專利名稱：一種蠶絲支架及其制備與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種組織工程網(wǎng)狀支架，特別涉及一種可用于生物體內(nèi)組織修補(bǔ)或加強(qiáng)，生物體外組織構(gòu)建的網(wǎng)狀蠶絲支架及其制備方法。
背景技術(shù)：
組織缺損、薄弱是臨床上常見問(wèn)題，引起的原因有先天缺損、病理因素及衰老等， 臨床表現(xiàn)為腹壁、盆地組織松弛、瘢痕及皺紋等。這些軟組織的缺損、薄弱通常無(wú)法自行修復(fù)，極大的影響到相應(yīng)器官組織的功能及外觀表現(xiàn)。特別是由于產(chǎn)后或絕經(jīng)后盆地松弛導(dǎo)致的張力性尿失禁，是婦女常見的疾病。自上世紀(jì)90年代中期以來(lái)，它已成為世界5大疾病之一。目前臨床上主要采用組織補(bǔ)片修復(fù)組織缺損和薄弱。根據(jù)材料的化學(xué)成分和生物學(xué)特征，可將組織補(bǔ)片分為生物補(bǔ)片和非生物補(bǔ)片。目前進(jìn)入市場(chǎng)的生物補(bǔ)片多為異體/異種的組織產(chǎn)品及其衍生物，異體/異種組織雖然來(lái)源廣泛，但是可能會(huì)引起免疫排斥和疾病傳播等，存在潛在的風(fēng)險(xiǎn)。而目前非生物補(bǔ)片主要是包括一些高分子聚合物產(chǎn)品。其中，聚丙烯補(bǔ)片已被廣泛應(yīng)用到臨床，用于尿失禁治療及疝修補(bǔ)等手術(shù)治療。但此類補(bǔ)片存在不可吸收和終生不降解的特征，據(jù)報(bào)道會(huì)引起嚴(yán)重的近期排異反應(yīng)和遠(yuǎn)期的侵蝕反應(yīng)。研究表明，蠶絲由約75%的絲素和約25%的絲膠所組成，它是蠶在絹絲腺內(nèi)分泌出來(lái)的天然蛋白質(zhì)，由18種氨基酸組成，主要由重復(fù)的Gly-Ala-Gly-Ala-Ser多胎單元組成。它無(wú)毒性、無(wú)刺激性，具有良好的生物相容性，因此蠶絲是制造生物醫(yī)學(xué)材料的較理想原料。專利200610051885. 3，一種網(wǎng)狀組織工程支架，提供了一種采用除絲膠蛋白的蠶絲編織網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的方法，其網(wǎng)孔大小為0. 5-25mm2。并認(rèn)為去除絲膠蛋白的蠶絲具有良好的力學(xué)性能和生物相容性。經(jīng)過(guò)脫絲膠蛋白處理的蠶絲網(wǎng)狀支架，容易發(fā)生卷邊的現(xiàn)象，結(jié)構(gòu)相對(duì)不平整；影響蠶絲支架的使用效果。因此，尋找一種對(duì)蠶絲支架的力學(xué)性能和生物學(xué)性能改良方法，制作一種能同時(shí)具備平整結(jié)構(gòu)，且有良好力學(xué)性能和生物相容性良好的用于組織修補(bǔ)或加強(qiáng)的醫(yī)用蠶絲支架，成為本發(fā)明的出發(fā)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種蠶絲支架及其制備方法與應(yīng)用，該蠶絲支架具備平整結(jié)構(gòu)、良好力學(xué)性能和生物相容性，可應(yīng)用于生物體內(nèi)組織修補(bǔ)或加強(qiáng)、生物體外組織構(gòu)建的醫(yī)用支架。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種蠶絲支架，所述的蠶絲支架由基礎(chǔ)支架及包覆在基礎(chǔ)支架表面的水溶性天然高分子材料層膜構(gòu)成，所述的基礎(chǔ)支架是由蠶絲編制成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)，所述的水溶性天然高分子材料為蠶絲絲素透明質(zhì)酸、膠原、或殼聚糖。本發(fā)明優(yōu)選所述的水溶性天然高分子材料為蠶絲絲素。
所述的基礎(chǔ)支架優(yōu)選由去除絲膠蛋白的蠶絲編制而成。所述的蠶絲支架為結(jié)構(gòu)平整的具有網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)的片狀。所述的基礎(chǔ)支架按如下方法制成先將蠶絲去掉絲膠蛋白，然后再使用機(jī)械或手工方法編織而成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)制成基礎(chǔ)支架。進(jìn)一步，所述的基礎(chǔ)支架也可按如下方法制成先將蠶絲使用機(jī)械或手工方法編織而成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2的待去絲膠蛋白的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)，再將待去絲膠蛋白的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)去掉絲膠蛋白。所述的蠶絲去絲膠蛋白的方法將蠶絲或待去絲膠蛋白的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)浸沒(méi)于質(zhì)量濃度為0. 0. 3% Na2COyK溶液中，煮沸60 150min ； (2)將步驟(1)經(jīng)過(guò)煮沸處理的蠶絲置于純水中，清洗1 3遍，室溫或干燥箱干燥，通常在干燥4 48小時(shí)。本發(fā)明所述的蠶絲支架的制備方法為(1)將去除絲膠蛋白的蠶絲編制成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)制成基礎(chǔ)支架；( 將基礎(chǔ)支架表面噴涂上一層質(zhì)量濃度 0. 1 % 20%的水溶性天然高分子材料的水溶液，噴涂量為0. 5 3. OmL/cm2,在20 40°C 干燥4 48h，在基礎(chǔ)支架表面形成天然高分子材料層膜，鈷-60輻照滅菌處理，獲得所述的蠶絲支架。進(jìn)一步，所述的蠶絲支架的制備方法優(yōu)選按照如下步驟進(jìn)行(1)將去除絲膠蛋白的蠶絲編制成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)制成基礎(chǔ)支架；(2)在步驟(1)制備的基礎(chǔ)支架的表面涂覆質(zhì)量濃度0. 20%蠶絲絲素水溶液，噴涂的天然高分子的量為 0. 5 3. OmL/cm2, 25 40°C干燥4 48h，鈷-60輻照滅菌，獲得所述的蠶絲支架。所述的蠶絲支架可應(yīng)用于生物體內(nèi)組織修補(bǔ)或加強(qiáng)及生物體外組織構(gòu)建。所述的蠶絲支架優(yōu)選應(yīng)用于治療女性尿失禁的醫(yī)用蠶絲支架。本發(fā)明所述的蠶絲支架中的基礎(chǔ)層膜可以是利用化學(xué)和物理方法先去除粗蠶絲的絲膠蛋白，在利用機(jī)械或手工方法編制成網(wǎng)片結(jié)構(gòu)，還可以先利用機(jī)械或手工方法編制成網(wǎng)片結(jié)構(gòu)，再利用化學(xué)和物理方法去除粗蠶絲的絲膠蛋白。本發(fā)明所述的去除桑蠶粗蠶絲絲膠蛋白的方法主有碳酸鈉溶液煮沸去除法、還可以用去污劑煮沸去除法、硼酸煮沸去除法或者直接加熱去除法，這些本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的去絲膠蛋白的方法，都適合本發(fā)明。本發(fā)明采用水溶性天然高分子材料涂覆網(wǎng)片狀蠶絲基礎(chǔ)層膜形成具有平整結(jié)構(gòu)且力學(xué)和生物學(xué)性能良好的蠶絲支架，所用的天然高分子材料性能(1)蠶絲絲素它是蠶絲的主要組成成分，其優(yōu)點(diǎn)主要表現(xiàn)在，絲素涂覆整個(gè)蠶絲支架化學(xué)成分單一，加熱干燥的過(guò)程可以導(dǎo)致絲素涂層晶體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，增加了蠶絲支架的硬度；( 透明質(zhì)酸它是一種直鏈狀的高分子多糖，是自然界中最具親水性的分子，具有良好的機(jī)體相容性，具有防組織粘連的作用；(3)膠原它是細(xì)胞外最重要的水不溶性纖維蛋白，是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的骨架。膠原在細(xì)胞外基質(zhì)中形成半晶體的纖維，給細(xì)胞提供抗張力和彈性，并在細(xì)胞的遷移和發(fā)育中起作用，膠原的加入可以促進(jìn)細(xì)胞長(zhǎng)入；(4)殼聚糖及其衍生物它們具有止血?dú)⒕龠M(jìn)創(chuàng)面愈合等功能，是一種良好生物活性的材料，本發(fā)明優(yōu)選蠶絲絲素為天然高分子材料。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在(1)本發(fā)明蠶絲支架結(jié)構(gòu)平整， 既具有良好的生物學(xué)和力學(xué)性能，又具有良好的組織相容性；( 本發(fā)明蠶絲支架，由機(jī)器編織而成，網(wǎng)孔大小均勻，且網(wǎng)孔大小根據(jù)需要可以在0. 25 25mm2之間進(jìn)行調(diào)整；(3)本發(fā)明蠶絲支架所用材料易得，制備方法簡(jiǎn)便，主要采用物理方法，不會(huì)涉及到其他化學(xué)物質(zhì)的引入及除去，杜絕了化學(xué)方法可能帶來(lái)的不良后果；(4)本發(fā)明蠶絲支架中所采用的天然高分子材料，生物相容性好，操作簡(jiǎn)單；( 本發(fā)明蠶絲支架適合于生物體內(nèi)組織修補(bǔ)或加強(qiáng)、生物體外組織構(gòu)建，特別可應(yīng)用于治療女性尿失禁。


圖1蠶絲脫絲膠處理前后的蠶絲表面電鏡掃描圖，1-1脫絲前，1-2脫絲后；圖2脫絲膠后蠶絲基礎(chǔ)支架的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)圖；圖3經(jīng)過(guò)天然絲素蛋白噴涂后的蠶絲支架的大體照片；圖4bMSCs復(fù)合蠶絲支架的熒光鏡照片；圖5實(shí)施例SbMSCs復(fù)合蠶絲支架植入動(dòng)物(大鼠)尿道實(shí)驗(yàn)，4_A為bMSCs復(fù)合蠶絲支架圖，4-B為bMSCs復(fù)合蠶絲支架植入動(dòng)物尿道實(shí)驗(yàn)；圖6實(shí)施例SbMSCs復(fù)合蠶絲支架植入動(dòng)物(大鼠)尿道4周后圖片，A為移植后 4周bMSCs復(fù)合蠶絲支架大體圖，B為細(xì)胞追蹤儀熒光圖，C為bMSCs復(fù)合蠶絲支架切片在激光共聚焦顯微鏡下圖片，D為bMSCs復(fù)合蠶絲支架移植前CFDA標(biāo)記熒光圖；圖77-1為實(shí)施例8術(shù)后4周動(dòng)物壓力性尿失禁圖，及7_2為四組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的LPP 結(jié)果，A為A組，B為B組，C為C組，D為D組；圖8實(shí)施例8術(shù)后12周，蠶絲支架及bMSCs復(fù)合蠶絲支架內(nèi)部結(jié)構(gòu)重建圖，A為蠶絲支架HE染色圖，B為bMSCs復(fù)合蠶絲支架HE染色圖，C為蠶絲支架麥松染色圖，D為 bMSCs復(fù)合蠶絲支架麥松染色圖；圖9實(shí)施例8術(shù)后12周，蠶絲支架及bMSCs復(fù)合蠶絲支架膠原含量圖，silk為蠶絲支架組，silk+bMSC為bMSCs復(fù)合蠶絲支架組。縱坐標(biāo)表示兩種不同的支架的膠原含量；圖10實(shí)施例8術(shù)后12周，蠶絲支架及bMSCs復(fù)合蠶絲支架力學(xué)性能A為抗張力實(shí)驗(yàn)，B為楊氏模量實(shí)驗(yàn)，其中silk為蠶絲支架組，silk+bMSC為bMSCs復(fù)合蠶絲支架組。A 組縱坐標(biāo)表示兩種支架的抗張力，B組縱坐標(biāo)表示兩種支架的楊氏模量。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1 將粗蠶絲編制成網(wǎng)片結(jié)構(gòu)支架，規(guī)格為IOOmmX 20mmX0. 5mm,網(wǎng)孔大小為1. Omm2, 然后用0. 2% Na2CO3溶液200mL，煮沸30min，重復(fù)3次，用200mL醫(yī)用純化水漂洗3次，室溫(25°C )晾干12h，獲得基礎(chǔ)支架；用4%絲素蛋白水溶液噴涂在基礎(chǔ)支架上，涂覆量為
0.5mL/cm2，室溫(25°C )下晾M小時(shí)。內(nèi)外包裝后，經(jīng)鈷-60輻照滅菌，獲得蠶絲支架。實(shí)施例2 將粗蠶絲編制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)支架，規(guī)格為IOOmmX IOOmmX 0. 5mm,網(wǎng)孔大小為
1.Omm2,然后用0. 2% Na2CO3溶液200mL，煮沸30min，重復(fù)3次。用200mL醫(yī)用純化水漂洗 3次，烘箱40°C干燥4h，備用。將預(yù)先配制好的10%殼聚糖水溶液噴涂在蠶絲支架上，涂覆量為1. 5mL/cm2，涂覆完成后40°C恒溫烘箱干燥4小時(shí)，內(nèi)外包裝后，經(jīng)鈷_60輻照滅菌，即得到蠶絲支架。實(shí)施例3 將粗蠶絲編制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)支架，規(guī)格為IOOmmX IOOmmX 0. 5mm,網(wǎng)孔大小為 4. Omm2,然后用0. 2% Na2CO3溶液200mL，煮沸30min，重復(fù)3次。用200mL醫(yī)用純化水漂洗 3次，室溫晾干Mh，備用。將預(yù)先配制好的20%殼聚糖水溶液噴涂在蠶絲支架上， 涂覆量為0. 5mL/cm2，涂覆結(jié)束經(jīng)30°C恒溫烘箱干12小時(shí)，內(nèi)外包裝后，經(jīng)鈷-60輻照滅菌， 即得到蠶絲支架。實(shí)施例4:將粗蠶絲編制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)支架，規(guī)格為50mmX50mmX0. 5mm,網(wǎng)孔大小為0. 5mm2, 然后用0. 2% Na2CO3溶液200mL，煮沸30min，重復(fù)3次。用200mL醫(yī)用純化水漂洗3次，烘箱40°C干燥他，備用。將預(yù)先配制好的0. 透明質(zhì)酸水溶液噴涂在蠶絲支架上，涂覆量為 3mL/cm2。室溫(25°C )下晾48小時(shí)，內(nèi)外包裝后，經(jīng)鈷_60輻照滅菌，即得到蠶絲支架。實(shí)施例5 將粗蠶絲編制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)支架，規(guī)格為50mmX50mmX0. 5mm,網(wǎng)孔大小為0. 25mm2, 然后用0. 2% Na2CO3溶液200mL，煮沸30min，重復(fù)3次。用200mL醫(yī)用純化水漂洗3次，烘箱40°C干燥他，備用。將預(yù)先配制好的0. 2%膠原水溶液噴涂在蠶絲支架上，涂覆量為3mL/ cm2，經(jīng)30°C恒溫烘箱干12小時(shí)，內(nèi)外包裝后，經(jīng)鈷-60輻照滅菌，即得到蠶絲支架。實(shí)施例6將粗蠶絲編制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)支架，規(guī)格為60mmX20mmX0. 5mm的蠶絲網(wǎng)片，網(wǎng)孔大小為1. 0mm2，然后用0. 2% Na2CO3溶液200mL，煮沸30min，重復(fù)3次，用200mL醫(yī)用純化水漂洗3次，室溫(25°C )晾干12h，獲得基礎(chǔ)支架，掃描電鏡圖如圖1、圖2所示；用4%絲素蛋白水溶液噴涂在基礎(chǔ)支架上，涂覆量為0. 5mL/cm2，室溫(25°C )下晾M小時(shí)，內(nèi)外包裝后， 經(jīng)鈷-60輻照滅菌，獲得蠶絲支架。蠶絲支架的大體照片如圖3所示。實(shí)施例7取第二代的bMSCs，用血清含量10 %的低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)5-7天后，改用血清20 %的高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)兩周，形成細(xì)胞片(cell sheet)，將按照實(shí)施例6獲得蠶絲支架置于培養(yǎng)皿中，用細(xì)胞片將蠶絲支架裹在其中，即得到bMSCs復(fù)合蠶絲支架。圖4顯示為bMSCs 復(fù)合蠶絲支架熒光圖。實(shí)施例8 蠶絲支架在婦女壓力性尿失禁中的應(yīng)用(1)建立動(dòng)物模型經(jīng)腹腔麻醉后，通過(guò)雙側(cè)坐骨神經(jīng)近端橫斷術(shù)，從雙側(cè)背部皮膚做切口，分離坐骨直腸窩上方肌肉，暴露坐骨神經(jīng)3cm，從坐骨神經(jīng)發(fā)起處切除2cm，建立尿失禁動(dòng)物模型，橫斷術(shù)后4周測(cè)量漏尿點(diǎn)壓(Leak Point Pressure, LPP)確認(rèn)為壓力性尿失禁(SUI)模型。(2)蠶絲支架用于尿失禁治療1)實(shí)驗(yàn)分組將40只成年雌性的Sprague-Dawley大鼠分為四組，分別為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(A組，5只)，未處理組(B組，5只)，蠶絲支架組C組(15只)，bMSCs復(fù)合蠶絲支架組(D組，15只)。2)壓力性尿失禁A組為經(jīng)過(guò)相同的手術(shù)處理過(guò)程，但未切除神經(jīng)組；B/C/D三組均經(jīng)過(guò)雙側(cè)坐骨神經(jīng)近端橫斷術(shù)處理，術(shù)后4周，壓力測(cè)試如圖7所示，確認(rèn)其為壓力性尿失禁。3)壓力性尿失禁的治療B組未進(jìn)行蠶絲支架植入；C組進(jìn)行實(shí)施例6制備的蠶絲支架植入；D組進(jìn)行實(shí)施例7制備的bMSCs復(fù)合蠶絲支架植入，如圖5所示，術(shù)后4周，蠶絲支架如圖7所示，進(jìn)行LPP測(cè)試及評(píng)價(jià)治療效果，C組、D組的LPP接近正常值(A組)，均顯著高于B組，這表明，蠶絲支架及bMSCs復(fù)合蠶絲支架都能有效治療壓力性尿失禁；4)組織修復(fù)能力手術(shù)后12周后，手術(shù)取出大鼠尿道組織，置于2. 5%戊二醛中， 4°C冰箱固定過(guò)夜，石蠟包埋，切片。HE染色將片子依次置于二甲苯(I) IOmin, 二甲苯(II) IOmin, 95 %乙醇 (I) IOmin, 95%乙醇(II) IOmin, 80%乙醇5min，75%乙醇5min，脫蠟。脫蠟完成后置于蘇木精液染色lOmin，流水稍洗去蘇木精液10s，1 %鹽酸乙醇3s，稍水洗30s，促藍(lán)液返藍(lán)10s。而后流水沖洗30min。0. 5%曙紅液染色lmin，蒸餾水稍洗k，80%乙醇稍洗2So而后依次經(jīng)過(guò)95%乙醇(I)3min，95%乙醇(II) 3min，無(wú)水乙醇5min，無(wú)水乙醇5min，二甲苯(I)3min， 二甲苯(II)3min，二甲苯(III) 3min，處理完畢后，用中性樹膠封固。麥松染色按照HE染色的方法至蘇木精染色，自來(lái)水沖洗，鹽酸乙醇分化，自來(lái)水沖洗；麗春紅-品紅溶液洗5min，自來(lái)水洗；1 %磷鉬酸分化直到各種成分被染清晰約 5min;2%淡綠液染10分鐘(或用2%苯胺藍(lán)水溶液替代)；醋酸水溶液洗5min，水洗； 常規(guī)脫水、透明、封片(同HE染色)。通過(guò)HE染色和麥松染色，從組織學(xué)觀察蠶絲支架植入組(C組)及bMSCs復(fù)合蠶絲支架植入組(D組)的內(nèi)部結(jié)構(gòu)重建，結(jié)果如圖8、圖9所示，從HE染色及麥松染色圖可以看出，D組bMSCs復(fù)合蠶絲支架的組織修復(fù)能力及膠原含量均優(yōu)于C組單純的蠶絲支架。5)力學(xué)性能手術(shù)12周后，檢測(cè)蠶絲支架植入組(C組)和bMSCs復(fù)合蠶絲支架
植入組(D組)的力學(xué)性能，分別對(duì)蠶絲支架及bMSCs復(fù)合蠶絲支架進(jìn)行抗張力及楊氏模量
測(cè)試，所采用的試驗(yàn)儀器為萬(wàn)能電子材料試驗(yàn)機(jī)(Model SMSJnstron)。為了保證樣品的
新鮮，用浸有生理鹽水的紗布包裹樣品，并迅速置于4°C冰箱進(jìn)行保存。夾持樣品，保持夾具
兩端各留5mm的試樣。在0. IN預(yù)張力的處理下，保持5mm/min進(jìn)行張力測(cè)試，直至樣品斷 m農(nóng)。結(jié)果如圖10所示，C組單純蠶絲支架的楊氏模量為3.045±0.388Mpa，D組 bMSCs復(fù)合蠶絲支架的楊氏模量為4. 468士0. 510Mpa,而C組單純蠶絲支架抗張力為 1. 521 士0. 087N, D組bMSCs復(fù)合蠶絲支架的抗張力為2. 436士0. 192N。兩個(gè)結(jié)果均表明，D 組bMSCs復(fù)合蠶絲支架的力學(xué)性能都要優(yōu)于C組單純蠶絲支架。
權(quán)利要求
1.一種蠶絲支架，其特征在于所述的蠶絲支架由基礎(chǔ)支架及包覆在基礎(chǔ)支架表面的水溶性天然高分子材料層膜構(gòu)成，所述的基礎(chǔ)支架是由蠶絲編制成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2 的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)，所述的水溶性天然高分子材料為蠶絲絲素、透明質(zhì)酸、膠原或殼聚糖。
2.如權(quán)利要求1所述的蠶絲支架，其特征在于所述的水溶性天然高分子材料為蠶絲絲素。
3.如權(quán)利要求1所述的蠶絲支架，其特征在于所述的基礎(chǔ)支架由去除絲膠蛋白的蠶絲編制而成。
4.如權(quán)利要求1所述的蠶絲支架，其特征在于所述的蠶絲支架為結(jié)構(gòu)平整的片狀。
5.如權(quán)利要求1所述的蠶絲支架，其特征在于所述的基礎(chǔ)支架按如下方法制成先將蠶絲去掉絲膠蛋白，然后再使用機(jī)械或手工方法編織而成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)制成基礎(chǔ)支架。
6.如權(quán)利要求1所述的蠶絲支架，其特征在于所述的基礎(chǔ)支架按如下方法制成先將蠶絲使用機(jī)械或手工方法編織而成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2的待去絲膠蛋白的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)， 再將所述的待去絲膠蛋白的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)去掉絲膠蛋白。
7.如權(quán)利要求3、5、6所述的蠶絲支架，其特征在于所述的去絲膠蛋白的方法為(1)將蠶絲或待去絲膠蛋白的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)浸沉在質(zhì)量濃度為0. 0.3^Na2COyK溶液中，煮沸 60 150min ； (2)將步驟(1)煮沸處理后的蠶絲置于純水中，清洗1 3遍，室溫或干燥箱中干燥。
8.如權(quán)利要求1所述的蠶絲支架的制備方法，其特征在于所述的方法按如下步驟制成(1)將去除絲膠蛋白的蠶絲編制成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)制成基礎(chǔ)支架； (2)將基礎(chǔ)支架噴涂質(zhì)量濃度0. 20%的水溶性天然高分子材料的水溶液，噴涂量為 0. 5 3. OmL/cm2，在20 40°C干燥，在基礎(chǔ)支架表面形成天然高分子材料層膜，鈷-60輻照滅菌處理，獲得所述的蠶絲支架。
9.如權(quán)利要求1所述的蠶絲支架的制備方法，其特征在于所述的制備方法按照如下步驟進(jìn)行(1)將去除絲膠蛋白的蠶絲編制成網(wǎng)孔大小為0. 25 25mm2的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)制成基礎(chǔ)支架；( 在步驟(1)制備的基礎(chǔ)支架的表面噴涂質(zhì)量濃度0. 20%蠶絲絲素水溶液， 涂覆量為0. 5 3. OmL/cm2, 20 40°C干燥4 48h，鈷-60輻照滅菌，獲得所述的蠶絲支架。
10.如權(quán)利要求1所述的蠶絲支架應(yīng)用于生物體內(nèi)組織修補(bǔ)或加強(qiáng)，或生物體外組織構(gòu)建。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蠶絲支架及制備方法及在生物體組織修補(bǔ)與構(gòu)建的應(yīng)用，所述的蠶絲支架主要由基礎(chǔ)層膜和水溶性天然高分子材料層膜構(gòu)成，所述的基礎(chǔ)層膜由蠶絲編制而成的網(wǎng)片結(jié)構(gòu)，網(wǎng)孔大小為0.25～25mm2；所述的水溶性天然高分子材料為蠶絲絲素、透明質(zhì)酸、膠原或殼聚糖；本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在(1)本發(fā)明蠶絲支架結(jié)構(gòu)平整，具有良好的生物學(xué)、力學(xué)性能和良好的組織相容性；(2)蠶絲支架網(wǎng)孔大小均勻，可調(diào)整；(3)材料易得，制備方法簡(jiǎn)便；(4)本發(fā)明蠶絲支架中所采用的天然高分子材料，生物相容性好，操作簡(jiǎn)單；(5)本發(fā)明蠶絲支架適合于生物體內(nèi)組織修補(bǔ)或加強(qiáng)、生物體外組織構(gòu)建。
文檔編號(hào)A61L27/28GK102293688SQ201110149850
公開日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2011年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月3日
發(fā)明者謝淑君, 鄒曉暉, 陳隆坤 申請(qǐng)人:浙江星月生物科技股份有限公司