專利名稱：對(duì)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞、組織和器官的保護(hù)、恢復(fù)和增強(qiáng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞、組織和器官的保護(hù)、恢復(fù)和增強(qiáng)。具體地，提供了幾種方法和組合物，用于通過(guò)全身或局部給予促紅細(xì)胞生成素受體活性調(diào)節(jié)劑， 如促紅細(xì)胞生成素或修飾的促紅細(xì)胞生成素，來(lái)保護(hù)或促進(jìn)包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物中在體內(nèi)、原位或來(lái)自體內(nèi)的促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞、組織、器官或身體某部分的功能或存活力。
背景技術(shù)：
多年來(lái)，促紅細(xì)胞生成素的唯一清楚的生理作用是控制紅細(xì)胞的生成。最近，幾方面的證據(jù)暗示，作為細(xì)胞因子超家族的一員，促紅細(xì)胞生成素通過(guò)與促紅細(xì)胞生成素受體(促紅細(xì)胞生成素-R)的相互作用為媒介發(fā)揮其它重要的生理功能。這些作用包括有絲分裂、調(diào)節(jié)進(jìn)入平滑肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的鈣流以及對(duì)中間代謝的影響。據(jù)信，促紅細(xì)胞生成素提供補(bǔ)償性應(yīng)答來(lái)改善缺氧的細(xì)胞的微環(huán)境，并調(diào)節(jié)由代謝應(yīng)激反應(yīng)引起的程序性細(xì)胞死亡。雖然研究已經(jīng)確定顱內(nèi)注射的促紅細(xì)胞生成素可保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受缺氧性神經(jīng)損傷，但是顱內(nèi)給藥對(duì)于治療用途來(lái)說(shuō)是一條不切實(shí)際的和無(wú)法接受的給藥路徑，尤其對(duì)正常個(gè)體來(lái)說(shuō)。另外，對(duì)貧血病人給予促紅細(xì)胞生成素的先前研究已經(jīng)斷定，外周給藥的促紅細(xì)胞生成素不能轉(zhuǎn)運(yùn)到腦中(Marti et al. ,1997, Kidney Int. 51 :416-8 Juul et al.，1999，Pediatr. Res. 46 :543-547 ；Buemi et al.，2000,Nephrol. Dial. Transplant. 15 422-433.)。已經(jīng)描述了各種修飾形式的促紅細(xì)胞生成素，它們具有用來(lái)提高其分子促紅細(xì)胞生成活性的活性，例如在美國(guó)專利5，457，089和美國(guó)專利4，835，260中描述的在羧基末端具有改變的氨基酸的促紅細(xì)胞生成素。每個(gè)分子帶有不同數(shù)量唾液酸殘基的促紅細(xì)胞生成素異構(gòu)型，例如披露于美國(guó)專利5，856，292的；披露于美國(guó)專利4，703，008中的多肽；披露在美國(guó)專利5，767，078中的激動(dòng)劑；在美國(guó)專利5，773，569和5，830，851中披露的結(jié)合于促紅細(xì)胞生成素受體的肽；以及披露于美國(guó)專利5，835，382中的小分子模擬物。本發(fā)明的目標(biāo)在于使用促紅細(xì)胞生成素來(lái)保護(hù)、維持、增強(qiáng)或修復(fù)在原位的和來(lái)自體內(nèi)的促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞、組織和器官，以及輸送促紅細(xì)胞生成素或者攜帶結(jié)合的分子跨越內(nèi)皮細(xì)胞屏障以便保護(hù)和增強(qiáng)遠(yuǎn)離血管系統(tǒng)的紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞、組織以及器官。

發(fā)明內(nèi)容
在一方面，本發(fā)明的目的在于使用促紅細(xì)胞生成素來(lái)制備藥物組合物用于保護(hù)、 維持、增強(qiáng)或修復(fù)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞、組織和器官的功能或存活力。在一個(gè)特別的方面，這些促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞、組織和器官由于緊密內(nèi)皮細(xì)胞屏障而遠(yuǎn)離血管系統(tǒng)。在另一個(gè)特別的方面，這些細(xì)胞、組織、 器官或其它身體部分分離自哺乳動(dòng)物體，如計(jì)劃用于移植的部分。作為非限制性實(shí)例，促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞或組織可以是神經(jīng)、視網(wǎng)膜、肌肉、心臟、肺、肝、腎、小腸、腎上腺皮質(zhì)、腎上腺髓質(zhì)、毛細(xì)血管內(nèi)皮、睪丸、卵巢、胰腺或子宮內(nèi)膜的細(xì)胞或組織。這些促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的例子僅僅是例證性的。一方面，這些促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞、組織和器官不是易興奮的細(xì)胞、組織或器官，或者不是主要由易興奮的細(xì)胞或組織構(gòu)成。在一個(gè)特定的實(shí)施方案，使用上述促紅細(xì)胞生成素衍生物的哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織或器官是在不利于該細(xì)胞、組織或器官存活的至少一種狀態(tài)下已消耗了或?qū)⒁囊欢螘r(shí)間的細(xì)胞組織或器官。這樣的條件包括原位創(chuàng)傷性缺氧或代謝功能紊亂、外科手術(shù)引起的原位組織缺氧或代謝功能紊亂、或者原位毒物暴露，后者可能與化學(xué)治療或放射治療有關(guān)。在一個(gè)實(shí)施方案中，不利條件是用于某些外科手術(shù)的心肺分流術(shù)(心肺機(jī))導(dǎo)致的結(jié)果。促紅細(xì)胞生成素適用于治療性或預(yù)防性處理主要具有神經(jīng)性或精神性癥狀的人 CNS疾病或外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病，以及眼科疾病、心血管疾病、心肺疾病、呼吸道疾病、腎、泌尿和生殖系統(tǒng)疾病、胃腸道疾病以及內(nèi)分泌和代謝紊亂。本發(fā)明還涉及包含特定促紅細(xì)胞生成素衍生物的藥物組合物，用于對(duì)哺乳動(dòng)物， 特別是人給藥。這種藥物組合物可以配方成口服、鼻飼或非腸道給藥，或者灌注液的形式， 用于維持來(lái)自體內(nèi)的細(xì)胞、組織或器官存活力。適用于前述目的的促紅細(xì)胞生成素衍生物可以是任何天然促紅細(xì)胞生成素，或者促紅細(xì)胞生成素類似物、促紅細(xì)胞生成素模擬物，以及促紅細(xì)胞生成素片斷、雜交的促紅細(xì)胞生成素分子、促紅細(xì)胞生成素受體結(jié)合分子、促紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑、腎促紅細(xì)胞生成素、腦促紅細(xì)胞生成素、其寡聚物、其多聚物、其突變體、其同類物、其天然產(chǎn)生的形式、其合成形式、其重組形式、其糖基化變異體、其去糖基化變異體，或者其組合。能夠有益于促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的任何形式的促紅細(xì)胞生成素都包括在本發(fā)明的這個(gè)方面中。適用于前述目的和藥物組合物的其它促紅細(xì)胞生成素衍生物包括，天然促紅細(xì)胞生成素以及與天然促紅細(xì)胞生成素相比被至少一處修飾而改變的促紅細(xì)胞生成素，優(yōu)選地是與天然的人促紅細(xì)胞生成素相比。至少一處修飾可以是促紅細(xì)胞生成素分子至少一個(gè)氨基酸的修飾，或者促紅細(xì)胞生成素分子至少一個(gè)糖基的修飾。當(dāng)然，適用于該目的的促紅細(xì)胞生成素分子與天然分子相比可以有許多修飾，例如對(duì)分子氨基酸部分的多處修飾，對(duì)分子糖基部分的多處修飾，或者對(duì)分子氨基酸部分的至少一處修飾和對(duì)分子糖基部分的至少一處修飾。經(jīng)修飾的促紅細(xì)胞生成素分子保持其保護(hù)、維持、增強(qiáng)或修復(fù)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞的功能或存活力的能力，而與天然分子相比，與前述理想的特點(diǎn)不相關(guān)的促紅細(xì)胞生成素分子的其它性質(zhì)可能不存在。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，促紅細(xì)胞生成素衍生物是非促紅細(xì)胞生成的。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的促紅細(xì)胞生成素至少?zèng)]有唾液酸部分。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，修飾的促紅細(xì)胞生成素是脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素，以及最優(yōu)選的是人脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，修飾的促紅細(xì)胞生成素具有1，2，3，4，5，6，7，8， 9，10，11，12或13個(gè)唾液酸部分。在第二個(gè)實(shí)施方案中，修飾的促紅細(xì)胞生成素至少?zèng)]有N-連接或沒(méi)有0-連接的糖基。在本發(fā)明的第三個(gè)實(shí)施方案中，修飾的促紅細(xì)胞生成素通過(guò)用至少一種糖苷酶處理帶有其天然糖基的促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素而具有至少降低的糖基含量。在第四個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)在非哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)重組促紅細(xì)胞生成素，修飾的促紅細(xì)胞生成素分子的糖基部分具有至少一種非哺乳動(dòng)物糖基化模式。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，修飾的促紅細(xì)胞生成素是在昆蟲(chóng)細(xì)胞或植物細(xì)胞中表達(dá)的。在第五個(gè)實(shí)施方案中，修飾的促紅細(xì)胞生成素具有至少一個(gè)或多個(gè)被氧化的糖基，該氧化的糖基也可被化學(xué)還原。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，修飾的促紅細(xì)胞生成素是高碘酸氧化的促紅細(xì)胞生成素；在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該高碘酸氧化的促紅細(xì)胞生成素是用硼氫化物如硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉化學(xué)還原的。在第六個(gè)實(shí)施方案中，用于前述用途的修飾促紅細(xì)胞生成素具有至少一個(gè)或多個(gè)修飾的精氨酸殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，修飾的促紅細(xì)胞生成素在一個(gè)或多個(gè)精氨酸殘基上包含乙二醛部分，如芳基乙二醛或烷基乙二醛部分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一個(gè)精氨酸殘基通過(guò)與鄰二酮諸如但不限于2，3-丁二酮或環(huán)己二酮反應(yīng)而被修飾。在第七個(gè)實(shí)施方案中，修飾的促紅細(xì)胞生成素包含至少一個(gè)或多個(gè)修飾的賴氨酸，或者修飾促紅細(xì)胞生成素分子的N-末端氨基，如由于賴氨酸殘基或N-末端氨基與氨基修飾試劑反應(yīng)而引起的修飾。修飾的賴氨酸殘基進(jìn)一步可被化學(xué)還原。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，促紅細(xì)胞生成素是通過(guò)一個(gè)或多個(gè)賴氨酸基團(tuán)被生物素化或氨甲?；?。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，賴氨酸與醛或還原性糖反應(yīng)形成亞胺，可通過(guò)用諸如氰基硼氫化鈉還原形成N-烷基賴氨酸例如葡糖基賴氨酸而使賴氨酸穩(wěn)定，或者在還原糖的情況下，可以通過(guò)Amadori或Heyns重排形成α -脫氧-α -氨基糖例如α -脫氧-α -果糖賴氨酸而使其穩(wěn)定。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，賴氨酸基團(tuán)被氨甲?；?氨基甲?；?，例如通過(guò)與氰酸鹽離子反應(yīng)，分別與烷基-異氰酸鹽、芳基異氰酸鹽或芳基-異硫氰酸鹽反應(yīng)，被烷基-氨甲?；?、芳基氨甲酰化或芳基-硫氨甲?；?，或者它可被活性烷基羧酸或芳基羧酸衍生物酰基化，如通過(guò)與乙酐、琥珀酸酐或鄰苯二甲酸酐反應(yīng)。至少一個(gè)賴氨酸基團(tuán)也可通過(guò)與三硝基苯磺酸或者優(yōu)選其鹽反應(yīng)而被三硝基苯化修飾。在另一個(gè)實(shí)施方案中，賴氨酸殘基可通過(guò)與乙二醛衍生物反應(yīng)而被修飾，如與乙二醛、甲基乙二醛或3-脫氧葡糖醛酮反應(yīng)形成相應(yīng)的α-羧烷基衍生物。在第八個(gè)實(shí)施方案中，促紅細(xì)胞生成素的至少一個(gè)酪氨酸殘基可通過(guò)親電子試劑如通過(guò)硝化或碘化在芳環(huán)位置被修飾。在第九個(gè)實(shí)施方案中，促紅細(xì)胞生成素的至少一個(gè)天冬氨酸或谷氨酸殘基可被修飾，例如通過(guò)與碳化二亞胺反應(yīng)，接著與胺諸如但不限于甘氨酰胺反應(yīng)。在第十個(gè)實(shí)施方案中，促紅細(xì)胞生成素的至少一個(gè)色氨酸殘基被修飾，例如通過(guò)與η-溴琥珀酰亞胺或η-氯琥珀酰亞胺反應(yīng)。在第十一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種被修飾的促紅細(xì)胞生成素分子，至少一個(gè)促紅細(xì)胞生成素氨基已被除去，例如通過(guò)與茚三酮反應(yīng)，接著通過(guò)與硼氫化物反應(yīng)而還原得到的羰基。在第十二個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種修飾的促紅細(xì)胞生成素，在該促紅細(xì)胞生成素分子中具有打開(kāi)的至少一個(gè)胱氨酸鍵，是通過(guò)與還原劑例如二硫蘇糖醇反應(yīng)，接著使得到的巰基與碘乙酰胺、碘乙酸或另一個(gè)親電子試劑反應(yīng)以防止二硫鍵的重新形成。在第十三個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種修飾的促紅細(xì)胞生成素，使用分子生物學(xué)技術(shù)，以許多氨基酸中的任何一個(gè)，例如亮氨酸至少一次取代促紅細(xì)胞生成素的至少一個(gè)賴氨酸、精氨酸、色氨酸、酪氨酸或半胱氨酸殘基。在第十四個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)修飾的促紅細(xì)胞生成素進(jìn)行了有限的化學(xué)蛋白質(zhì)水解，蛋白水解作用對(duì)準(zhǔn)特定的殘基，例如在色氨酸殘基后裂解。在此將這樣得到的促紅細(xì)胞生成素片斷包括在內(nèi)。如上所述，適用于本發(fā)明目的的促紅細(xì)胞生成素可能具有至少一個(gè)前述的修飾， 但是也可以具有上述修飾的不止一個(gè)。作為具有對(duì)分子糖基部分的一個(gè)修飾和對(duì)氨基酸部分的一個(gè)修飾的被修飾促紅細(xì)胞生成素的一個(gè)例子，修飾的促紅細(xì)胞生成素可以是脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素，并具有其賴氨酸殘基被生物素化或氨甲?；１景l(fā)明也包括幾個(gè)組合物，包括藥物組合物，其含有一個(gè)或多個(gè)前述的促紅細(xì)胞生成素。本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種方法，用于通過(guò)給予有效量的任何一種或幾種前述的促紅細(xì)胞生成素，來(lái)保護(hù)、維持、增強(qiáng)或修復(fù)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞、組織或器官的功能或存活力。在該方法的一個(gè)特別的方面，促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答哺乳動(dòng)物細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞、組織或器官由于緊密的內(nèi)皮細(xì)胞屏障而遠(yuǎn)離血管系統(tǒng)。在另一個(gè)特別的方面，這些細(xì)胞、組織、器官或其它身體部分是從哺乳動(dòng)物體分離出的，例如計(jì)劃用于移植的部分。作為非限制性例子，促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞或組織可以是神經(jīng)元、視網(wǎng)膜、肌肉、心臟、肺、肝、腎、小腸、腎上腺皮質(zhì)、腎上腺髓質(zhì)、毛細(xì)血管內(nèi)皮、睪丸、卵巢、或者子宮內(nèi)膜的細(xì)胞或組織。這些促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的例子僅僅是例證性的。 在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，這些促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞或其相關(guān)細(xì)胞、組織和器官不是易興奮的細(xì)胞、組織或器官，或者不是主要由易興奮的細(xì)胞或組織構(gòu)成。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，使用上述促紅細(xì)胞生成素衍生物的哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織或器官是在不利于該細(xì)胞、組織或器官存活的至少一種狀態(tài)下已消耗了或?qū)⒁囊欢螘r(shí)間的細(xì)胞組織或器官。這樣的條件可以包括原位創(chuàng)傷性組織缺氧或代謝功能紊亂、外科手術(shù)引起的原位組織缺氧或代謝功能紊亂、或者原位毒物暴露，后者可能與化學(xué)治療或放射治療有關(guān)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明要防護(hù)的不利條件來(lái)自心肺分流術(shù)。在本發(fā)明的另一分方面，前述的任何促紅細(xì)胞生成素以及任何其它的促紅細(xì)胞生成素分子包括天然的人促紅細(xì)胞生成素都可用來(lái)制備用于細(xì)胞、組織和器官的體內(nèi)治療的藥物組合物，目的在于保護(hù)、維持、增強(qiáng)或修復(fù)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞、組織和器官的功能或存活力。這種體內(nèi)治療是有用的，例如用于保存移植用的細(xì)胞、組織或器官，無(wú)論是自體移植或是異體移植。這些細(xì)胞、組織或器官可浸浴在包含促紅細(xì)胞生成素的溶液中，或者將這種灌注液通過(guò)血管系統(tǒng)或其他其它途徑輸入進(jìn)器官中，以便在這些細(xì)胞、組織或器官尚未與供體或受體血管系統(tǒng)結(jié)合期間維持細(xì)胞的功能。灌注液可以給予器官采集前的供體，以及已采集的器官和受體。而且，任何促紅細(xì)胞生成素的上述用途在細(xì)胞、組織或器官與個(gè)體的血管系統(tǒng)分離時(shí)是有效的，這樣基本上以體內(nèi)狀態(tài)存在了一段時(shí)間，術(shù)語(yǔ)“分離”是指限制或夾住細(xì)胞、組織、器官或身體一部分的血管系統(tǒng)或通向它們的血管系統(tǒng)，例如可在外科手術(shù)中進(jìn)行，特別是包括心肺旁路外科手術(shù)；細(xì)胞、組織、 器官或身體一部分的血管系統(tǒng)分流術(shù)；從哺乳動(dòng)物身體取出細(xì)胞、組織、器官或身體的一部分，這可以在異體移植前或自體移植前以及自體移植過(guò)程中進(jìn)行；或者是細(xì)胞、組織、器官或身體一部分的創(chuàng)傷性切除手術(shù)。這樣，本發(fā)明的這個(gè)方面在原位和來(lái)自體內(nèi)兩種情況下都適合用促紅細(xì)胞生成素輸液。在來(lái)自體內(nèi)的情況下，促紅細(xì)胞生成素可被置于細(xì)胞、組織或器官保存溶液中。對(duì)于二者，促紅細(xì)胞生成素的施用可以通過(guò)連續(xù)輸液、脈動(dòng)輸液、浸入、 浸泡、注射或?qū)Ч軐?dǎo)入進(jìn)行。還有另一方面，本發(fā)明涉及一種方法，用于保護(hù)、維持、增強(qiáng)或恢復(fù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞、 組織、器官或身體一部分的生存力，它們包含促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞或組織，其中該細(xì)胞、組織、器官或身體一部分是從哺乳動(dòng)物體分離的。該方法包括至少將分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織、器官或身體一部分暴露于可有效保護(hù)、維持、增強(qiáng)或恢復(fù)上述生存力的某一數(shù)量的促紅細(xì)胞生成素一段時(shí)間。在非限制性的例子中，“分離”是指限制或夾住細(xì)胞、組織、器官或身體一部分的血管系統(tǒng)或通向它們的血管系統(tǒng)，諸如可在外科手術(shù)中進(jìn)行，特別是包括心肺旁路外科手術(shù)；細(xì)胞、組織、器官或身體一部分的血管系統(tǒng)分流術(shù)；從哺乳動(dòng)物身體取出細(xì)胞、組織、器官或身體一部分，這可以在異體移植前或自體移植前以及自體移植過(guò)程中進(jìn)行；或者是細(xì)胞、組織、器官或身體一部分的創(chuàng)傷性切除手術(shù)。這樣，本發(fā)明的這個(gè)方面在原位和來(lái)自體內(nèi)兩種情況下都適合用促紅細(xì)胞生成素輸液。在來(lái)自體內(nèi)的情況下，促紅細(xì)胞生成素可被置于細(xì)胞、組織或器官保存溶液中。對(duì)于二者，促紅細(xì)胞生成素的施用可以通過(guò)連續(xù)輸液、脈動(dòng)輸液、浸入、浸泡、注射或?qū)Ч軐?dǎo)入進(jìn)行。在上述的分離或來(lái)自體內(nèi)的實(shí)施方案中，適用的促紅細(xì)胞生成素可以是上述促紅細(xì)胞生成素的任何一種，包括任何天然的促紅細(xì)胞生成素，或者促紅細(xì)胞生成素類似物、 促紅細(xì)胞生成素模擬物，以及促紅細(xì)胞生成素片斷、雜交促紅細(xì)胞生成素分子、促紅細(xì)胞生成素受體結(jié)合分子、促紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑、腎促紅細(xì)胞生成素、腦促紅細(xì)胞生成素、其寡聚體、其多聚體、其突變體、其同源物、其天然產(chǎn)生的形式、其合成形式、其重組形式、其糖基化變異體、其去糖基化變異體，或者其組合。能夠有益于促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的任何形式的促紅細(xì)胞生成素都包括在本發(fā)明的這個(gè)方面中。其它促紅細(xì)胞生成素包括但不限于脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素、N-去糖基化促紅細(xì)胞生成素、0-去糖基化促紅細(xì)胞生成素、具有低糖基含量的促紅細(xì)胞生成素、具有改變的糖基化模式的促紅細(xì)胞生成素、具有被氧化然后被還原糖基的促紅細(xì)胞生成素、芳基乙二醛修飾的促紅細(xì)胞生成素、烷基乙二醛修飾的促紅細(xì)胞生成素、2，3-丁二酮修飾的促紅細(xì)胞生成素、環(huán)己二酮修飾的促紅細(xì)胞生成素、 生物素化的促紅細(xì)胞生成素、N-烷基-賴氨酰-促紅細(xì)胞生成素、葡糖基賴氨酸促紅細(xì)胞生成素、α -脫氧-α -果糖賴氨酸促紅細(xì)胞生成素、氨甲酰化促紅細(xì)胞生成素、乙酰化促紅細(xì)胞生成素、琥珀?；偌t細(xì)胞生成素、α -羧烷基促紅細(xì)胞生成素、硝化促紅細(xì)胞生成素、 碘化促紅細(xì)胞生成素，根據(jù)此處的講述還可列舉一些代表性的但非限制性的例子。人促紅細(xì)胞生成素是優(yōu)選的；天然的人促紅細(xì)胞生成素是最優(yōu)選的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，人脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素是優(yōu)選的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，人苯基乙二醛促紅細(xì)胞生成素是優(yōu)選的。作為非限制性的例子，上述來(lái)自體內(nèi)的促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞或組織可以是或者包含神經(jīng)元、視網(wǎng)膜、肌肉、心臟、肺、肝、腎、小腸、腎上腺皮質(zhì)、腎上腺髓質(zhì)、毛細(xì)血管內(nèi)皮、睪丸、卵巢、或者子宮內(nèi)膜的細(xì)胞或組織。這些促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的例子僅僅是例證性的。所有上述方法和用途都優(yōu)選地適用于人類，但是對(duì)任何哺乳動(dòng)物也是同樣有用的，諸如但不限于寵物、馴養(yǎng)動(dòng)物、家畜和觀賞動(dòng)物。上述藥物組合物的給藥途徑包括口腔、 靜脈內(nèi)、鼻腔、體表、腔內(nèi)、呼吸道或非腸道給藥，后者包括靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、粘膜下或真皮內(nèi)給藥。對(duì)來(lái)自體內(nèi)用途，輸注液或浸泡溶液是優(yōu)選的。這包括對(duì)血管系統(tǒng)分離的部分原位輸液。在本發(fā)明的另一方面，上述促紅細(xì)胞生成素的任何一種在制備用于恢復(fù)功能紊亂的細(xì)胞、組織或器官的藥物組合物中是有用的，在造成功能紊亂的疾病或狀態(tài)發(fā)作之后給藥。作為非限制性的例子，給予含有促紅細(xì)胞生成素的藥物組合物恢復(fù)了曾遭受腦創(chuàng)傷的動(dòng)物的認(rèn)知功能，甚至在創(chuàng)傷已經(jīng)消退很長(zhǎng)時(shí)間(例如三天、五天、一周、一個(gè)月或更久) 之后給藥也可以。適用于這些應(yīng)用的促紅細(xì)胞生成素包括上述特定的促紅細(xì)胞生成素的任何一種，或任何天然的促紅細(xì)胞生成素，或者促紅細(xì)胞生成素類似物、促紅細(xì)胞生成素模擬物，以及促紅細(xì)胞生成素片斷、雜交的促紅細(xì)胞生成素分子、促紅細(xì)胞生成素受體結(jié)合分子、促紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑、腎促紅細(xì)胞生成素、腦促紅細(xì)胞生成素、其寡聚體、其多聚體、 其突變體、其同源物、其天然產(chǎn)生的形式、其合成形式、其重組形式、其糖基化變異體、其去糖基化變異體，或者其組合。能夠有助于促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的任何形式的促紅細(xì)胞生成素都包括在本發(fā)明的這個(gè)方面中。適用于上述目的和藥物組合物的其它促紅細(xì)胞生成素衍生物，包括天然促紅細(xì)胞生成素以及與天然促紅細(xì)胞生成素相比被至少一種修飾而改變的促紅細(xì)胞生成素，優(yōu)選地是與天然的人促紅細(xì)胞生成素相比。至少一種修飾可以是對(duì)促紅細(xì)胞生成素分子的至少一個(gè)氨基酸的修飾，或者對(duì)促紅細(xì)胞生成素分子的至少一個(gè)糖基的修飾。當(dāng)然，適用于該目的的促紅細(xì)胞生成素分子與天然分子相比可以具有許多修飾，例如對(duì)分子氨基酸部分的多處修飾，對(duì)分子糖基部分的多處修飾，或者對(duì)分子氨基酸部分的至少一處修飾和對(duì)分子糖基部分的至少一處修飾。修飾的促紅細(xì)胞生成素分子保持其保護(hù)、維持、增強(qiáng)或恢復(fù)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞的功能或存活力的能力，而相比于天然分子，與上述的理想特征無(wú)關(guān)的促紅細(xì)胞生成素分子的其它特性可以沒(méi)有。人促紅細(xì)胞生成素是優(yōu)選的；天然的人促紅細(xì)胞生成素是最優(yōu)選的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，人脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素是優(yōu)選的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，使用上述促紅細(xì)胞生成素來(lái)恢復(fù)功能紊亂的細(xì)胞、組織或器官，在造成功能紊亂的疾病或狀態(tài)開(kāi)始發(fā)作之后給藥。作為非限制性的例子，施用含有促紅細(xì)胞生成素的藥物組合物的方法恢復(fù)了曾遭受腦創(chuàng)傷的動(dòng)物的認(rèn)知功能，甚至在創(chuàng)傷已經(jīng)消退很長(zhǎng)時(shí)間(例如三天、五天、一周、一個(gè)月或更久)之后給藥也可以。適用于這些方法的促紅細(xì)胞生成素包括上述特定的促紅細(xì)胞生成素的任何一種，或任何天然的促紅細(xì)胞生成素，或者促紅細(xì)胞生成素類似物、促紅細(xì)胞生成素模擬物， 以及促紅細(xì)胞生成素片斷、雜交的促紅細(xì)胞生成素分子、促紅細(xì)胞生成素受體結(jié)合分子、促紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑、腎促紅細(xì)胞生成素、腦促紅細(xì)胞生成素、其寡聚物、其多聚物、其突變體、其同源物、其天然產(chǎn)生的形式、其合成形式、其重組形式、其糖基化變異體、其去糖基化變異體，或者其組合。能夠有助于促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的任何形式的促紅細(xì)胞生成素都包括在本發(fā)明的這個(gè)方面中。適用于上述目的和藥物組合物的其它促紅細(xì)胞生成素衍生物包括天然促紅細(xì)胞生成素以及與天然促紅細(xì)胞生成素相比被至少一種修飾而改變的促紅細(xì)胞生成素，優(yōu)選地是天然的人促紅細(xì)胞生成素相比。至少一種修飾可以是對(duì)促紅細(xì)胞生成素分子的至少一個(gè)氨基酸的修飾，或者對(duì)促紅細(xì)胞生成素分子的至少一個(gè)糖基的修飾。當(dāng)然，適用于該目的的促紅細(xì)胞生成素分子與天然分子相比可以具有許多修飾，例如對(duì)分子氨基酸部分的多處修飾，對(duì)分子糖基部分的多處修飾，或者，對(duì)分子氨基酸部分的至少一處修飾和對(duì)分子糖基部分的至少一處修飾。修飾的促紅細(xì)胞生成素分子保持其保護(hù)、維持、增強(qiáng)或恢復(fù)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞的功能或存活力的能力，而相比于天然分子，與上述的理想特征無(wú)關(guān)的促紅細(xì)胞生成素分子其它特性可以沒(méi)有。人促紅細(xì)胞生成素是優(yōu)選的；天然的人促紅細(xì)胞生成素是最優(yōu)選的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，人脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素是優(yōu)選的。在本發(fā)明更進(jìn)一步的一個(gè)方面，提供了一種方法，用于促進(jìn)一種分子轉(zhuǎn)胞吞 (tramsgtosis)跨越哺乳動(dòng)物中的內(nèi)皮細(xì)胞屏障，是通過(guò)給予與一種促紅細(xì)胞生成素相結(jié)合的該分子的組合物，其中的促紅細(xì)胞生成素包括例如至少不含唾液酸部分的促紅細(xì)胞生成素；至少?zèng)]有N-連接或沒(méi)有0-連接糖基的促紅細(xì)胞生成素；通過(guò)用至少一種糖苷酶處理天然促紅細(xì)胞生成素，而具有至少降低的糖基含量的促紅細(xì)胞生成素；通過(guò)在非哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)重組促紅細(xì)胞生成素，而使被修飾的促紅細(xì)胞生成素分子的糖基部分具有至少一種非哺乳動(dòng)物糖基化模式的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)或多個(gè)氧化糖基的促紅細(xì)胞生成素，該氧化糖基也可被化學(xué)還原；具有至少一個(gè)或多個(gè)修飾的精氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)或多個(gè)修飾的賴氨酸殘基，或者促紅細(xì)胞生成素分子的N-末端氨基修飾的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)修飾的酪氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)修飾的天冬氨酸或谷氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)修飾的色氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)氨基被除去的促紅細(xì)胞生成素；具有至少打開(kāi)促紅細(xì)胞生成素分子中至少一個(gè)胱氨酸鍵的促紅細(xì)胞生成素；被提供的具有對(duì)至少一個(gè)氨基酸一次取代的促紅細(xì)胞生成素；或者一種截短的促紅細(xì)胞生成素。在要被轉(zhuǎn)運(yùn)的分子和促紅細(xì)胞生成素之間的連接可以是，例如，不穩(wěn)定的共價(jià)鍵， 穩(wěn)定的共價(jià)鍵，或者是與此分子結(jié)合部位的非共價(jià)連接。內(nèi)皮細(xì)胞屏障可以是血-腦屏障、 血-眼屏障、血-睪屏障、血-卵巢屏障和血-胎盤屏障。適合于用本發(fā)明的方法轉(zhuǎn)運(yùn)的分子包括激素例如生長(zhǎng)激素，抗生素和抗癌制劑。在本發(fā)明更進(jìn)一步的一個(gè)方面，是提供了一種組合物，用來(lái)促進(jìn)一種分子轉(zhuǎn)胞吞跨越哺乳動(dòng)物中的內(nèi)皮細(xì)胞屏障，所述組合物包含與促紅細(xì)胞生成素結(jié)合的該分子，此促紅細(xì)胞生成素包括例如至少不含唾液酸部分的促紅細(xì)胞生成素；至少?zèng)]有N-連接或沒(méi)有 0-連接糖基的促紅細(xì)胞生成素；通過(guò)用至少一種糖苷酶處理天然促紅細(xì)胞生成素，而具有至少降低的糖基含量的促紅細(xì)胞生成素；通過(guò)在非哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)重組促紅細(xì)胞生成素，而使被修飾的促紅細(xì)胞生成素分子的糖基部分具有至少一種非哺乳動(dòng)物糖基化模式的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)或多個(gè)氧化糖基的促紅細(xì)胞生成素，該氧化糖基也可被化學(xué)還原；具有至少一個(gè)或多個(gè)修飾的精氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)或多個(gè)修飾的賴氨酸殘基或者促紅細(xì)胞生成素分子的N-末端氨基修飾的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)修飾的酪氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)修飾的天冬氨酸或谷氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)修飾的色氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)氨基被除去的促紅細(xì)胞生成素；具有至少打開(kāi)促紅細(xì)胞生成素分子中至少一個(gè)胱氨酸鍵的促紅細(xì)胞生成素；被提供具有對(duì)至少一個(gè)氨基酸一次取代的促紅細(xì)胞生成素；或者一種截短的促紅細(xì)胞生成素。其連接可以是，例如，不穩(wěn)定的共價(jià)鍵，穩(wěn)定的共價(jià)鍵，或者是與此分子結(jié)合部位的非共價(jià)連接。內(nèi)皮細(xì)胞屏障可以是血-腦屏障、血-眼屏障、血-睪屏障、血-卵巢屏障和血-胎盤屏障。適合于用本發(fā)明的方法轉(zhuǎn)運(yùn)的分子包括激素例如生長(zhǎng)激素，抗生素和抗癌制劑。在本發(fā)明更進(jìn)一步的一個(gè)方面，上述促紅細(xì)胞生成素的任何之一在制備藥物組合物中是有用的，該藥物組合物可用來(lái)促進(jìn)一種分子轉(zhuǎn)胞吞跨越哺乳動(dòng)物中的內(nèi)皮細(xì)胞屏障，所述組合物包含與促紅細(xì)胞生成素結(jié)合的該分子，此促紅細(xì)胞生成素包括例如，至少不含唾液酸部分的促紅細(xì)胞生成素；至少?zèng)]有N-連接或0-連接糖基的促紅細(xì)胞生成素；通過(guò)用至少一種糖苷酶處理天然促紅細(xì)胞生成素而具有至少降低的糖基含量的促紅細(xì)胞生成素；通過(guò)在非哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)重組促紅細(xì)胞生成素而使被修飾的促紅細(xì)胞生成素分子的糖基部分具有至少一種非哺乳動(dòng)物糖基化模式的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)或多個(gè)氧化糖基的促紅細(xì)胞生成素，該氧化糖基也可被化學(xué)還原；具有至少一個(gè)或多個(gè)修飾的精氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)或多個(gè)修飾的賴氨酸殘基或者促紅細(xì)胞生成素分子的N-末端氨基修飾的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)修飾的酪氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)修飾的天冬氨酸或谷氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)修飾的色氨酸殘基的促紅細(xì)胞生成素；具有至少一個(gè)氨基被除去的促紅細(xì)胞生成素；具有至少打開(kāi)促紅細(xì)胞生成素分子中至少一個(gè)胱氨酸鍵的促紅細(xì)胞生成素；被提供的具有對(duì)至少一個(gè)氨基酸一次取代的促紅細(xì)胞生成素；或者一種截短的促紅細(xì)胞生成素。其連接可以是，例如，不穩(wěn)定的共價(jià)鍵，穩(wěn)定的共價(jià)鍵，或者是與此分子結(jié)合部位的非共價(jià)連接。內(nèi)皮細(xì)胞屏障可以是血-腦屏障、血-眼屏障、血-睪屏障、血-卵巢屏障和血-胎盤屏障。適合于用本發(fā)明的方法轉(zhuǎn)運(yùn)的分子包括激素例如生長(zhǎng)激素，抗生素和抗癌制劑。參考下面的附圖和詳細(xì)描述，本發(fā)明的這些方面以及其它方面將得到更好的理解。


圖1描述非經(jīng)腸道注射給藥的促紅細(xì)胞生成素轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入腦脊髓液。圖2顯示在暫時(shí)的血管閉塞后，促紅細(xì)胞生成素保護(hù)心肌免受缺血性損傷。圖3顯示促紅細(xì)胞生成素對(duì)準(zhǔn)備移植的心臟維持其功能。圖4比較促紅細(xì)胞生成素和脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素對(duì)血清饑餓的P19細(xì)胞存活力的體外功效。圖5是比較促紅細(xì)胞生成素和脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素對(duì)血清饑餓的P19細(xì)胞存活力的體外功效的另一次實(shí)驗(yàn)。圖6比較促紅細(xì)胞生成素和苯基乙二醛修飾的促紅細(xì)胞生成素對(duì)血清饑餓的P19 細(xì)胞存活力的體外功效。
圖7顯示促紅細(xì)胞生成素和脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素在大鼠病灶性腦缺血模型中的保護(hù)作用。圖8顯示比較人促紅細(xì)胞生成素和人脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素對(duì)缺血性中風(fēng)模型中大腦中部動(dòng)脈閉塞功效的劑量響應(yīng)。圖9顯示生物素化促紅細(xì)胞生成素和脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素在P19試驗(yàn)中的效^ ο圖10顯示碘化促紅細(xì)胞生成素在P19試驗(yàn)中的活性。圖11描述促紅細(xì)胞生成素在大鼠青光眼模型中的治療效果。圖12顯示促紅細(xì)胞生成素在大鼠青光眼模型中對(duì)視網(wǎng)膜功能保護(hù)的程度。圖13描述在創(chuàng)傷后五天開(kāi)始給予促紅細(xì)胞生成素，大腦創(chuàng)傷后認(rèn)知功能的恢復(fù)。圖14描述在創(chuàng)傷后30天開(kāi)始給予促紅細(xì)胞生成素，大腦創(chuàng)傷后認(rèn)知功能的恢復(fù)。圖15描述人脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素在腦中毒的kainate模型中的功效。
具體實(shí)施例方式“促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞”是指一種哺乳動(dòng)物細(xì)胞，通過(guò)暴露于促紅細(xì)胞生成素，其功能或生存力可以被維持、促進(jìn)、增強(qiáng)、再生或者處于其它有利的方式。這種細(xì)胞的非限制性的例子包括神經(jīng)、視網(wǎng)膜、肌肉、心臟、肺、肝、腎、小腸、腎上腺皮質(zhì)、腎上腺髓質(zhì)、毛細(xì)血管內(nèi)皮、睪丸、卵巢和子宮內(nèi)膜的細(xì)胞。而且，這些促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞和由促紅細(xì)胞生成素對(duì)它提供的益處可以被延伸來(lái)提供間接地保護(hù)或增強(qiáng)不是直接促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性的其它細(xì)胞，或者包含這種非促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的組織或器官。這些間接受益于促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞增強(qiáng)作用的其它細(xì)胞、組織或器官，作為細(xì)胞、組織或器官的一部分，被稱為“相關(guān)的”細(xì)胞、組織或器官。這樣，在此所述的促紅細(xì)胞生成素的益處可作為組織或器官中少量或小部分促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞存在的結(jié)果而被提供， 例如，此類組織中存在的易興奮性組織或神經(jīng)組織，或者睪丸中制造睪丸激素的間質(zhì)細(xì)胞。 在一個(gè)方面，促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞或其相關(guān)細(xì)胞、組織或器官不是易興奮細(xì)胞、組織或器官，或者主要不是包含易興奮性細(xì)胞或組織。本發(fā)明的方法可對(duì)處在廣范圍的各種正常和不利狀態(tài)下的哺乳動(dòng)物體內(nèi)的細(xì)胞、 組織和器官提供局部或全身性保護(hù)或增強(qiáng)，或者保護(hù)那些預(yù)定移植到另一個(gè)哺乳動(dòng)物體的細(xì)胞、組織或器官。此外，還可提供功能障礙恢復(fù)或更新。如上所述，促紅細(xì)胞生成素跨越緊密的內(nèi)皮細(xì)胞屏障并對(duì)遠(yuǎn)離血管系統(tǒng)的促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞(以及其它類型的細(xì)胞)行使積極效果的能力，為預(yù)防和治療否則將對(duì)動(dòng)物包括人引起重大細(xì)胞和組織損傷的廣范的多種狀態(tài)和疾病提供了潛在的可能性，并且將使那些在傳統(tǒng)上危險(xiǎn)大于益處而迄今未能嘗試的外科手術(shù)獲得成功。為最終利益而誘發(fā)的有目的性不利狀態(tài)的持續(xù)時(shí)間和程度，通過(guò)利用本發(fā)明可得以實(shí)現(xiàn)，例如大劑量化學(xué)治療、放射治療、延長(zhǎng)來(lái)自體內(nèi)移植體的存活以及延長(zhǎng)外科手術(shù)引發(fā)缺血的時(shí)間。然而，本發(fā)明不限于此，但是作為一個(gè)方面它包括幾種方法或組合物，其中的靶標(biāo)性促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答細(xì)胞由于內(nèi)皮細(xì)胞屏障或內(nèi)皮緊密連接而遠(yuǎn)離血管系統(tǒng)?？偲饋?lái)說(shuō)，本發(fā)明的目的在于任何促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞和相關(guān)的細(xì)胞、組織和器官，它們可從暴露于促紅細(xì)胞生成素而受益。而且，通過(guò)暴露于促紅細(xì)胞生成素，細(xì)胞、組織或器官的功能障礙可以在急性不利事件(如創(chuàng)傷)后恢復(fù)或更新。
因此，本發(fā)明普遍性目的在于使用促紅細(xì)胞生成素來(lái)制備藥物組合物，用于上述目的，其中細(xì)胞的功能被維持、促進(jìn)、增強(qiáng)、再生或者以其它任何方式受益。本發(fā)明也涉及用于維持、促進(jìn)、增強(qiáng)或再生細(xì)胞功能的方法，如所述是通過(guò)對(duì)哺乳動(dòng)物給予有效量的促紅細(xì)胞生成素。本發(fā)明進(jìn)一步還涉及用于維持、促進(jìn)、增強(qiáng)或再生來(lái)自體內(nèi)的細(xì)胞功能的方法， 是通過(guò)將細(xì)胞、組織或器官暴露于促紅細(xì)胞生成素。本發(fā)明還涉及一種用于器官或組織保存的含有促紅細(xì)胞生成素的灌注組合物。本發(fā)明的各種方法都利用一種藥物組合物，它包含至少一種有效劑量的促紅細(xì)胞生成素，以特定的暴露途徑和持續(xù)時(shí)間，對(duì)哺乳動(dòng)物體內(nèi)的或從其中取出的促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞施加積極的效應(yīng)或益處。當(dāng)計(jì)劃治療的目標(biāo)細(xì)胞、組織或器官需要促紅細(xì)胞生成素以便跨越內(nèi)皮細(xì)胞屏障時(shí)，該藥物組合物中包含的促紅細(xì)胞生成素的濃度，是在跨越內(nèi)皮細(xì)胞屏障后能夠?qū)Υ偌t細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞施加理想的效果的濃度。能與促紅細(xì)胞生成素受體相互作用并調(diào)節(jié)受體活性的分子，在此被稱為促紅細(xì)胞生成素或促紅細(xì)胞生成素受體的活性調(diào)節(jié)劑，此分子適用于本發(fā)明的范圍。如上所述，這些分子可以是，例如，促紅細(xì)胞生成素分子的天然存在形式，合成的或重組的形式，或者如這里所述的，是其它一些分子，它們除了調(diào)節(jié)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的活性外，可以不必以任何方式與促紅細(xì)胞生成素相似。促紅細(xì)胞生成素是一種糖蛋白激素，在人體中它具有約34kDa的分子量。其成熟的蛋白質(zhì)包含165個(gè)氨基酸，其糖基殘基構(gòu)成分子約40%的重量。適用于本發(fā)明實(shí)施的促紅細(xì)胞生成素形式，包括以下的人和其它哺乳動(dòng)物促紅細(xì)胞生成素相關(guān)分子的天然存在的、合成的和重組的形式促紅細(xì)胞生成素、脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素、去糖基化促紅細(xì)胞生成素、促紅細(xì)胞生成素類似物、促紅細(xì)胞生成素模擬物、促紅細(xì)胞生成素片斷、雜交的促紅細(xì)胞生成素分子、促紅細(xì)胞生成素受體結(jié)合分子、促紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑、腎促紅細(xì)胞生成素、腦促紅細(xì)胞生成素、其寡聚物和多聚物、其突變體及其同源物。此外，適用于本發(fā)明實(shí)施的促紅細(xì)胞生成素形式還包括表現(xiàn)出功能等價(jià)的基因產(chǎn)物的蛋白質(zhì)。這種等價(jià)的促紅細(xì)胞生成素的基因產(chǎn)物包括突變促紅細(xì)胞生成素，其可以包含缺失，包括內(nèi)部缺失，添加， 包括產(chǎn)生融合蛋白的添加，或者是此氨基酸序列中和/或其附近的氨基酸殘基的保守性取代，但是它導(dǎo)致“沉默”的改變，其中該改變可產(chǎn)生功能性等價(jià)的促紅細(xì)胞生成素。這樣的氨基酸取代可以在所涉及殘基的極性、電荷、可溶性、疏水性、親水性和/或兩親性性質(zhì)相似性的基礎(chǔ)上進(jìn)行。例如，非極性(疏水性)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、 脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸；極性電中性氨基酸包括甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；正電性(堿性)氨基酸包括精氨酸、賴氨酸和組氨酸；以及負(fù)電性(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。按另一種方式，非保守性氨基酸取代，以及較大的插入和缺失可用來(lái)產(chǎn)生功能改變的促紅細(xì)胞生成素突變體。這樣的突變體可用來(lái)按需要的方式改變促紅細(xì)胞生成素的性質(zhì)。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，適用于本發(fā)明實(shí)施的促紅細(xì)胞生成素可以是這樣一種突變的促紅細(xì)胞生成素，此突變體在影響受體結(jié)合的促紅細(xì)胞生成素的四個(gè)功能域內(nèi)改變了一個(gè)或多個(gè)氨基酸=VLQRY和/或TKVNFYAW和/ 或SGLRSLTTL和/或SNFLRG。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用在其分子周圍區(qū)域內(nèi)包含突變的促紅細(xì)胞生成素這種突變影響此分子的動(dòng)力學(xué)或受體結(jié)合性質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“促紅細(xì)胞生成素”和“一種促紅細(xì)胞生成素”可以可交換地或結(jié)合地使用，而各種類似物、片斷、雜交分子、激動(dòng)劑、突變體以及上述的其它形式將這些變異體包括在促紅細(xì)胞生成素的糖基化的范圍和部位之內(nèi)。包括天然的、去糖基化的、脫唾液酸的以及其它部分糖基化的促紅細(xì)胞生成素形式。這些變異體的非限制性的例子被披露于Tsuda等， 1990，歐洲生物化學(xué)雜志188 :405-411，在此引入作為參考。細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)、植物、哺乳動(dòng)物，包括人。此外，多種宿主系統(tǒng)可用于表達(dá)和生產(chǎn)重組促紅細(xì)胞生成素，包括但不限于細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)、植物和哺乳動(dòng)物，包括人的細(xì)胞系統(tǒng)。例如，在細(xì)菌中生產(chǎn)的重組促紅細(xì)胞生成素沒(méi)有糖基化或唾液酸化產(chǎn)物，可用于生產(chǎn)促紅細(xì)胞生成素的非糖基化形式。另一方面，重組促紅細(xì)胞生成素可在其它進(jìn)行糖基化的系統(tǒng)中生產(chǎn)，例如植物中，還包括人的細(xì)胞。如上所述，本發(fā)明包括能夠?qū)Υ偌t細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞施加積極活性的任何以及所有的促紅細(xì)胞生成素受體活性調(diào)節(jié)劑分子，而不管該分子與促紅細(xì)胞生成素的任何結(jié)構(gòu)關(guān)系。此外，促紅細(xì)胞生成素本身可被修飾以使其活性適合于某一特定的組織或幾種組織。幾種非限制性策略，可被實(shí)施來(lái)獲得這種需要的組織特異性。包括縮短循環(huán)半衰期從而減少促紅細(xì)胞生成素可與紅細(xì)胞前體相互作用時(shí)間的修飾，或者修飾促紅細(xì)胞生成素分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)。降低循環(huán)半衰期的一種方法是去除或者修飾糖基化部分，促紅細(xì)胞生成素有三個(gè)N-連接的和一個(gè)0-連接的糖基化部分。這種糖基化促紅細(xì)胞生成素變異體可通過(guò)許多方式產(chǎn)生。例如，終止糖鏈末端的唾液酸，可通過(guò)作用于連接唾液酸與糖鏈的化學(xué)鍵的特異性唾液酸酶而除去。另外，糖基化結(jié)構(gòu)可通過(guò)使用裂解特定鍵的其它酶以不同的方式被除去。修飾一級(jí)結(jié)構(gòu)的技術(shù)有很多種，包括取代特定的氨基酸的，氨基酸的化學(xué)修飾， 或者加入干擾促紅細(xì)胞生成素與其任何受體相互作用的其它結(jié)構(gòu)。促紅細(xì)胞生成素這些形式的用途完全包括在本發(fā)明內(nèi)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的非促紅細(xì)胞生成的促紅細(xì)胞生成素的半衰期與天然促紅細(xì)胞生成素相比縮短了約90%。這些分子中的一些將仍然在其它組織或器官中模擬促紅細(xì)胞生成素本身的作用。 例如，包含天然促紅細(xì)胞生成素的31-47氨基酸序列的17-聚體，對(duì)于促紅細(xì)胞生成是失活的，但是在體外對(duì)神經(jīng)細(xì)胞是完全有活性的(C卿ana&0，Brien, 1998 :Int. J. Mo 1. Med. 1 235-41)。而且，有望適用于在此所述用途的衍生的促紅細(xì)胞生成素分子可通過(guò)如下方法產(chǎn)生胍基化、脒基化、氨甲?；?氨基甲?；?、三硝基苯基化、乙酰化、琥珀?；?、硝化，或者修飾精氨酸、賴氨酸、酪氨酸、色氨酸或半胱氨酸殘基或者羧基，在其它方法中，例如借助于分子生物學(xué)技術(shù)有限的蛋白質(zhì)水解、除去氨基，和/或誘變?nèi)〈彼帷①嚢彼?、酪氨酸?色氨酸或半胱氨酸殘基，以便產(chǎn)生對(duì)特定的器官和組織保持足夠水平的活性，但對(duì)其它器官和組織如紅細(xì)胞無(wú)活性的促紅細(xì)胞生成素，(例如&itake等；1990，Biochim. Biophys. Actal038 :125-9 ；在此全文引入作為參考)。如下所述的一個(gè)非限制性的例子是，通過(guò)與乙二醛如苯基乙二醛反應(yīng)來(lái)修飾促紅細(xì)胞生成素的精氨酸殘基(根據(jù)Takahashi，1977， J. Biochem. 81 :395-402的方案)。如下面可見(jiàn)，這種促紅細(xì)胞生成素分子完全保留了其親神經(jīng)性效應(yīng)。這種促紅細(xì)胞生成素分子被全部包括在所述的各種用途和組合物中。在這里提供了合成和重組的分子，例如腦促紅細(xì)胞生成素和腎促紅細(xì)胞生成素、 重組的哺乳動(dòng)物促紅細(xì)胞生成素形式，以及其天然存在的、腫瘤衍生的和重組的異構(gòu)型，例如重組表達(dá)的分子和那些以同源重組制備的分子。而且，本發(fā)明還包括含有結(jié)合促紅細(xì)胞生成素受體肽的分子，以及擁有促紅細(xì)胞生成素部分或全部結(jié)構(gòu)和/或生物性質(zhì)的重組構(gòu)建體或其它分子，包括促紅細(xì)胞生成素或其片斷的片斷和多聚體。這里的促紅細(xì)胞生成素包括具有改變的促紅細(xì)胞生成素受體結(jié)合活性的分子，優(yōu)選具有增強(qiáng)的受體親和力，尤其是與增強(qiáng)跨越內(nèi)皮細(xì)胞屏障有關(guān)的能力。含有增加或減少的糖基化位點(diǎn)數(shù)量的分子的突變體包括在內(nèi)。如上所述，術(shù)語(yǔ)“促紅細(xì)胞生成素”和“模擬物”及其它術(shù)語(yǔ)在此替換地使用， 是指與促紅細(xì)胞生成素有關(guān)的促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞保護(hù)和增強(qiáng)的分子，以及能夠跨越內(nèi)皮細(xì)胞屏障的分子。而且，這里還包括由轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)的分子。應(yīng)該指出，這里包括的促紅細(xì)胞生成素分子不必在結(jié)構(gòu)上或者以任何其它方式與促紅細(xì)胞生成素相似，只要具有與促紅細(xì)胞生成素受體相互作用或調(diào)節(jié)促紅細(xì)胞生成素受體活性，或者激活促紅細(xì)胞生成素活化的信號(hào)級(jí)聯(lián)的能力，如這里所述的。作為非限制性的例子，適用于本發(fā)明實(shí)施的促紅細(xì)胞生成素形式包括促紅細(xì)胞生成素突變體，例如它在羧基末端具有改變的氨基酸，被披露于美國(guó)專利5，457，089和美國(guó)專利4，835，260 ；每個(gè)分子帶有不同數(shù)量唾液酸殘基的脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素和促紅細(xì)胞生成素異構(gòu)型，例如披露于美國(guó)專利5，856，298的；還有披露于美國(guó)專利4，703，008的多肽；披露于美國(guó)專利5，767，078的激動(dòng)劑；如披露于美國(guó)專利5，773，569和5，830，851的結(jié)合于促紅細(xì)胞生成素受體的肽；如披露于美國(guó)專利5，835，382的激活促紅細(xì)胞生成素受體的小分子模擬物；以及披露于WO 9505465，W09718318和W09818^6的促紅細(xì)胞生成素相似物。所有上述弓I證在此被弓丨入達(dá)到的程度使這些公開(kāi)內(nèi)容運(yùn)用于本發(fā)明制備這些類型促紅細(xì)胞生成素的各種替換的形式或方法。促紅細(xì)胞生成素可從商業(yè)渠道獲得，例如，使用PR0CRIT商標(biāo)的可從Ortho Biotech Inc.，Raritan, NJ 獲得，以及使用 EPOGEN 商標(biāo)的可從 Amgen，Inc.，Thousand Oaks, CA 獲得。促紅細(xì)胞生成素和類促紅細(xì)胞生成素分子的活性(以活性單位表示)傳統(tǒng)上被定義為其在嚙齒動(dòng)物模型中刺激紅細(xì)胞生成的效力(這是由促紅細(xì)胞生成素的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)衍生的)。常規(guī)促紅細(xì)胞生成素(分子量約34，000)的一個(gè)單位(U)是大約8ng蛋白(Img蛋白是約125，000U)。然而，由于促紅細(xì)胞生成作用的效果在這里對(duì)所期望的活性來(lái)說(shuō)是次要的，而且不一定是本發(fā)明某些促紅細(xì)胞生成素的可檢測(cè)特性，因此基于促紅細(xì)胞生成活性的活性定義是不適合的。這樣，如在這里使用的，促紅細(xì)胞生成素或促紅細(xì)胞生成素相關(guān)分子的活性單位，被定義為在神經(jīng)或其它促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞體系中引發(fā)出同樣的活性所需的蛋白的量，如在同樣的體系中由WHO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的促紅細(xì)胞生成素所引發(fā)的。按照這里的指導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易確定非促紅細(xì)胞生成的促紅細(xì)胞生成素或相關(guān)分子的活性單位。為對(duì)適用于這里的上述促紅細(xì)胞生成素的修飾作進(jìn)一步闡述，下面的論述將擴(kuò)展到本發(fā)明的各種促紅細(xì)胞生成素。本發(fā)明的促紅細(xì)胞生成素可以至少?zèng)]有唾液酸部分，被稱為脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素。優(yōu)選地，本發(fā)明的促紅細(xì)胞生成素是人脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的促紅細(xì)胞生成素可以至少有1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12或13個(gè)唾液酸殘基。它可通過(guò)使用唾液酸酶使促紅細(xì)胞生成素脫唾液酸來(lái)制備，例如在來(lái)自ProZyme Inc.，San Leandro, California的唾液酸酶A的廠商包裝中所描述的。典型地，PR0ZYME GLYC0PR0 測(cè)序級(jí)SIALYDASE A (N-乙酰神經(jīng)酰胺糖水解酶，EC 3. 2. 1. 18)被用來(lái)從糖和糖蛋白復(fù)合體如促紅細(xì)胞生成素中切除所有非還原態(tài)的末端唾液酸殘基。它也將如此切除分枝的唾液酸(連接到內(nèi)部殘基的)。唾液酸酶是從ArthrcAacter ureafaciens的克隆中分離出的。促紅細(xì)胞生成素可具有至少降低數(shù)量的N-連接糖基。要除去N-連接的糖基，可用胼處理促紅細(xì)胞生成素，例如按照披露于Hermentin等，1996，Glycobiology 6(2) :217-30 的方法進(jìn)行。如上所述，促紅細(xì)胞生成素具有三個(gè)N-連接的糖基部分；本發(fā)明包括那些具有兩個(gè)、一個(gè)或沒(méi)有N-連接糖基的促紅細(xì)胞生成素。通過(guò)使用至少一種糖苷酶處理天然促紅細(xì)胞生成素，本發(fā)明的促紅細(xì)胞生成素可以具有至少降低的糖基含量。例如，可以按照Chen和Evangelista，1998， Electrophoresis 19(15) J639-44 中的方法進(jìn)行。此外，按照描述于 Hokke 等，1995，Eur. J. Biochem. 228(3) :981-1008中的方法，可達(dá)到除去O-連接糖基的目的。通過(guò)在非哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)重組促紅細(xì)胞生成素，促紅細(xì)胞生成素分子的糖基部分可以具有至少一種非哺乳動(dòng)物糖基化模式。優(yōu)選地，促紅細(xì)胞生成素是在昆蟲(chóng)或植物細(xì)胞中被表達(dá)。作為非限制性的例子，使用腺病毒表達(dá)體系在昆蟲(chóng)細(xì)胞中表達(dá)促紅細(xì)胞生成素，可以按照如下文獻(xiàn)的方法進(jìn)行Quelle等，1989，Blood 74(2) :652_657。另一個(gè)方法披露于美國(guó)專利5，637，477。在植物體系中的表達(dá)可以按照如下文獻(xiàn)的方法進(jìn)行 Matsumoto等，1993，生物科學(xué)、生物技術(shù)、生物化學(xué)57 (8) :1249_1252。另一方面，在細(xì)菌中的表達(dá)將產(chǎn)生非糖基化形式的促紅細(xì)胞生成素。這些僅僅是適用于產(chǎn)生本發(fā)明促紅細(xì)胞生成素的例證性方法，并沒(méi)有任何方式的限制。本發(fā)明的促紅細(xì)胞生成素可以具有至少一個(gè)或多個(gè)氧化糖基，這些氧化糖基也可被化學(xué)還原。例如，促紅細(xì)胞生成素可以是高碘酸氧化的促紅細(xì)胞生成素；此高碘酸氧化的促紅細(xì)胞生成素也可用硼氫化鹽例如硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉進(jìn)行化學(xué)還原。促紅細(xì)胞生成素的高碘酸氧化例如可按照如下文獻(xiàn)中所述的方法進(jìn)行=Linsley等，1994， Anal. Biochem. 219(2) :207-17.高碘酸氧化后的化學(xué)還原可按照如下文獻(xiàn)中的方法進(jìn)行 Tonelli 禾口 Meints，1978，J.Supramo1. Struct. 8(1) :67_78。用于上述用途的促紅細(xì)胞生成素可以具有至少一個(gè)或多個(gè)修飾的精氨酸殘基。例如，修飾的促紅細(xì)胞生成素可以在一個(gè)或多個(gè)精氨酸殘基上包含R-乙二醛部分，在此R可以是芳基、雜環(huán)芳基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、或環(huán)烷基、或α-脫氧糖酮基。如這里使用的， 術(shù)語(yǔ)低級(jí)“烷基”意指直鏈或支鏈的飽和脂肪族烴基團(tuán)，優(yōu)選含有1-6個(gè)碳原子。這種基團(tuán)的代表是甲基、乙基、異丙基、異丁基、丁基、戊基、和己基等。術(shù)語(yǔ)“烷氧基”意指如上述定義的低級(jí)烷基通過(guò)氧原子與分子的其余部分相連。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、和異丙氧基等。術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指具有三個(gè)到約8個(gè)原子的環(huán)狀烷基，包括例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、和環(huán)己基等。術(shù)語(yǔ)芳基是指苯基和萘基。術(shù)語(yǔ)雜環(huán)芳基是指包含4-10個(gè)環(huán)原子和1-3個(gè)雜原子的雜環(huán)基，雜原子選自氧、氮和硫。例子包括但不限于異唑基、苯基異唑基、呋喃基、嘧啶基、喹啉基、四氫喹啉基、吡啶基、咪唑基、吡咯烷基、1，2，4-三唑基、噻唑基和噻吩基等。R基團(tuán)可被取代，例如3-脫氧葡糖醛酮的4-三羥基丁基。R-乙二醛化合物的典型例子是乙二醛、甲基乙二醛、3-脫氧葡糖醛酮和苯基乙二醛。優(yōu)選的R-乙二醛化合物是甲基乙二醛或苯基乙二醛。使用苯基乙二醛進(jìn)行這種修飾的例證性的方法可在如下文獻(xiàn)中找至Ij :fferber 等，1975，Isr. J. Med. Sci. 11(11) 1169-70。在進(jìn)一步的實(shí)例中，至少一個(gè)精氨酸殘基通過(guò)與鄰二酮例如2，3-丁二酮或環(huán)己二酮反應(yīng)而被修飾，優(yōu)選地在大約50毫摩爾硼酸鹽緩沖液pH 8-9中進(jìn)行。使用2，3_ 丁二酮的后一種修飾程序可按照如下文獻(xiàn)進(jìn)行Riordan等，1973，Biochemistry 12(20) 3915-3923 ；以及使用環(huán)己二酮的程序可按照如下文獻(xiàn)進(jìn)行Jatthy等，1975，J.Biol. Chem. 250(2) 565-9。本發(fā)明的促紅細(xì)胞生成素可包含至少一個(gè)或多個(gè)修飾的賴氨酸殘基或者對(duì)促紅細(xì)胞生成素分子N-末端氨基的修飾，象來(lái)自賴氨酸殘基與氨基修飾試劑反應(yīng)的修飾。在另一個(gè)實(shí)施方案中，賴氨酸殘基可通過(guò)與乙二醛衍生物反應(yīng)而被修飾，例如與乙二醛、甲基乙二醛和3-脫氧葡糖醛酮反應(yīng)而形成α -羧烷基衍生物。與乙二醛反應(yīng)形成羧甲基賴氨酸的例子是在如下文獻(xiàn)中:Glomb 和 Monnier, 1995，J. Biol. Chem. 270 (17) 10017-26，或者使用甲基乙二醛形成(1-羧乙基)賴氨酸的例子是在如下文獻(xiàn)中Degenhardt等，1998，Cell. Mol. Biol. (Noisy-le-grand)44(7) :1139_45。修飾的賴氨酸殘基可進(jìn)一步被化學(xué)還原。 例如，此促紅細(xì)胞生成素可經(jīng)過(guò)賴氨酸基團(tuán)被生物素化，例如根據(jù)實(shí)施例5所述的方法，其中先使D-生物素-ε -氨基己酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯與促紅細(xì)胞生成素反應(yīng)，隨后在 Centricon 10柱上通過(guò)凝膠過(guò)濾除去未反應(yīng)的生物素，其披露于=Wojchowski和Caslake， 1989, Blood 74(3) :952_8。在本文中，作者使用了三種不同的方法生物素化促紅細(xì)胞生成素。其中任何一種方法都可用于制備此處使用的促紅細(xì)胞生成素。生物素可以被加入到 (1)唾液酸部分，( 羧基部分，( 氨基部分。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，賴氨酸可以與醛或還原糖反應(yīng)形成亞胺，可通過(guò)例如以氰基硼氫化鈉還原形成N-烷基賴氨酸如葡糖基賴氨酸而使其穩(wěn)定化，或者在還原糖的情況下，可以通過(guò)Amadori或Heyns重排形成α-脫氧-α-氨基糖例如α-脫氧-α-果糖賴氨酸而被穩(wěn)定。作為例子，通過(guò)與0.5Μ葡萄糖在磷酸鈉緩沖液pH 7. 4下保溫60天制備果糖賴氨酸修飾的蛋白質(zhì)的方法披露于=Makita等，1992，J. Biol. Chem. 267 5133-5138。在另一個(gè)實(shí)施例中，賴氨酸基團(tuán)可被氨甲?；缤ㄟ^(guò)與氰酸鹽反應(yīng)，或者與烷基或芳基異氰酸鹽或異硫氰酸鹽反應(yīng)被烷基或芳基氨甲?；蛄虬奔柞；蛘咚杀换钚酝榛蚍蓟人嵫苌秕；?，如通過(guò)與乙酐或琥珀酸酐或鄰苯二甲酸酐反應(yīng)。范例是用4-硫代苯基異硫氰酸鹽或用乙酐修飾賴氨酸基團(tuán)，兩者都如下列文獻(xiàn)中所述Gao等， 1994，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)91 :12027-30.賴氨酸基團(tuán)也可通過(guò)與三硝基苯磺酸或者優(yōu)選其鹽反應(yīng)而被三硝基苯基修飾。這種方法在下面實(shí)施例5中被描述。促紅細(xì)胞生成素的至少一個(gè)酪氨酸殘基可通過(guò)親電子試劑如通過(guò)硝化或碘化在芳環(huán)位置被修飾。作為非限制性的例子，可使促紅細(xì)胞生成素與四硝基甲烷反應(yīng)(Nestler 等，1985，J. Biol. Chem. 260(12) :7316-21 ；)或者如實(shí)施例5描述的被碘化。促紅細(xì)胞生成素的至少一個(gè)天冬氨酸或谷氨酸殘基可通過(guò)與碳化二亞胺反應(yīng)，然后與胺，例如但不限于甘氨酰胺反應(yīng)而被修飾。這種修飾的例子可在實(shí)施例5中找到。在另一個(gè)實(shí)施例中，促紅細(xì)胞生成素的色氨酸殘基可被修飾，例如通過(guò)與η-溴琥珀酰亞胺或η-氯琥珀酰亞胺反應(yīng)，按照例如如下文獻(xiàn)中所述方法進(jìn)行Josse等，ChemBiol Interact 1999. 5. 14 ;119_120。在另一個(gè)實(shí)施例中，可通過(guò)去除至少一個(gè)氨基，來(lái)制備促紅細(xì)胞生成素分子，例如通過(guò)與茚三酮反應(yīng)，隨后通過(guò)與硼氫化物反應(yīng)還原得到的羰基而獲得。在更進(jìn)一步的實(shí)施例中，提供一種促紅細(xì)胞生成素，在該促紅細(xì)胞生成素分子中具有打開(kāi)的至少一個(gè)胱氨酸鍵，是通過(guò)與還原劑例如二硫蘇糖醇反應(yīng)，接著使得到的巰基與碘乙酰胺、碘乙酸或另一個(gè)親電子試劑反應(yīng)以防止二硫鍵的重新形成。提供了一種具有至少一個(gè)取代的促紅細(xì)胞生成素，使用分子生物學(xué)技術(shù)，以許多氨基酸中任何一個(gè)，例如亮氨酸至少一次取代促紅細(xì)胞生成素的至少一個(gè)賴氨酸、精氨酸、 色氨酸、酪氨酸或半胱氨酸殘基。修飾的促紅細(xì)胞生成素可通過(guò)對(duì)促紅細(xì)胞生成素進(jìn)行有限的化學(xué)蛋白水解而制備，該蛋白水解對(duì)準(zhǔn)特定的殘基，例如在色氨酸殘基后裂解。在此將這樣得到的促紅細(xì)胞生成素片斷包括在內(nèi)。如上所述，適用于本發(fā)明目的的促紅細(xì)胞生成素可具有至少一個(gè)前述修飾，但是也可以具有上述修飾的不止一個(gè)。作為具有對(duì)分子糖基部分的一個(gè)修飾和對(duì)氨基酸部分的一個(gè)修飾的被修飾促紅細(xì)胞生成素的一個(gè)例子，修飾的促紅細(xì)胞生成素可以是脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素，并具有其賴氨酸殘基被生物素化或氨甲?；?。這樣，用于在此所述用途的各種促紅細(xì)胞生成素分子以及包含它們的藥物組合物都包括在內(nèi)。這種促紅細(xì)胞生成素分子包括但不限于脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素、N-去糖基化促紅細(xì)胞生成素、0-去糖基化促紅細(xì)胞生成素、具有低糖基含量的促紅細(xì)胞生成素、具有改變的糖基化模式的促紅細(xì)胞生成素、具有被氧化然后被還原的糖基的促紅細(xì)胞生成素、 芳基乙二醛修飾的促紅細(xì)胞生成素、烷基乙二醛修飾的促紅細(xì)胞生成素、2，3-丁二酮修飾的促紅細(xì)胞生成素、環(huán)己二酮修飾的促紅細(xì)胞生成素、生物素化的促紅細(xì)胞生成素、N-烷基化-賴氨酰-促紅細(xì)胞生成素、葡糖基賴氨酸促紅細(xì)胞生成素、α -脫氧-α -果糖賴氨酸促紅細(xì)胞生成素、氨甲?；偌t細(xì)胞生成素、乙?；偌t細(xì)胞生成素、琥珀?；偌t細(xì)胞生成素、α -羧烷基促紅細(xì)胞生成素、硝化促紅細(xì)胞生成素、碘化促紅細(xì)胞生成素，根據(jù)此處的講述還可列舉一些代表性的但非限制性的例子。優(yōu)選的是基于人促紅細(xì)胞生成素的上述修飾形式。此外，上述促紅細(xì)胞生成素的某些是新的，本發(fā)明涉及這些化合物以及包含它們的藥物組合物。作為非限制性的例子，這些新的促紅細(xì)胞生成素包括高碘酸氧化的促紅細(xì)胞生成素、葡糖基賴氨酸促紅細(xì)胞生成素、果糖賴氨酸促紅細(xì)胞生成素、3-脫氧葡糖醛酮促紅細(xì)胞生成素以及氨甲?；拿撏僖核岽偌t細(xì)胞生成素。各種宿主表達(dá)載體系統(tǒng)可用于生產(chǎn)本發(fā)明的促紅細(xì)胞生成素和促紅細(xì)胞生成素相關(guān)分子。這些宿主表達(dá)系統(tǒng)是一種媒介物，通過(guò)它可產(chǎn)生感興趣的促紅細(xì)胞生成素，并隨后被純化，但也是一種細(xì)胞，當(dāng)用合適的核苷酸編碼序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染時(shí)，它們可在原位表現(xiàn)出修飾的促紅細(xì)胞生成素。這些體系包括但不限于細(xì)菌、昆蟲(chóng)、植物、哺乳動(dòng)物包括人的宿主系統(tǒng)，例如但不限于，用包含修飾的促紅細(xì)胞生成素產(chǎn)物編碼序列的重組病毒表達(dá)載體 (例如腺病毒)感染的昆蟲(chóng)細(xì)胞系統(tǒng)；用包含促紅細(xì)胞生成素相關(guān)分子編碼序列的重組病毒表達(dá)載體(例如花椰菜花葉病毒，CaMV;煙草花葉病毒，TMV)感染的或者用包含此序列的重組質(zhì)粒表達(dá)載體(例如Ti質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞系統(tǒng)；或者是它們哺乳動(dòng)物細(xì)胞體系統(tǒng)，包括人細(xì)胞體系(例如HT1080，COS，CHO, BHK, 293, 3T3)。具有包含來(lái)源于哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組的啟動(dòng)子(例如金屬硫蛋白啟動(dòng)子)或來(lái)自哺乳動(dòng)物病毒的啟動(dòng)子(例如腺病毒晚期啟動(dòng)子；牛痘病毒7. 5K啟動(dòng)子)的重組表達(dá)構(gòu)建體。此外，可以選擇調(diào)節(jié)插入序列的表達(dá)的，或者以所期望的特定方式修飾和加工基因產(chǎn)物的宿主細(xì)胞株。對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)物的這種修飾(如糖基化)和加工(如裂解)對(duì)于蛋白質(zhì)功能可能是重要的。不同宿主細(xì)胞具有特征性的和特定的機(jī)制對(duì)蛋白質(zhì)和基因產(chǎn)物進(jìn)行翻譯后加工和修飾。可以選擇合適的細(xì)胞系或宿主系統(tǒng)來(lái)確保對(duì)被表達(dá)的外源蛋白質(zhì)的正確修飾和加工。為此目的，可以使用真核宿主細(xì)胞，它具有對(duì)基因產(chǎn)物的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物、糖基化和磷酸化作適當(dāng)加工的細(xì)胞機(jī)器。這種哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，包括人宿主細(xì)胞，其包括但不限于 HT1080、CHO、VERO、BHK、HeLa、COS、MDCK、293、3T3 和 WI38。為長(zhǎng)期、高產(chǎn)量地產(chǎn)生重組蛋白，優(yōu)選穩(wěn)定的表達(dá)。例如，可以基因工程設(shè)計(jì)穩(wěn)定表達(dá)促紅細(xì)胞生成素相關(guān)分子基因產(chǎn)物的細(xì)胞系。不使用包含病毒復(fù)制起點(diǎn)的表達(dá)載體， 而可以使用被合適的表達(dá)控制成分(例如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、序列、轉(zhuǎn)錄終止子、聚腺苷酸化位點(diǎn)等)以及可選擇性標(biāo)記控制的DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。在引入外源DNA后，可使基因工程細(xì)胞在富養(yǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)1-2天，然后轉(zhuǎn)移到選擇培養(yǎng)基中。重組質(zhì)粒中的選擇性標(biāo)記賦予選擇抗性，允許細(xì)胞將此質(zhì)粒穩(wěn)定地整合到它們的染色體中，并生長(zhǎng)形成轉(zhuǎn)化灶，轉(zhuǎn)化灶本身又可被克隆并擴(kuò)展為細(xì)胞系。這種方法可有利地用于工程設(shè)計(jì)表達(dá)促紅細(xì)胞生成素相關(guān)分子基因產(chǎn)物的細(xì)胞系。這樣工程設(shè)計(jì)的細(xì)胞系可能特別適合用于篩選和估計(jì)影響促紅細(xì)胞生成素相關(guān)分子基因產(chǎn)物的內(nèi)源活性的化合物。按另一種方式，通過(guò)將異源DNA調(diào)控成分插入到穩(wěn)定的細(xì)胞系或克隆微生物的基因組中，以致使被插入的調(diào)控成分與內(nèi)源性促紅細(xì)胞生成素基因形成可操作連接，可修飾細(xì)胞系或微生物中內(nèi)源性促紅細(xì)胞生成素基因的表達(dá)特征。例如，一種在正常情況下是“轉(zhuǎn)錄沉默”的內(nèi)源促紅細(xì)胞生成素基因，即在正常情況下在某一細(xì)胞系中不表達(dá)的或者僅以非常低水平表達(dá)的促紅細(xì)胞生成素基因，可以通過(guò)插入能夠增強(qiáng)正常表達(dá)的基因產(chǎn)物在那種細(xì)胞系或微生物中表達(dá)的調(diào)控成分而被激活?？闪硪环矫?，轉(zhuǎn)錄沉默的內(nèi)源促紅細(xì)胞生成素基因，可通過(guò)插入可在交叉的細(xì)胞類型起作用的任一調(diào)控成分而被激活?？蓪愒葱哉{(diào)控成分插入到穩(wěn)定的細(xì)胞系或克隆的微生物中，使它與內(nèi)源性促紅細(xì)胞生成素基因可操作地連接，是使用例如定向同源重組技術(shù)，這種技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，披露于例如授權(quán)給hstitut Pasteur的法國(guó)專利沈46438，給Chappel的美國(guó)專利4，215，051 ；給Sierwin等人的美國(guó)專利5，578,461 ；以及由klden等人提出的國(guó)際申請(qǐng)PCT/US92/09627 (W093/09222)；和由Skoultchi等人提出的國(guó)際申請(qǐng)PCT/ US90/06436 (W091/06667)，在此都全文被引入作為參考。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，唾液酸殘基不足或者完全缺乏唾液酸殘基的促紅細(xì)胞生成素相關(guān)分子可在包括人細(xì)胞的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中生產(chǎn)。這種細(xì)胞可被工程設(shè)計(jì)為加唾液酸的酶活性不足或缺乏，如β-半乳糖苷-α-2，3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶(“α-2，3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶”)和β-半乳糖苷-α-2，6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶(“α _2，6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶”)的活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用的哺乳動(dòng)物細(xì)胞缺失α-2，3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因和/或α-2，6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因中的兩者之一或者全部。這樣的缺失可使用本領(lǐng)域熟知的基因敲除技術(shù)構(gòu)建。在另一個(gè)實(shí)施方案中，二氫葉酸還原酶OHFR)缺乏的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞，被用作產(chǎn)生重組促紅細(xì)胞生成素相關(guān)分子的宿主細(xì)胞。CHO細(xì)胞不表達(dá)α-2，6_唾液酸轉(zhuǎn)移酶并因此不以2，6鍵連接加唾液酸到這些細(xì)胞中產(chǎn)生的糖蛋白N-連接的寡糖上。因此，在CHO 細(xì)胞中生產(chǎn)的重組蛋白缺少以2，6鍵連接了半乳糖的唾液酸(Msaki等，(1987) ；Takeuchi ，同 ± ；Mutsaers 等，Eur. J. Biochem. 156,651 (1986) ；Takeuchi 等，J. Chromotgr. 400, 207 (1987))。在一個(gè)實(shí)施方案中，為制備用于產(chǎn)生脫唾液酸-促紅細(xì)胞生成素的宿主細(xì)胞， 使CHO細(xì)胞中編碼α -2，3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶的基因缺失。這種α -2，3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶敲除的 CHO細(xì)胞完全缺少唾液酸轉(zhuǎn)移酶活性，并因此適用于脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素的重組表達(dá)和生產(chǎn)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素可通過(guò)干擾唾液酸轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入高爾基體而產(chǎn)生(例如Eckhardt等，1998，J. Biol. Chem. 273 :20189-95)。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法(如Oelmann等，2001，J. Biol. Chem. 276 =26291-300)，可對(duì)核苷酸糖CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運(yùn)子實(shí)施誘變，以使產(chǎn)生中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞的突變體。這些細(xì)胞不能添加唾液酸殘基到糖蛋白如促紅細(xì)胞生成素上，僅產(chǎn)生脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素。產(chǎn)生促紅細(xì)胞生成素的轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞也產(chǎn)生胞質(zhì)唾液酸酶，如果它滲漏到培養(yǎng)基中，將高效地降解唾液酸促紅細(xì)胞生成素(例如Gramer等，1995 Biotechnology 13:692-698)。使用本領(lǐng)域熟知的方法(例如從如下文獻(xiàn)提供的信息=Ferrari等，1994，Glycobiology 4 :367-373)，細(xì)胞系可被轉(zhuǎn)染、突變，或者相反使它以構(gòu)成的方式產(chǎn)生唾液酸酶。按這種方式，可以在制備脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素的過(guò)程中生產(chǎn)脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素。在本發(fā)明一個(gè)方面的實(shí)施中，包含促紅細(xì)胞生成素的上述藥物組合物可以以任何途徑施加給哺乳動(dòng)物，在血管系統(tǒng)中提供足夠水平的促紅細(xì)胞生成素使其可能轉(zhuǎn)運(yùn)跨越內(nèi)皮細(xì)胞屏障，并對(duì)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞提供有利的效果。當(dāng)被使用于對(duì)組織或器官輸液的目的時(shí)，類似的結(jié)果是期望中的。在促紅細(xì)胞生成素用于對(duì)來(lái)自體內(nèi)組織輸液的例子中，此促紅細(xì)胞生成素可以是促紅細(xì)胞生成素的任何形式，如上述的促紅細(xì)胞生成素但不限于此，并可包括天然促紅細(xì)胞生成素，包括人促紅細(xì)胞生成素。在細(xì)胞或組織是非血管化的，和/或是通過(guò)用本發(fā)明的組合物浸浴細(xì)胞或組織給藥的例子中，該藥物組合物對(duì)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞提供有效的益劑量的促紅細(xì)胞生成素。促紅細(xì)胞生成素可轉(zhuǎn)運(yùn)跨越的內(nèi)皮細(xì)胞屏障，包括在哺乳動(dòng)物存在的緊密連接、穿孔連接、有窗孔連接以及任何其它類型的內(nèi)皮屏障。上述促紅細(xì)胞生成素通常適用于治療或預(yù)防性處理主要有神經(jīng)學(xué)或精神學(xué)癥狀的人中樞神經(jīng)系統(tǒng)或外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病，眼科疾病，心血管疾病，心肺疾病，呼吸疾病，腎、 泌尿和生殖疾病，胃腸疾病以及內(nèi)分泌和代謝異常。特別的，這樣的病癥和疾病包括缺氧狀態(tài)，其對(duì)易興奮組織有不利影響，例如在中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織、外周神經(jīng)系統(tǒng)組織或心組織或視網(wǎng)膜組織例如腦、心或視網(wǎng)膜/眼的易興奮組織。因此，本發(fā)明可用于治療或預(yù)防在各種條件和環(huán)境中由缺氧狀態(tài)導(dǎo)致的對(duì)易興奮組織的損傷。這樣的條件和環(huán)境的非限制性的例子提供在如下的表中。在防護(hù)按照本發(fā)明能治療的神經(jīng)組織病理狀態(tài)的例子中，這種病理狀態(tài)包括那些由神經(jīng)組織低氧導(dǎo)致的狀態(tài)。任何降低對(duì)神經(jīng)組織的供氧而導(dǎo)致的應(yīng)激反應(yīng)、損傷以及最終的神經(jīng)細(xì)胞死亡的狀態(tài)可借助本發(fā)明的方法治療。通常稱為缺氧和/或缺血的這些狀態(tài)源自或包括但不限于中風(fēng)、血管閉塞、出生前或出生后的供氧喪失、窒息、噎窒、溺水、一氧化碳中毒、吸入煙塵、創(chuàng)傷、包括外科手術(shù)和放射治療、昏厥、癲癇癥、低血糖癥、慢性梗阻性肺病、肺氣腫、成人呼吸窘迫癥、低血壓休克、敗血癥休克、過(guò)敏性休克、胰島素休克、鐮刀細(xì)胞病、心跳停止、節(jié)律障礙、氮麻醉以及由心肺旁路手術(shù)引起的神經(jīng)系統(tǒng)缺陷。在一個(gè)實(shí)施方案中，例如，可給予特定的EPO組合物來(lái)防止外科手術(shù)例如腫瘤切除術(shù)或動(dòng)脈瘤修復(fù)的過(guò)程中由傷害或組織損傷的風(fēng)險(xiǎn)引起的傷害或組織損傷。由低血糖癥引起的其它病理狀態(tài)包括胰島素服藥過(guò)量，也稱為醫(yī)源性胰島功能亢進(jìn)，胰島瘤，生長(zhǎng)激素缺乏，可的松過(guò)量，藥物服用過(guò)量以及某些腫瘤。這些病理狀態(tài)都是借助在此所述的方法能治療的。源于易興奮性神經(jīng)組織損傷的其它病理狀態(tài)包括發(fā)作障礙，例如癲癇癥、驚厥或慢性發(fā)作障礙。其它可治療的病征和疾病包括如中風(fēng)、多發(fā)性硬化、低血壓、心跳停止、阿爾茨海默氏病、帕金森病、大腦性麻痹、腦或脊髓創(chuàng)傷、AIDS癡呆、年齡相關(guān)的認(rèn)知功能喪失、 記憶喪失、肌萎縮性側(cè)索硬化、發(fā)作障礙、酒精中毒、視網(wǎng)膜缺血、青光眼引起的視神經(jīng)損傷，以及神經(jīng)喪失。本發(fā)明的特定組合物和方法可用于治療視網(wǎng)膜組織的病癥以及對(duì)它的傷害。這樣的病癥包括但不限于視網(wǎng)膜缺血、黃斑變性、視網(wǎng)膜脫落、色素性視網(wǎng)膜炎、動(dòng)脈硬化性視網(wǎng)膜病、高血壓性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、低血壓以及糖尿病性視網(wǎng)膜病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法和原理可用于保護(hù)或治療源自對(duì)易興奮組織的放射性損傷造成的損害。本發(fā)明方法的進(jìn)一步效用是治療神經(jīng)毒素中毒，例如軟骨藻酸貝中毒、神經(jīng)性山黧豆中毒以及關(guān)島(Guam)病、肌萎縮性側(cè)索硬化，以及帕金森氏病。如上所述，本發(fā)明也涉及一種方法，用于通過(guò)外周給予上述的促紅細(xì)胞生成素來(lái)增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中易興奮組織的功能。多種疾病和病癥，適合于用這種方法治療以及進(jìn)一步地，這種方法適用于在沒(méi)有任何病癥或疾病時(shí)增強(qiáng)智力功能。本發(fā)明的這些用途將在下面進(jìn)一步描述，并包括用于人類和非人類的哺乳動(dòng)物強(qiáng)化學(xué)習(xí)和訓(xùn)練。借助于本發(fā)明這方面的方法可治療的涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病癥和疾病，包括但不限于情感障礙、焦慮癥、壓抑、孤獨(dú)、注意力缺乏的機(jī)能亢進(jìn)性障礙以及認(rèn)知功能障礙。這些狀況可受益于神經(jīng)功能的增強(qiáng)。按照本發(fā)明的教條可治療的其它病癥包括睡眠障礙，例如， 睡眠呼吸暫停和旅行相關(guān)的障礙；蛛網(wǎng)膜下腔和動(dòng)脈瘤的出血，低血壓休克，震蕩性損傷， 敗血癥休克，過(guò)敏性休克以及各種腦炎和腦膜炎后遺癥，例如結(jié)締組織疾病相關(guān)的大腦炎如狼瘡。其它用途包括預(yù)防或保護(hù)免受神經(jīng)毒素的毒害，例如軟骨藻酸貝中毒、神經(jīng)性山黧豆中毒以及關(guān)島(Guam)病、肌萎縮性側(cè)索硬化，帕金森??；血栓或缺血損傷的后處理治療； 全腦輻射；鐮刀細(xì)胞病以及驚厥。用本發(fā)明的方法可治療的另一類病癥包括線粒體功能紊亂，遺傳性的或獲得性的，它是引起多種以神經(jīng)損傷和死亡為典型特征的神經(jīng)性疾病的原因。例如，賴氏疾病(亞急性腦髓壞死病)的特征在于漸進(jìn)性的視力喪失和腦髓壞死，它是由于神經(jīng)脫落和肌肉疾病造成。在這些情況下，缺陷的線粒體代謝無(wú)法提供足夠的高能量底物來(lái)給易興奮細(xì)胞的代謝添加燃料。促紅細(xì)胞生成素受體活性調(diào)節(jié)劑可優(yōu)化各種線粒體疾病中不足的功能。如上所述，缺氧狀態(tài)對(duì)易興奮組織有不利影響。易興奮組織包括但不限于中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織、 外周神經(jīng)系統(tǒng)組織和心臟組織。除了上述病癥外，本發(fā)明的方法還適用于治療吸入性中毒，例如一氧化碳和煙塵吸入、急性哮喘、成人呼吸窘迫癥，以及窒息和溺水。造成缺氧狀態(tài)或通過(guò)其它方式誘發(fā)易興奮性組織損傷的另一些病癥包括低血糖癥，它可能在胰島素用藥不適合或者具有產(chǎn)生胰島素的腫瘤(胰島瘤)時(shí)發(fā)生。被認(rèn)為是源自易興奮組織損傷的多種神經(jīng)精神性疾病可借助于本發(fā)明的方法治療。涉及神經(jīng)損傷的，以及通過(guò)本發(fā)明可對(duì)其提供治療的慢性病包括與中樞神經(jīng)系統(tǒng)和/ 或外周神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的疾病，如包括年齡相關(guān)的認(rèn)知功能喪失和老年性癡呆、慢性發(fā)作障礙、阿爾茨海默氏病、帕金森病、癡呆、記憶喪失、肌萎縮性側(cè)索硬化、多發(fā)性硬化、結(jié)節(jié)性腦硬化、威爾遜病、大腦性和漸進(jìn)性核上癱瘓、關(guān)島(Guam)病、Lewy身體癱瘓、朊蛋白病，例如海棉狀腦疾病，如傳染性海綿樣腦病、亨廷頓舞蹈病、肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良、遺傳性共濟(jì)失調(diào)或其它失調(diào)、以及圖雷綜合征、發(fā)作障礙如癲癇癥和慢性發(fā)作障礙、中風(fēng)、腦或脊髓創(chuàng)傷、 AIDS癡呆、酒精中毒、視網(wǎng)膜缺血、青光眼，自主功能障礙如高血壓和睡眠障礙，以及神經(jīng)精神性障礙包括但不限于精神分裂癥、精神分裂性障礙、注意力缺乏障礙、精神抑郁性障礙、 極度沮喪性障礙、狂躁、強(qiáng)迫性神經(jīng)失調(diào)、使用影響精神狀態(tài)藥物引起的障礙、焦慮、恐慌性障礙，以及單極和雙極情感障礙。其它的神經(jīng)精神性和神經(jīng)性退化性障礙包括，例如列舉在美國(guó)精神病學(xué)會(huì)的精神疾病診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(DSM)中的病癥，其最近的版本在此被整體引入作為參考。在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含促紅細(xì)胞生成素的重組的嵌合毒素分子可用于治療性轉(zhuǎn)移毒素來(lái)治療增殖性障礙，例如癌癥或者病毒病例如亞急性硬化性全腦炎。下面的表格列舉出了關(guān)于適合于用上述促紅細(xì)胞生成素治療的多種病癥和疾病的補(bǔ)充的例證性、非限制性適應(yīng)癥。
權(quán)利要求
1.用于保護(hù)、維持、增強(qiáng)或恢復(fù)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞、包含促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的組織或包含促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的器官的功能或存活力的藥物組合物，所述藥物組合物包含修飾的促紅細(xì)胞生成素和藥學(xué)上可接受的載體，所述修飾的促紅細(xì)胞生成素具有至少一種下面(i)_ (xvii)所列的修飾i)0、l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、12或 13 個(gè)唾液酸部分；ii)N-連接的糖基的數(shù)量降低或沒(méi)有N-連接的糖基；iii)0-連接的糖基的數(shù)量降低或沒(méi)有0-連接的糖基；iv)降低的糖基含量；ν)非哺乳動(dòng)物糖基化模式；vi)一個(gè)或多個(gè)氧化的糖基；vii)一個(gè)或多個(gè)氧化的糖基，此氧化的糖基也可被化學(xué)還原；viii)一個(gè)或多個(gè)修飾的精氨酸殘基；ix)一個(gè)或多個(gè)修飾的賴氨酸殘基；x)N-末端氨基的修飾；xi)一個(gè)或多個(gè)修飾的酪氨酸殘基；χ ) 一個(gè)或多個(gè)修飾的天冬氨酸或谷氨酸殘基；xiii)一個(gè)或多個(gè)修飾的色氨酸殘基；xiv)一個(gè)或多個(gè)氨基被除去；XV)打開(kāi)一個(gè)或多個(gè)胱氨酸鍵；xvi)取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸；或xvii)烷基化。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述修飾的促紅細(xì)胞生成素與天然促紅細(xì)胞生成素相比具有降低水平的促紅細(xì)胞生成活性。
3.權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其中用至少一種糖苷酶處理所述修飾的促紅細(xì)胞生成素，或其中所述修飾的促紅細(xì)胞生成素是脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素，優(yōu)選人脫唾液酸促紅細(xì)胞生成素。
4.權(quán)利要求1-3的任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述修飾的促紅細(xì)胞生成素的賴氨酸殘基被氨甲?；?。
5.權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞、包含促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的組織或包含促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的器官是肺、肝、腎、小腸、腎上腺皮質(zhì)、腎上腺髓質(zhì)、毛細(xì)血管、內(nèi)皮、睪丸、卵巢、胰腺、骨、皮膚、子宮內(nèi)膜、腦、神經(jīng)、神經(jīng)元、視網(wǎng)膜、肌肉、心臟或心肌細(xì)胞、組織或器官。
6.權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述修飾的促紅細(xì)胞生成素能夠治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、外周神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、心肺系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、腎、泌尿系統(tǒng)、胰腺、骨、肝、皮膚、免疫系統(tǒng)、眼、胚胎或胎兒、ΕΝΤ、肌肉、生殖系統(tǒng)、肝、胃腸系統(tǒng)、 內(nèi)分泌系統(tǒng)、心臟、心肌、冠狀動(dòng)脈、腦、眼或視網(wǎng)膜的疾病或病癥，或代謝異常、線粒體疾病或缺氧狀況。
7.權(quán)利要求1-6的任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述修飾的促紅細(xì)胞生成素對(duì)于維持、 恢復(fù)或增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的認(rèn)知功能是有效的。
8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述哺乳動(dòng)物患有由腦創(chuàng)傷導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙、 曾經(jīng)患有由腦創(chuàng)傷導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙或處于患由腦創(chuàng)傷導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙的風(fēng)險(xiǎn)中， 或其中認(rèn)知功能的增強(qiáng)是學(xué)習(xí)的增強(qiáng)。
9.權(quán)利要求1-8的任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述哺乳動(dòng)物患有以下疾病、曾經(jīng)患有以下疾病、處于患以下疾病的風(fēng)險(xiǎn)中、或正在經(jīng)歷以下疾病發(fā)作障礙、慢性發(fā)作障礙、癲癇癥、驚厥、神經(jīng)根壓迫、多發(fā)性硬化、中風(fēng)、低血壓、心跳停止、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、神經(jīng)元喪失、缺血、蛛網(wǎng)膜下腔出血、動(dòng)脈瘤、動(dòng)脈瘤出血、心肌梗塞、炎癥、年齡相關(guān)的認(rèn)知功能喪失、放射性傷害、放療、全腦輻射、化療、大腦性麻痹、大腦和進(jìn)行性核上麻痹、神經(jīng)性退化疾病或病癥、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷綜合征、賴氏疾病、格-巴綜合征、癡呆、AIDS癡呆、老年癡呆、Lewy小體癡呆、記憶喪失、肌萎縮性側(cè)索硬化、酒精中毒、 神經(jīng)精神或神經(jīng)心理障礙、情感障礙、單極情感障礙、抑郁、嚴(yán)重的抑郁性障礙、心境惡劣障礙、狂躁、雙極情感障礙、焦慮障礙、焦慮、精神分裂癥、精神分裂性障礙、強(qiáng)迫性神經(jīng)失調(diào)、 注意力缺乏障礙、注意力缺乏多動(dòng)障礙、孤獨(dú)癥、朊病毒病，如傳染性海綿樣腦病、遺傳性共濟(jì)失調(diào)、威爾遜病、創(chuàng)傷、震蕩性損傷、腦或脊髓損傷、心肺旁路術(shù)、由心肺旁路手術(shù)引起的神經(jīng)系統(tǒng)缺陷、術(shù)后認(rèn)知功能障礙、栓塞性或缺血性損傷的術(shù)后處理、缺氧、線粒體功能障礙、心臟損傷、心肌損傷、心臟創(chuàng)傷、慢性心衰竭、眼組織損傷、黃斑變性、糖尿病性神經(jīng)病、 糖尿病性視網(wǎng)膜病、青光眼、視網(wǎng)膜缺血、視網(wǎng)膜創(chuàng)傷、色素性視網(wǎng)膜炎、視神經(jīng)損傷、視網(wǎng)膜脫落、動(dòng)脈硬化性視網(wǎng)膜病、高血壓性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、低血壓、與低血糖相關(guān)的狀況、糖尿病、急性腎衰竭、肝炎、認(rèn)知功能喪失、硬膜下血腫、腎病綜合征、肌營(yíng)養(yǎng)不良、肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或躁狂性障礙。
10.權(quán)利要求1-9的任一項(xiàng)的藥物組合物在制備用于保護(hù)、維持、增強(qiáng)或恢復(fù)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞、包含促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性哺乳動(dòng)物細(xì)胞的組織或包含促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞的器官的功能或存活力的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及對(duì)促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞、組織和器官的保護(hù)、恢復(fù)和增強(qiáng)。具體地，提供了幾種方法和組合物，用于通過(guò)全身或局部給予促紅細(xì)胞生成素受體活性調(diào)節(jié)劑，如促紅細(xì)胞生成素或修飾的促紅細(xì)胞生成素，來(lái)保護(hù)或促進(jìn)包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物中在體內(nèi)、原位或來(lái)自體內(nèi)的促紅細(xì)胞生成素應(yīng)答性細(xì)胞、組織、器官或身體某部分的功能或存活力。
文檔編號(hào)A61P25/32GK102319421SQ20111022747
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2001年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月29日
發(fā)明者A·切拉米, C·切拉米, M·布賴恩斯 申請(qǐng)人:肯尼思 S.沃倫協(xié)會(huì)有限公司