專利名稱：一種從野菊花中提取的多糖在制備增強機體免疫力藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于從傳統(tǒng)中藥材中提取有效提高機體免疫力的藥物活性成分，尤其是將從中藥材野菊花中的多糖成分用于制備增強機體免疫力藥物的醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
隨著社會和經(jīng)濟的發(fā)展，越來越多的上班族由于過度勞累、焦慮不安、運動不足和飲食失衡等因素的影響，從而導(dǎo)致機體免疫力低下。如何尋找一種既安全又價格低廉的增強免疫力的來自天然的藥物，是本領(lǐng)域科研人員一直孜孜不倦努力尋找的目標。野菊花為菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.北野菊C. boreale Mak.或巖香菊C. Iavandulaefolium (Fisch. )Mak.的頭狀花序。生于山坡草地、灌叢、河邊水濕地，海濱鹽潰地及田邊、路旁，巖石上。資源分布分布于吉林、遼寧、河北、河南、山西、陜西、甘肅、青海、新疆、山東、江蘇、浙江、安徽、福建、江西、湖北、四川、云南、湖南等地。野菊花含有大量的多糖成分，具有廣泛的生物活性，如抗腫瘤、抗氧化、治療糖尿病、抗病毒、抗輻射、調(diào)節(jié)性功能、調(diào)血脂等藥理作用。野菊花多糖(Chrysanthemum indicum polysaccharide,CIP)具有防衰老和清除活性氧自由基等方面作用，但對其免疫調(diào)節(jié)作用的研究至今尚未見報道。本發(fā)明對中藥多糖的增強免疫力的功效進行了深入研究，為尋找新型免疫調(diào)節(jié)劑及抗腫瘤藥物提供了廣闊的前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是利用價格低廉的常用中藥材野菊花，從中提取野菊花多糖，制備具有提高機體免疫力的天然藥物。本發(fā)明的技術(shù)方案取干燥的野菊花藥材500 g，以水為提取劑，按料液比1:32，于90 °C水浴中浸提I h，連續(xù)提取3次，過濾，合并水提液，濃縮后加入5倍量的95%乙醇靜置24 h。醇沉后的沉淀抽濾后依次用無水乙醇、丙酮、乙醚進行洗滌，干燥后得野菊花粗多糖粉末。而后利用LSA-21大孔吸附樹脂，于溫度40 °C、pH 5、流速3 BV/h對其進行純化，接收液按前述醇沉方法，得較純的野菊花多糖粉末，蒽酮-硫酸法檢測多糖含量為81. 29%。灌胃(ig)時分別用生理鹽水配成濃度為4(T20 g · L-1的野菊花多糖溶液。最后將提取得到的野菊花多糖成分與常用的輔料相結(jié)合，制備得到各種劑型的增強免疫力的藥物。
具體實施例方式實施例I
儀器、試劑與材料 1.1.1動物
ICR小鼠，雄性，體重18 22 g，由江蘇省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供，實驗動物合格證號 SCXK (蘇)2007-0001。
儀器
Spectrumlab 752S紫外可見分光光度計上海棱光技術(shù)有限公司
梅特勒萬分之一電子天平瑞士
梅特勒十萬分之一電子天平瑞士
HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋金壇市奧瑞電器廠
TDL-5-A型離心機上海安亭科學儀器廠
Microfuge 16 型離心機德國 Beckman Coulter
I. I. 3試劑 注射用環(huán)磷酰胺江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號11061421
氯化鈉注射液南京小營藥業(yè)集團有限公司，批號2011081805
野菊花江蘇南京藥業(yè)股份有限公司中藥飲片廠二硝基氟苯(DNFB)溶液稱取DNFB50 mg置于干燥潔凈的具塞小瓶中，將預(yù)先配好的5 mL丙酮麻油溶液(I I)，倒入小瓶并用膠布密封，混勻后使用，新鮮配制。補體(豚鼠血清)抽取4只豚鼠心臟血，雌雄各半，分離新鮮血清，混合后備用，臨用時生理鹽水稀釋I : 10。雞紅細胞(5%CRBC):取新鮮雞血，除去纖維蛋白，離心得壓積紅細胞，臨用時用生理鹽水洗滌三次，配成5%混懸液即可。受試藥物
野菊花多糖制備取干燥的野菊花藥材500 g，以水為提取劑，按料液比1:32，于90 V水浴中浸提I h，連續(xù)提取3次，過濾，合并水提液，濃縮后加入5倍量的95%乙醇靜置24 h。醇沉后的沉淀抽濾后依次用無水乙醇、丙酮、乙醚進行洗滌，干燥后得野菊花粗多糖粉末。而后利用LSA-21大孔吸附樹脂，于溫度40 °C、pH 5、流速3 BV/h對其進行純化，接收液按前述醇沉方法，得較純的野菊花多糖粉末，蒽酮-硫酸法檢測多糖含量為81. 29%。ig時用生理鹽水配成濃度為40 g · Γ1,即野菊花多糖高濃度溶液。實驗方法
I. 2. I動物分組及給藥
將ICR雄性小鼠隨機分為3個組正常對照組、模型組及野菊花多糖高劑量組，每組10只。各組小鼠每天ig I次，連續(xù)ig 14 d，正常對照組和模型組分別ig生理鹽水10mL · kg-1 · (Γ1,野菊花多糖高劑量組ig等體積的野菊花多糖溶液400 mg · kg-1 · (Γ1。于ig的第10天開始，正常對照組經(jīng)腹腔注射生理鹽水10 mL · kg—1 · cf1，連續(xù)4 d ;模型組及野菊花多糖高劑量組分別經(jīng)腹腔注射等體積的環(huán)磷酰胺100 mg · kg—1 · (Γ1,連續(xù)4 do對免疫功能低下小鼠碳廓清能力影響的檢測
給藥第14天,ig 2 h后尾靜脈注射印度墨汁0.1 ml/10g,于I U1)和5 (t2) min后分別經(jīng)眼眶靜脈采血20 yL，加至2 mL O. 1% Na2CO3中，于紫外可見分光光度計680 nm處測定吸光度04)，采血后將小鼠脫頸處死，摘取肝、脾及胸腺稱重，按下式計算廓清指數(shù)(K)和吞噬指數(shù)(α )，并計算臟器指數(shù)。K =(logA「logA5)/(t2_ ti) =Iog(A1A5)/4α =體重/ (肝重+脾重)X K173
臟器指數(shù)=臟器重量(mg)/小鼠體重(g)I.2. 3對免疫功能低下小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)影響的檢測
給藥第9天時用5%硫化鈉溶液給每只小鼠腹部脫毛，面積約3X3 cm2。第10天，給每只小鼠腹部涂抹DNFB溶液致敏，進行初次免疫(致敏)。致敏后4 d，用DNFB溶液均勻涂抹小鼠右耳廓內(nèi)外兩面進行攻擊。攻擊24 h后頸椎脫白處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8 _的耳片，稱重。小鼠的耳腫脹度(右耳片重減去左耳片重的差值)表示遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的程度。對免疫功能低下小鼠血清溶血素影響的檢測
給藥第7天時，每鼠腹腔注射5%的雞紅細胞生理鹽水混懸液0.2 mL進行免疫。免疫7天后，摘眼球取血，離心，取血清用生理鹽水稀釋100倍，取稀釋血清I mL，與5%雞紅細胞懸液O. 5 mL、10%補體O. 5 mL混合，另設(shè)不加血清的空白管作對照，在37 °C恒溫水浴鍋保溫30 min后，冰水浴終止反應(yīng)。離心，取上清液于紫外可見分光光度計540 nm處測定吸光度值。 統(tǒng)計學分析
數(shù)據(jù)以表示，用SPSS
19. O對數(shù)據(jù)進行方差分析，采用t檢驗進行組間比較。Pd 05有統(tǒng)計學意義。實驗結(jié)果
I.3. I對免疫功能低下小鼠碳廓清能力的影響
與正常對照組相比，模型組各指數(shù)均顯著下降(/X0.01);與模型組相比，野菊花多糖高劑量組小鼠的碳廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)以及脾指數(shù)與胸腺指數(shù)均升高，差異呈現(xiàn)顯著性O(shè)°〈0. 01 或/X0. 05)。結(jié)果見表 I。表I野菊花多糖高劑量組對免疫功能低下小鼠碳廓清能力的影響(，n=10)
權(quán)利要求
1.一種從野菊花中提取的多糖在制備提高機體免疫力藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求I所述的一種從野菊花中提取的多糖在制備提高動物免疫力藥物中的應(yīng)用，其特征為采用以下的提取工藝取干燥的野菊花藥材500 g，以水為提取劑，按料液比1:32，于90 °C水浴中浸提I h，連續(xù)提取3次，過濾，合并水提液，濃縮后加入5倍量的95%乙醇靜置24 h ;醇沉后的沉淀抽濾后依次用無水乙醇、丙酮、乙醚進行洗滌，干燥后得野菊花粗多糖粉末；而后利用LSA-21大孔吸附樹脂，于溫度40 °C、pH 5、流速3 BV/h對其進行純化，接收液按前述醇沉方法，得較純的野菊花多糖粉末，蒽酮-硫酸法檢測多糖含量為81. 29% ；ig時分別用生理鹽水配成濃度為40-20 g · Γ1的野菊花多糖溶液。
3.如權(quán)利要求2所述的一種從野菊花中提取的多糖在制備提高動物免疫力藥物中的應(yīng)用，其特征為將提取得到的野菊花多糖成分與常用的輔料相結(jié)合，制備得到各種劑型的增強免疫力的藥物。
全文摘要
本發(fā)明屬于從傳統(tǒng)中藥材中提取有效提高機體免疫力的藥物活性成分的領(lǐng)域。技術(shù)方案為取干燥的野菊花藥材500g，以水為提取劑于90℃水浴中浸提1h，連續(xù)提取3次，過濾，合并水提液，濃縮后加入5倍量的95%乙醇靜置24h。醇沉后的沉淀抽濾后依次用無水乙醇、丙酮、乙醚進行洗滌，干燥后得野菊花粗多糖粉末。而后利用LSA-21大孔吸附樹脂對其進行純化，接收液按前述醇沉方法，得較純的野菊花多糖粉末，蒽酮-硫酸法檢測多糖含量為81.29%。灌胃(ig)時分別用生理鹽水配成濃度為40~20g·L-1的野菊花多糖溶液。最后將提取得到的野菊花多糖與常用輔料相結(jié)合，制備得到各種劑型的增強免疫力的藥物。
文檔編號A61K31/715GK102688255SQ20121021496
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月27日
發(fā)明者任愛農(nóng) 申請人:江蘇省中醫(yī)藥研究院