專利名稱：一種海藻附生真菌氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物及其制備和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抗細菌抗生素、抗腫瘤藥物及殺蟲劑領域，具體地說是一種海藻附生真菌氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物及其制備和應用。
背景技術：
目前在臨床治療中發(fā)現(xiàn)病原微生物的耐藥性越來越強，尤其是耐甲氧基青霉素金 黃色葡萄球菌(MRSA)造成的感染越來越嚴重，很多傳統(tǒng)抗生素已基本喪失療效；另外臨床治療發(fā)現(xiàn)腫瘤的耐藥性也在不斷增強，且出現(xiàn)多藥耐藥性現(xiàn)象，已有抗腫瘤藥物在臨床化療中越來越力不從心，因此有必要尋找新型的抗生素和抗腫瘤藥物來滿足臨床藥物研發(fā)的需要。此外，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)因為過度使用各種化學合成農(nóng)藥，造成嚴重的食品、土壤及水污染，并經(jīng)過食物鏈危及人體健康和生態(tài)平衡，農(nóng)藥殘留也嚴重阻礙了我國的農(nóng)產(chǎn)品出口 ；而生物農(nóng)藥具有不易產(chǎn)生抗藥性、對非靶生物安全、環(huán)境友好且易于自然降解等優(yōu)點，對于人類健康、環(huán)境保護及農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義。海洋真菌來源的抗細菌抗生素、抗腫瘤藥物及殺蟲劑具有易于大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)、高效、易于克服抗藥性等優(yōu)點，易于實現(xiàn)藥源穩(wěn)定供給，具有較好的經(jīng)濟、社會與環(huán)境效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種天然的附生真菌氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物及其制備和應用。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用真菌爪曲霉(Aspergillus unguis) CGMCC No. 3372菌種，其于2009年10月29日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，保藏編號為CGMCC No. 3372,株號為DLEP2008001 ;技術方案如下所述的海藻附生真菌氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物的制備方法，包括如下操作步驟I.發(fā)酵將爪曲霉(Aspergillus unguis)CGMCC No. 3372接種于真菌液體培養(yǎng)基中靜止發(fā)酵,過濾,分別收集菌絲體和發(fā)酵液；其中，所述真菌液體培養(yǎng)基組成，每升中含土豆汁500mL，天然粗海鹽配制的40g/L 鹽水 500mL,鹿糖 20g ；II.粗提將步驟I獲得的發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取并濃縮，將步驟I獲得的菌絲體用有機溶劑提取并濃縮，將所得濃縮物合并，即為粗提物；其中，所述有機溶劑為氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一種或幾種；III.分離純化將步驟II獲得的粗提物經(jīng)硅膠柱層析、反相柱層析、凝膠柱層析或高壓液相色譜分離得到氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物(I)。
權利要求
1. 一種海藻附生真菌氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物的制備方法，其特征在于包括如下操作步驟1.發(fā)酵將爪曲霉(Aspergillus unguis)CGMCC No. 3372接種于真菌液體培養(yǎng)基中靜止發(fā)酵，過濾，分別收集菌絲體和發(fā)酵液；其中，所述真菌液體培養(yǎng)基組成，每升中含土豆汁500mL，天然粗海鹽配制的40g/L鹽水 500mL,鹿糖 20g ；II.粗提將步驟I獲得的發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取并濃縮，將步驟I獲得的菌絲體用有機溶劑提取并濃縮，將所得濃縮物合并，即為粗提物；其中，所述有機溶劑為氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一種或幾種；III.分離純化將步驟II獲得的粗提物經(jīng)硅膠柱層析、反相柱層析、凝膠柱層析或高壓液相色譜分離得到氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物(I)。
2.根據(jù)權利要求I所述的制備方法，其特征在于步驟III所述的分離純化條件為a.將步驟II獲得的粗提物經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-二氯甲烷或石油醚-氯仿進行梯度洗脫，收集以洗脫液體積比I : 2 3梯度的洗脫的組分；b.將步驟a收集的洗脫組分再進行硅膠柱層析，洗脫液為體積比40 30 I的石油醚-乙酸乙酯；c.將步驟b收集的洗脫組分進行反相柱層析，洗脫液為體積百分含量為90%的甲醇水溶液；d.將步驟c收集的洗脫組分進行凝膠柱層析，洗脫液為甲醇；收集符合下述特征的組分，即權利要求I所述的海藻附生真菌氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物(I)TLC檢測收集在254nm紫外線照射下呈單個、均勻的深紫色斑點，茴香醛硫酸不顯色的組分；在檢測用的薄層層析條件下Rf值為O. 25的組分；所述的檢測用薄層層析板為GF254硅膠板，展開劑為體積比為3 I的石油醚-乙酸乙酯，添加0.1%體積的乙酸；在檢測用的高效液相分析條件下保留時間為22. 5min的單一色譜峰的組分；所述的檢測用高效液相色譜分析條件為Hypersil C-18柱,填料粒徑5微米,柱尺寸4. 6mmX250mm,流動相為體積百分含量為55%的甲醇水溶液，添加萬分之一體積的改性劑乙酸，流速Iml/min。
3.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟a或b中所述的硅膠柱層析，所用硅膠為200 300目。
4.根據(jù)權利要求1、2或3中任一項所述的制備方法，其特征在于步驟I中靜止發(fā)酵的條件是28°C培養(yǎng)箱靜止發(fā)酵20天之后，加入發(fā)酵液一半體積的乙酸乙酯殺滅真菌。
5.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟II中的發(fā)酵液用乙酸乙酯萃取三次，減壓濃縮；菌絲體粉碎后用甲醇提取三次，減壓濃縮。
6.利用權利要求I所述的制備方法獲得的該氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物，在常溫常壓下為無色針晶。
7.根據(jù)權利要求6所述的該氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物在制備抗細菌劑、抗腫瘤藥物及農(nóng)用殺蟲劑中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗細菌抗生素、抗腫瘤藥物及殺蟲劑領域，具體地說是一種海藻附生真菌氯代縮酚酸環(huán)醚類化合物的制備和應用。具體結(jié)構(gòu)式如(I)所示，其制備方法為將爪曲霉DLEP2008001接種于培養(yǎng)基中靜止發(fā)酵，發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取，菌絲體由有機溶劑提取，合并后粗提物用有機溶劑進行硅膠柱梯度層析，經(jīng)薄層層析檢測，將以洗脫液體積比1∶2梯度的洗脫組分繼續(xù)進行硅膠柱、反相柱和凝膠柱層析分離純化得目標化合物。該化合物可抑制耐甲氧基青霉素金黃色葡萄球菌，選擇性抑制DNA損傷修復基因缺陷型大腸桿菌，殺死鹵蟲幼蟲，并抑制人類肺癌細胞株A-549生長，具有作為抗細菌抗生素、抗腫瘤藥物及殺蟲劑的潛在用途。
文檔編號A61P31/04GK102634551SQ201210056168
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月6日 優(yōu)先權日2012年3月6日
發(fā)明者馮妍, 張翼, 穆軍 申請人:大連交通大學