專利名稱：基于選擇病毒受體結(jié)合位點(diǎn)的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，具體地，涉及一種基于選擇病毒受體結(jié)合位點(diǎn)的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著世界經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，空間的距離已不再成為人們溝通的障礙，但是伴隨著 這種進(jìn)步，由各種病毒引起的傳染病也遍及世界各地。其中以逆轉(zhuǎn)錄病毒為病因的艾滋病引起的危害最為引人注目，每年都有數(shù)以百萬(wàn)的人口死于艾滋病。中和抗體在抵制病毒感染的作用中有著至關(guān)重要的地位。逆轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)入細(xì)胞的過(guò)程包括吸附，受體結(jié)合，膜融合進(jìn)而將病毒內(nèi)含物主要為核酸和酶運(yùn)送入細(xì)胞內(nèi)。中和抗體能夠結(jié)合病毒表面的蛋白從而阻止病毒進(jìn)入細(xì)胞。中和抗體的作用對(duì)象通常是病毒的囊膜蛋白，某些病毒其中一個(gè)重要的靶點(diǎn)為位于病毒顆粒表面的囊膜蛋白的融合蛋白亞單位gp41。長(zhǎng)期以來(lái)有很多研究人員意圖通過(guò)各種抗原誘導(dǎo)機(jī)制產(chǎn)生類似中和抗體，但成功的例子鮮有報(bào)道。研究者們逐漸認(rèn)識(shí)到對(duì)于慢性病毒來(lái)說(shuō)，其中和抗體大多為構(gòu)象型抗體。以往的相關(guān)疫苗設(shè)計(jì)研究主要集中在2F5作用靶點(diǎn)，但幾乎沒(méi)有得到相應(yīng)的中和抗體。一種解釋認(rèn)為，這些疫苗沒(méi)有將這段2F5識(shí)別序列放在一個(gè)合適的環(huán)境中，因此不能呈遞出正確的構(gòu)象。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種基于選擇病毒受體結(jié)合位點(diǎn)的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應(yīng)用。通過(guò)將具有本申請(qǐng)記載的特定氨基酸序列的特異性抗體選擇性的結(jié)合于gp41 MPER，可以使抗體和病毒發(fā)生較好的中和反應(yīng)，起到較好的防治病毒感染作用。本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是基于選擇病毒受體結(jié)合位點(diǎn)的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應(yīng)用，所述特異性抗體重鏈可變區(qū)基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV中的一個(gè)或多個(gè)⑶Rs，特異性抗體輕鏈可變區(qū)基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT中的一個(gè)或多個(gè)CDRs，具有該氨基酸序列的特異性抗體選擇性的結(jié)合于gp41 MPER。本申請(qǐng)的病毒以HIV-I為例，其包膜來(lái)自宿主細(xì)胞膜，包膜中的兩種糖蛋白gpl20和gp41是病毒重要的抗原標(biāo)志，均由env基因編碼。gpl60分子為糖蛋白前體，可裂解為gpl20和gp41。Gpl20分子稱外膜蛋白，能與T細(xì)胞CD4分子特異性結(jié)合而識(shí)別靶細(xì)胞。Gp41平時(shí)鑲嵌在包膜內(nèi)，當(dāng)gpl20與⑶4分子結(jié)合時(shí)，gpl20發(fā)生構(gòu)象變化，暴露出病毒輔助受體的結(jié)合位點(diǎn)，然后與輔助受體結(jié)合后，gp41介導(dǎo)病毒與CD4細(xì)胞融合,從而病毒進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。病毒表面包膜蛋白的免疫原性比病毒核心蛋白強(qiáng)。幾乎979^100%艾滋病患者血清中可檢測(cè)到針對(duì)gpl20、gpl60的抗體。Gp41抗體穩(wěn)定而持久，對(duì)病毒的診斷和防治有重要意義。通過(guò)比較不同特異性抗體的重鏈可變區(qū)基因VH和輕鏈可變區(qū)基因VL的氨基酸順序發(fā)現(xiàn)，變異僅集中在其中少數(shù)區(qū)域的氨基酸上(15% 20% )，稱為超變區(qū)，超變區(qū)是抗體的抗原結(jié)合位，與抗原決定簇的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)，故又稱為互補(bǔ)決定區(qū)(complementarity —determining regions, Q)Rs)。本申請(qǐng)將gp41MPER區(qū)域作為祀點(diǎn)進(jìn)行了相關(guān)研究由于gp41MPER難以在gp41本身蛋白骨架背景下產(chǎn)生特異性免疫，所以通過(guò)蛋白融合，并在免疫過(guò)程中模擬gp41跨膜前域(MPER)的天然構(gòu)象，將這個(gè)區(qū)域的表位呈遞給免疫系統(tǒng)，以期獲得針對(duì)gp41MPER區(qū)域的特異性抗體，并分析所獲得抗體的中和活性。所述重鏈可變區(qū)基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV的三個(gè)CDRs，輕鏈可變區(qū)基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT 的三個(gè) CDRs。具體地，所述生物制品為生物載體。
或者，所述生物制品為生物片段?；蛘撸錾镏破窞榭贵w。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明通過(guò)將具有特定序列的特異性抗體選擇性的結(jié)合于gp41 MPER，可以使抗體和病毒發(fā)生較好的中和反應(yīng)，起到較好的防治病毒感染的作用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不僅限于下述實(shí)施例。本事實(shí)例為基于選擇病毒受體結(jié)合位點(diǎn)的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應(yīng)用，所述特異性抗體重鏈可變區(qū)基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV的三個(gè)CDRs，特異性抗體輕鏈可變區(qū)基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT的三個(gè)CDRs。本實(shí)施例的單克隆抗體，擁有的可變重鏈和可變輕鏈序列，重鏈可變區(qū)基因VH具體序列為
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly GluSer Leu Lys He Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Asn Phe Ala Ser GluTrp He Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp MetGly Ile He Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser PheGln Gly Gln Val Ile He Ser Ala Asp Lys Ser He Asn Thr Ala TyrLeu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala He Tyr Tyr CysAla Arg Gln Asn His Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Phe Tyr Arg Thr AlaTyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr ValSer Ser
輕鏈可變區(qū)基因VL的氨基酸的具體序列為
Val Ala Gln Ala Ala Asp He Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser LeuSer Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser GlnSer He Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys AlaPro Asn Leu Leu lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Thr Pro Phe Thr Leu Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg
下表I為本實(shí)施例已確定的CDR區(qū)域的氨基酸序列 表I.單克隆抗體VH和VL的⑶R區(qū)域
權(quán)利要求
1.基于選擇病毒受體結(jié)合位點(diǎn)的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應(yīng)用，其特征在于，所述特異性抗體重鏈可變區(qū)基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYPGDSDT, ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV中的一個(gè)或多個(gè)CDRs，特異性抗體輕鏈可變區(qū)基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT中的一個(gè)或多個(gè)⑶Rs，具有該氨基酸序列的特異性抗體選擇性的結(jié)合于gp41 MPER。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)基因VH包含氨基酸含序列為 GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV 的三個(gè) CDRs，輕鏈可變區(qū)基因 VL 包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT的三個(gè)CDRs。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物制品為生物載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物制品為生物片段。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物制品為抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種基于選擇病毒受體結(jié)合位點(diǎn)的特異性抗體在制備防治病毒感染的生物制品中的應(yīng)用。該特異性抗體重鏈可變區(qū)基因VH包含氨基酸含序列為GYNFASEW、IYPGDSDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV中的一個(gè)或多個(gè)CDRs，特異性抗體輕鏈可變區(qū)基因VL包含氨基酸含序列為QSISSY、AAS、QQSYNTPFT中的一個(gè)或多個(gè)CDRs，具有該氨基酸序列的特異性抗體選擇性的結(jié)合于gp41MPER。本發(fā)明通過(guò)將具有特定序列的特異性抗體選擇性的結(jié)合于gp41MPER，可以使抗體和病毒發(fā)生較好的中和反應(yīng)，起到較好的防治病毒感染的作用。
文檔編號(hào)A61P31/20GK102727889SQ20121020720
公開(kāi)日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月21日
發(fā)明者丁兆, 朱仲玉 申請(qǐng)人:四川匯宇制藥有限公司