專利名稱：一種從西青果中提取α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從西青果中提取α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法，屬于中草藥制備及化工技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
餐后高血糖的葡萄糖毒性作用有以下兩點(diǎn)一方面降低胰島素敏感性，減少β細(xì)胞胰島素分泌，加速其功能衰竭；另一方面急性血糖高峰直接導(dǎo)致氧化應(yīng)激狀態(tài)。對(duì)心血管系統(tǒng)，餐后血糖增高不僅具有高血糖的一般損害作用，還是眾多心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。所以，解決餐后高血糖的預(yù)防和治療問(wèn)題，對(duì)于控制心血管疾病的發(fā)生和進(jìn)展具有非常重要的意義。α-葡萄糖苷酶抑制劑能阻滯存在于小腸黏膜微絨毛膜表面的麥芽糖酶和蔗糖酶等雙糖水解酶，使攝取的多糖、寡糖和雙糖消化變成葡萄糖、果糖等單糖的過(guò)程受阻，從而降低餐后血糖峰值，是一種有廣闊應(yīng)用前景的治療糖尿病的藥物。國(guó)人飲食習(xí)慣以碳水化合物為主，因此α -葡萄糖苷酶抑制劑能更好的發(fā)揮降糖效果，從而對(duì)糖尿病、心血管疾病以及代謝綜合癥起到明顯的防治作用。目前用于臨床的α-葡萄糖苷酶抑制劑有三種阿卡波糖(Acarbose)、伏格列波糖(Voglibose)和米格列醇(Miglitol)；但來(lái)源比較單一，均為細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)物，種類太少，都存在胃腸道的副作用，臨床上沒(méi)有更多的選擇余地。 因此，開發(fā)更多、更有效、副作用更少的α -葡萄糖苷酶抑制劑供臨床選擇使用就顯得尤為重要。我國(guó)中藥資源豐富，從天然植物和藥物中尋找新的低毒、高效的α-葡萄糖苷酶抑制劑一直是國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。目前未見有其他相關(guān)的專利和非專利文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種西青果的干果中α-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分的制備方法，具有工藝簡(jiǎn)單、操作方便等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的目的有以下技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)，其中所述原料份數(shù)除特殊說(shuō)明外，均為重量份數(shù)。從西青果中提取小腸α -葡萄糖苷酶抑制劑的方法包括以下步驟(1)將西青果的干果粉碎，平均粒度為200 350 μ m，然后按料液比Ig 20 30ml加入濃度為50 100wt%的乙醇作為提取劑，在室溫下震蕩30 36小時(shí)，分離上清
液，濃縮干燥后獲得乙醇浸膏，得率為35 40%。(2)將上述乙醇浸膏分散于蒸餾水中，料液比為Ig 20 30ml，然后按體積比 1 2加入正己烷震蕩萃取2 3次，收集水相萃取物。(3)將上述水相萃取物濃縮到15 20ml，上大孔吸附樹脂Diaion HP-20層析柱， 用水-甲醇梯度洗脫，濃度為25^^^80^%和IOOwt %，洗脫流速為lml/min，收集具有活性的洗脫峰，濃縮干燥后得到小腸α-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分，得率為12 20%。性能測(cè)試活性洗脫峰的檢測(cè)方法將洗脫部分用0. 2mm的薄層硅膠板進(jìn)行展開，展開劑為氯仿甲醇水=6 4 1。用5%的硫酸噴霧后加熱顯色，具有最高活性洗脫峰的&值為 0. 2 0. 3。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)工藝簡(jiǎn)單、操作方便；(2)抑制活性強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)證明，在0. 4mg/ml濃度時(shí)，本實(shí)驗(yàn)的提取物對(duì)小腸α -葡萄糖苷酶麥芽糖水解活性的抑制率達(dá)76. 2%，IC50值為51. 7 μ g/ml。


圖1 西青果提取物的高效液相色譜分析分析條件如下0DS-3色譜柱(4. 6X 250讓，5 μ m)；流速，lml/min ；柱溫，25 °C ； 檢測(cè)波長(zhǎng)，280nm;梯度洗脫液0min，10 %甲醇；10min，20 %甲醇；20_30min，30 %甲醇；50min，40%甲醇；70_90min，50 %甲醇；100min，100%甲醇。訶子素(保留時(shí)間為 31. 20min)、訶黎勒酸(保留時(shí)間為40. 97min)和訶子酸(保留時(shí)間為56. 29min)。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體的描述，有必要在此指出的是本實(shí)施例只用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)容作出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。實(shí)施例1:(1)將西青果的干果5g粉碎后，平均粒度為200 μ m,然后用濃度為50wt %乙醇 150ml作為提取劑，在室溫下36小時(shí)震蕩，分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得乙醇浸膏1.97g，得率為39. 4% ο(2)將上述乙醇浸膏分散于40ml蒸餾水中，然后用80ml正己烷震蕩萃取2次，將萃取液和水相萃取物分離。(3)將上述水相萃取物濃縮到15ml后，上聚苯乙烯型弱極性大孔吸附樹脂 DiaiOnHP-20(重量為IOOg)層析柱，用水-甲醇梯度洗脫，濃度為25wt %、80wt %和 100wt%，洗脫流速為lml/min。收集具有活性的80%甲醇洗脫峰，濃縮干燥后得到淡黃色固體0. 65g，得率為13%。實(shí)施例2:(1)將西青果的干果5g粉碎后，平均粒度為350 μ m,然后用濃度為SOwt %乙醇 120ml作為提取劑，在室溫下34小時(shí)震蕩，分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得乙醇浸膏1. 76g，得率為35. 2%0(2)將上述乙醇浸膏分散于Mml蒸餾水中，然后用88ml正己烷震蕩萃取3次，將萃取液和水相萃取物分離。(3)將上述水相萃取物濃縮到20ml后，上聚苯乙烯型弱極性大孔吸附樹脂 DiaiOnHP-20(重量為IOOg)層析柱，用水-甲醇梯度洗脫，濃度為25wt %、80wt %和 100wt%，洗脫流速為lml/min。收集具有活性的80%甲醇洗脫峰，濃縮干燥后得到淡黃色固體0. 96g，得率為19.2%。實(shí)施例3
(1)將西青果的干果5g粉碎后，平均粒度為300 μ m，然后用濃度為100wt%乙醇 IOOml作為提取劑，在室溫下30小時(shí)震蕩，分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得乙醇浸膏1.81g，得率為36.2%。(2)將上述乙醇浸膏分散于5細(xì)1蒸餾水中，然后用108ml正己烷震蕩萃取2次，將萃取液和水相萃取物分離。(3)將上述水相萃取物濃縮到20ml后，上聚苯乙烯型弱極性大孔吸附樹脂 DiaiOnHP-20(重量為IOOg)層析柱，用水-甲醇梯度洗脫，濃度為25wt %、80wt %和 100wt%，洗脫流速為lml/min。收集具有活性的80%甲醇洗脫峰，濃縮干燥后得到淡黃色固體0. 85g，得率為17%。應(yīng)用實(shí)例1由上述實(shí)施例中獲得的西青果提取物對(duì)α -葡萄糖苷酶抑制活性試驗(yàn)方法及結(jié)果如下從SIGMA公司訂購(gòu)大鼠小腸丙酮提取粉末，用磷酸緩沖液(PBS，0. 1Μ，ρΗ7. 0)勻漿處理，離心后除去上清液；再用PBS+10% Triton的混合液勻漿處理，離心后獲得上清液。用透析膜M小時(shí)透析后，以獲得大鼠小腸粗α-葡萄糖苷酶溶液。大鼠小腸α-葡萄糖苷酶粗酶麥芽糖水解活性是1. 85U/ml。其中酶活力單位定義為37°C、pH6. 8條件下，在酶的作用下1分鐘分解1 μ mol麥芽糖，規(guī)定為一個(gè)酶活力單位(U)。測(cè)定小腸α-葡萄糖苷酶的麥芽糖水解活性的酶反應(yīng)混合溶液包括大鼠小腸α-葡萄糖苷酶粗溶液(0.05ml)、受試物(0. lml，溶于25 % 二甲基亞砜)、麥芽糖溶液 (0. 35ml, 3. 5mM麥芽糖溶于0. 1M，pH6. 3的磷酸緩沖液)。將以上反應(yīng)混合溶液在37°C培養(yǎng)箱中反應(yīng)15分鐘，用0. 75ml的Tris-HCl溶液停止酶的水解反應(yīng)。用葡萄糖氧化法(GOD 法)，測(cè)定在490nm波長(zhǎng)下的OD值，以葡萄糖的含量計(jì)算α _葡萄糖苷酶抑制活性。抑制百分率=[1-(提取物吸光值-提取物空白吸光值)/酶活吸光值]X 100%。測(cè)試結(jié)果如表1所示表1西青果提取物對(duì)大鼠小腸α -葡萄糖苷酶抑制活性
權(quán)利要求
1. 一種從西青果中提取α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)將西青果的干果粉碎，平均粒度為200 350μ m，然后按料液比Ig 20 30ml 加入濃度為50 IOOwt%的乙醇作為提取劑，在室溫下震蕩30 36小時(shí)，分離上清液，濃縮干燥后獲得乙醇浸膏，得率為35 40% ；(2)將上述乙醇浸膏分散于蒸餾水中，料液比為Ig 20 30ml，然后按體積比1 2 加入正己烷震蕩萃取2 3次，收集水相萃取物；(3)將上述水相萃取物濃縮到15 20ml，上大孔吸附樹脂DiaionHP-20層析柱，用水-甲醇梯度洗脫，濃度為25^^^80^%和100Wt%，洗脫流速為lml/min，收集具有活性的洗脫峰，濃縮干燥后得到小腸α-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分，得率為12 20%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從西青果中提取α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法，其特點(diǎn)是將西青果的干果粉碎，平均粒度為200～350μm，然后按料液比1g∶20～30ml加入濃度為50～100wt％的乙醇作為提取劑，在室溫下震蕩30～36小時(shí)，分離上清液，濃縮干燥后獲得乙醇浸膏，得率為35～40％；將乙醇浸膏分散于蒸餾水中，料液比為1g∶20～30ml，按體積比1∶2加入正己烷震蕩萃取2～3次，收集水相萃取物；將水相萃取物濃縮到15～20ml，上大孔吸附樹脂Diaion HP-20層析柱，用水-甲醇梯度洗脫，濃度為25wt％、80wt％和100wt％，洗脫流速為1ml/min，收集具有活性的洗脫峰，濃縮干燥后得到小腸α-葡萄糖苷酶抑制劑有效分，得率為10～20％。α-葡萄糖苷酶抑制的活性，在0.4mg/ml濃度時(shí)，對(duì)小腸α-葡萄糖苷酶麥芽糖水解活性的抑制率達(dá)到76.2％，IC50值分別為51.7μg/ml。
文檔編號(hào)A61K36/185GK102266360SQ20111016183
公開日2011年12月7日 申請(qǐng)日期2011年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月16日
發(fā)明者曾維才, 祝瑞雪, 鄧鵬翅, 鐘凱, 高鴻, 黃毅娜 申請(qǐng)人:四川大學(xué)