專利名稱：多花野牡丹提取物、制劑，制備方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬中藥技術領域，涉及一種植物提取物，具體涉及一種多花野牡丹提取物、制劑，制備方法，及其在制備預防和治療宮頸炎、宮頸糜爛藥物、消殺產(chǎn)品以及保健用品中的應用。
背景技術：
宮頸炎是已婚婦女的常見病與多發(fā)??；宮頸糜爛是慢性宮頸炎病變過程中最常見的特征，也是可能誘發(fā)宮頸癌的高危因素之一。宮頸糜爛依照炎癥程度可分為單純型、顆粒型、乳頭型。根據(jù)糜爛區(qū)所占宮頸的比例分為三度輕度糜爛、中度糜爛、重度糜爛。目前治療宮頸糜爛的方法有藥物治療、物理治療、手術治療，物理治療和手術治療對身體有一定傷害存在較大的副作用，藥物治療是副作用最少，相對安全有效的治療方法。 多花野牡丹(Melastomaaffine D. Don,Melastoma polyanthum B1.)為野牡丹科野牡丹屬植物，主要分布在我國的西南或南部地區(qū)。臨床研究表明多花野牡丹水煮濃縮得到的浸膏對輕度、中度和重度宮頸糜爛都有很好的療效，300例患者中治愈率為99. 33%,有效率為100%。經(jīng)多花野牡丹提取物首次治療后，創(chuàng)面壞死組織形成痂皮，且迅速脫落，使創(chuàng)面清潔。血管擴張，血液循環(huán)改善，增強局部組織營養(yǎng)，并促上皮組織生長，將創(chuàng)面覆蓋而愈合姚菊玲等，多花野牡丹治療宮頸糜爛300例臨床觀察，河南中醫(yī)，1990，vol 10(5)，24 25。多花野牡丹提取物在臨床上的應用方法主要是用窺器擴張陰道，用干棉球拭凈頸粘液后，將棉球在200%多花野牡丹水提液中浸濕，再貼覆于宮頸糜爛面，每日一次，以12次為限。但由于該方法提取物工藝粗糙，藥效成分不明，質量難以控制，在一定程度上影響了療效，僅停留在個別醫(yī)院的小范圍之內(nèi)使用，同時沒有制成合適的制劑，治療時需要醫(yī)護人員協(xié)助，給患者帶來不便，從而限制了多花野牡丹在治療宮頸病變上的應用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題在于提供一種安全有效的多花野牡丹提取物、制劑，制備方法，及其在制備預防和治療宮頸炎、宮頸糜爛藥物、消殺產(chǎn)品以及保健用品中的應用，以彌補現(xiàn)有技術的不足。本發(fā)明以多花野牡丹(Melastomaaffine D. Don,Melastoma polyanthum B1.)的葉為原料，經(jīng)特定的提取純化工藝制得提取物，保留了原藥材的有效成分，且去除了雜質，藥效優(yōu)于原提取物及其它工藝部位。進一步添加輔料將其制成制劑，保存、攜帶方便，尤其凝膠劑和栓劑，成型好、穩(wěn)定性良好。將它們用于治療宮頸炎、宮頸糜爛，無需特殊設備，無需醫(yī)護人員協(xié)助，患者可以獨立使用，使用非常方便。本發(fā)明所述的多花野牡丹提取物，其水溶液的pH = 2 3 ;包括氨基酸、有機酸(如沒食子酸、檸檬酸等)、小分子糖類(如蔗糖)、有機鋁等成分。以重量百分數(shù)計，氨基酸含量為2% 15%，主要包括丙氨酸、纈氨酸和4-氨基丁酸，還包括天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸等；沒食子酸含量為1% 7%，檸檬酸含量為1% 8%;蔗糖含量為2% 10%;有機鋁含量為0.5% 3. 5%，按 Al 計。所述的多花野牡丹提取物的制備方法，包括以下步驟取多花野牡丹葉子，水提取，水提取液濃縮至每毫升含0. 5g 2g生藥(優(yōu)選每毫升含Ig生藥)；邊攪拌邊加入95% (v/v)乙醇，使含醇量達到60% 90% (v/v),過濾,濾液回收乙醇并濃縮至濃度為4 6g生藥/毫升；放冷，濃縮液加水稀釋，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱吸附(樹脂生藥=I 0.5 3，質量比，優(yōu)選聚苯乙烯型大孔吸附樹脂，如DlOl等)，然后用大孔樹脂量3 5倍體積的水洗脫，洗脫液減壓濃縮至干，即得。本發(fā)明的提取物為稠膏至干膏狀，雖用 冷凍干燥的方式可得固體，但得到的固體極易吸潮。由于冷凍干燥能耗太高，因此，該提取物以膏狀低溫保存為佳。本發(fā)明的多花野牡丹提取物可以以原型、水溶液稀釋等形式，通過與常規(guī)載體材料結合制成各種制劑，如凝膠劑、栓劑、乳劑、霜劑、洗劑等，還可根據(jù)各制劑的需要加入常規(guī)輔料。例如，所述的多花野牡丹提取物的凝膠劑可以按照如下處方配制(以質量分數(shù)計)處方多花野牡丹提取物和水60% 90%，聚卡波菲1% 3%，卡波姆0. 5% 3%，甘油5% 30%，防腐劑(如對羥基苯甲酸乙酯鈉)0.01% 1%，黃原膠0. 2% 3%。優(yōu)選處方多花野牡丹提取物和水80. 33%，聚卡波菲2.2%，卡波姆1.7%，甘油15%,對羥基苯甲酸乙酯鈉0.17%，黃原膠0.6%。配制取多花野牡丹提取物適量，加純化水溶解攪勻至額定量；慢慢加入聚卡波菲、卡波姆，邊加邊攪拌至均勻。再加入黃原膠、甘油、防腐劑(對羥基苯甲酸乙酯鈉)，攪拌至均勻，放置過夜，使溶脹均勻；次日，攪拌至使呈均勻凝膠。測定pH = 2. 0 3. 5，抽真空，脫氣，分裝，包裝，即得。所述的多花野牡丹提取物的栓劑可以按照如下處方配制(以質量分數(shù)計)處方多花野牡丹提取物10% 20%，土溫80 10% 20%，半合成脂肪酸甘油酯(如棕櫚酸酯等)60^-80 ^優(yōu)選處方多花野牡丹提取物13%，吐溫80 16%，半合成脂肪酸甘油酯(如棕櫚酸酯等)71 %。配制將半合成脂肪酸甘油酯(如棕櫚酸酯等)放入不銹鋼精鍋中水浴加熱至大部分溶化，停止加熱，然后分別加入吐溫80和加熱至50 60°C的多花野牡丹提取物(可流動)，攪拌至混合均勻，倒到備好的模具上冷卻凝固成型，整型，包裝，即得。眾所周知，多花野牡丹提取物中所含化學成分與藥效均有密切的聯(lián)系，但是對于不同的提取工藝，其所獲得的提取物的化學成分各有差異，因此藥理活性也各有不同。經(jīng)本發(fā)明特定提取工藝制得的多花野牡丹提取物，其水溶液pH = 2 3，包含氨基酸、有機酸、小分子糖類和有機鋁等成分。其中氨基酸能增加疤痕中膠原纖維含量，促進創(chuàng)口愈合，如脯氨酸幾乎僅存在于膠原纖維中，與膠原的合成有密切關系，纈氨酸可作為加速創(chuàng)口愈合的治療劑。有機酸使提取物的pH值在2 3之間，這種弱酸性環(huán)境可以抑制有害病菌的生長和吞噬外來細菌，有利于消除感染。其中沒食子酸具有收斂、抗炎、抑菌和抗病毒的作用，對白念珠菌生物膜有較強的抑制作用；檸檬酸有收斂作用，能加快皮膚角質的更新。小分子糖類中的蔗糖能選擇性地促進陰道內(nèi)乳桿菌生長，使乳桿菌分解糖原產(chǎn)生乳酸從而降低陰道PH值，同時誘導乳桿菌分泌過氧化氫和細菌素，抑制致病菌的生長，調節(jié)陰道菌群。有機鋁有收斂作用，能促進細胞生長，加快創(chuàng)口的愈合。有益效果本發(fā)明的多花野牡丹提取物、制劑，采用特定優(yōu)選提取工藝，保留了原藥材的有效成分，并去除了雜質，藥效優(yōu)于原提取物及其它工藝部位，制得的制劑尤其凝膠劑和栓劑成型性、穩(wěn)定性良好。動物實驗表明，本發(fā)明的多花野牡丹提取物在苯酚導致的大鼠宮頸炎(宮頸粘膜糜爛)模型中，能大大改善大鼠宮頸炎的炎癥程度，其中60 80%完全恢復正常，20 30%改善為輕度炎癥。效果明顯優(yōu)于陽性對照藥愛寶療(聚甲酚磺醛陰道栓)。即本發(fā)明的多花野牡丹提取物及其制劑藥效明顯優(yōu)于現(xiàn)有技術的多花野牡丹粗提取物和其它工藝部位的提取物，可應用于制備預防和治療宮頸炎、宮頸糜爛藥物、消殺產(chǎn)品以及保健用品中。


圖1、2分別為本發(fā)明提取物中氨基酸成分分析的色譜圖。
具體實施例方式以下結合具體實施例進一步詳細描述本發(fā)明的技術方案。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構成任何限制。本領域的普通技術人員應當理解，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明的技術方案的細節(jié)和形式進行修改或等同替換，但這些修改或替換均落入本發(fā)明保護范圍內(nèi)。實施例1多花野牡丹提取物的制備取多花野牡丹葉子1kg，加水煎煮3次，每次I小時進行水提取。合并水提取液，濾過，濾液濃縮至每毫升含Ig生藥，邊攪拌邊加入95% (v/v)的乙醇，使含醇量達到80%(v/v)，靜置過夜，過濾，濾液回收乙醇并濃縮至約4g生藥/毫升，放冷，加水稀釋至3g生藥/毫升，過濾，上DlOl大孔樹脂柱(樹脂生藥=I 1，質量比)吸附30min，用大孔樹脂量3倍體積的純化水洗脫，洗脫液減壓濃縮至干，得42. 9g，收率4. 29 %。實施例2多花野牡丹提取物的制備取多花野牡丹葉子1kg，加水煎煮2次，每次1. 5小時進行水提取。合并水提取液，濾過，濾液濃縮至每毫升含Ig生藥，邊攪拌邊加入95% (v/v)的乙醇，使含醇量達到70%(v/v)，靜置過夜，過濾，濾液回收乙醇并濃縮至約4g生藥/毫升，放冷，加水稀釋至2. 5g生藥/毫升，過濾，上AB-8大孔樹脂柱(樹脂生藥=I 1，質量比)吸附30min，用大孔樹脂量4倍體積的純化水洗脫，洗脫液減壓濃縮至干，得38. 9g，收率3. 89 %。實施例3多花野牡丹提取物中氨基酸成分分析樣品制備取實施例1的樣品約lg，加水溶解稀釋調pH = 2后，上至處理好的732型陽離子交換樹脂柱，水洗脫，收集洗脫液另置，再用10%氨水洗脫，收集10%氨水洗脫液并濃縮蒸干，即得0.1Sgo分析方法HITACHI氨基酸分析儀；內(nèi)標4_氨基丁酸(4-Aminobutyric acid)；分析柱磺酸型強酸性陽離子交換樹脂855-3506 ;柱后茚三酮顯色，紫外測定。脯氨酸用入440nm測定,其它氨基酸用570nm測定。測定結果參看圖1、2，與對照品圖譜對比，可知樣品中所含氨基酸類化合物主要包括丙氨酸(Ala)、繳氨酸(Val)和4-氨基丁酸(4-Aminobutyric acid),還包括天冬氨酸(Asp)、蘇氨酸(Thr)、絲氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、半胱氨酸(Cys)、異亮氨酸(He)、亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)等。實施例4多花野牡丹提取物中有機酸和蔗糖的薄層色譜分析供試樣品制備將實施例3的水洗脫液，調pH = 5上至處理好的717型陰離子交換樹脂柱，水洗脫，收集水洗脫液，濃縮蒸干得540mg。再用I %鹽酸洗脫，收集I %鹽酸洗脫液，濃縮蒸干得70mg。薄層色譜分析a.將用I %鹽酸洗脫下來的樣品用水溶解，與檸檬酸對照品溶液點在同一塊硅膠HSGF254薄層板上用展開劑(甲苯乙酸乙酯乙醚甲酸=6:3:2:1)展開，噴顯色劑(溴甲酚綠乙醇和稀堿溶液)，加熱，有機酸在藍色背景上顯黃色斑點，樣品色譜中在與朽1檬酸相同位置顯相同的黃色斑點，表明樣品中含有朽1檬酸。b.將用水洗脫下來的樣品用水溶解與蔗糖對照品溶液點在同一塊硅膠HSGF254薄層板上，用展開劑(異丙醇濃氨水水=12 : 4 :1)展開，取出，熱風吹干，噴顯色劑(5%磷鑰酸乙醇溶液)，在150°C加熱至斑點顯色清晰。樣品色譜中，在與蔗糖對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，表明樣品中含有蔗糖。實施例5多花野牡丹提取物溶液pH值測定
供試品制備分別稱取實施例1樣品和實施例2樣品各配成100mg/ml的溶液。測定方法用Mettler Toledo pH計測定溶液pH值。測定結果實施例1樣品溶液pH = 2. 46，實施例2樣品溶液pH =為2. 53。實施例6多花野牡丹提取物中氨基酸含量測定A試劑與材料1.供試品制備取實施例1和實施例2的樣品各1. Og,同實施例3步驟制備，得0. 17g和0. 16g。分別加水溶解定容至10ml，精密吸取Iml至IOOml量瓶中，加水定容至刻度。2.對照品溶液稱取0 -丙氨酸對照品10. 6mg,加水溶解并定容至IOml,移取Iml并加水定容至20ml，搖勻，即得53ii g/ml的對照溶液。分別移取對照液5份，配制成5. 3,10. 6,21. 2,31. 8、42. 4 u g/ml 以備用。3.乙酸鈉-乙酸緩沖液(pH = 5. 4)稱取乙酸鈉7. 46g，乙酸0. 54g加入500ml溶解，搖勻，乙酸校正pH。4.茚三酮顯色液稱取85mg卻三酮和15mg還原卻三酮,用IOmL乙二醇甲醚溶解。還原型茚三酮按下法制備稱取5g茚三酮，用125mL沸蒸餾水溶解，得黃色溶液。B操作步驟1.標準曲線的繪制
移取上述6個不同濃度的對照品溶液各Iml與具塞試管中，依次加入ImL 2mol/L醋酸緩沖液、ImL茚三酮顯色液，充分混勻后，蓋住試管口，在100°C水浴中加熱15min，用自來水冷卻。放置5min后,加入3ml 60%乙醇稀釋,充分搖勻。用分光光度計于570nm測定。以對照品濃度為橫坐標(X)，以測得值為縱坐標(y)，繪制標準曲線y = 0. 021x+0. 0837，r=0. 9992。2.樣品中氨基酸的測定取供試品按照標準曲線的方法進行操作，測定，并代入標準曲線方程計算，即得。結果表明經(jīng)732型陽離子樹脂純化后的兩份樣品，氨基酸含量分別為39. 21%和38. 96%，從而計算得實施例1和實施例2樣品中氨基酸含量分別為6. 7%,6. 2%。實施例7多花野牡丹提取物中沒食子酸含量測定
·
對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品8. 6mg置IOml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取Iml置20ml量瓶中，加10 %甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每Iml含沒食子酸43 ii g)。供試品溶液的制備精密稱取實施例1的樣品84. 5mg,實施例2的樣品86. 7mg分別置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。分析方法以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0. 05%磷酸二氫鉀溶液(用lmol/L磷酸調節(jié)pH = 2. 7) (3 97)為流動相；檢測波長為270nm，流速lml/min ;分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各20 Ul注入液相色譜儀，測定。測定結果實施例1和實施例2樣品中沒食子酸的含量分別為2. 75%,2. 46%。實施例8多花野牡丹提取物中檸檬酸含量測定檸檬酸對照品溶液的制備精密稱取檸檬酸對照品10. Omg,置IOml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，即得(每Iml含檸檬酸20y g)。供試品溶液的制備精密稱取實施例1的樣品6. 4mg,實施例2的樣品7. 2mg分別置IOml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。分析方法離子色譜儀ICS2100(戴安，美國)；Hitech Kflow超純水機；色譜柱Thermo IonPac ASl 1-HC (4 X 250mm),預柱Thermo Dionex IonPacTM AGll_HC(4X50mm);淋洗液30mM NaOH。流速1. 2ml/min ;柱溫35°C ;抑制器90mA。分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各25 u I注入液相色譜儀，測定，即得。測定結果實施例1和實施例2樣品中檸檬酸含量分別為3. 38%,3. 19%。實施例9多花野牡丹提取物中有機酸定性分析對照溶液的制備分別稱取檸檬酸、富馬酸、草酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、DL-蘋果酸對照品適量，加水配成 20 ii g/ml, 5 ii g/ml, 5 ii g/ml, 5 ii g/ml, 2 ii g/ml, 5 ii g/ml, 5 ii g/ml的溶液，即得。樣品溶液的制備精密稱取實施例1的樣品適量，加水溶解，配成lmg/ml的溶液，即得?；旌先芤旱闹苽浞謩e精密吸取各對照品溶液Iml和樣品溶液Iml至2ml容量瓶中混勻，即得7個混合溶液。分析方法1:離子色譜儀ICS2100(戴安，美國)；Hitech Kflow超純水機；色譜柱Thermo IonPac ASl 1-HC (4 X 250mm),預柱Thermo Dionex IonPac AGll_HC(4X50mm);淋洗液30mM NaOH。流速1.2ml/min ;柱溫35°C ;抑制器90mA。分別精密吸取檸檬酸、富馬酸、草酸、酒石酸、丙酮酸、DL-蘋果酸對照品溶液、樣品溶液和混合溶液各25 u I注入液相色譜儀，分別記錄各自的色譜圖。分析方法2 :離子色譜儀IClOlO ;色譜柱Shodex IC S1-524E (4X 250mm)，淋洗液Na2C03，3. 6mm/ml。分別精密吸取乳酸對照品溶液、樣品溶液和兩者的混合溶液各50 yl注入液相色譜儀，分別記錄各自的色譜圖。結果分析方法1，在樣品溶液的色譜圖中，在與對照品檸檬酸、草酸色譜峰相應的位置(22. 34min，6. 96min)出現(xiàn)對應的色譜峰，在混合溶液的色譜圖中，這些相應的色譜 峰完全重合，表明樣品中含有檸檬酸、草酸。分析方法2，在樣品溶液的色譜圖中，在與對照品乳酸色譜峰相應的位置(5.73min)出現(xiàn)對應的色譜峰，在混合溶液的色譜圖中，相應的色譜峰完全重合，表明樣品中含有乳酸。除檸檬酸外，草酸、乳酸的含量均較低。實施例10多花野牡丹提取物中蔗糖含量測定A試劑與材料1.供試品溶液制備取實施例1和實施例2的樣品各0. 10g，加水溶解定容至20ml，搖勻，即得。2.對照品溶液制備稱取鹿糖對照品9. 95mg,加水溶解并定容至IOml,移取Iml加水定容至10ml，搖勻，即得99. 5 u g/ml的對照品溶液。3.蒽酮硫酸溶液稱取蒽酮0. 5000g，用98%的硫酸溶解于250ml的容量瓶中，定容至刻度，搖勻，其濃度為0. 0020g/ml (即配即用)。B樣品中蔗糖的測定分別取供試品溶液和99. 5 U g/ml的對照品溶液各1ml，各自加10% KOHlml，沸水浴加熱5min,冷卻至室溫,各取溶液Iml,加水Iml,搖勻，再加入4ml蒽酮硫酸溶液，反應70s，冰水迅速冷卻70s，以蒸餾水為作參比，用分光光度計于625nm下測定。計算得實施例I樣品和實施例2樣品中蔗糖的含量分別為3. 8%,3. 2%。實施例11多花野牡丹提取物中鋁含量測定A試劑與材料1.供試品溶液制備分別稱取實施例1樣品和實施例2樣品各0. 5g，至坩堝中，電爐上炭化，馬弗爐中灰化至恒重。樣品先加水浸潤，再加少許濃鹽酸加熱溶解，移至50ml容量瓶中，水定容；精密吸取Iml至IOml容量瓶中，水定容，搖勻即可。2.對照品溶液制備稱取Al (NO3) 3. 9H20 138. 9mg用水溶解并定容至100ml，即得每ml含100 y g的Al3+溶液以備用。移取對照溶液，分別配制成每ml含I ii g>2 u g>3 u g、4 u g>5 u g、6 y g的Al3+的溶液，搖勻即可。3.顯色試劑①乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH = 5. 6):稱取乙酸鈉7. 46g，乙酸0. 54g加入500ml溶解，搖勻，乙酸校正pH;
②抗壞血酸溶液10g/L :稱取本品1. 00g，用水溶解并定容至IOOml ；③鉻天青S溶液0. 5g/L :稱取本品50. Omg，用水溶解并定容至IOOml ；④溴化十六烷基三甲胺溶液0. 2g/L :稱取本品20. Omg，用水溶解并定容至100ml。B操作步驟1.標準曲線的繪制移取上述6個不同濃度的Al3+溶液各Iml至25ml容量瓶中，分別加入8ml乙酸-乙酸鈉緩沖液，抗壞血酸溶液Iml，溴化十六烷基三甲胺溶液2ml，鉻天青S溶液2ml，加水至刻度，搖勻。室溫放置20分鐘，用分光光度計于645nm處進 行測定。以對照液的濃度為橫坐標(X)，吸光度為縱坐標(y)繪制標準曲線，y = 0. 1577x-0. 0774，r = 0. 9976。2.樣品中鋁的含量測定分別取供試品溶液Iml至25ml容量瓶中，按照對照品溶液的方法進行操作，測定，并代入標準曲線方程計算。結果實施例1和實施例2樣品中鋁含量分別為1. 4%,1. 2%。實施例12多花野牡丹提取物水分含量測定儀器與設備MEITLERTOLEDO DL38, Karl Fisher Titrator測定方法精密稱取實施例1樣品52. 3mg,實施例2樣品54. 8mg,按照《中國藥典2010年版二部》附錄VIII M水分測定法第一法(費休氏法)A容量滴定法測定。測定結果15.28%，16. 52%。實施例13多花野牡丹提取物凝膠的制備取多花野牡丹葉子1kg，加水煎煮3次，每次I小時進行水提取。合并水提取液，濾過，濾液濃縮至每毫升含Ig生藥，邊攪拌邊加入95% (v/v)的乙醇，使含醇量達到80%(v/v)，靜置過夜，過濾，濾液回收乙醇并濃縮至約4g生藥/毫升，放冷，用純化水稀釋至3g生藥/毫升，過濾，上大孔樹脂柱(樹脂生藥=I 1，質量比)，吸附30min，用大孔樹脂量3倍體積的純化水洗脫，洗脫液濃縮到約每毫升含4g生藥，放冷，加純化水至401. 65g。慢慢加入聚卡波菲llg、卡波姆8. 5g,邊加邊攪拌至均勻。加入黃原膠3g、甘油75g、對輕基苯甲酸乙酯鈉0.85g，攪拌至均勻，放置過夜，使溶脹均勻。次日，攪拌使呈均勻凝膠。抽真空，脫氣，分裝，包裝，即得。實施例14多花野牡丹提取物凝膠的制備取多花野牡丹葉子5kg，加水煎煮2次，每次1. 5小時進行水提取。合并水提取液,濾過,濾液濃縮至每毫升含1. 5g生藥，邊攪拌邊加入95% (v/v)的乙醇，使含醇量達到75% (v/v)，靜置過夜，過濾，濾液回收乙醇并濃縮至約4g生藥/毫升，放冷，用純化水稀釋至3g生藥/毫升，過濾，上大孔樹脂柱(樹脂生藥=I 1，質量比)，吸附30min，用大孔樹脂量5倍體積的純化水洗脫，洗脫液濃縮到約每毫升含4g生藥，放冷，加純化水至2008. 2g。慢慢加入聚卡波菲55g、卡波姆42. 5g，邊加邊攪拌至均勻。加入黃原膠15g、甘油375g、對羥基苯甲酸乙酯鈉4. 25g，攪拌至均勻，放置過夜，使溶脹均勻。次日，攪拌使呈均勻凝膠。抽真空，脫氣，分裝，包裝，即得。實施例15多花野牡丹提取物凝膠的制備取多花野牡丹葉子10kg，加水煎煮3次，每次I小時進行水提取。合并水提取液，濾過，濾液濃縮至每毫升含Ig生藥，邊攪拌邊加入95% (v/v)的乙醇，使含醇量達到80%(v/v)，靜置過夜，過濾，濾液回收乙醇并濃縮至約4g生藥/毫升，放冷，過濾，上DlOl大孔樹脂柱(樹脂生藥=I 1，質量比)吸附30min，用大孔樹脂量3倍體積的純化水洗脫，洗脫液濃縮到約每毫升含4g生藥，放冷，加純化水至4016. 5g。慢慢加入聚卡波菲110g、卡波姆85g,邊加邊攪拌至均勻。加入黃原膠30g、甘油750g、對輕基苯甲酸乙酯鈉8. 5g,攪拌至均勻，放置過夜，使溶脹均勻。次日，攪拌使呈均勻凝膠。抽真空，脫氣，分裝，包裝，即得。實施例16多花野牡丹提取物栓劑的制備取多花野牡丹葉子5kg，加水煎煮2次，每次1. 5小時進行水提取。合并水提取液,濾過,濾液濃縮至每毫升含1. 5g生藥，邊攪拌邊加入95% (v/v)的乙醇，使含醇量達到75% (v/v)，靜置過夜，過濾，濾液回收乙醇并濃縮至約4g生藥/毫升，放冷，用純化水稀釋至3g生藥/毫升，過濾，上大孔樹脂柱(樹脂生藥=I 1，質量比)，吸附30min，用大孔樹脂量5倍體積的純化水洗脫，洗脫液濃縮至干，得到202克。稱取1103g棕櫚酸酯放入不銹鋼精鍋中水浴加熱至大部分溶化，停止加熱，然后分別加入249g吐溫80和加熱至50°C的202g多花野牡丹提取物，攪拌至混合均勻，倒到備好的模具上冷卻凝固成型，整型，包裝，即 得。實施例17多花野牡丹提取物不同工藝部位局部給藥抗SD大鼠宮頸炎藥效實驗(一)a)樣品制備樣品1:將實施例13制得的樣品，按1: 1.5(質量比)與空白凝膠混合稀釋后得到的樣品，每克凝膠含0. Sg生藥(空白凝膠，即將凝膠處方中的提取物用純化水來代替)。樣品2 :取多花野牡丹葉子1kg，加水煎煮3次，每次I小時進行水提取。合并水提取液，濾過，濾液減壓濃縮至每毫升含4g生藥。按照實施例13的凝膠配置方法配置凝膠，并經(jīng)同樣的稀釋方法得到的樣品，每克凝膠含0. Sg生藥。正常對照組和溶媒對照組按照實施例13的凝膠配置方法配置空白凝膠樣品，即將凝膠處方中的藥液用純化水來代替。陽性對照愛寶療(聚甲酚磺醛陰道栓)批號131593。b)實驗動物雌性SD大鼠；年齡60-90天，體重范圍150_200g ;來源上海西普爾-必凱實驗動物有限公司；等級=SPF ;合格證號及發(fā)證單位SCXK (滬)2008-0016，上海市科學技術委員會。c)分組和給藥方法分別按體重隨機分6組正常對照組、模型對照組、陽性對照組、溶媒對照組、樣品I組、樣品2組，每組5只。正常對照組、溶媒對照組、樣品I組、樣品2組，給藥劑量為2. 6g凝膠/kg ;陽性對照組給藥劑量為0. 125g/kg。陰道栓塞給藥，每日給藥一次，連續(xù)12天。d)實驗方法和觀察指標主要檢測儀器光學顯微鏡實驗方法及觀察指標(I)陰道炎及宮頸炎造模用錐形靜脈切開針，進向陰道深部注入25%苯酚膠漿，每只0. 5ml，3天I次，共4次；造模后3天開始給藥。(2)局部組織解剖取材末次給藥24小時后，取出子宮和陰道，子宮稱重，固定于10%福爾馬林溶液中，常規(guī)包埋、切片、染色、觀察。(3)觀察指標肉眼觀察(陰道、宮頸組織充血、水腫情況)；組織病理學檢查(上皮增厚及過度角化、炎細胞浸潤、血管擴張充血、組織變性壞死)。e)結果連續(xù)造模第三次后，可見大鼠陰道口紅腫、有的有膿性分泌物流出；陰道外周毛發(fā)變脫落，形成潰瘍，確定造模成功。造模成功后，連續(xù)給藥12天后解剖，病理檢查結果如下宮頸模型對照組4只大鼠、陽性對照組I只大鼠、溶媒對照組2只大鼠、樣品2組I只大鼠宮頸全層就可見到中量炎細胞浸潤；模型對照組I只大鼠、陽性對照組3只大鼠、溶媒對照組I只大鼠、樣品2組I只大鼠、樣品I組I只大鼠宮頸內(nèi)膜層和肌層可見少量炎細胞浸潤，其中陽性對照組I只大鼠宮頸腔輕度擴張。余正常對照組、陽性對照組、溶媒對照組、樣品I組和樣品2組未見明顯異常(詳見表I)。陰道正常對照組、模型對照組、陽性對照組、溶媒對照組、和樣品I組、樣品2組未見明顯異常。表I各組大鼠宮頸病變觀察結果
權利要求
1.一種多花野牡丹提取物，其水溶液pH = 2 3，以質量百分數(shù)計，所述提取物包括2% 15%的氨基酸；1% 7%的沒食子酸，I % 8%的檸檬酸；2% 10%的蔗糖；O.5% 3. 5%的有機鋁，按Al計。
2.根據(jù)權利要求1所述的多花野牡丹提取物，其特征在于，所述的氨基酸包括丙氨酸、纈氨酸、4-氨基丁酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、 亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸和脯氨酸。
3.根據(jù)權利要求1所述的多花野牡丹提取物，其特征在于，所述提取物以原型或水溶液稀釋形式，通過與載體材料結合制成凝膠劑、栓劑、乳劑、霜劑，或洗劑。
4.權利要求1所述的多花野牡丹提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 取多花野牡丹葉子，水提取；將水提取液濃縮至每毫升含O. 5g 2g生藥，邊攪拌邊加Λ 95% (ν/ν)乙醇，使含醇量達到60% 90% (ν/ν)，過濾，濾液回收乙醇并濃縮至濃度為 4 6g生藥/毫升；放冷，濃縮液加水稀釋，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱吸附，然后用大孔樹脂量3 5倍體積的水洗脫，洗脫液減壓濃縮至干，即得。
5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，水提取液優(yōu)選濃縮至每毫升含Ig生藥。
6.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，優(yōu)選聚苯乙烯型大孔吸附樹脂。
7.根據(jù)權利要求4或6所述的方法，其特征在于，樹脂與生藥的質量比為1: 0.5 3。
8.一種多花野牡丹提取物凝膠劑，以質量百分數(shù)計，包括60% 90%的多花野牡丹提取物和水，I % 3%的聚卡波菲，O. 5% 3%的卡波姆，5% 30%的甘油，O. 01% I % 的防腐劑，O. 2% 3%的黃原膠。
9.根據(jù)權利要求8所述的多花野牡丹提取物凝膠劑，其特征在于，以質量百分數(shù)計，所述凝膠劑優(yōu)選包括80. 33%的多花野牡丹提取物和水，2. 2%的聚卡波菲，1. 7%的卡波姆， 15%的甘油，O. 17%的防腐劑，O. 6%的黃原膠。
10.根據(jù)權利要求8或9所述的多花野牡丹提取物凝膠劑，其特征在于，防腐劑優(yōu)選對羥基苯甲酸乙酯鈉。
11.一種多花野牡丹提取物栓劑，以質量百分數(shù)計，包括10% 20%的多花野牡丹提取物，10% 20%的土溫80，60% 80%的半合成脂肪酸甘油酯。
12.根據(jù)權利要求11所述的多花野牡丹提取物栓劑，其特征在于，以質量百分數(shù)計，所述栓劑優(yōu)選包括13%的多花野牡丹提取物，16%的吐溫80，71%的半合成脂肪酸甘油酯。
13.根據(jù)權利要求11或12所述的多花野牡丹提取物栓劑，其特征在于，所述的半合成脂肪酸甘油酯優(yōu)選棕櫚酸酯。
14.權利要求1所述的多花野牡丹提取物及其凝膠劑、栓劑、乳劑、霜劑，或洗劑在制備預防和治療宮頸炎、宮頸糜爛藥物、消殺產(chǎn)品以及保健用品中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多花野牡丹提取物、制劑，制備方法及其應用。所述的多花野牡丹提取物，其水溶液pH＝2～3，以質量百分數(shù)計，包括2％～15％的氨基酸；1％～7％的沒食子酸，1％～8％的檸檬酸；2％～10％的蔗糖；0.5％～3.5％的有機鋁，按Al計。該提取物可以原型或水溶液稀釋形式，通過與載體材料結合制成凝膠劑、栓劑、乳劑、霜劑，或洗劑，用于預防和治療宮頸炎、宮頸糜爛，無需特殊設備，無需醫(yī)護人員協(xié)助，患者可以獨立使用，使用非常安全方便。
文檔編號A61K9/107GK103006720SQ20121012900
公開日2013年4月3日 申請日期2012年4月27日 優(yōu)先權日2012年4月27日
發(fā)明者曾佳烽, 王啟運, 陳慶花, 方通, 覃俊杰, 李寶瑩, 李建輝, 潘俊芳 申請人:上海華拓醫(yī)藥科技發(fā)展股份有限公司