專利名稱：一種寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型h1n1流感病毒藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海洋藥物領(lǐng)域，涉及到寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
甲型、流感病毒(Influenza A Virus, IAV)屬于正粘病毒科(Orthomyxoviridae) 且有包膜的負鏈RNA病毒，根據(jù)其表面的血凝素蛋白(HA)和神經(jīng)氨酸酶蛋白(NA)的結(jié)構(gòu)及基因特性的不同可分為若干亞型，如Hmi、H5m及H3N2等。IAV在上個世紀至少引起三次大規(guī)模的流感爆發(fā)，其中最嚴重的是1918-1919年間爆發(fā)的西班牙流感，造成了超過4000 萬人死亡。自2009年4月以來，發(fā)源于墨西哥的Hmi亞型的甲型流感病毒造成了世界范圍的流感爆發(fā)，給人類的健康帶來了巨大威脅。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球每年約有6億人感染流感，約30萬人死于流感，直接經(jīng)濟損失超過100億美元。目前，治療甲型流感病毒的藥物主要有兩大類，分別是以離子通道蛋白(IC)為靶點的金剛烷胺和金剛乙胺以及以神經(jīng)氨酸酶(NA)為靶點的扎那米韋(zanamivir)和奧司他韋(oseltamivir)。由于流感病毒是分節(jié)段的RNA病毒，容易發(fā)生變異并容易對現(xiàn)有藥物產(chǎn)生耐藥性，如歐洲已經(jīng)出現(xiàn)了對金剛烷胺及奧司他韋產(chǎn)生耐藥性的IAV毒株。此外，現(xiàn)有的抗流感病毒藥物大多具有不同程度的毒副作用，尤其是離子通道阻斷劑具有神經(jīng)毒性等副作用。因此，研發(fā)低毒有效的抗IAV藥物十分迫切。以糖為基礎(chǔ)的藥物研發(fā)是本世紀生化藥物研究領(lǐng)域的熱點之一。海洋多糖特別是來源于褐藻的酸性多糖具有良好的抗病毒作用。國內(nèi)外大量研究表明，褐藻多糖及其衍生物具有抗人類免疫缺陷病毒HIV及甲型流感病毒IAV的顯著活性(Miao et al. ,Biochem. Pharmacol.，2004，68 :641-649 ；Lee et al.,Chem. Pharm. Bull.，2004，52(9) :1091-1094)。 但是多糖藥物的分子量大，溶解性和吸收性較差，導(dǎo)致其生物利用度很低從而限制了其在臨床上的應(yīng)用。國內(nèi)外學者已經(jīng)報道了一些關(guān)于褐藻寡糖的制備和應(yīng)用方面的專利 (ZL01107952. 5，CN1414002A, CN1562050A, Cm01037456A)，但是還沒有關(guān)于寡聚甘露糖酸酸在抗甲型Hmi流感病毒方面的研究和應(yīng)用報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中治療甲型流感病毒的藥物容易產(chǎn)生耐藥性且具有毒副作用的缺點，本發(fā)明提供了寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的寡聚甘露糖醛酸(OM)具有其分子量小、溶解性和穩(wěn)定性好的特點，并且此寡聚甘露糖醛酸在體內(nèi)外實驗中都呈現(xiàn)出很好的抗甲型Hmi流感病毒的活性。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案予以實現(xiàn)本發(fā)明提供了寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應(yīng)用。所述寡聚甘露糖醛酸的糖殘基是由D-甘露糖醛酸組成，并以β-1，4-糖苷鍵連接，重均分子量為< 6KD，其分子式可表述為[C6H8OJn，其中η = 2_34。對技術(shù)方案的進一步改進所述寡聚甘露糖醛酸在濃度為40 μ mol/L以上可顯著抑制甲型Hmi流感病毒在狗腎上皮細胞(MDCK)中的感染和增殖。對技術(shù)方案的進一步改進所述寡聚甘露糖醛酸在40mg/kg/day的劑量下可顯著減輕甲型Hmi流感病毒IAV感染引起的小鼠肺部炎癥。對技術(shù)方案的進一步改進對IAV病毒感染小鼠的肺指數(shù)抑制率達到34. 9%，對于IAV感染小鼠的死亡保護率達到50%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是本發(fā)明選取來源于海洋褐藻的低分子量的新型寡聚甘露糖醛酸OM為研究對象，在體內(nèi)外水平上揭示其抗甲型Hmi流感病毒感染和增殖的作用。本發(fā)明經(jīng)實驗證實寡聚甘露糖醛酸OM可以很好地抑制甲型Hmi流感病毒對于狗腎上皮細胞的感染和增殖過程，其作用效果與陽性對照藥利巴韋林相近。寡聚甘露糖醛酸 OM可以顯著減輕甲型Hmi流感病毒感染引起的小鼠肺部炎癥，減輕流感引起的小鼠體重下降癥狀，從而對小鼠起到治療和保護作用。此外，寡聚甘露糖醛酸OM還可以顯著減少IAV 感染引起的小鼠死亡，延長生存時間。本發(fā)明證實寡聚甘露糖醛酸OM無論在細胞水平還是動物水平上都可以很好地抑制甲型Hmi流感病毒的感染和增殖過程，揭示該化合物具有開發(fā)成抗甲型流感病毒藥物的廣闊前景。結(jié)合附圖閱讀本發(fā)明的具體實施方式
后，本發(fā)明的其他特點和優(yōu)點將變得更加清林疋。


圖1表明本發(fā)明中寡聚甘露糖醛酸OM對于感染甲型Hmi流感病毒小鼠的死亡保護作用。圖1中，病毒對照組為只感染病毒而不加藥的模型對照組；利巴韋林組為陽性藥處理組；寡糖OM組為寡聚甘露糖醛酸處理組；給藥劑量為40mg/kg/day ；病毒對照組給予同樣體積的生理鹽水。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步詳細的說明。本發(fā)明采用酸降解法從海藻多糖褐藻膠中制備并分離獲得低分子量的寡聚甘露糖醛酸OM(在專利ZLOl 107952. 5和ZLOl 127533. 2中記載有寡聚甘露糖醛酸OM的制備方法)，并試驗其在制備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明制得的所述寡聚甘露糖醛酸OM的糖殘基是D-甘露糖醛酸，并以β-1， 4-糖苷鍵連接，重均分子量為< 6KD，其分子式可表述為[C6H8OJn，其中η = 2_34。按照國際公認的方法，評價了它對甲型Hmi流感病毒的體內(nèi)外感染和增殖的影響。實施例1、寡聚甘露糖醛酸OM體外抗甲型Hmi流感病毒增殖作用利用甲型流感病毒小鼠適應(yīng)株Hmi (A/PR/8/34，中科院武漢病毒所提供)感染狗腎上皮細胞(MDCK)建立細胞模型，并利用此細胞模型結(jié)合細胞病變(CPE)抑制試驗和噻唑籃(MTT)比色法分別檢測寡聚甘露糖醛酸OM對于IAV的抑制活性以及細胞毒性的大小，并且計算半數(shù)抑制濃度IC50和半數(shù)細胞毒性濃度CC50。陽性對照藥物選擇利巴韋林。實驗結(jié)果如表1所示，寡聚甘露糖醛酸OM對于IAV的抑制活性非常顯著(IC5tl = 38. 3 μ M)，且細胞毒性較小(CC5tl = 420 μ Μ)，治療指數(shù)SI (CC50/IC50)達到11.0。與廣譜的抗病毒藥物利巴韋林相比，寡聚甘露糖醛酸OM起效的藥物濃度更低，IC5tl值遠小于利巴韋林(IC5tl = 91.3 μ M)，且兩者的治療指數(shù)(Si)都大于10.0。說明寡聚甘露糖醛酸OM具有較好的體外抑制甲型流感病毒增殖的作用。表1 寡聚甘露糖醛酸OM體外抗甲型Hmi流感病毒活性
權(quán)利要求
1. 一種寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應(yīng)用， 其特征在于所述寡聚甘露糖醛酸的糖殘基是由D-甘露糖醛酸組成，并以β -1，4-糖苷鍵連接，重均分子量為<6 kDa，其分子式可表述為[C6H8OJn，其中n=2-34。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應(yīng)用， 其特征在于所述寡聚甘露糖醛酸在濃度為40 Mfflol/L以上可顯著抑制甲型Hmi流感病毒在狗腎上皮細胞中的感染和增殖，半數(shù)抑制濃度(IC5tl)為38. 3 μ M0
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型Hmi流感病毒藥物中的應(yīng)用， 其特征在于所述寡聚甘露糖醛酸在40 mg/kg/day的劑量下可顯著減輕甲型HlNI流感病毒感染引起的小鼠肺部炎癥，降低死亡率。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型Hmi亞型的流感病毒藥物中的應(yīng)用，其特征在于對甲型Hmi流感病毒感染小鼠的肺指數(shù)抑制率達到34. 9%,對于甲型 HlNl流感感染小鼠的死亡保護率達到50%。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種寡聚甘露糖醛酸在制備抗甲型H1N1流感病毒的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過實驗不僅證明了寡聚甘露糖醛酸OM在體外對H1N1亞型的甲型流感病毒感染的狗腎上皮細胞具有較好的保護作用，可以有效地降低病毒的復(fù)制,其作用效果與陽性對照藥利巴韋林相當。而且，OM還可以顯著減少甲型H1N1流感病毒感染引起的小鼠死亡，延長生存時間。本發(fā)明提供的寡聚甘露糖醛酸OM具有水溶性好、穩(wěn)定性高和安全低毒等優(yōu)點，在體內(nèi)外實驗中都證明OM具有良好的抗甲型H1N1流感病毒活性，預(yù)示該寡聚甘露糖醛酸有開發(fā)成抗甲型流感病毒藥物的前景。
文檔編號A61K31/7016GK102488697SQ20111040896
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月9日
發(fā)明者于廣利, 王偉, 管華詩, 郝翠 申請人:中國海洋大學