專利名稱：一種骨鈣素的注射用緩釋微球制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種骨鈣素的藥物制劑，尤其涉及一種骨鈣素的注射用緩釋微球制劑。
背景技術：
#1 y ^ 1S (Bone- y -caboxyglutamic acid containing protein,BGP)或依賴維生素K蛋白(Bone vitamin K depengt protein)，是非增殖期成骨細胞特異合成與分泌的一種非膠原蛋白。過去認為骨鈣素與骨質(zhì)疏松的關系密切，它的主要功能是維持骨的正常礦化，且能抑制成骨細胞活性，導致骨質(zhì)疏松。近年研究表明骨鈣素對糖尿病具有治療作用。骨鈣素相關藥理學及藥物制劑的研發(fā)目前已經(jīng)成為藥物學研發(fā)熱點之一。中國專利公開文獻CN101674839A(申請?zhí)?00880014594. 4，申請日2008年3月5 日)公開了一種骨鈣素的提取方法及相關組合物，其組合物包括藥物、飼料、生長促進劑及口腔護理組合物等，但其提取液組成復雜純化困難，無法保證藥物組合物中骨鈣素的穩(wěn)定性及人體給藥的安全性。骨鈣素口服給藥生物利用度較低，從藥物制劑技術方面講，其靜脈或皮下注射給藥較為理想。但是，骨鈣素屬于生物大分子物質(zhì)，穩(wěn)定性極差，易于降解或發(fā)生構象改變從而喪失生物活性，溶解性較低，難以制成穩(wěn)定的注射制劑，迄今為止，尚無骨鈣素的注射制劑研發(fā)成功。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術，本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定性強、載藥量高、緩釋效果好的骨鈣素的藥物制劑，即骨鈣素的注射用緩釋微球制劑。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案為一種骨鈣素的注射用緩釋微球制劑，由骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物組成，其中，骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物的重量比為(5-30) (0.1-1) 100。所述骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物的重量比為(10- ) 0.4 100。所述骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物的重量比為15 0.4 100。所述的骨鈣素的注射用緩釋微球制劑的制備方法，步驟為1)將骨鈣素和硫酸鋅溶于水，調(diào)節(jié)pH值為8-10，作為內(nèi)水相；2)將乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷作為油相；3)將內(nèi)水相與油相混合，冰浴條件下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌成初乳；4)在9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌條件下，將初乳加入到質(zhì)量濃度為4%的聚乙烯醇水溶液中得復乳；5)將復乳在室溫下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌5小時，離心收集微球，用注射用水洗滌微球后冷凍干燥。
所述步驟1)中調(diào)節(jié)pH值采用的調(diào)節(jié)劑為碳酸氫鈉溶液。本發(fā)明的發(fā)明人進行了大量制劑學及動物實驗，研究表明，本發(fā)明的骨鈣素的注射用緩釋微球制劑穩(wěn)定性良好，載藥量大，包封率可控制在82% _95%，加速試驗條件不發(fā)生降解、聚集及構象改變，且體內(nèi)安全性良好。本發(fā)明所采用的制備方法，簡單，工藝條件易控制，適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，并易于得到質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，批間差異小，便于質(zhì)量控制。小鼠尾靜脈注射后測得本發(fā)明的注射用緩釋微球制劑生物利用度可高達72% -76%。
具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的解釋。應當理解的是，以下實施例僅用于解釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的保護范圍。實施例1制備骨鈣素的注射用緩釋微球制劑配方如下骨鈣素20g碳酸鋅0. 5g乳酸-羥基乙酸共聚物 100g。制備方法如下1)將骨鈣素和硫酸鋅溶于水，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值為8-10，作為內(nèi)水相；2)將乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷作為油相；3)將內(nèi)水相與油相混合，冰浴條件下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌成初乳；4)在9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌條件下，將初乳加入到質(zhì)量濃度為4%的聚乙烯醇水溶液中得復乳；5)將復乳在室溫下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌5小時，離心收集微球，用注射用水洗滌微球后冷凍干燥。實施例2制備骨鈣素的注射用緩釋微球制劑配方如下骨鈣素30g碳酸鋅0. 4g乳酸-羥基乙酸共聚物100g。制備方法如下1)將骨鈣素和硫酸鋅溶于水，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值為8-10，作為內(nèi)水相；2)將乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷作為油相；3)將內(nèi)水相與油相混合，冰浴條件下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌成初乳；4)在9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌條件下，將初乳加入到質(zhì)量濃度為4%的聚乙烯醇水溶液中得復乳；5)將復乳在室溫下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌5小時，離心收集微球，用注射用水洗滌微球后冷凍干燥。實施例3制備骨鈣素的注射用緩釋微球制劑配方如下骨鈣素15g
碳酸鋅0. 4g乳酸-羥基乙酸共聚物 100g。制備方法如下1)將骨鈣素和硫酸鋅溶于水，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值為8-10，作為內(nèi)水相；2)將乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷作為油相；3)將內(nèi)水相與油相混合，冰浴條件下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌成初乳；4)在9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌條件下，將初乳加入到質(zhì)量濃度為4%的聚乙烯醇水溶液中得復乳；5)將復乳在室溫下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌5小時，離心收集微球，用注射用水洗滌微球后冷凍干燥。實施例4制備骨鈣素的注射用緩釋微球制劑配方如下骨鈣素15g碳酸鋅0. 2g乳酸-羥基乙酸共聚物 100g。制備方法如下1)將骨鈣素和硫酸鋅溶于水，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值為8-10，作為內(nèi)水相；2)將乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷作為油相；3)將內(nèi)水相與油相混合，冰浴條件下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌成初乳；4)在9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌條件下，將初乳加入到質(zhì)量濃度為4%的聚乙烯醇水溶液中得復乳；5)將復乳在室溫下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌5小時，離心收集微球，用注射用水洗滌微球后冷凍干燥。實施例5穩(wěn)定性考察實施例1和實施例4制備的凍干粉各4份，1份為對照品測定主藥含量后室溫下留存，另外3份為實驗品，分別置光照(4500士500) lx、高溫(50士2) °C及高濕(70士5) %條件下放置60天，分別于第10天、30天及60天時取樣，觀察其外觀，測定主藥含量。各制劑外觀無顯著改變，主藥含量等無顯著差異，制劑中骨鈣素未出現(xiàn)降解、聚集等現(xiàn)象。第60天時取樣得到的各制劑主藥含量數(shù)據(jù)見表1，其中主藥含量以實驗品實測主藥含量與對照品實測主藥含量的百分比表示。表 1
實施例1樣品實施例4樣品-
主藥含量98. 2-99. 7% 98. 4-99. 2%由表1可見，實施例1和實施例4制備的骨鈣素的注射用緩釋微球制劑穩(wěn)定性較強，高溫、高濕、光照條件下放置60天，主藥含量無顯著減少。實施例6骨鈣素注射用緩釋微球制劑體外釋藥試驗精密稱取實施例1至實施例4制備的骨鈣素注射用緩釋微球與不同的離心管中， 將如lOmmol/L的pH7. 4的磷酸鹽緩沖液，室溫下以100轉(zhuǎn)/分鐘水浴攪拌，分別于不同時間點用吸管從溶液中吸取Iml用于定量測定，計算骨鈣素的累積釋放量。實驗表明，實施例1至實施例4制備的骨鈣素注射用緩釋微球無突釋現(xiàn)象，可緩釋 7天-11天。實施例7骨鈣素注射用緩釋微球制劑血管刺激性試驗將實施例2和實施例3制備的注射用緩釋微球制劑按照30mg/ml濃度溶于生理鹽水。取健康家兔9只，雌雄不拘。按體重分為3組，每組3只，1組耳緣靜脈注射給予5ml生理鹽水，其余2組分別耳緣靜脈注射給予實施例1和實施例2制備的凍干粉的生理鹽水溶液5ml，每天給藥2次，連續(xù)給藥7天。給藥方式如下將兔固定于兔盒中，透光檢查耳緣靜脈的情況正常后，用75%酒精棉球消毒，耳緣靜脈注射受試藥物或生理鹽水。每次給藥后及末次給藥后48小時和96小時對動物和注射部位進行肉眼觀察，觀察期結束時每組麻醉處死2只動物，在距靜脈注入的近心端Icm處，每隔Icm切取0. 5cm寬標本，共取3塊；常規(guī)固定后H-E染色，進行鏡下病理觀察，確定血管刺激程度。各組最后 1只動物與給藥后5天麻醉處死，在距靜脈注入的近心端Icm處，每隔Icm切取0. 5cm寬標本，共取3塊；常規(guī)固定后H-E染色，進行鏡下病理觀察，確定血管刺激程度。試驗結果表明，在本試驗的給藥方案下，實施例1和實施例2所得注射用緩釋微球制劑均不存在血管刺激性。
權利要求
1.一種骨鈣素的注射用緩釋微球制劑，其特征在于由骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物組成，其中，骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物的重量比為 (5-30) (0. 1-1) 100。
2.根據(jù)權利要求1所述的骨鈣素的注射用緩釋微球制劑，其特征在于所述骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物的重量比為(10-28) 0.4 100。
3.根據(jù)權利要求1所述的骨鈣素的注射用緩釋微球制劑，其特征在于所述骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物的重量比為15 0.4 100。
4.權利要求1-3中任一項所述的骨鈣素的注射用緩釋微球制劑的制備方法，其特征在于，步驟為1)將骨鈣素和硫酸鋅溶于水，調(diào)節(jié)PH值為8-10，作為內(nèi)水相；2)將乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷作為油相；3)將內(nèi)水相與油相混合，冰浴條件下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌成初乳；4)在9500轉(zhuǎn)/分攪拌條件下，將初乳加入到質(zhì)量濃度為4%的聚乙烯醇水溶液中得復乳；5)將復乳在室溫下9500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌5小時，離心收集微球，用注射用水洗滌微球后冷凍干燥。
5.根據(jù)權利要求4所述的骨鈣素的注射用緩釋微球制劑的制備方法，其特征在于，步驟1)中調(diào)節(jié)PH值采用的調(diào)節(jié)劑為碳酸氫鈉溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種骨鈣素的注射用緩釋微球制劑，由骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物組成，其中，骨鈣素、硫酸鋅和乳酸-羥基乙酸共聚物的重量比為(5-30)∶(0.1-1)∶100。制備方法為1)將骨鈣素和硫酸鋅溶于水，作為內(nèi)水相；2)將乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷作為油相；3)將內(nèi)水相與油相混合，攪拌成初乳；4)在攪拌條件下，將初乳加入到聚乙烯醇水溶液中得復乳；5)將復乳在室溫下攪拌5小時，離心收集微球，用注射用水洗滌微球后冷凍干燥。本發(fā)明的制劑穩(wěn)定性良好，載藥量大，包封率可控制在82％-95％，加速試驗條件不發(fā)生降解、聚集及構象改變，且體內(nèi)安全性良好。小鼠尾靜脈注射后測得本發(fā)明的注射用緩釋微球制劑生物利用度可高達72％-76％。
文檔編號A61P19/08GK102258479SQ20111011344
公開日2011年11月30日 申請日期2011年5月4日 優(yōu)先權日2011年5月4日
發(fā)明者厲保秋, 李艷, 王會巖, 蔡建輝, 高繼友 申請人:吉林醫(yī)藥學院