專利名稱：一種腎寶合劑滲漉液的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及中藥成藥質(zhì)量控制，具體涉及一種快速測定腎寶合劑滲漉液比重及淫 羊藿苷含量的方法。
背景技術(shù)：
中藥是我國最具有原創(chuàng)和自主知識產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)業(yè)之一。中成藥與飲片是中藥的主要 臨床應用形式。由于中藥療效的物質(zhì)基礎的復雜性，中成藥的質(zhì)量控制技術(shù)手段較為粗放， 體現(xiàn)在中成藥的質(zhì)量控制采用的是工藝制法控制，加上代表性的化學指標性成分定量檢測 和制劑定性檢查。即，“過程上的定性加點上的定量”。沒有全過程的以理化指標為基礎的 全面質(zhì)量控制，這是導致中成藥質(zhì)量、臨床療效穩(wěn)定性差的重要原因之一。腎寶合劑(腎寶)收錄于《中華人民共和國衛(wèi)生部要藥品標準-中藥成方制劑(第 十五冊)》(標準編號WS3-B-2913-98)，由淫羊藿、當歸、補骨脂、蛇床子等22味中藥組成， 具有調(diào)和陰陽、溫陽補腎、安神固精、扶正固本的作用，是重要的補腎中成藥，在中成藥臨床 應用中占有特殊的地位。腎寶合劑制劑過程多、流程長，包括滲漉、煎煮、濃縮、醇沉等過程。上述標準中規(guī) 定處方二十二味，將蛇床子、淫羊藿、當歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑 項下的滲漉法，用70%乙醇作溶劑，浸漬48小時，緩緩滲漉，收集滲漉液，回收乙醇減壓濃 縮至相對密度1. 10 (熱測)，濾過，濾濾備用，將紅參粉碎成粗粉，用20%乙醇作溶劑，浸漬 8小時后，回流二次，每次2小時，合并回流液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至生藥量的二分 之一，備用；取覆盆子等十六味，與紅參藥渣一起，加水煎煮二次，每次2小時，合并煎煮液， 濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時，取上清液回收乙醇，濃縮至相對密度 1. 10 (熱測)，備用；除紅參藥液外合并其余兩次藥液，加入蔗糖200g，煮沸15分鐘，濾過， 濾液加入紅參藥液和苯甲酸鈉lg，尼泊金乙酯0. 5g，調(diào)整總量至1000ml，濾過，即得。其中， 淫羊藿等藥材滲漉過程時間最長，現(xiàn)有技術(shù)標準僅規(guī)定了操作工藝參數(shù)而無過程質(zhì)量控制 手段。上述標準中僅規(guī)定了產(chǎn)品需要進行性狀鑒別檢查。近紅外定性定量檢測技術(shù)是建立在傳統(tǒng)理化分析手段基礎上的二級分析方法，依 賴于近紅外光譜儀、計算機技術(shù)和化學計量學軟件基礎，是目前應用在化工煙草、石油等行 業(yè)較為成熟的在線和快速檢測手段，尚未應用于腎寶合劑制劑過程的質(zhì)量控制。

發(fā)明內(nèi)容
為了進一步提高和穩(wěn)定腎寶合劑的產(chǎn)品質(zhì)量，克服中成藥無生產(chǎn)過程的理化指標 在線控制，本發(fā)明應用聲光可調(diào)(AOTF)-近紅外光譜技術(shù)對腎寶滲漉液指標成分淫羊藿苷 及滲漉液比重進行連續(xù)取樣和現(xiàn)場分析，結(jié)合傳統(tǒng)定量檢測，建立了在線應用的腎寶合劑 滲漉液指標成分淫羊藿苷及滲漉液比重的近紅外模型。本發(fā)明一種腎寶合劑滲漉液的質(zhì)量控制方法，具體涉及一種快速測定腎寶合劑滲 漉液近紅外光譜，比重及淫羊藿苷含量的方法，其特征在于包括如下步驟
步驟1、測定合格的腎寶合劑滲漉液近紅外光譜，比重及淫羊藿苷含量，步驟2、采用化學計量學軟件分別建立滲漉液近紅外光譜與比重、淫羊藿苷含量之 間的對應模型；步驟3、測定待測的腎寶合劑滲漉液近紅外光譜；步驟4、利用步驟2建立的對應模型，通過化學計量學軟件分別獲得待測的腎寶合 劑制備過程中滲漉液樣品的比重、淫羊藿苷含量。其中腎寶合劑滲漉液的制備方法，比重及淫羊藿苷含量的測定方法如下按照腎寶合劑處方，取處理好的淫羊藿等藥材，用乙醇滲漉，收集不同時間點的滲 漉液樣品，分別采集近紅外光譜，同時測定對應樣品比重和淫羊藿苷濃度；本發(fā)明所述的方法，其特征在于利用一次近紅外光譜采集，通過建立的軟件模 型，同時獲得腎寶合劑滲漉液比重及淫羊藿苷含量。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集腎寶合劑滲漉液近紅外光譜采集時，采用透 射方式進行，每一張光譜都是1-1000次掃描的平均結(jié)果，分辨率0. 3-20nm,掃描光譜范圍 為 1100-2300nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集腎寶合劑滲漉液近紅外光譜時，采用透射 方式進行，每一張光譜都是200-500次掃描的平均結(jié)果，分辨率l-5nm，掃描光譜范圍為 1100-2300nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集腎寶合劑滲漉液近紅外光譜時，采用 透射方式進行，每一張光譜都是300次掃描的平均結(jié)果，分辨率2nm，掃描光譜范圍為 1100-2300nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集腎寶合劑滲漉液近紅外光譜時，以現(xiàn)場取樣 方式、在線取樣方式和旁線取樣方式之一進行。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采用RP-HPLC進行腎寶合劑淫羊藿苷含量分 析，分析條件為——色譜柱為YMC ODS分析柱(6 X 150mm，5 μ m,柱溫25°C )，流動相為乙 腈-7jC -冰醋酸08 72 1)，進樣體積20 μ L，流速lml/min，UV檢測波長270nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于步驟2中模型的建立包括(1) 一階導數(shù)9點 平滑法(savitzky-golay)光譜預處理；⑵采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預測效果驗 證。本發(fā)明所述的方法，其特征在于步驟2中模型的建立包括(1) 一階導數(shù)9點 平滑法(savitzky-golay)光譜預處理；⑵采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預測效果驗 證；(4)精密度試驗；(5)穩(wěn)定性試驗。優(yōu)選的本發(fā)明的方法，包括以下步驟步驟1、測定合格的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜，比重及淫羊藿苷含量 的標準圖譜和數(shù)據(jù)；取蛇床子、淫羊藿、當歸、川芎、小茴香，用乙醇濕潤后裝填滲漉器，再用乙醇浸漬， 以每分鐘5ml-10ml/min速度緩緩滲漉，收集滲漉液，每100單位為一份，取樣測定比重和淫 羊藿苷濃度，并采集近紅外光譜，共采集樣品61份，總量約6500份，將61份樣品分為校正
6集和驗證集，將其中的10份設為驗證集；其中樣品淫羊藿苷HPLC含量測定方法如下采用RP-HPLC連續(xù)收集的所有滲漉液樣品進行淫羊藿苷含量分析，分析條件如 下色譜柱YMC ODS分析柱(6X150mm，5ym，柱溫25°C )，流動相為乙腈-水-冰醋酸 (28 72 1)，進樣體積20uL，流速lml/min，UV檢測波長270nm，運行時間47min。重現(xiàn) 性變異系數(shù)分別為1.7% (η = 3)，其中樣品比重測定方法如下采用安東帕便攜式密度計DMA35測定；其中采集OTR光譜方法如下掃描光譜時在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長2m，待 溶液穩(wěn)定并無氣泡后進行掃描.測試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍 為1100 2300nm。共得到61個樣品的總光譜圖，步驟2、采用化學計量學軟件分別建立滲漉液近紅外光譜與比重、淫羊藿苷濃度之 間的對應模型；光譜預處理采用的預處理方法為一階導數(shù)9點平滑法；將經(jīng)過預處理后的光譜 數(shù)據(jù)與HPLC分析數(shù)據(jù)進行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法，交叉-驗證法，用Unscrambler定量分 析軟件建立模型，得到的樣品比重及淫羊藿苷的OTR光譜預測值與樣品比重實測值及HPLC 分析值之間相關(guān)性良好，樣品比重模型的主成分維數(shù)為7，R2 = 0. 9766, RMSECV = 0. 1013，淫羊藿苷模型的主成分維數(shù)為 3，R2 = 0. 9633， RMSECV = 0. 1868 ；步驟3、測定待測的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜；步驟4、利用步驟2建立的對應模型，通過化學計量學軟件分別獲得待測的腎寶合 劑制備過程中滲漉液樣品的比重、淫羊藿苷濃度。最優(yōu)選的方法包括以下步驟步驟1、測定合格的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜，比重及淫羊藿苷含量 的標準圖譜和數(shù)據(jù)；1)滲漉樣品制備與收集取處理好的蛇床子、淫羊藿、當歸、川芎、小茴香共850. 4g，用70%乙醇濕潤后裝 填入玻璃柱內(nèi)，再用70%乙醇浸漬48小時(乙醇應高于藥材面IOcm以上)，以每分鐘 8ml-9ml/min速度緩緩滲漉，收集滲漉液，每IOOml為一份，取樣測定比重和淫羊藿苷濃度， 并采集近紅外光譜，共采集樣品61份，總量約6500ml，將61份樣品分為校正集和驗證集，將 其中的10份設為驗證集；2)樣品淫羊藿苷HPLC分析采用RP-HPLC連續(xù)收集的所有滲漉液樣品進行淫羊藿苷含量分析，分析條件如 下色譜柱YMC ODS分析柱(6X150mm，5ym，柱溫25°C )，流動相為乙腈-水-冰醋酸 (28 72 1)，進樣體積20uL，流速lml/min，UV檢測波長270nm，運行時間47min。重現(xiàn) 性變異系數(shù)分別為1. 7% (n = 3),圖譜見附圖1、附圖2。校正集樣品結(jié)果帶入軟件建立模 型，驗證集樣品用于模型驗證；3)樣品比重測定
采用安東帕便攜式密度計DMA35測定(室溫)；4)獲取NIR光譜掃描光譜時在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長2m，待 溶液穩(wěn)定并無氣泡后進行掃描.測試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍 為1100 2300nm。共得到61個樣品的總光譜圖，見附圖3 ；步驟2、采用化學計量學軟件分別建立滲漉液近紅外光譜與比重、淫羊藿苷濃度之 間的對應模型；1)光譜預處理對掃描得到的原始吸收光譜進行光譜預處理，以消除噪音和基線漂移的影響。采 用的預處理方法為一階導數(shù)9點平滑法(savitzky-golay)。一階導數(shù)光譜圖見圖4。經(jīng)一 階導數(shù)處理可以很好的消除樣品由于顏色差別引起的光譜基線偏移和漂移；2)建立PLSl數(shù)學模型將經(jīng)過預處理后的光譜數(shù)據(jù)與HPLC分析數(shù)據(jù)進行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法 (PLSl)，交叉-驗證法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析軟件建立模型。OTR 和HPLC測定的異常值分別采用光譜影響值Leverage和化學值誤差Residual這2個統(tǒng)計 量來檢驗剔除。經(jīng)過異常值的剔除進行優(yōu)化，得到較為理想的校正模型；得到的樣品比重及淫羊藿苷的OTR光譜預測值與樣品比重實測值及HPLC分析值 之間相關(guān)性良好，測定數(shù)據(jù)偏差較小。樣品比重模型的主成分維數(shù)為7，R2 = 0. 9766, RMSECV = 0. 1013，淫羊藿苷模型的主成分維數(shù)為 3，R2 = 0. 9633， RMSECV = 0. 1868 ；步驟3、測定待測的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜；步驟4、利用步驟2建立的對應模型，通過化學計量學軟件分別獲得待測的腎寶合 劑制備過程中滲漉液樣品的比重、淫羊藿苷濃度。本發(fā)明所述的方法，優(yōu)點在于，利用一次近紅外光譜采集，通過建立的軟件模型， 同時獲得腎寶合劑滲漉液比重及淫羊藿苷含量。本發(fā)明采用AOTF-近紅外光譜技術(shù)建立腎 寶合劑滲漉液比重及淫羊藿苷含量的數(shù)學模型，可以快速在線監(jiān)測腎寶合劑滲漉過程。該 方法操作簡便、分析迅速，為腎寶合劑滲漉過程中指標成分及物理指標快速定量分析和生 產(chǎn)過程中的在線檢測，控制產(chǎn)品的質(zhì)量提供了高效的分析方法。


圖1淫羊藿苷對照品圖譜圖2腎寶滲漉樣品液相圖譜圖3腎寶合劑滲漉液近紅外光譜原始總光譜4腎寶合劑滲漉液的一階導數(shù)光譜圖
具體實施例方式下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明，但不表明對本發(fā)明權(quán)利要求的限制。儀器與試藥儀器AOTF便攜式Luminar 5030-731近紅外光譜分析儀(美國BRIMR0SE公司)，配套使用的SNAP光譜采集軟件和CAMO化學計量學軟件；AglientllOO色譜儀(美國 Agilent公司)，DAD 二極管陣列檢測器；安東帕便攜式密度計DMA35 (奧地利Anton Paar 公司)；玻璃層析柱150 X 15cm (上海精工儀器公司)試藥蛇床子藥材、淫羊藿藥材、當歸藥材、川芎藥材、小茴香藥材(江西匯仁藥業(yè) 有限公司)；淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號111562-200504，供含量測定 用)；乙醇為藥用乙醇(提取用)，乙腈為色譜純試劑，冰醋酸為分析純，水為超純水。方法與結(jié)果1滲漉樣品制備與收集取處理好的蛇床子、淫羊藿、當歸、川芎、小茴香共850. 4g，用70%乙醇濕潤后裝 填入玻璃柱內(nèi)，再用70%乙醇浸漬48小時(乙醇應高于藥材面IOcm以上)，以每分鐘 8ml-9ml/min速度緩緩滲漉，收集滲漉液，每IOOml為一份，取樣測定比重和淫羊藿苷濃度， 并采集近紅外光譜，共采集樣品61份，總量約6500ml，將61份樣品分為校正集和驗證集，將 其中的10份設為驗證集。2樣品淫羊藿苷HPLC分析采用RP-HPLC連續(xù)收集的所有滲漉液樣品進行淫羊藿苷含量分析，分析條件如 下色譜柱YMC ODS分析柱(6X150mm，5ym，柱溫25°C )，流動相為乙腈-水-冰醋酸 (28 72 1)，進樣體積20uL，流速lml/min，UV檢測波長270nm，運行時間47min。重現(xiàn) 性變異系數(shù)分別為1. 7% (n = 3),圖譜見附圖1、附圖2。校正集樣品結(jié)果帶入軟件建立模 型，驗證集樣品用于模型驗證。3樣品比重測定采用安東帕便攜式密度計DMA35測定(室溫)。4獲取OTR光譜掃描光譜時在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長2m，待 溶液穩(wěn)定并無氣泡后進行掃描.測試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍 為1100 2300nm。共得到61個樣品的總光譜圖，見附圖3。5建立模型5. 1光譜預處理對掃描得到的原始吸收光譜進行光譜預處理，以消除噪音和基線漂移的影響。采 用的預處理方法為一階導數(shù)9點平滑法(savitzky-golay)。一階導數(shù)光譜圖見圖4。經(jīng)一 階導數(shù)處理可以很好的消除樣品由于顏色差別引起的光譜基線偏移和漂移。5. 2建立PLSl數(shù)學模型將經(jīng)過預處理后的光譜數(shù)據(jù)與HPLC分析數(shù)據(jù)進行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法 (PLSl)，交叉-驗證法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析軟件建立模型。OTR 和HPLC測定的異常值分別采用光譜影響值Leverage和化學值誤差Residual這2個統(tǒng)計 量來檢驗剔除。經(jīng)過異常值的剔除進行優(yōu)化，得到較為理想的校正模型。得到的樣品比重及淫羊藿苷的OTR光譜預測值與樣品比重實測值及HPLC分析值 之間相關(guān)性良好，測定數(shù)據(jù)偏差較小。樣品比重模型的主成分維數(shù)為7，R2 = 0. 9766, RMSECV = 0. 1013，淫羊藿苷模型的主成分維數(shù)為 3，R2 = 0. 9633， RMSECV = 0. 1868。
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5. 3模型預測效果驗證以建立的校正模型對10份外部驗正集樣品進行分析。樣品比重及淫羊藿苷的測 試結(jié)果分別見表1，表2。OTR光譜預測值與樣品比重真值、淫羊藿苷HPLC測定真值的相關(guān) 系數(shù)R2分別為0. 9706和0. 9890。結(jié)果表明，OTR光譜預側(cè)值與樣品比重實測值及HPLC分 析值之間相關(guān)性良好。表1滲漉液比重校正模型對外部驗證集樣品的分析結(jié)果(n = 10)
權(quán)利要求
1.測定腎寶合劑滲漉液近紅外光譜，比重及淫羊藿苷含量的方法，其特征在于包括如 下步驟步驟1、測定合格的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜，比重及淫羊藿苷含量的標 準圖譜和數(shù)據(jù)；步驟2、采用化學計量學軟件分別建立滲漉液近紅外光譜與比重、淫羊藿苷濃度之間的 對應模型；步驟3、測定待測的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜；步驟4、利用步驟2建立的對應模型，通過化學計量學軟件分別獲得待測的腎寶合劑制 備過程中滲漉液樣品的比重、淫羊藿苷濃度。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采集腎寶合劑滲漉液近紅外光譜采集時，采 用透射方式進行，每一張光譜都是1-1000次掃描的平均結(jié)果，分辨率0. 3-20nm,掃描光譜 范圍為 1100-2300nm。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采集腎寶合劑滲漉液近紅外光譜時，采用透 射方式進行，每一張光譜都是200-500次掃描的平均結(jié)果，分辨率l-5nm，掃描光譜范圍為 1100-2300nm。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采集腎寶合劑滲漉液近紅外光譜時，采 用透射方式進行，每一張光譜都是300次掃描的平均結(jié)果，分辨率2nm，掃描光譜范圍為 1100-2300nm。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采用RP-HPLC進行腎寶合劑淫羊藿苷含量 分析，分析條件為——色譜柱為YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流動相為乙 腈-水-冰醋酸(28 72 1)，進樣體積20 μ L，流速lml/min, UV檢測波長270nm。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1中模型的建立包括(1)一階導數(shù)9 點平滑法(savitzky-golay)光譜預處理；(2)采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預測效果驗 證。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1中模型的建立包括(1)一階導數(shù)9 點平滑法(savitzky-golay)光譜預處理；(2)采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預測效果驗 證；(4)精密度試驗；(5)穩(wěn)定性試驗。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其中淫羊藿苷含量測定采用RP-HPLC法，色 譜條件為色譜柱為YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流動相為乙腈-水-冰 醋酸08 72 1)，進樣體積20yL，流速lml/min，UV檢測波長270nm，測定方法將樣品 和標準品注入色譜儀，測定淫羊藿苷峰面積，歸一法得到待測樣品含量。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步驟步驟1、測定合格的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜，比重及淫羊藿苷含量的標 準圖譜和數(shù)據(jù)；取蛇床子、淫羊藿、當歸、川芎、小茴香，用乙醇濕潤后裝填滲漉器，再用乙醇浸漬，以每 分鐘5ml-10ml/min速度緩緩滲漉，收集滲漉液，每100單位為一份，取樣測定比重和淫羊藿 苷濃度，并采集近紅外光譜，共采集樣品61份，總量約6500份，將61份樣品分為校正集和驗證集，將其中的10份設為驗證集；其中樣品淫羊藿苷HPLC含量測定方法如下采用RP-HPLC連續(xù)收集的所有滲漉液樣品進行淫羊藿苷含量分析，分析條件如 下色譜柱YMC ODS分析柱(6X150mm，5ym，柱溫25°C )，流動相為乙腈-水-冰醋酸 (28 72 1)，進樣體積20uL，流速lml/min，UV檢測波長270nm，運行時間47min。重現(xiàn) 性變異系數(shù)分別為1.7% (η = 3)， 其中樣品比重測定方法如下 采用安東帕便攜式密度計DMA35測定； 其中采集OTR光譜方法如下掃描光譜時在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長2m，待溶液 穩(wěn)定并無氣泡后進行掃描.測試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍為 1100 2300nm。共得到61個樣品的總光譜圖，步驟2、采用化學計量學軟件分別建立滲漉液近紅外光譜與比重、淫羊藿苷濃度之間的 對應模型；光譜預處理采用的預處理方法為一階導數(shù)9點平滑法；將經(jīng)過預處理后的光譜數(shù)據(jù) 與HPLC分析數(shù)據(jù)進行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法，交叉-驗證法，用Unscrambler定量分析軟 件建立模型，得到的樣品比重及淫羊藿苷的OTR光譜預測值與樣品比重實測值及HPLC分析 值之間相關(guān)性良好，樣品比重模型的主成分維數(shù)為.7，R2 = 0. 9766，RMSECV = 0. 1013，淫羊藿苷模型的主成分維數(shù)為3，R2 = 0. 9633， RMSECV = 0. 1868 ；步驟3、測定待測的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜；步驟4、利用步驟2建立的對應模型，通過化學計量學軟件分別獲得待測的腎寶合劑制 備過程中滲漉液樣品的比重、淫羊藿苷濃度。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步驟步驟1、測定合格的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜，比重及淫羊藿苷含量的標 準圖譜和數(shù)據(jù)；1)滲漉樣品制備與收集取處理好的蛇床子、淫羊藿、當歸、川芎、小茴香共850. 4g，用70%乙醇濕潤后裝填入 玻璃柱內(nèi)，再用70%乙醇浸漬48小時(乙醇應高于藥材面IOcm以上)，以每分鐘8ml_9ml/ min速度緩緩滲漉，收集滲漉液，每IOOml為一份，取樣測定比重和淫羊藿苷濃度，并采集近 紅外光譜，共采集樣品61份，總量約6500ml，將61份樣品分為校正集和驗證集，將其中的 10份設為驗證集；2)樣品淫羊藿苷HPLC分析采用RP-HPLC連續(xù)收集的所有滲漉液樣品進行淫羊藿苷含量分析，分析條件如 下色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm，5 μ m，柱溫25 °C )，流動相為乙腈-水-冰醋酸 (28 72 1)，進樣體積20uL，流速lml/min，UV檢測波長270nm，運行時間47min。重現(xiàn) 性變異系數(shù)分別為1. 7% (n = 3),圖譜見附圖1、附圖2。校正集樣品結(jié)果帶入軟件建立模 型，驗證集樣品用于模型驗證；3)樣品比重測定采用安東帕便攜式密度計DMA35測定(室溫)；4)獲取OTR光譜掃描光譜時在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長2m，待溶液 穩(wěn)定并無氣泡后進行掃描.測試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍為 1100 2300nm。共得到61個樣品的總光譜圖，見附圖3 ；步驟2、采用化學計量學軟件分別 建立滲漉液近紅外光譜與比重、淫羊藿苷濃度之間的對應模型；1)光譜預處理對掃描得到的原始吸收光譜進行光譜預處理，以消除噪音和基線漂移的影響。采用的 預處理方法為一階導數(shù)9點平滑法(savitzky-golay)。一階導數(shù)光譜圖見圖4。經(jīng)一階導 數(shù)處理可以很好的消除樣品由于顏色差別引起的光譜基線偏移和漂移；2)建立PLSl數(shù)學模型將經(jīng)過預處理后的光譜數(shù)據(jù)與HPLC分析數(shù)據(jù)進行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法(PLSl)，交 叉-驗證法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析軟件建立模型。OTR和HPLC測 定的異常值分別采用光譜影響值Leverage和化學值誤差Residual這2個統(tǒng)計量來檢驗剔 除。經(jīng)過異常值的剔除進行優(yōu)化，得到較為理想的校正模型；得到的樣品比重及淫羊藿苷的OTR光譜預測值與樣品比重實測值及HPLC分析值之間 相關(guān)性良好，測定數(shù)據(jù)偏差較小。樣品比重模型的主成分維數(shù)為7，R2 = 0. 9766,RMSECV = 0. 1013，淫羊藿苷模型的主成分維數(shù)為3，R2 = 0. 9633，RMSECV = 0. 1868 ；步驟3、測定待測的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜；步驟4、利用步驟2建立的對應模型，通過化學計量學軟件分別獲得待測的腎寶合劑制 備過程中滲漉液樣品的比重、淫羊藿苷濃度。
全文摘要
一種腎寶合劑滲漉液的質(zhì)量控制方法，具體涉及一種快速測定腎寶合劑滲漉液比重及淫羊藿苷含量的方法，包括如下步驟步驟1、測定合格的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜，比重及淫羊藿苷含量的標準圖譜和數(shù)據(jù)；步驟2、采用化學計量學軟件分別建立滲漉液近紅外光譜與比重、淫羊藿苷濃度之間的對應模型；步驟3、測定待測的腎寶合劑制備過程中滲漉液近紅外光譜；步驟4、利用步驟2建立的對應模型，通過化學計量學軟件分別獲得待測的腎寶合劑制備過程中滲漉液樣品的比重、淫羊藿苷濃度。
文檔編號A61P13/12GK102106956SQ201110067858
公開日2011年6月29日 申請日期2011年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月21日
發(fā)明者李勝華, 王木蘭, 耿炤, 胡浩武 申請人:江西匯仁藥業(yè)有限公司