專利名稱：一種六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥成藥質(zhì)量控制，具體涉及一種快速測(cè)定六味地黃丸濃縮丸提取濃 縮液比重及馬錢苷、丹皮酚含量含量的方法。
背景技術(shù)：
中藥是我國(guó)最具有原創(chuàng)和自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)業(yè)之一。中成藥與飲片是中藥的主要 臨床應(yīng)用形式。由于中藥療效的物質(zhì)基礎(chǔ)的復(fù)雜性，中成藥的質(zhì)量控制技術(shù)手段較為粗放， 體現(xiàn)在中成藥的質(zhì)量控制采用的是工藝制法控制，加上代表性的化學(xué)指標(biāo)性成分定量檢測(cè) 和制劑定性檢查。即，“過(guò)程上的定性加點(diǎn)上的定量”。沒(méi)有全過(guò)程的以理化指標(biāo)為基礎(chǔ)的 全面質(zhì)量控制，這是導(dǎo)致中成藥質(zhì)量、臨床療效穩(wěn)定性差的重要原因之一。六味地黃丸系北宋名醫(yī)錢仲陽(yáng)之名方，始載于《小兒藥證直訣》，由熟地黃、山萸 肉、山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓等六味藥以8-4-4-3-3-3重量比例組成。六味地黃丸滋補(bǔ)腎 陰，為治療腎陰不足的基本藥方?，F(xiàn)代藥理研究表明該方具有免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)、延緩衰老、降 血糖作用，具有對(duì)心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用，抗腫瘤的作用，能改善腎功能、促進(jìn)腎臟對(duì)體內(nèi) 代謝產(chǎn)物尿素的排泄等；臨床用于治療慢性腎炎、高血壓、糖尿病、神經(jīng)衰弱等。六味地黃丸濃縮丸為六味地黃丸采用現(xiàn)代制劑工藝對(duì)部分藥材進(jìn)行提取濃縮后 改劑而成，其制劑過(guò)程較長(zhǎng)，制劑過(guò)程如下處方熟地黃120g，山茱萸(制)60g，牡丹皮 45g，山藥60g，茯苓45g，澤瀉45g六味，牡丹皮提取丹皮酚；藥渣與山茱萸20. 3g、熟地黃、 茯苓、澤瀉加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1. 35-1. 40 的稠膏；山藥與剩余山茱萸粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；將以上稠膏、細(xì)粉、丹皮酚混勻，制丸， 干燥，打光，即得。該制劑過(guò)程主要為煎煮和濃縮，藥材及提取物受熱時(shí)間長(zhǎng)，現(xiàn)有技術(shù)標(biāo)準(zhǔn) 規(guī)定了成品需要進(jìn)行性狀鑒別檢查含量測(cè)定等內(nèi)容，過(guò)程質(zhì)量控制內(nèi)容僅僅 規(guī)定了操作工藝參數(shù)而無(wú)過(guò)程質(zhì)量控制手段。近紅外光譜定性定量檢測(cè)技術(shù)是建立在傳統(tǒng)理化分析手段基礎(chǔ)上的二級(jí)分析方 法，依賴于近紅外光譜儀、計(jì)算機(jī)技術(shù)和化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件基礎(chǔ)，是目前應(yīng)用在化工煙草、石 油等行業(yè)較為成熟的在線和快速檢測(cè)手段。近紅外光譜法技術(shù)應(yīng)用于中成藥的質(zhì)量控制研究近年來(lái)逐漸增加。僅就六味地黃 丸成品的單成分快速測(cè)定指標(biāo)就包括水分、丹皮酚、熊果酸；還有多指標(biāo)同時(shí)測(cè)定，如六味 地黃丸成品水分、丹皮酚、馬錢苷三指標(biāo)的同時(shí)測(cè)定[6]；也有進(jìn)行近紅外分析模型與毛細(xì)管 電泳指紋(特征)圖譜相關(guān)性[7]，都獲得了很好的預(yù)測(cè)模型。此外，文獻(xiàn)M還成功建立了 從18種中藥丸劑中定性鑒別六位地黃丸的近紅外快速鑒別分析方法，文獻(xiàn)[9]還成功建立 以均勻度為基礎(chǔ)的六味地黃丸粉末混合過(guò)程在線近紅外監(jiān)測(cè)方法，文獻(xiàn)[1°]還成功建立以 標(biāo)準(zhǔn)樣為基礎(chǔ)的六味地黃丸近紅外質(zhì)量控制及真?zhèn)舞b別模型。但尚未見(jiàn)到以生產(chǎn)過(guò)程控制 為目標(biāo)，同時(shí)進(jìn)行理化指標(biāo)測(cè)定的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了進(jìn)一步提高和穩(wěn)定六味地黃丸濃縮丸的產(chǎn)品質(zhì)量，克服中成藥無(wú)生產(chǎn)過(guò)程的 理化指標(biāo)在線控制，本發(fā)明應(yīng)用聲光可調(diào)(AOTF)-近紅外光譜技術(shù)對(duì)六味地黃丸濃縮丸比 重和指標(biāo)成分進(jìn)行連續(xù)取樣和現(xiàn)場(chǎng)分析，結(jié)合傳統(tǒng)定量檢測(cè)，建立了在線應(yīng)用的六味地黃 丸濃縮丸提取濃縮液比重、指標(biāo)成分的近紅外模型。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法，具體涉及一種快速測(cè)定六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近 紅外光譜，比重及丹皮酚和馬錢苷含量的方法，其特征在于包括如下步驟步驟1、測(cè)定合格六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液的比重、丹皮酚和馬錢苷含量，并 采集近紅外光譜；步驟2、采用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別建六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外光譜與 比重、丹皮酚和馬錢苷含量之間的對(duì)應(yīng)模型；步驟3、測(cè)定待測(cè)的六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液樣品的近紅外光譜；步驟4、利用對(duì)應(yīng)模型，通過(guò)化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別獲得待測(cè)的六味地黃丸濃縮丸提 取濃縮液樣品的比重、以及丹皮酚和馬錢苷的含量。所述六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液制備及測(cè)定方法如下按照法定標(biāo)準(zhǔn)六味地黃丸濃縮丸處方，取處理好的牡丹皮，提取丹皮酚，收集丹皮 酚；藥渣與山茱萸、熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液；取煎煮液和丹 皮酚蒸餾母液，濾過(guò)，濾液于50 70°C真空濃縮至相對(duì)比重為1. 35 1. 40的稠膏，現(xiàn)場(chǎng)收 集濃縮液，取樣測(cè)定比重、丹皮酚和馬錢苷含量，并采集近紅外光譜。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外光譜 采集時(shí)，采用透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是1-1000次掃描的平均結(jié)果，分辨率0. 3-20nm, 掃描光譜范圍為1100-2300nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外光譜 時(shí)，采用透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是200-500次掃描的平均結(jié)果，分辨率l-5nm，掃描光 譜范圍為1100-2300nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外光譜 時(shí)，采用透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是300次掃描的平均結(jié)果，分辨率2nm，掃描光譜范圍 為 1100-2300nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外光譜 時(shí)，以現(xiàn)場(chǎng)取樣方式、在線取樣方式和旁線取樣方式之一進(jìn)行。本發(fā)明所述的方法，其特征在于樣品馬錢苷采用RP-HPLC對(duì)連續(xù)收集的所有濃 縮液樣品進(jìn)行含量分析，采用色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流動(dòng)相 為四氫呋喃-甲醇-乙腈-0.05%磷酸溶液(1 :4:8: 87)，進(jìn)樣體積20uL，流速Iml/ min, UV檢測(cè)波長(zhǎng)236nm;本發(fā)明所述的方法，其特征在于樣品丹皮酚采用RP-HPLC對(duì)連續(xù)收集的所有濃 縮液樣品進(jìn)行含量分析，采用色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流動(dòng)相 為甲醇-水(58 42)，進(jìn)樣體積20uL，流速lml/min，UV檢測(cè)波長(zhǎng)274nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于步驟2中模型的建立包括(1) 一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn) 平滑法(savitzky-golay)光譜預(yù)處理；⑵采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗(yàn)證法(cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預(yù)測(cè)效果驗(yàn) 證。本發(fā)明所述的方法，其特征在于步驟2中模型的建立包括(1) 一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn) 平滑法(savitzky-golay)光譜預(yù)處理；⑵采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗(yàn)證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預(yù)測(cè)效果驗(yàn) 證；(4)精密度試驗(yàn)；(5)穩(wěn)定性試驗(yàn)。本發(fā)明采用AOTF-近紅外光譜技術(shù)建立六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液比重、馬錢 苷及丹皮酚含量的數(shù)學(xué)模型，可以快速在線監(jiān)測(cè)六味地黃丸濃縮丸提取濃縮過(guò)程。該方法 操作簡(jiǎn)便、分析迅速，為六味地黃丸濃縮丸提取濃縮過(guò)程中指標(biāo)成分及物理指標(biāo)快速定量 分析和生產(chǎn)過(guò)程中的在線檢測(cè)，控制產(chǎn)品的質(zhì)量提供了高效的分析方法。


圖1馬錢苷對(duì)照品HPLC圖譜圖2六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液樣品HPLC圖譜1圖3丹皮酚對(duì)照品HPLC圖譜圖4六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液樣品HPLC圖譜2圖5六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液樣品近紅外光譜原始總光譜6六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液樣品近紅外光譜一階導(dǎo)數(shù)光譜圖
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不表明對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求的限制。實(shí)施例1儀器與試藥儀器AOTF便攜式Luminar 5030-731近紅外光譜分析儀(美國(guó)BRIMR0SE公司)， 配套SNAP光譜采集軟件和CAMO化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件；AglientllOO色譜儀(美國(guó)Agilent公 司)，DAD 二極管陣列檢測(cè)器；安東帕便攜式比重計(jì)DMA35 (奧地利Anton Paar公司)；多功 能提取罐(常熟市醫(yī)藥化工設(shè)備總廠)，真空減壓濃縮罐(常熟市醫(yī)藥化工設(shè)備總廠)。試藥牡丹皮藥材、山茱萸藥材、熟地黃藥材、茯苓藥材、澤瀉藥材(江西匯仁藥業(yè) 有限公司)；丹皮酚對(duì)照品、馬錢苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)；甲醇、乙腈為色譜 純?cè)噭?，四氫呋喃，磷酸為分析純，水為超純水。方法與結(jié)果1樣品制備與收集取處理好的牡丹皮900g，提取丹皮酚，收集丹皮酚，總量約IOg ；丹皮酚藥渣與山 茱萸406g、熟地黃MOOg、茯苓900g、澤瀉900g加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，總 量約2500ml ；取煎煮液和丹皮酚蒸餾母液，濾過(guò)，濾液于50 70°C真空濃縮至相對(duì)比重為 1. 35 1. 40的稠膏，現(xiàn)場(chǎng)收集濃縮液，每50ml —份，取樣測(cè)定比重及丹皮酚和馬錢苷含量， 并采集近紅外光譜，共收集樣品50份。2樣品馬錢苷、丹皮酚HPLC分析2. 1樣品馬錢苷HPLC分析采用RP-HPLC對(duì)連續(xù)收集的所有濃縮液樣品進(jìn)行馬錢苷量分析，分析條件色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流動(dòng)相為四氫 呋喃-甲醇-乙腈-0.05%磷酸溶液(1 :4:8: 87)，進(jìn)樣體積20uL，流速lml/min，UV 檢測(cè)波長(zhǎng)236nm，運(yùn)行時(shí)間15min。重現(xiàn)性變異系數(shù)分別為0. 66% (n = 3),圖譜見(jiàn)附圖1、 附圖2。校正集樣品結(jié)果帶入軟件建立模型，驗(yàn)證集樣品用于模型驗(yàn)證。2. 2樣品丹皮酚HPLC分析采用RP-HPLC對(duì)連續(xù)收集的所有濃縮液樣品進(jìn)行丹皮 酚含量分析，分析條件色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流動(dòng)相為甲 醇-水(58 42)，進(jìn)樣體積20uL，流速lml/min，UV檢測(cè)波長(zhǎng)274nm，運(yùn)行時(shí)間30min。重 現(xiàn)性變異系數(shù)分別為0.45% (n = 3)，圖譜見(jiàn)附圖3、附圖4。校正集樣品結(jié)果帶入軟件建 立模型，驗(yàn)證集樣品用于模型驗(yàn)證。3樣品比重測(cè)定采用安東帕便攜式比重計(jì)DMA35測(cè)定(室溫)。4獲取OTR光譜掃描光譜時(shí)在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長(zhǎng)2m，待 溶液穩(wěn)定并無(wú)氣泡后進(jìn)行掃描.測(cè)試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍 為1100 2300nm。共得到50個(gè)樣品的總光譜圖，見(jiàn)附圖5。5建立模型5. 1光譜預(yù)處理對(duì)掃描得到的原始吸收光譜進(jìn)行光譜預(yù)處理，以消除噪音和基線 漂移的影響。采用的預(yù)處理方法為一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn)平滑法(savitzky-golay)，一階導(dǎo)數(shù)光譜 圖見(jiàn)附圖6。經(jīng)一階導(dǎo)數(shù)處理可以很好的消除樣品由于顏色差別引起的光譜基線偏移和漂 移。5. 2建立PLSl數(shù)學(xué)模型樣品分別順序編號(hào)，隨機(jī)選擇10個(gè)作為外部驗(yàn)正集樣品， 其余作為建模樣品。將經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的光譜數(shù)據(jù)與HPLC分析數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二 乘法(PLSl)，交叉-驗(yàn)證法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析軟件建立模型。 NIR和HPLC測(cè)定的異常值分別采用光譜影響值Leverage和化學(xué)值誤差Residual這2個(gè)統(tǒng) 計(jì)量來(lái)檢驗(yàn)剔除。經(jīng)過(guò)異常值的剔除進(jìn)行優(yōu)化，得到較為理想的校正模型。得到的樣品比 重及馬錢苷、丹皮酚的OTR光譜預(yù)測(cè)值與樣品比重實(shí)測(cè)值及HPLC分析值之間相關(guān)性良好， 測(cè)定數(shù)據(jù)偏差較小。樣品比重模型的主成分維數(shù)為4，R2 = 0. 9945，RMSECV = 0. 003760 ； 馬錢苷模型的主成分維數(shù)為4，R2 = 0. 9967，RMSECV = 0. 010015，丹皮酚模型的主成分維 數(shù)為 5，R2 = 0. 9522，RMSECV = 0. 430716。5. 3模型預(yù)測(cè)效果驗(yàn)證以建立的校正模型對(duì)10份外部驗(yàn)正集樣品進(jìn)行分析。樣 品比重及馬錢苷、丹皮酚的測(cè)試結(jié)果分別見(jiàn)附表1。OTR光譜預(yù)測(cè)值與樣品比重真值、馬錢 苷及丹皮酚HPLC測(cè)定真值的相關(guān)系數(shù)R2分別為0. 994,0. 997,0. 992。結(jié)果表明，OTR光譜 預(yù)側(cè)值與樣品比重實(shí)測(cè)值及HPLC分析值之間相關(guān)性良好。6精密度試驗(yàn)取1個(gè)預(yù)測(cè)樣品，重復(fù)掃描20次，將所得光譜帶入建立的校正模型計(jì)算含量，以 考察方法的精密度，結(jié)果濃縮液比重和馬錢苷、丹皮酚含量的RSD分別為0. 05%,0. 83%, 2. 00%，表明儀器精精密度良好。7穩(wěn)定性試驗(yàn)取1個(gè)預(yù)測(cè)樣品，每Ih掃描一次，于證內(nèi)重復(fù)掃描5次，考察樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果樣品比重的RSD為1.08%，馬錢苷苷的RSD為1.97%，丹皮酚的RSD為1.46%，表明樣品 在證內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。8預(yù)測(cè)回收率試驗(yàn)取5個(gè)預(yù)測(cè)樣品，分別掃描，將所得光譜帶入建立的校正模型，計(jì)算比重和馬錢 苷、丹皮酚預(yù)測(cè)值與比重測(cè)定及HPLC測(cè)定的真值之間的比值(預(yù)測(cè)回收率)，樣品比重和馬 錢苷、丹皮酚的預(yù)測(cè)回收率分別為99. 9 %，100. 2%,92.8%0本研究采用在線取樣方式建立 六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液的AOTF-近紅外光譜模型并校正確立后，完成1次測(cè)量只需 2min ；而HPLC測(cè)定以上指標(biāo)需分別提取和測(cè)試，測(cè)試過(guò)程約需3h。AOTF-OTR技術(shù)測(cè)定濃縮 六味地黃丸濃縮液中馬錢苷、丹皮酚及濃縮液比重，集快速、直接、多成分同時(shí)測(cè)定和能夠 實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)分析為一體，解決了六味地黃丸濃縮丸提取液濃縮過(guò)程中定量分析的操作復(fù)雜、 分析周期長(zhǎng)，不能用于在線檢測(cè)的問(wèn)題，分析結(jié)果令人滿意，各項(xiàng)分析參數(shù)能夠基本滿足中 藥制劑生產(chǎn)過(guò)程中現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的要求。本方法為實(shí)現(xiàn)濃縮六味地黃丸濃縮丸制劑生產(chǎn)過(guò)程中 的理化指標(biāo)的在線質(zhì)量控制提供了有效方法和技術(shù)基礎(chǔ)。附表1六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液理化指標(biāo)校正模型對(duì)外部驗(yàn)證集樣品的分 析結(jié)果(n = 10)
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液比重及馬錢苷、丹皮酚含量的方法，其特征 在于包括如下步驟步驟1、測(cè)定合格六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液的比重及丹皮酚和馬錢苷含量，并采集 近紅外光譜；步驟2、采用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別建立六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外光譜與比 重、丹皮酚和馬錢苷含量之間的對(duì)應(yīng)模型；步驟3、測(cè)定待測(cè)的六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液樣品的近紅外光譜；步驟4、利用對(duì)應(yīng)模型，通過(guò)化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別獲得待測(cè)的六味地黃丸濃縮丸提取濃 縮液樣品的比重及丹皮酚和馬錢苷含量。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其特征在于采集六味地黃丸濃縮丸提取濃 縮液近紅外光譜采集時(shí)，采用透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是1-1000次掃描的平均結(jié)果， 分辨率0. 3-20nm，掃描光譜范圍為1100_2300nm。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采集六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外 光譜時(shí)，采用透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是200-500次掃描的平均結(jié)果，分辨率l-5nm，掃 描光譜范圍為1100-2300nm。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采集六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外 光譜時(shí)，采用透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是300次掃描的平均結(jié)果，分辨率2nm，掃描光譜 范圍為 1100-2300nm。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于樣品馬錢苷采用RP-HPLC對(duì)連續(xù)收集的所 有濃縮液樣品進(jìn)行含量分析，采用色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流 動(dòng)相為四氫呋喃-甲醇-乙腈-0.05%磷酸溶液(1 :4:8: 87)，進(jìn)樣體積20uL，流速 lml/min, UV 檢測(cè)波長(zhǎng) 236nm。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于樣品樣品丹皮酚采用RP-HPLC對(duì)連續(xù)收 集的所有濃縮液樣品進(jìn)行含量分析，采用色譜柱YMC ODS分析柱(6X 150mm，5 μ m，柱溫 25°C )，流動(dòng)相為甲醇-水(58 42)，進(jìn)樣體積20uL，流速11111/1^11，而檢測(cè)波長(zhǎng)27411111。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟2中模型的建立包括(1)一階導(dǎo)數(shù)9 點(diǎn)平滑法(savitzky-golay)光譜預(yù)處理；(2)采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗(yàn)證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預(yù)測(cè)效果驗(yàn) 證。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟2中模型的建立包括(1)一階導(dǎo)數(shù)9 點(diǎn)平滑法(savitzky-golay)光譜預(yù)處理；( 采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗(yàn)證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預(yù)測(cè)效果驗(yàn) 證；(4)精密度試驗(yàn)；(5)穩(wěn)定性試驗(yàn)。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟如下步驟1、測(cè)定合格六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液的比重、丹皮酚和馬錢苷含量，并采集 近紅外光譜；取處理好的牡丹皮900g，提取丹皮酚，收集丹皮酚，總量約IOg ；丹皮酚藥渣與山茱 萸406g、熟地黃MOOg、茯苓900g、澤瀉900g加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，總量 約2500ml ；取煎煮液和丹皮酚蒸餾母液，濾過(guò)，濾液于50 70°C真空濃縮至相對(duì)比重為. 1. 35 1. 40的稠膏，現(xiàn)場(chǎng)收集濃縮液，每50ml —份，取樣測(cè)定比重及丹皮酚和馬錢苷含量， 并采集近紅外光譜，共收集樣品50份，樣品馬錢苷HPLC分析采用RP-HPLC對(duì)連續(xù)收集的所有濃縮液樣品進(jìn)行馬錢苷量分 析，分析條件色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流動(dòng)相為四氫呋喃-甲 醇-乙腈-0.05%磷酸溶液(1 :4:8: 87)，進(jìn)樣體積20uL，流速lml/min，UV檢測(cè)波長(zhǎng) 236nm，運(yùn)行時(shí)間15min，重現(xiàn)性變異系數(shù)分別為0. 66% (n = 3),圖譜見(jiàn)附圖1、附圖2，校正 集樣品結(jié)果帶入軟件建立模型，驗(yàn)證集樣品用于模型驗(yàn)證，樣品丹皮酚HPLC分析采用RP-HPLC對(duì)連續(xù)收集的所有濃縮液樣品進(jìn)行丹皮酚含量 分析，分析條件色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流動(dòng)相為甲醇-水 (58 42)，進(jìn)樣體積20uL,流速lml/min，UV檢測(cè)波長(zhǎng)274nm,運(yùn)行時(shí)間30min,重現(xiàn)性變異 系數(shù)分別為0. 45% (η = 3),圖譜見(jiàn)附圖3、附圖4，校正集樣品結(jié)果帶入軟件建立模型，驗(yàn) 證集樣品用于模型驗(yàn)證， 樣品比重測(cè)定采用安東帕便攜式比重計(jì)DMA35測(cè)定(室溫)， 獲取OTR光譜掃描光譜時(shí)在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長(zhǎng)2m，待溶液 穩(wěn)定并無(wú)氣泡后進(jìn)行掃描.測(cè)試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍為 1100 2300nm，共得到50個(gè)樣品的總光譜圖，見(jiàn)附圖5，步驟2、采用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別建六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外光譜與比重、 丹皮酚和馬錢苷濃度之間的對(duì)應(yīng)模型；光譜預(yù)處理對(duì)掃描得到的原始吸收光譜進(jìn)行光譜預(yù)處理，以消除噪音和基線漂移的 影響，采用的預(yù)處理方法為一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn)平滑法(savitzky-golay)，一階導(dǎo)數(shù)光譜圖見(jiàn)附 圖6，經(jīng)一階導(dǎo)數(shù)處理可以很好的消除樣品由于顏色差別引起的光譜基線偏移和漂移，建立PLSl數(shù)學(xué)模型樣品分別順序編號(hào)，隨機(jī)選擇10個(gè)作為外部驗(yàn)正集樣品，其余 作為建模樣品，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的光譜數(shù)據(jù)與HPLC分析數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法 (PLSl)，交叉-驗(yàn)證法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析軟件建立模型，NIR 和HPLC測(cè)定的異常值分別采用光譜影響值Leverage和化學(xué)值誤差Residual這2個(gè)統(tǒng)計(jì) 量來(lái)檢驗(yàn)剔除，經(jīng)過(guò)異常值的剔除進(jìn)行優(yōu)化，得到較為理想的校正模型，得到的樣品比重及 馬錢苷、丹皮酚的肌R光譜預(yù)測(cè)值與樣品比重實(shí)測(cè)值及HPLC分析值之間相關(guān)性良好，測(cè)定 數(shù)據(jù)偏差較小，樣品比重模型的主成分維數(shù)為4，R2 = 0. 9945, RMSECV = 0. 003760 ；馬錢苷 模型的主成分維數(shù)為4，R2 = 0. 9967，RMSECV = 0. 010015，丹皮酚模型的主成分維數(shù)為5， R2 = 0. 9522，RMSECV = 0. 430716，步驟3、測(cè)定待測(cè)的六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液樣品的近紅外光譜； 步驟4、利用對(duì)應(yīng)模型，通過(guò)化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別獲得待測(cè)的六味地黃丸濃縮丸提取濃 縮液樣品的比重、丹皮酚和馬錢苷含量。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液制備及 測(cè)定方法如下按照法定標(biāo)準(zhǔn)六味地黃丸濃縮丸處方，取處理好的牡丹皮，提取丹皮酚，收集丹皮酚; 藥渣與山茱萸、熟地黃、茯苓、澤瀉加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液；取煎煮液和丹皮酚蒸餾母液，濾過(guò)，濾液于50 70°C真空濃縮至相對(duì)比重為1. 35 1. 40的稠膏，現(xiàn)場(chǎng)收集 濃縮液，取樣測(cè)定比重、丹皮酚和馬錢苷含量，并采集近紅外光譜。
全文摘要
本發(fā)明提供一種六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液質(zhì)量控制方法，包括如下步驟步驟1、測(cè)定合格六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液的比重、丹皮酚和馬錢苷含量，并采集近紅外光譜；步驟2、采用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別建六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液近紅外光譜與比重、丹皮酚和馬錢苷濃度之間的對(duì)應(yīng)模型；步驟3、測(cè)定待測(cè)的六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液樣品的近紅外光譜；步驟4、利用對(duì)應(yīng)模型，通過(guò)化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別獲得待測(cè)的六味地黃丸濃縮丸提取濃縮液樣品的比重、丹皮酚和馬錢苷濃度。
文檔編號(hào)A61K9/20GK102106939SQ201110067860
公開(kāi)日2011年6月29日 申請(qǐng)日期2011年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月21日
發(fā)明者孫曉波, 杜育華, 梅玲華, 王木蘭, 耿炤, 胡浩武 申請(qǐng)人:江西匯仁藥業(yè)有限公司