專利名稱：一種刺五加組合物，含其制劑及其檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥發(fā)明領域，具體涉及一種刺五加組合物，含其制劑及其檢測方法。
背景技術：
刺五加(Radix Acanthopanacis Senticosl)為五加科五加屬植物的根、根莖及莖，主要分布在中國東北部、俄羅斯遠東地區(qū)、日本北海道及朝鮮等地。始見于東漢《神農本草經(jīng)》，別名為五加參、老虎釕自、刺拐棒(東北)。《本草綱目》記載刺五加能“補力益精，明目下氣”，能“補五勞七傷，久服輕身耐老”，具有益氣健脾，補腎安神之功效。刺五加的主要功效成分為酚苷類及其某些苷元類成分，主要包括刺五加總苷和總黃麗等刺五加總苷具有7種型式，其主要活性成分為刺五加苷B、刺五加苷E :刺五加苷 B又稱紫丁香苷(Syringin)，相對含量最多，也是刺五加中的主要藥效成分之一，具有抗疲勞、增強免疫力、護肝和釋放乙酰膽堿，增加胰島素分泌，防輻射等作用；刺五加苷E具有緩解壓力、抗焦慮、抗應激、抗?jié)兒涂蛊诘茸饔?。刺五加總黃酮是刺五加中重要的天然有效活性成分，具有廣泛的藥理活性，能擴張血管，增加冠狀動脈血流量，降低心肌耗氧量，抗心肌缺血，改善心電圖，抗異位心律，降低血壓，鎮(zhèn)靜安神。由于刺五加總黃酮的多種生物活性及良好的臨床效果，多年來在國內外已成為中藥提取及中草藥現(xiàn)代化研究的焦點之一。其主要藥效成分異嗪皮啶是刺五加苷BI 的苷元，具有明顯的抗炎和抗菌作用?，F(xiàn)代臨床研究表明，刺五加主要用于治療神經(jīng)官能癥、腎上腺皮質功能低下癥、腫瘤患者因放療化療引起的白細胞減少、風濕性及類風濕性關節(jié)炎、肺心病、低血壓和糖尿病等癥。刺五加活性成分的提取研究主要是采用水提、甲醇提、乙醇回流提取和超臨界CO2 萃取法等，其中超臨界CO2萃取的選擇性高、操作時間短、有效成分得率高，但其缺點是受處理量的限制，產(chǎn)量低，目前工業(yè)開發(fā)難度較大，因而目前仍以水提、有機溶劑提取為主，且多數(shù)僅以單一成分作為衡量提取工藝參數(shù)優(yōu)劣的指標，難以保證刺五加的全部有效成分得到充分的提取分離和利用。在2010年版中國藥典一部中“刺五加浸膏”公開了如下內容，第一是提取方法，分別為水煎煮或醇提，具體為水煎煮方法，刺五加lOOOg，粉碎成粗粉，加水煎煮兩次，每次3h， 合并煎液，濾過，濾液濃縮成浸膏50g(水浸膏)；醇提方法:取刺五加lOOOg，粉碎成粗粉，加 75%乙醇，回流提取12h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮成浸膏40g(醇浸膏)，即得。中國專利申請200710117640.0(簡稱07年專利)公開了水提醇沉的提取方法，I)采用水提醇沉法制備刺五加藥物浸膏；2)將浸膏加水稀釋，用石灰乳調節(jié)pH至 10. 00-12. 00，攪拌均勻后用硫酸調節(jié)pH至4. 5-6. 5，靜置，抽取上清液過濾，濃縮，醇沉；3) 冷藏靜置除雜得刺五加提取液；或濃縮減壓干燥得刺五加提取物。該方法存在煎煮時間短， 有效成分尤其是刺五加苷E成分不能被充分提出，石灰乳調堿前采用二次醇沉方法除雜，在去除雜質的同時有效成分損失也較大的缺點。而中國專利申請201010165556. 8(下簡稱為2010年專利)在07年專利的基礎上，進一步公開了刺五加的提取方法，包括以下步驟將刺五加切成碎片，加水煎煮，合并煎液，減壓濃縮，加入乙醇至醇含量為70-75%，靜置濾過，回收乙醇后加水稀釋至生藥重量的 3-6倍，用石灰乳調pH值至10. 0-12. 0，靜置4小時以上，再用硫酸將pH值調至5. 0-6. 0，靜置過濾，濃縮，加入乙醇至醇含量為80-85%，靜置過濾，離心分離雜質，藥液回收乙醇后濃縮干燥，即得。該方法同樣存在煎煮時間短，有效成分尤其是刺五加苷E成分不能被充分提出的缺點，醇沉次數(shù)雖然減少至I次，但有效成分損失仍較大。07年專利說明書實施例5公開的由提取物制備注射液的制備方法為取實施例2 的提取物，加注射用水使溶解，用40 %的NaOH溶液調pH值至5. 5，攪拌均勻后加熱，加入
O.2%的活性炭，煮沸吸附15分鐘，冷卻至50°C以下用40%的NaOH溶液調pH值至5. 7，補加新鮮注射用水至含生藥5g/ml。經(jīng)O. 45 μ m濾膜過濾至澄清，灌裝，115°C高壓滅菌40分鐘。冷凍，緩化后冷藏20天，常溫放置3. 5個月。O. 65 μ m濾芯過濾，加注射用水至含生藥 5g/ml，調pH值至5. 0，加入活性炭脫色，過濾，調pH值至5. 0，補加注射用水至含生藥5g/ ml，分別經(jīng)O. 45 μ m、0. 22 μ m濾芯精濾，灌封，115°C 30分鐘滅菌，即得。該方法第一次高壓滅菌易導致溶液pH值下降，使有效成分分解、被破壞掉。而且冷凍步驟使溶液迅速凝固成固體，不利于雜質成分的沉降。冷藏及常溫放置的時間較長，不利于大生產(chǎn)。中國專利申請201010165556. 8公開的注射液的制備方法為取提取物加注射用水稀釋，100_12(TC熱處理，過濾，0-4°C冷藏處理，過濾，調pH值至5. 5，活性炭處理，過濾， 滅菌，冷藏處理，超濾，灌裝，滅菌，即得。該方法在加入活性炭進行脫色處理前后各進行了一次冷熱處理，目的是除雜，但由于第一次冷熱處理后不能將雜質徹底除去就進行活性炭脫色處理，致使I)脫色處理不完全，溶液顏色較深；2)若增加活性炭用量保證溶液顏色符合要求，則部分有效成分會被活性炭吸附除去，含量損失大。現(xiàn)有紫丁香苷的含量檢測方法為照高效液相色譜法(2010年版中國藥典一部附錄VI D)測定。色譜條件與系統(tǒng)試用性實驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以O. I %磷酸溶液為流動相B，按照表I中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為220nm;柱溫30°C。理論板數(shù)按照紫丁香苷峰計算應不低于10000 ;異嗪皮啶峰與相鄰雜質峰的分離度應不小于1.5。表I:梯度洗脫表
權利要求
1.一種刺五加組合物，其特征在于，每克該組合物中含有總黃酮50-120毫克、紫丁香苷12. 5-30毫克和刺五加苷E 4-15毫克。
2.根據(jù)權利要求I所述的刺五加組合物，其特征在于，每克該組合物中含有總黃酮 60-120毫克、紫丁香苷15-30毫克和刺五加苷E 6-15毫克。
3.一種制備權利要求I或2所述的刺五加組合物的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟1)稱取刺五加，粉碎，加水浸泡30分鐘后煎煮2-3次，每次加入4-8倍量水，煎煮2-3 小時，濾過；2)待濾液溫度降到50°C以下時，用20%石灰乳調節(jié)pH值至10.0-12.0，攪拌均勻；再用20%硫酸調節(jié)pH值至5. 0-6. O，攪拌均勻，靜置4小時以上，濾取上清液，濃縮成在80°C 測定相對密度為I. 10-1. 20的濃縮膏；3)待濃縮膏溫度降至50°C以下時，邊攪拌邊加入乙醇使含醇量達83-85%，攪拌均勻，靜置12小時以上，濾過，濾液回收乙醇至無醇味并濃縮至在80°C測定相對密度為I.15-1. 20，即得。
4.含權利要求I或2所述的刺五加組合物的制劑，其特征在于，所述制劑由刺五加組合物組成，或由刺五加組合物和藥學上可接受的載體或稀釋劑組成。
5.根據(jù)權利要求4所述的制劑，其特征在于，所述制劑為注射液、凍干粉針劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑或合劑。
6.根據(jù)權利要求5所述的制劑，其特征在于，所述制劑為注射液，該注射液中含總黃酮I.8-6. 5mg/ml、紫丁香苷 O. 14-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 06-1. Omg/ml。
7.根據(jù)權利要求6所述的制劑，其特征在于，所述注射液中含總黃酮I.8-6. 5mg/ml、紫丁香苷 O. 16-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 06-1. Omg/ml。
8.根據(jù)權利要求7所述的制劑，其特征在于，所述注射液中含總黃酮4.5-5. 5mg/ml、紫丁香苷 O. 35-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 17-1. Omg/ml。
9.根據(jù)權利要求7所述的制劑，其特征在于，所述注射液中含總黃酮2.7-3. 3mg/ml、紫丁香苷 O. 21-1. 6mg/ml 和刺五加苷 E O. 10-0. 8mg/ml。
10.根據(jù)權利要求7所述的制劑，其特征在于，所述注射液中含總黃酮I.8-2. 2mg/ml、 紫丁香苷 O. 14-1. lmg/ml 和刺五加苷 E O. 06-0. 6mg/ml。
11.根據(jù)權利要求7所述的制劑，其特征在于，所述注射液中含總黃酮I.8-6. 5mg/ml、 紫丁香苷 O. 20-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 06-1. Omg/ml。
12.根據(jù)權利要求7所述的制劑，其特征在于，所述注射液中含總黃酮I.8-6. 5mg/ml、 紫丁香苷 O. 22-2. 2mg/ml 和刺五加苷 E O. 10-1. Omg/ml。
13.根據(jù)權利要求6-12任一項所述的制劑，其特征在于，所述注射液的包裝材料為安瓿、輸液瓶、注射劑瓶、輸液袋或預灌封注射器。
14.一種制備權利要求6-12任一項所述制劑的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟I)取刺五加組合物，加注射用水調整為每Iml含總黃酮10-20mg，用10%鹽酸調節(jié)pH 值至4. 0-5. 5，攪拌均勻，經(jīng)115-120°C高溫熱處理40分鐘，4°C以下冷藏24小時以上，濾過，濾液再經(jīng)115-120°C高溫熱處理40分鐘，4°C以下冷藏24小時以上；2)取上述溶液，濾過，加入O. 2-0. 3%的活性炭，煮沸20分鐘，冷卻至60°C以下，濾過， 濾液用20%氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至5. 5-6. 5，測定總黃酮的含量，加注射用水至全量，濾過，灌封，116°C滅菌40分鐘，即得。
15.一種權利要求6-12任一項所述制劑的含量檢測方法，包括總黃酮、紫丁香苷和刺五加苷E含量的檢測方法，其特征在于，總黃酮含量檢測的方法是以蘆丁為對照品，照分光光度法在波長510nm處測定吸收度，計算含量。
16.根據(jù)權利要求15所述的含量檢測方法，其特征在于，紫丁香苷和刺五加苷E含量的檢測方法，采用超高效液相色譜法，應用ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱，柱溫為40°C，流速為每分鐘O. 3ml，檢測波長為220nm，理論板數(shù)按紫丁香苷峰計算應不低于30000，刺五加苷E峰的分離度應達到I. 5，梯度洗脫程序如下0分鐘時，流動相為5%的乙腈和95%的體積比為O. I %的磷酸溶液；3. 2分鐘時，流動相為9. 2%的乙腈和90. 8%的體積比為O. 1% 的磷酸溶液；10. O分鐘時，流動相為22 %的乙腈和78 %的體積比為O. I %的磷酸溶液；12.O分鐘時，流動相為100%的乙腈；15. O分鐘時，流動相為5%的乙腈和95%的體積比為O.I %的磷酸溶液。
17.—種權利要求6-12任一項所述的制劑的定性檢測方法，還包括指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，該指紋圖譜的檢測方法采用高效液相色譜法，應用Agilent的Zorbox Eclipse XDB-C18色譜柱，柱溫為20°C，流速為每分鐘O. 8ml，檢測波長為270nm，理論板數(shù)按紫丁香苷峰計算應不低于6000，且與其相鄰的色譜峰的分離度應達到1.5以上，梯度洗脫程序如下流動相A為O. 5%的甲酸溶液，流動相B為乙腈和水，其體積比為30 70,0 分鐘時為100%的流動相A ；15分鐘時為88%的流動相A和12%的流動相B ；21分鐘時為 82 %的流動相A和18 %的流動相B ；60分鐘時為31 %的流動相A和69 %的流動相B ；65分鐘時為100%的流動相B ；70-75分鐘時為100%的流動相A。
18.權利要求I或2所述的刺五加組合物或權利要求4-12任一項所述的制劑在制備治療內分泌系統(tǒng)疾病、心腦血管系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病或生殖系統(tǒng)疾病的藥物中的應用。
19.根據(jù)權利要求18所述的應用，其特征在于，所述內分泌系統(tǒng)疾病為更年期綜合癥或糖尿病，所述心腦血管系統(tǒng)疾病為短暫性腦缺血發(fā)作、腦動脈硬化、腦血栓形成、腦栓塞、 冠心病、心絞痛或高脂血癥，所述神經(jīng)系統(tǒng)疾病為神經(jīng)衰弱，所述生殖系統(tǒng)疾病為男性不育癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種刺五加組合物，含其制劑及其含量檢測方法，每克該組合物中含有總黃酮50-120毫克、紫丁香苷12.5-30毫克和刺五加苷E 4-15毫克。本發(fā)明提供的組合物及制劑在降血糖、降血脂、男性不育癥方面具有療效，且效果優(yōu)于現(xiàn)有技術。
文檔編號A61P9/10GK102579532SQ20121004975
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月29日 優(yōu)先權日2011年10月17日
發(fā)明者方同華 申請人:哈爾濱珍寶制藥有限公司