專利名稱：EB病毒miR-BART7反義寡聚核苷酸在制備治療鼻咽癌的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于含有兩個(gè)或多個(gè)單核苷酸單元的化合物領(lǐng)域，特別是涉及具有以核苷基的糖化物基團(tuán)連接的單獨(dú)的磷酸酯基或多磷酸酯基的化合物。
背景技術(shù)：
鼻咽癌(NPC)是我國南方地區(qū)常見的頭頸部惡性腫瘤，是頭頸部腫瘤中復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率最高的疾病，頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達(dá)80%，治愈后5年內(nèi)仍有20 30%患者出現(xiàn)鼻咽癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，是臨床上導(dǎo)致死亡的主要因素之一，傳統(tǒng)治療手段如手術(shù)、放療或化療等對防治鼻咽癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移效果不理想，相比較而言，應(yīng)用生物治療方法更適合第二階段的治療，其中基因療法對防治鼻咽癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移具有更重要的臨床意義。EB病毒(Epstein Barr virus, EBV)是一種\皰疫病毒，幾乎所有的未分化和低分化鼻咽癌都與EB病毒潛伏性感染有關(guān)。近來研究發(fā)現(xiàn)EB病毒編碼的一些miRNA (非編碼微小核糖核酸)可參與調(diào)控EB病毒編碼的基因和人宿主基因的表達(dá)。EBV-miR-BART2能與編碼病毒DNA聚合酶的基因BALF5的3'UTR完全互補(bǔ)。在裂解感染期大量病毒復(fù)制時(shí)，miR-BART2表達(dá)水平降低，對BALF5基因的分解作用減弱，有利于病毒復(fù)制循環(huán)。隨著miR-BART2選擇壓力變化，BALF5表達(dá)降低，EBV感染細(xì)胞釋放的病毒顆粒不斷減少，感染進(jìn)入潛伏狀態(tài)(Nucleic Acids Res 37:1035-48, 2009) ;EBV-miR-BHRFI_3 與細(xì)胞 IFN誘導(dǎo)的T細(xì)胞趨化因子CXCL-Il / I-TAC的表達(dá)水平相關(guān)，推測CXCL-11/I-TAC是miR-BHRFl-3作用靶點(diǎn)，EB病毒可以此作為調(diào)節(jié)方式來干擾宿主的免疫監(jiān)視和免疫清除作用(Cancer Res68:1436-42，2008) ;EBViiR-BART5能通過抑制宿主的凋亡前蛋白PUMAH1，上調(diào)P53的表達(dá)。如果從EBV感染的細(xì)胞中去除miR-BART5，將促進(jìn)PUMA介導(dǎo)的凋亡作用，提示EBV能夠抑制凋亡的發(fā)生，從而保護(hù)其感染的上皮細(xì)胞(J Exp Med 205:2551-60,2008, J Biol Chem285:33358-70, 2010) ;EBV_miR_BART6_5p能抑制EBNA2病毒癌基因的表達(dá)，而這種癌基因的表達(dá)在I型和II型潛伏狀態(tài)(免疫低反應(yīng))向III型潛伏狀態(tài)(免疫高反應(yīng))轉(zhuǎn)化的過程中是不可缺少的，表明EBV-miR-BART6在EBV的感染和潛伏中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用(JBiol Chem 285:33358-70,2010)。由此可見，EB病毒miRNA —方面可作用于病毒本身的靶基因，促進(jìn)病毒的感染和潛伏，另一方面也可以作用于宿主的靶基因，促進(jìn)病毒逃避宿主細(xì)胞的免疫反應(yīng)，并抑制宿主細(xì)胞的凋亡。然而，有關(guān)EB病毒miR_BART7的作用及機(jī)制的研究卻很少，Lo等(PNAS104 :16164-9,2007)報(bào)道 3 種 EB 病毒編碼的 miRNA(miR-BARTl_5p，miR_BART16 和miR-BART17-5p)可下調(diào)EB病毒的LMPl基因的表達(dá)。當(dāng)LMPl受到病毒miRNA調(diào)控時(shí)，其下游信號(hào)途徑會(huì)受到抑制，NF-KB表達(dá)降低，凋亡受到抑制，使EB病毒感染的細(xì)胞易向腫瘤發(fā)展(Cell Mol Immunol 4:185-96，2007)。另有報(bào)道 EBViiR-BARTl 可與 BBLF4 和 LMP2AmRNA 3’端結(jié)合，從而達(dá)到調(diào)節(jié)病毒自身基因表達(dá)的目的(PNAS，1993，90:378— 382)。重要的是，迄今為止，有關(guān)EB病毒miR-BART7與其他EB病毒miRNA促進(jìn)鼻咽癌發(fā)生發(fā)展尤其是促鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用仍未見任何報(bào)道。納米顆粒具有小尺寸效應(yīng)、表面效應(yīng)等優(yōu)勢，通過增強(qiáng)滲透和保留作用(EPR)可有效地祀向腫瘤區(qū)域，近年來研究納米載藥系統(tǒng)應(yīng)用于腫瘤治療成為熱點(diǎn)(Biomacromolecules. 11，3531-3538，2010)。納米顆?？砂?、濃縮、保護(hù)核苷酸，使其免受核酸酶降解；通過表面功能化，可連接特異靶向分子；體內(nèi)循環(huán)時(shí)間明顯長于普通大小顆粒，IOOnm以下的納米顆粒能夠逃避網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬，從而延長給藥時(shí)間，提高給藥效果；合適的納米基因藥物既能夠發(fā)揮陽離子聚合物的體外高效轉(zhuǎn)染的優(yōu)點(diǎn)，也可以有效避免體內(nèi)實(shí)驗(yàn)過程中網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的清除，提高治療效果，因此將納米技術(shù)應(yīng)用于基因治療具有很好的臨床 應(yīng)用前景。粒徑為Inm 150nm的金顆粒(AuNP)為惰性物質(zhì),無毒,制備方法簡單,成本較低，具有特殊的光學(xué)性質(zhì)以及良好的生物相容性和表面易于功能化等優(yōu)點(diǎn)，可與藥物分子、生物大分子等結(jié)合，廣泛地應(yīng)用于免疫標(biāo)記、生物芯片、生物傳感及藥物輸送系統(tǒng)等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域(Adv. Drug Deliv. Rev. 60，1307-1315，2008)。近年來以金納米顆粒為載體，表面進(jìn)行適當(dāng)功能化的基團(tuán)修飾，再進(jìn)一步負(fù)載AMO、SiRNA等進(jìn)行基因治療獲得了許多可喜的成果。美國西北大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)，應(yīng)用13nm左右金顆粒穩(wěn)定多股巰基化寡核苷酸，使其進(jìn)細(xì)胞能力大大增強(qiáng)，可綁定到目標(biāo)信使的核酸(mRNAs)，使其表達(dá)下調(diào)，并具有抗核酸酶性質(zhì)，轉(zhuǎn)染效率高于未經(jīng)過修飾的寡核苷酸及商品用轉(zhuǎn)染脂質(zhì)載體LipOfectamine2000(Science. 312，27-30，2006) ；Klibavov小組將帶有低分子量PEI (2KDa)的金納米顆粒作為載體轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA進(jìn)猴腎細(xì)胞C0S-7，既增加了 PEI的有效分子量又降低了其細(xì)胞毒性，轉(zhuǎn)染效率較單一的 PEI 增加了 12 倍(Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100(16) :9138-9143, 2003)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種EB病毒miR_BART7反義寡聚核苷酸的藥物用途，體現(xiàn)該用途的藥物可以有效地與EB病毒miR-BART7結(jié)合，阻斷miR_BART7的表達(dá)及其對鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控促進(jìn)作用，從而達(dá)到抗鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移和治療鼻咽癌的目的。上述EB病毒miR-BART7反義寡聚核苷酸的藥物用途具體是，EB病毒miR_BART7反義寡聚核苷酸在制備抗鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用，其中所述的反義寡聚核苷酸的序列是 CCCUGGACACUGGACUAUGAUG (SEQ ID NO: I)。本發(fā)明所述的反義寡聚核苷酸采用本領(lǐng)域常規(guī)方法合成，如，先采用核酸合成儀合成，再經(jīng)簡單的單鏈化學(xué)修飾(如，2’ -甲氧修飾，變成增強(qiáng)型寡核苷酸)和HPLC純化制得。本發(fā)明人推薦的方法由以下步驟組成I.反義寡核苷酸探針的設(shè)計(jì)(I. I)根據(jù)國際公用的sanger mirbase數(shù)據(jù)庫中的EB病毒miR-BART7序列，進(jìn)行反義設(shè)計(jì)，獲得反義寡核苷酸序列；其中探針設(shè)計(jì)的基本原則是，I)探針內(nèi)部的發(fā)夾結(jié)構(gòu)不超過2個(gè)；2)經(jīng)BLAST比較與其它序列的相似性小于20% ；3)經(jīng)BLAST比較與其它基因序列的重復(fù)連續(xù)不超過3個(gè)堿基；(I. 2)采用21-23nt 2'-甲氧修飾，得到SEQ ID NO 1所示序列；2.反義寡核苷酸探針的合成及純化(2. I)將SEQ ID NO :1所示的序列輸入3900合成儀自動(dòng)合成，得到含SEQ ID NO:I所示序列的反義寡核苷酸的合成柱；
(2. 2)對合成柱進(jìn)行洗脫并收集洗脫液，然后，冰凍、干燥、去氨水，溶于9 :1的甲酞胺和TBE混合溶液中；(2. 3)上樣于HPLC進(jìn)行純化；(2. 4)酒精沉淀、洗滌、真空抽干后得到序列為SEQ ID NO :1的反義寡核苷酸，-20°C保存?zhèn)溆谩１景l(fā)明利用轉(zhuǎn)移和侵襲試驗(yàn)(Transwell實(shí)驗(yàn)和Boyden小室實(shí)驗(yàn))分析發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌細(xì)胞中呈高度表達(dá)的EB病 毒miR-BART7能明顯促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。將EB病毒編碼的miR-BARI7轉(zhuǎn)染進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞株CNEl后，與沒有轉(zhuǎn)染EB病毒miR-BART7的CNEl細(xì)胞株相比較，細(xì)胞穿透濾膜和基質(zhì)膜的數(shù)量顯著增多，表明該miRNA調(diào)控促進(jìn)了鼻咽癌細(xì)胞的遷移和侵襲。本發(fā)明人將EB病毒miR-BART7反義寡聚核苷酸作用鼻咽癌細(xì)胞后，EB病毒miR-BART7表達(dá)水平發(fā)生顯著性差異變化(Welch/F=104. 400, P=O. 000)，24h和48h干擾抑制效率均可達(dá)到80%以上(表明其反義抑制作用至少能維持兩天);經(jīng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)EB病毒miRBART7反義寡聚核苷酸作用的鼻咽癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力出現(xiàn)明顯降低，穿過透濾膜和基質(zhì)膜的數(shù)量明顯減少。本發(fā)明所述的治療鼻咽癌的藥物由EB病毒miR-BART7反義寡聚核苷酸和藥學(xué)上可以接受的賦形劑組成。為了提高藥效，最好是先將EB病毒miR_BART7反義寡聚核苷酸吸附在納米球上，然后再加入適當(dāng)?shù)馁x形劑制成所需要的劑型。本發(fā)明所述的納米球的粒徑為30nm 50nm,該納米球由含巰基的納米金、分子量為2Kda的聚乙烯亞胺、EB病毒miR-BART7反義寡核苷酸與聚乙二醇單甲醚和支鏈型聚乙烯亞胺的共聚物組成；所述的納米球可以由以下方法制備得到(a)將含巰基的納米金和質(zhì)量為含巰基的納米金10倍的分子量為2Kda的聚乙烯亞胺加入IOmM NaCl溶液中，常溫下反應(yīng)30分鐘，離心純化分離得到聚乙烯亞胺包裹納米金；(b)將步驟(a)制備的聚乙烯亞胺包裹納米金和質(zhì)量為含巰基的納米金60倍的序列為SEQ ID NO 1的反義寡聚核苷酸加入IOmM NaCl溶液中，常溫下反應(yīng)30分鐘，離心純化分離得到負(fù)載反義寡核苷酸納米金；(C)將步驟(b)制備的負(fù)載反義寡核苷酸納米金、質(zhì)量為含巰基的納米金7倍的聚乙二醇單甲醚和支鏈型聚乙烯亞胺的共聚物加入IOmM NaCl溶液中，常溫下反應(yīng)30分鐘，離心純化分離得到納米球；其中，聚乙二醇單甲醚的分子量為2Kda，支鏈型聚乙烯亞胺的分子量為25Kda，且聚乙二醇單甲醚與支鏈型聚乙烯亞胺的物質(zhì)的量之比為1:1.5。上述納米球的制備方法中，所述的共聚物的制備方法可參照文獻(xiàn)的報(bào)導(dǎo)(如Macromolecules, 35, 6867-6874，2002)。上述納米球的制備方法中，所述的含巰基的納米金的粒徑為15 20nm。其中，所述的含巰基的納米金可以依據(jù)本領(lǐng)域常用的方法制備，具體步驟可以參照文獻(xiàn)的報(bào)導(dǎo)(如ACS Nano, 4(9):5505-5511, 2010)。本發(fā)明所述的反義寡核苷酸可阻斷EB病毒編碼的miRNA的復(fù)制、生存和表達(dá)，其堿基序列與反向互補(bǔ)的序列結(jié)合，具有比抗體更高的專一性，使鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移受到有效抑制，且miRNA無免疫原性，有利于更好地防治鼻咽癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。更進(jìn)一步地，本發(fā)明將所述的反義寡核苷酸制備成納米基因藥物，以保護(hù)反義寡核苷酸免受核酸酶降解，延長作用時(shí)間，比商品用脂質(zhì)體有更高的轉(zhuǎn)染效率，有利于進(jìn)一步的臨床實(shí)際開發(fā)和應(yīng)用。


圖I是本發(fā)明所述的EB病毒miR_BART7反義寡聚核苷酸Transwell轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)的直方圖，圖中Control為未加反義寡核苷酸的鼻咽癌細(xì)胞株Transwell轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果，BART7-AM0是反義寡核苷酸作用后的鼻咽癌細(xì)胞株Transwell轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖2是本發(fā)明所述的EB病毒miR_BART7反義寡聚核苷酸Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)的直方圖，圖中Control為未加反義寡核苷酸的鼻咽癌細(xì)胞株B oyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果，BART7-AM0是反義寡核苷酸作用后的鼻咽癌細(xì)胞株Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖3是下述實(shí)施例5中所述治療后的鼻咽癌裸鼠模型在LT-9MACMSYSPLUS整體熒光系統(tǒng)下成像的圖片，其中，A圖是對照組的一張具有代表性的圖片；B圖是實(shí)驗(yàn)組I的一張具有代表性的圖片，C圖是實(shí)驗(yàn)組II的一張具有代表性的圖片。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例II、含EBV-miR_BART7的鼻咽癌細(xì)胞株CNEl的制備細(xì)胞CNE1細(xì)胞株，購自湖南中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室。寡核苷酸EB病毒miR-BARI7反義寡聚核苷酸的序列為SEQ ID NO :1，委托上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成。過表達(dá)EBV-miR-BART7的CNEl細(xì)胞制備化學(xué)合成EB病毒miR_BART7前體分子序列(282bp)，連接到含GFP表達(dá)的慢病毒載體pMAGic 4. 0中，經(jīng)pNL_EGFP/CMV/WPREDU3載體質(zhì)粒、p⑶/NL-BH*DDD包裝質(zhì)粒和pLTR-G質(zhì)粒，在293T細(xì)胞中的包裝，產(chǎn)生能表達(dá)EBV-miR-BART7的慢病毒載體pMAGic-EBV-miR-BART7。用此慢病毒載體轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞株CNEl，經(jīng)流式分篩和定量PCR證實(shí)，獲得EB病毒miR-BART7穩(wěn)定高表達(dá)的CNEl (含GFP表達(dá))。具體步驟可以參照題為“慢病毒介導(dǎo)的ebv-miR-BARI7穩(wěn)定過表達(dá)鼻咽癌細(xì)胞株CNEl的建立”(南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2011; 31 (3) :419)—文的報(bào)導(dǎo)。2、熒光定量PCR檢測制備的鼻咽癌細(xì)胞株CNEl的EBV_miR-BART7表達(dá)先把RNA制備的器皿用滅活的DEPC水配制的液體進(jìn)行去RNase處理，然后分別置入原始細(xì)胞株CNE1、空載體的細(xì)胞株CNEl-mock和轉(zhuǎn)染了 EBV_miR-BART7的細(xì)胞株CNE1-BART7，按照TRIzoI試劑說明書分別進(jìn)行總RNA的抽提取對數(shù)生長期的鼻咽癌細(xì)胞株培養(yǎng)至細(xì)胞待測密度，用預(yù)冷的PBS洗2遍，加入Iml TRIzoI，冰上靜置5min后裂解液轉(zhuǎn)移至I. 5ml EP管，加入氯仿0. 2ml,劇烈振搖15sec,室溫放置5分鐘后12000rpm 4°C離心15min，吸出上層水相，下層轉(zhuǎn)移至另一 I. 5ml EP管，按等比例加入異丙醇，混勻后室溫靜置5min,離心30min, 75%乙醇洗漆沉淀,離心10分鐘,下層在超凈臺(tái)中自然干燥5_10min,待酒精揮發(fā)后用適量DEPC水溶解，-80° C保存?zhèn)溆?。RNA標(biāo)本稀釋后測定A260和A280，計(jì)算RNA濃度和純度，在1%的瓊脂糖凝膠中電泳檢測RNA有無降解。檢測完好的RNA用于進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，按照TIANScript cDNA第一鏈合成試劑盒說明書進(jìn)行cDNA的合成。然后，用熒光定量PCR儀檢測，并根據(jù)熒光定量PCR儀所顯示的Ct值按下述步驟采用相對定量法來分析和比較三組細(xì)胞株的EBV-miR-BART7表達(dá)的差異(I)以U6為內(nèi)參，按以下公式先分別計(jì)算CNEl、CNEl-mock和CNE1-BART7細(xì)胞株中 EBV-miR-BART7 的 A Ct 值CNEl 的 A Ct=CNEl 的 EBViiR-BART7 的 Ct 值-CNEl 的 U6 的 Ct 值； CNEl-mock 的 A Ct=CNEliiock 的 EBV_miR-BART7 的 Ct 值-CNEl-mock 的 U6 的 Ct值；CNE1-BART7 的 A Ct=CNE I-BART7 的 EBViiR-BART7 的 Ct 值-CNE1-BART7 的 U6 的Ct值。(2)以 2-A ACt 按以下公式分別計(jì)算 CNEl、CNEl-mock 和 CNE1-BART7 中EBV-miR-BART7表達(dá)的倍比關(guān)系A(chǔ) A Ct= (CNEl-mock 的 EBV_miR-BART7 的 Ct 值一U6 的 Ct 值)一(CNElEBV-miR-BART7 的 Ct 值一 U6 的 Ct 值)；A ACt=(CNEl-BART7 的 EBV_miR-BART7 的 Ct 值一U6 的 Ct 值)一(CNE1 的EBV-miR-BART7 的 Ct 值一 U6 的 Ct 值)。(3)最后，兩樣本t檢驗(yàn)比較各類型細(xì)胞株之間EBV-miR_BART7的表達(dá)有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。上述統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表I所示。由表I可見，CNEU CNEl-mock和CNE1-BART7三組中，EBV-miR-BART7表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=124. 472，P=O. 001)，表明CNEl轉(zhuǎn)染了EBV-miR-BART7 后，能陽性表達(dá) EBViiR-BART7。表IReal-time PCR檢測ebv_miR-BART7在CNEl細(xì)胞感染前后中的表達(dá)
權(quán)利要求
1.EB病毒miR-BART7反義寡聚核苷酸在制備治療鼻咽癌的藥物中的應(yīng)用，其中所述的反義寡聚核苷酸的序列是 CCCUGGACACUGGACUAUGAUG (SEQ ID NO: I)。
2.權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物是先將所述反義寡聚核苷酸負(fù)載到納米金上制成納米球，再加入藥學(xué)上可以接受的輔料制成。
3.權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于,所述的納米球的粒徑為30nm 50nm,該納米球由含巰基的納米金、分子量為2Kda的聚乙烯亞胺、反義寡核苷酸與聚乙二醇單甲醚和支鏈型聚乙烯亞胺的共聚物組成；所述的該納米球由以下方法制備得到 (a)將含巰基的納米金和質(zhì)量為含巰基的納米金10倍的分子量為2Kda的聚乙烯亞胺加入IOmM NaCl溶液中，常溫下反應(yīng)30分鐘，離心純化分離得到聚乙烯亞胺包裹納米金； (b)將步驟(a)制備的聚乙烯亞胺包裹納米金和質(zhì)量為含巰基的納米金60倍的序列為SEQ ID NO: I的反義寡聚核苷酸加入IOmM NaCl溶液中，常溫下反應(yīng)30分鐘，離心純化分離得到負(fù)載反義寡核苷酸納米金； (c)將步驟(b)制備的負(fù)載反義寡核苷酸納米金、質(zhì)量為含巰基的納米金7倍的聚乙二醇單甲醚和支鏈型聚乙烯亞胺的共聚物加入IOmM NaCl溶液中，常溫下反應(yīng)30分鐘，離心純化分離得到納米球；其中，聚乙二醇單甲醚的分子量為2Kda，支鏈型聚乙烯亞胺的分子量為25Kda，且聚乙二醇單甲醚與支鏈型聚乙烯亞胺的物質(zhì)的量之比為1:1.5。
全文摘要
本發(fā)明涉及EB病毒miR-BART7反義寡聚核苷酸的藥物用途，具體涉及EB病毒miR-BART7反義寡聚核苷酸在制備治療鼻咽癌的藥物中的應(yīng)用，其中所述的反義寡聚核苷酸的序列是CCCUGGACACUGGACUAUGAUG(SEQ ID NO1)。本發(fā)明所述的反義寡聚核苷酸可以有效地與EB病毒成熟miRNA結(jié)合，阻斷EB病毒miR-BART7的表達(dá)及其相應(yīng)的調(diào)控作用，從而抑制鼻咽癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，且miRNA無免疫原性，有利于進(jìn)一步應(yīng)用于防治鼻咽癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。體現(xiàn)本發(fā)明所述用途的藥物，可保護(hù)反義寡核苷酸免受核酸酶降解，延長作用時(shí)間，比商品用脂質(zhì)體有更高的轉(zhuǎn)染效率，有利于進(jìn)一步的臨床實(shí)際開發(fā)和應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K48/00GK102641509SQ201210140280
公開日2012年8月22日 申請日期2012年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月12日
發(fā)明者葉艷芬, 李欣, 王鶯, 蔡紅兵, 蔡隆梅, 袁存存 申請人:南方醫(yī)科大學(xué)