專利名稱：一種殼聚糖包衣磁性納米粒及制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬磁性納米粒及制備方法，主要涉及一種表面殼聚糖包衣四氧化三鐵納米粒、及其制備方法與抗腫瘤藥物的控釋。
背景技術：
磁革巴向給藥系統(tǒng)(magnetic targeting drug delivery system, MTDDS)是近年來國內外研究較多的一種新型靶向給藥系統(tǒng)，通常由磁性材料、載體材料、藥物(主要是抗腫瘤藥物或某些診斷試劑)及其它輔料組成，可通過靜脈、動脈導管、口服或注射等途徑給藥。MTDDS系將藥物與磁性物質通過適當?shù)妮d體制成穩(wěn)定體系，在足夠強的外磁場作用下， 使藥物在體內定向移動、定位濃集并釋放，從而集中在病變部位發(fā)揮療效，具有高效低毒的特點。目前磁靶向給藥系統(tǒng)有磁性微球(magneticmicrospheres，匪S)、磁性納米粒 (magneticnanoparticles, MNP)、磁性脂質體[1]、磁性乳劑、磁性片劑、磁性膠囊和將單克隆抗體偶聯(lián)在磁性制劑表面的免疫磁性制劑。目前最常用的磁性材料是I^e3O4和!^e2O3的納米磁粉或磁流體，或稱鐵磁流體。磁性納米粒是近年來國內外研究的熱點。磁性納米粒用于腫瘤的治療主要具有以下特點(1)容易在癌、腫瘤部位富集，這可能由于腫瘤細胞對磁性納米粒的吞噬作用強， 而且腫瘤組織病變，組織間毛細血管容易擴張或者產生隙漏，納米粒子容易穿過血管而滯留于腫瘤組織中。由于磁性材料的富集，磁性納米粒還可應用于核磁共振成像技術中；(2) 在磁場的作用下，容易在腫瘤組織中引起栓塞，阻斷腫瘤組織的血液供應，而導致腫瘤細胞死亡，而在非磁場區(qū)，納米粒的直徑比毛細血管或肝竇的直徑小，呈單個分散存在，一般不會引起栓塞；(3)超順磁性納米粒處于交變磁場中，由于磁滯后效應而產生熱量，使得局部溫度過高而殺傷腫瘤組織。殼聚糖是一類由氨基葡萄糖組成的陽離子聚合物，具有很好的生物相容性、低毒性和可生物降解性。殼聚糖被廣泛應用于藥物輔料、止血材料、組織工程支架等。據(jù)報道殼聚糖具有腸粘膜粘附的特性，作為藥物輔料有利于藥物的口服吸收。大分子量殼聚糖在生理PH條件下(7. 2-7.4)不溶于水，而通過酶降解的低分子量殼聚糖(殼寡糖，Chitosan oligosaccharide, CS0)具有良好的水溶性和更低的毒性，適合作為藥物輔料使用。另有報道指出，在藥物載體中進行親水性的聚乙二醇修飾，可以減少血漿蛋白對載體的吸附作用，同時可減少巨噬細胞對藥物載體的吞噬作用，使載體在循環(huán)系統(tǒng)中的半衰期延長。有利于藥物的靶向?；诖藢ぞ厶沁M行聚乙二醇修飾，可以減少血漿蛋白對殼聚糖包衣磁性納米粒在體內的調理作用，從而減少巨噬細胞對殼聚糖包衣磁性納米粒的攝取，延緩殼聚糖包衣磁性納米粒從血漿中被清除的過程，并通過“增強的透過及滯留效應”， 進一步提高殼聚糖包衣磁性納米粒的被動靶向功能。本發(fā)明通過水性溶劑擴散技術和離子復合技術的結合，制備殼聚糖包衣磁性納米粒，實現(xiàn)對抗腫瘤藥物的控釋，在此基礎上合成聚乙二醇殼聚糖嫁接物，并制備聚乙二醇修飾殼聚糖包衣磁性納米粒，以提高殼聚糖包衣磁性納米粒的被動靶向功能。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的是提供一種殼聚糖包衣磁性納米粒。該磁性納米粒由四氧化三鐵納米磁性粉體、油酸、單甘脂、阿霉素和殼聚糖(或聚乙二醇殼聚糖嫁接物)所組成。殼聚糖包衣磁性納米粒的組成為lmg的四氧化三鐵納米磁性粉體(平均粒徑30nm)，^iig的油酸，6. 5mg的單甘酯，0. 5mg的阿霉素和Img的殼聚糖(或聚乙二醇殼聚糖嫁接物)。其中，殼聚糖的重均分子量為18 KDa，脫乙酰度為95% ；聚乙二醇的重均分子量為2KDa，聚乙二醇與殼聚糖的嫁接比例為1: l(mol:mol)
本發(fā)明的另一個目的是提供殼聚糖包衣磁性納米粒的制備方法，具體通過以下途徑實
現(xiàn)
(1)稱取四氧化三鐵(Fe3O4)納米磁性粉體(平均粒徑30nm)5mg，加入至50ml純水中中，探頭超聲(600W;工作2s，停3s)40min分散；稱取10 mg油酸，溶于1 ml無水乙醇后， 緩慢加入上述分散液中，，探頭超聲(600W ；工作k，停3s)10min得到經油酸穩(wěn)定的!^e3O4納米磁性粉體分散液(1)；
(2)精密稱取32.5mg的單甘脂和2. 5mg阿霉素溶于Iml無水乙醇和Iml 二甲亞楓 (DMSO)混合溶劑后，加入經油酸穩(wěn)定的!^e3O4納米磁性粉體分散液中，得磁性納米粒分散液 (2)。(3)取磁性納米粒分散液(2) 10 mL，在水浴超聲條件下，逐滴滴加入10 mL 100 Pg/mL殼聚糖水溶液或聚乙二醇殼聚糖嫁接物水溶液中，繼續(xù)水浴超聲5 min，得殼聚糖包衣磁性納米粒。本發(fā)明首先采用油酸為表面活性劑，制備穩(wěn)定的四氧化三鐵納米分散液，并進一步將溶有脂質材料和抗腫瘤藥物的有機溶劑注入到經油酸穩(wěn)定的四氧化三鐵納米分散液， 可制備得到含有藥物的帶負電荷的磁性納米粒。陽離子的殼聚糖可進一步通過離子復合作用包裹于帶負電荷的磁性納米粒表面，制備得到殼聚糖包衣磁性納米粒，并實現(xiàn)藥物的控釋。


圖1為聚乙二醇修飾殼聚糖包衣磁性納米粒(a)和殼聚糖包衣磁性納米粒(b)的透射電鏡照片。圖2為制備得到的殼聚糖包衣磁性納米粒(a)和聚乙二醇修飾殼聚糖包衣磁性納米粒(b)的阿霉素體外釋放曲線。
具體實施例方式本發(fā)明結合附圖和實施例作進一步的說明。實施例1
(1)油酸穩(wěn)定四氧化三鐵納米磁性粉體的制備
精密稱取狗304納米磁性粉體(平均粒徑30nm) 5mg,加入至50ml純水中，探頭超聲 (600W;工作2s，停3s)40min分散。精密稱取IOmg油酸，溶于1 ml無水乙醇后，緩慢加入上述分散液中，，探頭超聲(600W ；工作2s，停3s)5min得到經油酸穩(wěn)定的!^e3O4納米磁性粉體分散液。(2)精密稱取32. 5mg的單甘脂和2. 5mg阿霉素溶于Iml無水乙醇和Iml 二甲亞楓(DMSO)混合溶劑后，加入經油酸穩(wěn)定的!^e3O4納米磁性粉體分散液中，得磁性納米粒分散液⑵。(3)取磁性納米粒分散液(2) 10 mL，在水浴超聲條件下，逐滴滴加入10 mL 100 Pg/mL殼聚糖(重均分子量為18 KDa，脫乙酰度為95%)水溶液中，繼續(xù)水浴超聲5 min，得殼聚糖包衣磁性納米粒。所得殼聚糖包衣磁性納米粒的透射電鏡圖見圖1 (b)；經粒徑電位測定儀測定該納米粒的數(shù)均粒徑為312. 0 士 19. Onm、電位為30. 2 士0. 6mV;經熒光分光光度法測定阿霉素的藥物包封率為70. 20 士 0. 21%，載藥量為3. 09 士 0. 02%。 表1 殼聚糖包衣磁性納米粒和聚乙二醇修飾殼聚糖包衣磁性納米粒的理化性質
權利要求
1.一種殼聚糖包衣磁性納米粒，其特征在于，由Img平均粒徑30nm的四氧化三鐵納米磁性粉體、2mg油酸、6. 5mg單甘酯，0. 5mg阿霉素和Img殼聚糖組成，其中，殼聚糖的重均分子量為18 KDa，脫乙酰度為95%。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種殼聚糖包衣磁性納米粒，其特征在于，由Img平均粒徑 30nm的四氧化三鐵納米磁性粉體、2mg油酸、6. 5mg單甘酯，0. 5mg阿霉素和Img聚乙二醇殼聚糖嫁接物組成，其中，殼聚糖的重均分子量為18 KDa，脫乙酰度為95%，聚乙二醇的重均分子量為2KDa，聚乙二醇與殼聚糖的嫁接mol比例為1:1。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種殼聚糖包衣磁性納米粒的制備方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn)(1)稱取平均粒徑30nm的四氧化三鐵納米磁性粉體5mg，加入至50ml純水中，第一次探頭超聲40min分散，稱取10 mg油酸，溶于1 ml無水乙醇后，緩慢加入上述分散液中，第二次探頭超聲IOmin得到經油酸穩(wěn)定的四氧化三鐵納米磁性粉體分散液(a)；(2)精密稱取32.5mg的單甘脂和2. 5mg阿霉素溶于Iml無水乙醇和Iml 二甲亞楓混合溶劑后，加入分散液(a)中，得磁性納米粒分散液(b)；(3)取分散液(b)10 mL，在水浴超聲條件下，逐滴加入10 mL 100 Pg/mL殼聚糖水溶液或聚乙二醇殼聚糖嫁接物水溶液中，繼續(xù)水浴超聲5 min，得殼聚糖包衣磁性納米粒。
4.根據(jù)權利要求3所述的一種殼聚糖包衣磁性納米粒的制備方法，其特征在于，第一次探頭超聲條件600W，工作2s，停3s ；第二次探頭超聲條件600W，工作2s，停3s。
全文摘要
本發(fā)明提供一種殼聚糖包衣磁性納米粒，由四氧化三鐵納米磁性粉體、油酸、單甘脂、阿霉素和殼聚糖(或聚乙二醇殼聚糖嫁接物)組成，采用油酸為表面活性劑，通過水性溶劑擴散技術和離子復合技術的結合，制備殼聚糖包衣磁性納米粒，實現(xiàn)對抗腫瘤藥物的控釋，在此基礎上合成聚乙二醇殼聚糖嫁接物，并制備聚乙二醇修飾殼聚糖包衣磁性納米粒，以提高殼聚糖包衣磁性納米粒的被動靶向功能，實現(xiàn)藥物的控釋。
文檔編號A61K31/704GK102319217SQ20111020976
公開日2012年1月18日 申請日期2011年7月26日 優(yōu)先權日2011年7月26日
發(fā)明者葉軼青, 應曉英, 杜永忠, 虞和永 申請人:浙江大學醫(yī)學院附屬婦產科醫(yī)院