準(zhǔn)液和緩沖液，所述的標(biāo)準(zhǔn)液為鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)液，化學(xué)名稱 為10