專利名稱：美漢草制劑的制備方法及其抗氧化用途的制作方法
美漢草制劑的制備方法及其抗氧化用途技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及美漢草制劑的制備方法及其抗氧化用途。
背景技術(shù)：
目前，大量資料已經(jīng)證明炎癥、腫瘤、衰老、血液病、以及心、肝、肺、皮膚等各方面疑難疾病的發(fā)生機(jī)理與體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多或清除自由基的能力下降有著密切的關(guān)系。由于抗氧化劑對(duì)由自由基引起的機(jī)體損傷有干擾作用，而被公認(rèn)為是一種新的治療途徑，在預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里，對(duì)抗氧化劑研究興趣空前高漲。合成的抗氧化劑雖然抗氧化性能較好，但有一定的副作用。所以，開發(fā)研究抗氧化作用的天然藥物是目前研究的重中之重。
美漢草為唇形科(Labiatae)龍頭草屬(Meehania)植物芝麻花Meehania urticifolia(Miq.)Makino的干燥地上部分，別名蕁麻葉龍頭草，芝麻花(遼寧)、美漢花， 異名水升麻(四川)，為多年生草本植物，分布于通化、渾江、柳河、集安、撫松、靖宇、蛟河、 舒蘭、安圖、敦化、長白朝鮮族自治區(qū)、通化縣等地，朝鮮、日本也有分布。美漢草味辛、苦、性微寒，全草入藥，可作為民間藥，具有清熱解表，利水消腫等功效。用于感冒發(fā)熱，瀉痢腹痛， 肝炎，膽囊炎，小便不利，蛇咬傷等癥。在民間作美漢草藥用，全草可入藥，作為寒藥，具有發(fā)表清熱，利濕解毒等功效，其天然資源極為豐富，且蘊(yùn)含量大。
經(jīng)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)外對(duì)美漢草的抗氧化作用研究鮮見報(bào)道。通過本文的研究， 為深入研究美漢草植物提供理論依據(jù)。為其在食品、藥品等領(lǐng)域開發(fā)新的天然抗氧化劑提供參考依據(jù)。發(fā)明內(nèi)容
1、美漢草制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程
步驟(1)稱取美漢草干燥粗粉，以美漢草粗粉10倍量的50%乙醇浸泡IOh后，然后超聲提取30min-35min，超聲溫度為30°C -32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，靜置過濾，經(jīng)抽濾后合并濾液，將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回收乙醇后置于4°C冰箱中48h-60h，抽濾，得流浸膏；
步驟O)將步驟(1)中的流浸膏加適量水稀釋成混懸液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分別萃取3次，合并乙酸乙酯層萃取液，減壓濃縮，冷凍干燥，得到美漢草乙酸乙酯提取物制劑，備用。
2、美漢草制劑具有抗氧化作用。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明所述的美漢草制劑的制備方法及其抗氧化用途包括以下實(shí)施例，下面的實(shí)施例可進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1:1、美漢草制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程步驟(1)稱取美漢草干燥粗粉，以美漢草粗粉10倍量的50%乙醇浸泡IOh后，然后超聲提取30min，超聲溫度為30°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，靜置過濾，經(jīng)抽濾后合并濾液，將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回收乙醇后置于4°C冰箱中48h，抽濾，得流浸膏；步驟O)將步驟(1)中的流浸膏加適量水稀釋成混懸液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分別萃取3次，合并乙酸乙酯層萃取液，減壓濃縮，冷凍干燥，得到美漢草乙酸乙酯提取物制劑，備用。2、美漢草制劑具有抗氧化作用。實(shí)施例2:1、美漢草制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程步驟(1)稱取美漢草干燥粗粉，以美漢草粗粉10倍量的50%乙醇浸泡IOh后，然后超聲提取35min，超聲溫度為32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，靜置過濾，經(jīng)抽濾后合并濾液，將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回收乙醇后置于4°C冰箱中60h，抽濾，得流浸膏；步驟O)將步驟(1)中的流浸膏加適量水稀釋成混懸液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分別萃取3次，合并乙酸乙酯層萃取液，減壓濃縮，冷凍干燥，得到美漢草乙酸乙酯提取物制劑，備用。2、美漢草制劑具有抗氧化作用。藥理試驗(yàn)美漢草制劑的抗氧化作用1材料與方法1. 1實(shí)驗(yàn)樣品來源藥材采于吉林省臨江市，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院胡全德教授鑒定美漢草為唇形科(Labiatae)龍頭草屬(Meehania)植物芝麻花 Meehania urticifolia(Miq. )Makino 的干燥地上部分。1.2 儀器T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；百靈 LA114型電子天平(110g/0.0001g，常熟市百靈天平儀器有限公司)；電子計(jì)數(shù)天平 (500g/0.001g，金羊天平儀器廠)；KQ-250DB型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；101-2A型數(shù)顯電熱鼓吹干燥箱(上海錦屏儀器儀表有限公司通州分公司)；RE 52-05 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；電子恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司)；移液槍OOul，上?？蠌?qiáng)貿(mào)易有限公司)。1. 3 試劑DPPH溶液，蒸餾水，無水乙醇，甲醇，ABTS,過硫酸鉀，鐵氰化鉀，磷酸鹽緩沖液(PH =6. 6)，三氯乙酸，三氯化鐵，抗壞血酸(以下用Vc表示)(上?；菔郎噭┯邢薰?，批號(hào)08040 ，F(xiàn)olin-Ciocalteu 試劑，無水碳酸鈉。2實(shí)驗(yàn)方法與步驟2. 1藥材組分的提取取美漢草樣品粉末2. 25kg，分別以美漢草粉末10倍量的50%乙醇浸泡IOh后，超聲35min，溫度為30°C，功率為80W，超聲提取三次，靜置過濾，經(jīng)抽濾后合并濾液，將濾液置
4于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回收乙醇后置于4°C冰箱中60h，抽濾，得流浸膏，將此流浸膏加適量水稀釋成混懸液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分別萃取3次，合并乙酸乙酯層萃取液，減壓濃縮，冷凍干燥，得到美漢草乙酸乙酯提取物制劑，備用。2. 2 DPPH法測定抗氧化活性2. 2. 1樣品溶液的制備準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的美漢草乙酸乙酯提取物制劑30mg，用無水乙醇定容于 IOmL容量瓶中，配成濃度為;3mg/mL的樣品母液，將樣品母液用無水乙醇逐級(jí)稀釋成濃度為 0. 000mg/ml,0. 018mg/mL,0. 037mg/mL, 0. 075mg/mL,0. 15mg/mL,0. 31mg/mL,0. 62mg/mL, 1.25mg/mL的樣品溶液待用。2. 2. 2 DPPH溶液的制備精密稱取DPPH樣品0. Olg,加入無水乙醇定容至50ml容量瓶中，得到DPPH母液 (濃度0. 2mg/mL)。從母液中移取10mL，用無水乙醇定容置50mL容量瓶中，得到DPPH溶液 (濃度0. 04mg/mL)，整個(gè)過程都需要避光。2. 2. 3樣品測定美漢草乙酸乙酯提取物制劑樣品溶液按表1加入反應(yīng)液，搖勻后于室溫避光靜置 30min，在515nm處測定吸光度值。用Vc作對(duì)照。表1美漢草乙酸乙酯提取物制劑樣品溶液加樣表
A 3mL無水乙醇+3mlDPPH 溶液 B 3mL樣品溶液+3mlDPPH·溶液 _C_3mL樣品溶液+3ml無水乙醇_DPPH 清除率％= (A_B+C)/A*1002. 3 ABTS法測定抗氧化活性2. 3. 1樣品溶液的制備精確稱取干燥至恒重的美漢草乙酸乙酯提取物制劑30mg，用水定容于IOmL容量瓶中，配成濃度為:3mg/mL的樣品母液，將樣品母液用水逐級(jí)稀釋成濃度0. 000mg/ml, 0. 018mg/mL，0. 037mg/mL,0. 075mg/mL,0. 15mg/mL，0. 31mg/mL，0. 62mg/mL, 1. 25mg/mL,的樣品溶液待用。2. 3. 2 ABTS · + 溶液的制備5mL, 14mM的ABTS和5mL，4. 9mMk2S208混合產(chǎn)生ABTS+，黑暗中靜止16h,使用之前用乙醇稀釋成備用的ABTS+，要求其在734nm波長下的吸光度為0. 70士0. 02。2. 3. 3樣品測定取3ml樣品溶液加入158 μ LABTS+(Asample)，用乙醇做空白，158 μ LABTS+和3ml水為標(biāo)準(zhǔn)液(A。。ntral)，6min后在734nm波長下測定吸光度，用Vc作對(duì)照。清除率(％) = [(Acontrol-Asample)/Acontrol] X 100%2. 4半數(shù)抑制率的計(jì)算半數(shù)抑制率(IC5tl)指清除率為50%時(shí)所需抗氧化劑的濃度，根據(jù)不同濃度抗氧化劑的清除率作曲線求出。2. 5總酚含量測定
2. 5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取對(duì)照品沒食子酸0. 0040g,甲醇溶解轉(zhuǎn)入IOOml容量瓶，制成濃度為 0. 04mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，備用。分別吸取0. 5ml、l. 0ml、2. 0ml、4. 0ml、8. Oml 于 25ml 容量瓶中加 2.5ml Folin-Ciocalteu試劑，搖勻，在0_8min再加入2ml7. 5 % Na2CO3溶液，于50°C水浴反應(yīng) 5min，冷卻至室溫加蒸餾水定容。以空白溶液為參比溶液，于760nm測定吸光度。對(duì)所測得的數(shù)據(jù)采用直線回歸法計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，并以對(duì)照品的質(zhì)量為橫坐標(biāo)， 吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y = 6. 2168Χ-0. 0421，R2 = 0. 9991，在 0. 02-0. 32mg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2. 5. 2樣品測定取樣品20mg于IOmL容量瓶中，用甲醇定容，取0.5ml樣品溶液于25mL容量瓶中，加入Folin-Ciocalteu (福林酚試劑)2. 5mL,在0. 5至8分鐘范圍內(nèi)間斷加入2mL無水 Na2CO3 (75g/L)，在50°C水浴中加熱5min，冷卻后用蒸餾水配平，760nm處測吸光度值，用蒸餾水作對(duì)照。3結(jié)果與討論3. 1 結(jié)果3.1.1 DPPH法測定抗氧化活性結(jié)果見表2。表2 DPPH法測定抗氧化活性結(jié)果清除率％
權(quán)利要求
1.美漢草制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程步驟(1)稱取美漢草干燥粗粉，以美漢草粗粉10倍量的50%乙醇浸泡IOh后，然后超聲提取30min-35min，超聲溫度為30°C -32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，靜置過濾，經(jīng)抽濾后合并濾液，將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回收乙醇后置于4°C冰箱中48h-60h，抽濾，得流浸膏；步驟O)將步驟(1)中的流浸膏加適量水稀釋成混懸液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分別萃取3次，合并乙酸乙酯層萃取液，減壓濃縮，冷凍干燥，得到美漢草乙酸乙酯提取物制劑，備用。
2.如權(quán)利要求1所述的美漢草制劑的用途，其特征在于該制劑用于制備抗氧化作用的制劑。
全文摘要
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及美漢草制劑的制備方法及其抗氧化用途。稱取美漢草干燥粗粉，以美漢草粗粉10倍量的50％乙醇浸泡10h后，然后超聲提取30min-35min，超聲溫度為30℃-32℃，超聲功率為80W，超聲提取三次，靜置過濾，經(jīng)抽濾后合并濾液，將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回收乙醇后置于4℃冰箱中48h-60h，抽濾，得流浸膏；將流浸膏加適量水稀釋成混懸液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分別萃取3次，合并乙酸乙酯層萃取液，減壓濃縮，冷凍干燥，得到美漢草乙酸乙酯提取物制劑。美漢草制劑用于制備抗氧化作用的制劑。
文檔編號(hào)A61K36/53GK102512491SQ20121000993
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2012年1月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月1日
發(fā)明者侯欣池, 張崇禧, 張成城, 李小葉, 鄭友蘭 申請(qǐng)人:山東大學(xué)威海分校