專(zhuān)利名稱(chēng)：從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的藥物分離方法，具體是從植物催吐蘿芙木(Rauwolfia vomitoria Afz.)中提取育亨賓(yohimbine)、阿嗎靈(ajmaline)、蛇根喊(serpentine)、利血平(reserpine)、利新胺(rescinnamine)等5種生物堿的方法。
背景技術(shù)：
蘿芙木是夾竹桃科蘿芙木屬植物，含有多種藥效成分。催吐蘿芙木是蘿芙木的一種，從非洲引進(jìn)，其中含有利血平、阿嗎靈、育亨賓、蛇根堿等多種生物堿，這些生物堿可作為藥物，臨床上具有對(duì)多種疾病的治療作用。經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，從蘿芙木(包括催吐蘿芙木)中提取藥效成分，報(bào)道較多的是提取利血平，早期采用苯萃取，以后用大孔樹(shù)脂提取。從催吐蘿芙木中同時(shí)提取幾種組分的報(bào)道，有提取利血平和育亨賓的研究，但提取出的育亨賓純度較低(劉宇、馮蕾、趙鳳生，藥物生物技術(shù)，2008，15 (5) =393-397)。還有從催吐蘿芙木中同時(shí)提取利血平、利血匹林、蘿芙木新堿的報(bào)道，但提取步驟較多，花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)(周雪晴、馮玉紅、張沖、陳四利、林強(qiáng)，海南大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版，2008, 26 (2) 145-148)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提供一種從催吐蘿芙木中一次最多可以提取5種生物堿的方法，用酸性乙醇浸提、大孔樹(shù)脂吸附、弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂提取、反相層析分離等技術(shù)相結(jié)合，提取出的生物堿均有較高的純度。本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供一種從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，即同時(shí)提取育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺；具體包括如下步驟(I)取催吐蘿芙木根部粉碎而成的粉末，加入含酸的乙醇水溶液，攪拌、浸提、過(guò)濾，得到浸提液，照此程序重復(fù)2-3次；(2)將所得的浸提液合并，減壓加熱濃縮，濃縮后的浸提液用非極性大孔吸附樹(shù)脂吸附，然后用水洗滌樹(shù)脂，隨后用40%乙醇洗脫，收集洗脫液(記為Al)，再用80%乙醇洗脫，收集洗脫液(記為BI)；(3)將上述收集的兩部分洗脫液Al和BI分別減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液Al用弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附，然后用水洗滌樹(shù)脂，隨后用50%乙醇洗脫，收集洗脫液(記為A2);濃縮后的洗脫液BI用弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附，然后用水洗滌樹(shù)脂，隨后用50%乙醇洗脫，收集洗脫液(記為B2)；(4)將上述收集的兩部分洗脫液A2和B2分別用濃酸調(diào)節(jié)到pH 3左右，減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液A2用C18反相層析介質(zhì)吸附，然后用乙醇水溶液洗脫，分段收集洗脫液(記為A3);濃縮后的洗脫液B2用C18反相層析介質(zhì)吸附，然后用乙醇水溶液洗脫，分段收集洗脫液(記為B3)；
(5)將上述分段收集的洗脫液A3和B3用高效液相色譜儀測(cè)定其中各種生物堿的含量，將洗脫液A3中含育亨賓或阿嗎靈并且純度較高的部分分別合并；將洗脫液B3中含蛇根堿或利血平或利新胺并且純度較高的部分分別合并；分別減壓加熱濃縮，至液體蒸干，力口入有機(jī)溶劑結(jié)晶，得到育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺的晶體。步驟(I)中所述的含酸的乙醇水溶液，含有10% -60%的水(體積百分比)，同時(shí)含有酸，酸的濃度為0. 02-0. 2mol/L，酸可以是硫酸、鹽酸或乙酸；所述的浸提，每次加入的含酸的乙醇水溶液的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的3-10倍。
步驟(2)中，將所得的浸提液合并，減壓加熱濃縮，濃縮后的浸提液在常溫下用非極性大孔吸附樹(shù)脂吸附，非極性大孔吸附樹(shù)脂的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的40% _50%，然后用水洗滌樹(shù)脂，水的體積為非極性大孔吸附樹(shù)脂體積的1-5倍，隨后用40%乙醇洗脫，40%乙醇的體積為非極性大孔吸附樹(shù)脂體積的2-5倍，收集洗脫液Al，再用80%乙醇洗脫，80%乙醇的體積為非極性大孔吸附樹(shù)脂體積的2-5倍，收集洗脫液BI ；所述的用水洗滌樹(shù)脂，是用去離子水或純凈水從柱的進(jìn)口通入柱內(nèi)，再?gòu)闹某隹诹鞒觯礈鞎r(shí)間為0. 5-3h ；所述的40%乙醇，其中含有體積百分比為59%的水及體積百分比為1%的鹽酸；所述的80%乙醇，其中含有體積百分比為19%的水及體積百分比為1%的鹽酸。步驟(3)中，將收集的兩部分洗脫液Al和BI分別減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液Al和BI分別在常溫下用弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附，吸附每一部分洗脫液所用的弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的20%-30%，然后用水洗滌樹(shù)月旨，水的體積為弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂體積的1-5倍，隨后用50%乙醇洗脫，50%乙醇的體積為弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂體積的3-5倍，收集洗脫液A2和B2 ；所述的用水洗滌樹(shù)脂，是用去離子水或純凈水從柱的進(jìn)口通入柱內(nèi)，再?gòu)闹某隹诹鞒?，洗滌時(shí)間為0. 5-2h ；所述的50%乙醇，其中含有體積百分比為45%的水及體積百分比為5%的氨水。步驟⑷中，將收集的洗脫液A2和B2分別用濃酸調(diào)節(jié)到pH 3左右，減壓加熱濃縮；濃縮后的洗脫液A2在常溫下用C18反相層析介質(zhì)吸附，C18反相層析介質(zhì)的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的10% _20%，然后依次用5%、10%、15%、20%、95%乙醇水溶液洗脫，乙醇水溶液的體積總和為C18反相層析介質(zhì)體積的10-30倍，分段收集10-20份洗脫液A3 ;濃縮后的洗脫液B2在常溫下用C18反相層析介質(zhì)吸附，C18反相層析介質(zhì)的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的10% -20%，然后依次用15%、20%、25%、30%、35%、40^^55^^95%乙醇水溶液洗脫，乙醇水溶液的體積總和為C18反相層析介質(zhì)體積的10-30倍，分段收集10-20份洗脫液B3 ；所述的濃酸為濃硫酸或濃鹽酸；所述的分段收集洗脫液，是將洗脫時(shí)間或洗脫體積分為若干段，每一段洗脫時(shí)間或洗脫體積內(nèi)的洗脫液收集為I份。步驟(5)中所述的加入有機(jī)溶劑結(jié)晶，對(duì)于洗脫液A3中的育亨賓、阿嗎靈或洗脫液B3中的蛇根堿，加入甲醇，攪拌使固體溶解，甲醇加入量能使固體全部溶解,但不宜過(guò)量，再加入乙醚，加入體積為甲醇體積的2-5倍，攪拌I_3h，于0-5 °C放置10-20h，析出結(jié)晶，過(guò)濾或離心去除母液，得到結(jié)晶；對(duì)于洗脫液B3中的利血平或利新胺，加入乙酸乙酯，攪拌使固體溶解，乙酸乙酯加入量能使固體全部溶解，但不宜過(guò)量，再加入甲醇，加入體積為乙酸乙酯體積的2-5倍，攪拌l_3h，于0-5°C放置10-20h，析出結(jié)晶，過(guò)濾或離心去除母液，得到結(jié)晶；按以上步驟所得晶體放入40-50°C烘箱中烘5-10h，至恒重為止；步驟(5)中，分段收集的洗脫液A3和B3用高效液相色譜儀測(cè)定其中各種生物堿的含量，如果某種生物堿的純度不夠高，需要再次提純，可以將洗脫液A3或B3中含有欲再次提純的生物堿的洗脫液合并，作為A2或B2，按照步驟(4)再操作一次。以上所述的減壓加熱濃縮都是在溫度45_65°C、真空度0. 08-0. IOM Pa的條件下進(jìn)行，除特別說(shuō)明的以外，一般將液體濃縮至原來(lái)體積的一半左右。本發(fā)明上述方法中，可以只取40%乙醇洗脫液Al進(jìn)行所述步驟(3)、(4)、(5)中對(duì)應(yīng)操作，依次得到A2、A3，以及最終的生物堿育亨賓、阿嗎靈；也可以只取80%乙醇洗脫液BI進(jìn)行所述步驟(3)、(4)、(5)中對(duì)應(yīng)操作，依次得到B2、B3，以及最終的生物堿蛇根堿、利血平、利新胺。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明將酸性乙醇浸提、大孔樹(shù)脂吸附、弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂提取、反相層析分離等技術(shù)相結(jié)合，同時(shí)提取育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺5種生物堿，提取出的生物堿均有較高的純度。
具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。以下實(shí)施例中沒(méi)有詳細(xì)說(shuō)明的操作，可以采用現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)操作。實(shí)施例I取干燥的催吐蘿芙木根部粉末2500g，加入含0. 025mol/L硫酸的50%乙醇溶液浸提，共浸提2次，兩次浸提加入的液體體積分別為25000mL、12500mL，每次浸提時(shí)間均為2h，浸提時(shí)間歇攪拌，每次浸提后過(guò)濾。將2份浸提液合并，體積為31000mL，減壓加熱濃縮為16000mL，過(guò)濾。濾液通入裝在柱內(nèi)的1200mL HZ-818非極性大孔吸附樹(shù)脂(華東理工大學(xué)華震科技有限公司制)進(jìn)行吸附，共吸附20h。然后用1500mL去離子水通入樹(shù)脂柱中洗滌1.5h。用2400mL 40%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹(shù)脂柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間4h。收集洗脫液，減壓加熱濃縮至840mL。濃縮液通入裝在柱內(nèi)的700mL D152弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(南開(kāi)大學(xué)化工廠制)進(jìn)行吸附，共吸附4h。然后用SOOmL去離子水通入樹(shù)脂柱中洗滌I. 5h。用2IOOmL 50%乙醇溶液(含5%氨水)通入樹(shù)脂柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間4h。收集洗脫液,用10mol/L硫酸調(diào)節(jié)pH為3,減壓加熱濃縮至llOOmL。濃縮液通入裝在柱內(nèi)的500mL C18反相層析介質(zhì)(日本YMC公司制)進(jìn)行吸附，共吸附2h。然后依次用2000mL 5%乙醇溶液、4000mL 10%乙醇溶液、IOOOmL 15%乙醇溶液、IOOOmL 20%乙醇溶液、500mL 95%乙醇溶液(均含0. 01 %三氟乙酸)通入柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間15h。洗脫液分為13份收集。分段收集的洗脫液經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)定，其中5%乙醇溶液洗脫的2份洗脫液、中育亨賓含量較高，合并，體積lOOOmL。減壓加熱濃縮至干，加入IOmL甲醇溶解固體，再加A 40mL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到育亨賓沉淀,放入40°C烘箱中烘10h，得育亨賓14mg，純度52%。10%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中阿嗎靈含量較高，合并，體積2700mL。減壓加熱濃縮至干，加入15mL甲醇溶解固體,再加入50mL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心lOmin，得到阿嗎靈沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得阿嗎靈406mg，純度63%。實(shí)施例2催吐蘿芙木浸提、非極性大孔樹(shù)脂吸附與洗脫、弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附與洗脫、結(jié)晶與干燥的實(shí)施步驟與實(shí)施例I相同，不同之處在于C18反相層析收集的洗脫液中育亨賓含量較高的部分合并后，體積lOOOmL，減壓加熱濃縮至700mL,再通入裝在柱內(nèi)的500mL C18反相層析介質(zhì)進(jìn)行吸附,共吸附2h。然后依次用2000mL 5%乙醇溶液、2000mL 10%乙醇溶液、500mL 15%乙醇溶液、500mL 20%乙醇溶液、500mL 95%乙醇溶液(均含0. 01 %三氟乙酸)通入柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間10h。洗脫液分為10份收集。經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)定，其中5%乙醇溶液洗脫的2份洗脫液中育亨賓含量較高，合并，體積800mL。結(jié)晶，得育亨賓6mg，純度87 %。C18反相層析收集的洗脫液中阿嗎靈含量較高的部分合并后，體積2700mL，減壓加熱濃縮至1500mL,再通入裝在柱內(nèi)的500mL C18反相層析介質(zhì)進(jìn)行吸附,共吸附2. 5h。然后依次用2000mL 5%乙醇溶液、2000mL 10%乙醇溶液、500mL 15%乙醇溶液、500mL 20%乙醇溶液、500mL 95%乙醇溶液(均含0. 01 %三氟乙酸)通入柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間10h。洗脫液分為10份收集。經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)定，其中10%乙醇溶液洗脫的2份洗脫液中阿嗎靈含量較高，合并，體積700mL。結(jié)晶，得阿嗎靈23011^，純度90%。實(shí)施例3取干燥的催吐蘿芙木根部粉末2500g，加入含0. 025mol/L硫酸的50%乙醇溶液浸提，共浸提2次，兩次浸提加入的液體體積分別為25000mL、12500mL，每次浸提時(shí)間均為2h，浸提時(shí)間歇攪拌，每次浸提后過(guò)濾。將2份浸提液合并，體積為30000mL，減壓加熱濃縮為15000mL，過(guò)濾。濾液通入裝在柱內(nèi)的1200mL HZ-818非極性大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，共吸附18h。然后用1500mL去離子水通入樹(shù)脂柱中洗滌I. 5h。用2500mL 40%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹(shù)脂柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間4h。再用3000mL 80%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹(shù)脂柱中進(jìn)行洗脫,洗脫時(shí)間6h。收集80%乙醇溶液洗脫液，減壓加熱濃縮至680mL。濃縮液通入裝在柱內(nèi)的600mLD152弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行吸附，共吸附4h。然后用SOOmL去離子水通入樹(shù)脂柱中洗滌I. 5h。用3000mL 50%乙醇溶液(含5%氨水)通入樹(shù)脂柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間6h。
收集洗脫液,用10mol/L硫酸調(diào)節(jié)pH為3,減壓加熱濃縮至1200mL。濃縮液通入裝在柱內(nèi)的500mL C18反相層析介質(zhì)進(jìn)行吸附，共吸附2h。然后依次用800mL 15%乙醇溶液、800mL 20%乙醇溶液、600mL 25%乙醇溶液、600mL 30%乙醇溶液、600mL35%乙醇溶液、600mL 40%乙醇溶液、600mL 55%乙醇溶液、500mL 95%乙醇溶液(均含有0.01%三氟乙酸)通入柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間10h。洗脫液分為10份收集。
分段收集的洗脫液經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)定，其中20%、25%、30%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中蛇根堿含量較高，合并，體積1600mL。減壓加熱濃縮至干，加入15mL甲醇溶解固體，再加入50mL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到蛇根堿沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得蛇根堿780mg，純度95%。35%乙醇溶液洗脫的I份洗脫液中利血平含量較高，體積600mL。減壓加熱濃縮至干，加入IOmL乙酸乙酯溶解固體，再加入45mL甲醇，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心lOmin，得到利血平沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得利血平107mg，純度98%。40%乙醇溶液洗脫的I份洗脫液中利新胺含量較高，體積300mL。減壓加熱濃縮至干，加入IOmL乙酸乙酯溶解固體，再加入45mL甲醇，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到利新胺沉淀,放入40°C烘箱中烘IOh,得利新胺8mg,純度98%。實(shí)施例4取干燥的催吐蘿芙木根部粉末5000g，加入含0. 05mol/L硫酸的50 %乙醇溶液浸提，共浸提2次，兩次浸提加入的液體體積分別為50000mL、25000mL，每次浸提時(shí)間均為2h，浸提時(shí)間歇攪拌，每次浸提后過(guò)濾。將2份浸提液合并，體積為60000mL，減壓加熱濃縮為30000mL，過(guò)濾。濾液通入裝在柱內(nèi)的2300mL HZ-818非極性大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，共吸附20h。然后用3000mL去離子水通入樹(shù)脂柱中洗滌2h。用5000mL 40%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹(shù)脂柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間5h，收集洗脫液。再用6000mL 80%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹(shù)脂柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間6h，收集洗脫液。40%乙醇溶液的洗脫液減壓加熱濃縮至2400mL。濃縮液通入裝在柱內(nèi)的1200mLD152弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行吸附，共吸附4h。然后用1400mL去離子水通入樹(shù)脂柱中洗滌I. 5h。用4500mL 50%乙醇溶液(含5%氨水)通入樹(shù)脂柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間6h。收集洗脫液，用10mol/L硫酸調(diào)節(jié)pH為3,減壓加熱濃縮至2000mL。濃縮液通入裝在柱內(nèi)的500mL C18反相層析介質(zhì)進(jìn)行吸附，共吸附3. 5h。然后依次用6000mL 5%乙醇溶液、3500mL 10%乙醇溶液、500mL 15%乙醇溶液、IOOOmL 20%乙醇溶液、IOOOmL 95%乙醇溶液(均含0.01%三氟乙酸)通入柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間20h。洗脫液分為15份收集。分段收集的洗脫液經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)定，其中5%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中育亨賓含量較高，合并，體積3300mL。減壓加熱濃縮至干，加入20mL甲醇溶解固體，再加A 8OmL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到育亨賓沉淀,放入40°C烘箱中烘10h，得育亨賓26mg，純度55%。10%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中阿嗎靈含量較高，合并，體積3500mL。減壓加熱濃縮至干，加入30mL甲醇溶解固體，再加入IOOmL乙醚，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心lOmin，得到阿嗎靈沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得阿嗎靈1027mg，純度71 %。HZ-818非極性大孔吸附樹(shù)脂用80%乙醇溶液洗脫得到的洗脫液減壓加熱濃縮至1600mL。濃縮液通入裝在柱內(nèi)的1200mL D152弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行吸附，共吸附4h。然后用1500mL去離子水通入樹(shù)脂柱中洗滌I. 5h。用6000mL 50%乙醇溶液(含5%氨水)通入樹(shù)脂柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間6h。
收集洗脫液,用10mol/L硫酸調(diào)節(jié)pH為3,減壓加熱濃縮至3000mL。濃縮液通入裝在柱內(nèi)的500mL C18反相層析介質(zhì)進(jìn)行吸附，共吸附5h。然后依次用1500mL 15%乙醇溶液、1500mL 20%乙醇溶液、3500mL 25%乙醇溶液、1500mL 30 %乙醇溶液、1200mL 35%乙醇溶液、600mL 40%乙醇溶液、600mL 55%乙醇溶液、700mL 95%乙醇溶液(均含有0.01%三氟乙酸)通入柱中進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)間21h。洗脫液分為20份收集。分段收集的洗脫液經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)定，其中20%、25%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中蛇根堿含量較高，合并，體積1800mL。減壓加熱濃縮至干，加入30mL甲醇溶解固體，再加入IOOmL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到蛇根堿沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得蛇根堿1564mg，純度97%。35%乙醇溶液洗脫的2份洗脫液中利血平含量較高，合并，體積1200mL。減壓加熱濃縮至干，加入20mL乙酸乙酯溶解固體，再加入SOmL甲醇，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到利血平沉淀，放入40°C烘箱中烘IOh,得利血平309mg,純度99%。40%乙醇溶液洗脫的I份洗脫液中利新胺含量較高，體積600mL。減壓加熱濃縮至干，加入IOmL乙酸乙酯溶解固體，再加入45mL甲醇，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到利新胺沉淀,放入40°C烘箱中烘IOh,得利新胺21mg,純度98%。以上為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，本發(fā)明還有其他可實(shí)現(xiàn)的方式。盡管本發(fā)明的內(nèi)容已經(jīng)通過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例作了詳細(xì)介紹，但應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到上述的描述不應(yīng)被認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明的限制。在本領(lǐng)域的技術(shù)人員閱讀了上述內(nèi)容后，對(duì)于本發(fā)明的多種修改和替代都將是顯而易見(jiàn)的。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)由所附的權(quán)利要求來(lái)限定。
權(quán)利要求
1.一種從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征在于，具體包括如下步驟 (1)取催吐蘿芙木根部粉碎而成的粉末，加入含酸的こ醇水溶液，攪拌、浸提、過(guò)濾，得到浸提液，照此程序重復(fù)2-3次； (2)將所得的浸提液合并，減壓加熱濃縮，濃縮后的浸提液用非極性大孔吸附樹(shù)脂吸附，然后用水洗滌樹(shù)脂，隨后用40%こ醇洗脫，收集洗脫液Al，再用80%こ醇洗脫，收集洗脫液BI ； (3)將上述收集的兩部分洗脫液Al和BI分別減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液Al和BI分別用弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附，然后用水洗滌樹(shù)脂，隨后用50%こ醇洗脫，收集洗脫液A2、B2 ； (4)將上述收集的兩部分洗脫液A2和B2分別用濃酸調(diào)節(jié)到pH3左右，減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液A2和B2分別用C18反相層析介質(zhì)吸附，然后用こ醇水溶液洗脫，分段收集洗脫液A3、B3 ； (5)將上述分段收集的洗脫液A3和B3用高效液相色譜儀測(cè)定其中各種生物堿的含量，將洗脫液A3中含育亨賓或阿嗎靈并且純度較高的部分分別合并；將洗脫液B3中含蛇根堿或利血平或利新胺并且純度較高的部分分別合并；分別減壓加熱濃縮，至液體蒸干，加入有機(jī)溶劑結(jié)晶，得到育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺的晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(I)中所述的含酸的こ醇水溶液，含有體積百分比為10% -60%的水及0. 02-0. 2mol/L的酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，所述的酸是硫酸、鹽酸或こ酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(I)中，毎次浸提時(shí)所用的含酸的こ醇水溶液體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的3-10倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(2)中，將所得的浸提液合并，減壓加熱濃縮，濃縮后的浸提液在常溫下用非極性大孔吸附樹(shù)脂吸附，非極性大孔吸附樹(shù)脂的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的40% -50%,然后用水洗滌樹(shù)脂，水的體積為非極性大孔吸附樹(shù)脂體積的1-5倍，隨后用40%こ醇洗脫，40%こ醇的體積為非極性大孔吸附樹(shù)脂體積的2-5倍，收集洗脫液Al，再用80%こ醇洗脫，80%こ醇的體積為非極性大孔吸附樹(shù)脂體積的2-5倍，收集洗脫液BI。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或5所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(2)中所述的40%こ醇，其中含有體積百分比為59%的水及體積百分比為I%的鹽酸；所述的80%こ醇，其中含有體積百分比為19%的水及體積百分比為1%的鹽酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(3)中，將收集的兩部分洗脫液Al和BI分別減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液Al和BI分別在常溫下用弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附，吸附每一部分洗脫液所用的弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的20% -30%，然后用水洗滌樹(shù)脂，水的體積為弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂體積的1-5倍，隨后用50%こ醇洗脫，50%こ醇的體積為弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂體積的3-5倍，收集洗脫液A2和B2。
8.根據(jù)權(quán)利要求I或7所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(3)中所述的50%こ醇，其中含有體積百分比為45%的水及體積百分比為5%的氨水。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(4)中，將收集的洗脫液A2和B2分別用濃酸調(diào)節(jié)到pH 3，減壓加熱濃縮；濃縮后的洗脫液A2在常溫下用C18反相層析介質(zhì)吸附，C18反相層析介質(zhì)的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的10% -20%，然后依次用5%、10%、15%、20%、95%こ醇水溶液洗脫，こ醇水溶液的體積總和為C18反相層析介質(zhì)體積的10-30倍，分段收集10-20份洗脫液A3 ;濃縮后的洗脫液B2在常溫下用C18反相層析介質(zhì)吸附，C18反相層析介質(zhì)的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重 g 的 10%-20%，然后依次用 15%、20%、25%、30%、35%、40%、55%、95% こ醇水溶液洗脫，こ醇水溶液的體積總和為C18反相層析介質(zhì)體積的10-30倍，分段收集10-20份洗脫液B3。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(4)中所述的5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、55%、95% こ醇水溶液，其中分別含有體積百分比為95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、45%、5%的水，并含有體積百分比為O. 01%的三氟こ酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求I或9所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(4)中所述的濃酸為濃硫酸或濃鹽酸。
12.根據(jù)權(quán)利要求I或9所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(4)中所述的分段收集洗脫液，是將洗脫時(shí)間或洗脫體積分為若干段，每一段洗脫時(shí)間或洗脫體積內(nèi)的洗脫液收集為I份。
13.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(5)中所述的加入有機(jī)溶劑結(jié)晶，具體操作為對(duì)于育亨賓、阿嗎靈或蛇根堿，加入甲醇，攪拌使固體溶解，甲醇加入量能使固體全部溶解，再加入こ醚，加入體積為甲醇體積的2-5倍，攪拌，于0-5 °C放置，析出結(jié)晶，去除母液，得到結(jié)晶；對(duì)于利血平或利新胺，加入こ酸こ酷，攪拌使固體溶解，こ酸こ酯加入量能使固體全部溶解，再加入甲醇，加入體積為こ酸こ酯體積的2-5倍，攪拌，于0-5 °C放置，析出結(jié)晶，去除母液，得到結(jié)晶；所得晶體放入40-50°C烘箱中烘至恒重為止。
14.根據(jù)權(quán)利要求I或13所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(5)中，分段收集的洗脫液A3和B3用高效液相色譜儀測(cè)定其中各種生物堿的含量，如果某種生物堿的純度不夠高，需要再次提純，可將洗脫液A3或B3中含有欲再次提純的生物堿的洗脫液合并，作為A2或B2，按照步驟(4)再操作一次。
15.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，所述減壓加熱濃縮是在溫度45-65で、真空度O. 08-0. IOM Pa的條件下進(jìn)行。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，只取40%こ醇洗脫液Al進(jìn)行所述步驟(3)、(4)、(5)中對(duì)應(yīng)操作，依次得到A2、A3，以及最終的生物堿育亨賓、阿嗎靈。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，只取80%こ醇洗脫液BI進(jìn)行所述步驟(3)、(4)、(5)中對(duì)應(yīng)操作，依次得到B2、B3，以及最終的生物堿蛇根堿、利血平、利新胺。
全文摘要
一種從植物催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，取催吐蘿芙木根部粉末，加入含酸的乙醇水溶液，攪拌、過(guò)濾得到浸提液；濃縮浸提液，用非極性大孔吸附樹(shù)脂吸附，洗滌，用40％乙醇和80％乙醇洗脫；分別收集洗脫液，濃縮后用弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附，洗滌，用50％乙醇洗脫；分別收集洗脫液，用濃酸調(diào)節(jié)到pH3，濃縮后用C18反相層析介質(zhì)吸附，用濃度逐漸增加的乙醇水溶液洗脫；分段收集洗脫液，將洗脫液中單一生物堿純度較高的部分分別合并，濃縮得到固體，加入有機(jī)溶劑結(jié)晶，得到育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺的晶體。本發(fā)明從一種植物中一次最多可提取5種生物堿，步驟少，所用有機(jī)溶劑量較少，污染小，所需設(shè)備簡(jiǎn)單。
文檔編號(hào)A61K36/24GK102627641SQ20121009772
公開(kāi)日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年4月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月5日
發(fā)明者馮蕾, 岳京麗, 趙鳳生 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)