專利名稱：在消化道中具有局部活性的抗體治療劑的制作方法
在消化道中具有局部活性的抗體治療劑
背景技術(shù)：
抗體治療劑已被證明是有價值的藥品。然而，它們的使用卻往往由于抗體在身體各部位的活性所導(dǎo)致的副作用而受到限制。例如，對于TNF具有特異性的抗體(Remicade、 Humira, Cimzia)可有效地治療炎性腸病。然而，很可能是由于全身免疫抑制，它們的使用與惡性腫瘤的風(fēng)險增加和嚴(yán)重感染的風(fēng)險增加相關(guān)(Bongartz等，2006，JAMA, 295, 2275-85)。因此，需要開發(fā)出能夠?qū)⒖贵w引導(dǎo)至使臨床益處最大化同時使抗體在其它部位的活性最低的位置的方法和抗體治療劑藥物組合物。更具體地講，需要開發(fā)出能夠?qū)⒖贵w引導(dǎo)至消化道以治療消化道疾病，同時使抗體在其它部位的活性最低的方法和抗體治療劑藥物組合物?？贵w治療劑的使用還往往由于所施用抗體的免疫原性而受到限制。對針對治療劑抗體的誘導(dǎo)與活性損失以及發(fā)生不良輸注反應(yīng)的可能性相關(guān)。在抗體來源于非人物種的情況下，可最清楚地觀察到免疫原性。然而，人抗人抗體反應(yīng)(HAHA)的存在也已被描述并引起顯著臨床關(guān)注(Ritter 等，2001，Cancer Res，61，6851-9 ；Tracey 等，2008，Pharmacol Ther，111，244-79)。因此，需要開發(fā)出能夠使免疫原性最低，同時維持功效的方法和抗體治療劑藥物組合物。在炎性腸病的治療中，由于中和抗體的誘導(dǎo)，全身施用抗TNF抗體的患者往往變得對于抗體療法無反應(yīng)(Tracey等，2008，Pharmacol Ther，111，244-79)。需要開發(fā)出可用于治療對于現(xiàn)有抗TNF抗體治療劑已變得無反應(yīng)的患者的方法和藥物組合物。發(fā)明概述本發(fā)明提供了在消化道中或在消化道粘膜屏障下方有治療效果，但不將已被證明對于全身施用抗體后獲得臨床益處所必需的抗體水平遞送至體循環(huán)的方法和抗體治療劑組合物。本發(fā)明進一步描述了抗體治療劑的治療性組合物，其在消化道中或在消化道粘膜屏障下方有治療效果，但不將與全身施用后抗體后所出現(xiàn)的不良事件和全身免疫抑制相關(guān)的抗體水平遞送至體循環(huán)。附圖簡述

圖1是顯示與對照相比，在炎性腸病的小鼠模型中ロ服施用不同劑量抗TNF抗體 AVX-470之后的內(nèi)窺鏡檢查得分的圖。圖2是顯示用于檢測牛血清免疫球蛋白抗體水平的ELISA分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線的圖。圖3是倉鼠頰囊染色切片的顯微照片，其顯示牛免疫球蛋白可在經(jīng)照射的左面頰頰囊中被檢測到(圖A)，但是只在未經(jīng)照射的右頰囊的外表面上被發(fā)現(xiàn)(圖B)。圖4是顯示通過ロ服抗TNF抗體治療之后，患有GI急性輻射綜合征的小鼠的存活率(以表示)的圖。圖5是施用ロ服抗TNF抗體之后，患有GI急性輻射綜合征的小鼠的空腸固有層的染色切片的顯微照片。發(fā)明詳述出于本發(fā)明目的，“消化道”由嘴、咽、食道、胃、小腸(十二指腸、空腸、回腸)、大腸(盲腸、結(jié)腸、直腸)和肛門組成。出于本發(fā)明目的，“ 口腔”應(yīng)理解為包括嘴、咽和食道。出于本發(fā)明目的，“胃腸道”，或“ GI道”應(yīng)理解為包括胃、小腸(十二指腸、空腸、回腸)、大腸 (盲腸、結(jié)腸、直腸)和肛門。例如與臨床益處相關(guān)的抗TNF抗體的血清水平是0.5yg/ml以上的濃度 (Nestorov,2005, J Rheumatol Suppl，74，13-8 ;Tracey 等，2008，Pharmacol Ther, 111, 244-79)。雖然尚不清楚與不良事件相關(guān)的抗TNF抗體的確切血清水平，但認(rèn)為該血清水平大于臨床益處所需要的水平(Nestorov，2005，J Rheumatol Suppl，74，13-8)。因此，與現(xiàn)有腸胃外TNF拮抗劑相比，本發(fā)明治療性組合物和方法與全身免疫抑制降低、全身分布減少、 免疫原性降低、快速免疫降低(不論由中和抗體誘導(dǎo)還是另ー機制所引起)和即時副作用減小(例如輸注反應(yīng))相關(guān)。本發(fā)明治療性抗體組合物使治療性抗體在消化道外部的活性最低，并且進一歩使針對治療性抗體的中和免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)最低。治療性組合物是被局部遞送至消化道管腔表面的抗體。本發(fā)明抗體可例如通過ロ服施用、直腸施用而局部施用至消化道，并且包括所有口腔施用形式，諸如經(jīng)頰、粘膜粘著性膜等?？贵w可穿過消化道的粘膜屏障以進入粘膜下的空間以與其靶標(biāo)相互作用，但是不進入體循環(huán)。本發(fā)明包括使用針對以下靶標(biāo)的抗體在消化道管腔表面上或附近以及在粘膜屏障下方(諸如在上皮細(xì)胞基面上)表達的生物靶標(biāo)、 在粘膜下層中表達的靶標(biāo)、在外側(cè)細(xì)胞間隙中表達的靶標(biāo)，和在固有層中表達的靶標(biāo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的抗體由于先前存在的對于粘膜屏障的損害而得以穿過粘膜屏障。在健康受試者中，消化道通常對于施加于管腔表面的蛋白質(zhì)是相對不可透過的。然而，在許多疾病狀況中，消化道展示出増加的通透性(McGuckin等，2009， Inflamm Bowel Dis，15，100-13)。此增加的通透性使得施加于消化道管腔表面的抗體得以穿過粘膜屏障(Worledge 等，2000，Dig Dis Sci，45，2298-2305)。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明抗體由于制劑有利于抗體穿越粘膜屏障的特定方面而得以穿過粘膜屏障。可利用滲透促進劑，包括殼聚糖、聚-L-精氨酸和卡波姆
(しaroopol)0患有在本領(lǐng)域中統(tǒng)稱為炎性腸病的克羅恩氏病(Crohn' s disease)和潰瘍性結(jié)腸炎的患者常常用針對炎性細(xì)胞因子TNF的抗體來治療。在這些患者中，在通過抗體獲得的臨床益處和所施用抗TNF抗體的谷血清濃度之間存在相互關(guān)系Geow等，Gut. ,1/2010 ； 59(1) :49_54) (Karmiris 等，11/2009，Gastroenterology ； I37 (5) :1628-40) 這些數(shù)據(jù)表明必須獲得一定的血清抗體濃度以便使抗體可有效地治療消化道炎癥。然而，本發(fā)明者意外地發(fā)現(xiàn)使用根據(jù)本發(fā)明的抗體來局部治療消化道炎癥在治療上是有效的。此局部或表面應(yīng)用可通過局部施用抗體，諸如通過ロ服或直腸施用來實現(xiàn)。術(shù)語“局部施用”于消化道定義為局部和/或表面施用于口腔、通過ロ服或直腸施用來遞送至消化道，或通過使抗體與消化道的管腔方面接觸的任何其它途徑來施用。因此，本發(fā)明的目標(biāo)是通過將治療有效量的本發(fā)明抗體施用至消化道，同時維持血清中的抗體水平低于先前被認(rèn)為在通過注射來給予抗體時為臨床功效所需的水平，從而治療消化道炎癥。根據(jù)本發(fā)明，如使用本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)分析測量，根據(jù)本發(fā)明施用的血清抗體水平小于約ι μ g/ml，優(yōu)選小于約500ng/ml，優(yōu)選小于約150 μ g/ml，并且優(yōu)選小于約 50ng/ml。
測量血清抗體水平可使用現(xiàn)有技術(shù)中已知的標(biāo)準(zhǔn)分析來完成。ー種分析是檢測TNF與抗體結(jié)合的放射免疫分析法(RIA) (Svenson等，Rheumatology 2007 46: 1828-1834)。簡單地說，將1 %患者血清添加至5，000計數(shù)/分鐘/0. 1毫升的125I-TNF0 在4°C下孵育2小時之后，通過添加對用作治療性抗體的抗體物質(zhì)具有特異性的兔抗體來分離游離的和與抗體結(jié)合的示蹤劑。為了檢測患者血清中的牛抗TNF抗體，使用對于牛免疫球蛋白具有特異性的兔抗體(重鏈+輕鏈)。為了檢測患者血清中的英夫利昔單抗(小鼠-人IgGl: κ嵌合抗體)，使用對于人Fc γ具有特異性的兔抗體。添加能夠使>95%的可利用治療性抗體發(fā)生沉淀的量的兔抗體。再過2小時之后，添加2. 5ml冷分析緩沖液，并且在4°C下以4000g離心IOmin來分離結(jié)合和游離的1251-TNF。沉淀(pellet)活性的放射性通過使用Y計數(shù)器來測量。治療性抗體用作建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的參考。對于英夫利昔單抗， 分析的檢測極限是 0. 4μ g/ml 全血清(Bendtzen，Arthritis and Rheumatism，第 M 卷，第 12 期，2006 年 12 月，第 3782-3789 頁，2006)。另ー種可用于檢測血清抗體水平的分析是酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA) (ffolbink, Ann Rheum Dis 2005;64:704-707)。簡單地說，平底微量滴定板在室溫下以針對TNF的小鼠單克隆抗體(每孔100 μ 1中的2 μ g/ml)涂布過夜。添加HPE緩沖液中的重組TNF (每孔100 μ 1中的0. 1 μ g/ml)歷時1小吋。在用磷酸緩沖鹽水/0. 2%吐溫洗滌之后，將患者的血清樣品以HPE緩沖液中的不同稀釋度添加并且在室溫下孵育2小吋。將板用磷酸緩沖鹽水/0. 2%吐溫洗滌，然后以與對于用作治療性抗體的抗體物種具有特異性的抗體偶聯(lián)的辣根過氧物酶(HRP)孵育。為了檢測患者血清中的?？筎NF抗體，使用羊杭-牛IgG (h+1)。 為了檢測英夫利昔單抗，使用單克隆抗人IgG。在室溫下添加IOOmlHPE緩沖液中的HRP-標(biāo)記抗體歷時1小吋。隨后，在洗滌之后，添加四甲基聯(lián)苯胺。反應(yīng)以2M H2SO4停止。然后確定在450nm處的吸光度。結(jié)果與每個板中的治療性抗體(例如，?？筎NF抗體或英夫利昔單抗)的滴定曲線相關(guān)。英夫利昔單抗的最低檢測水平是0.2 μ g/ml (Wolbink，第704頁， 上述)。這兩個用來測量血清中的治療性抗體水平的分析是基于檢測抗體結(jié)合靶標(biāo)抗原 (例如TNF)的能力。另ー種分析測量治療性抗體本身的存在。當(dāng)治療性抗體是嵌合或人源化單克隆抗體吋，這并非優(yōu)選的，因為很難區(qū)分治療性抗體和通常存在于患者體內(nèi)的抗體。 然而，這種方法可用于檢測非人抗體治療劑(參見實施例3)。對于多克隆抗體，僅一部分施用抗體對于靶標(biāo)抗原具有特異性并與其結(jié)合。在本發(fā)明的上下文中，待測量的重要抗體濃度是對于靶標(biāo)抗原具有特異性的治療性抗體的濃度，因為這是生物活性的組成部分。因此， 當(dāng)施用抗體的血清水平通過檢測抗體本身來量化吋，必須進行實驗以確定對于靶標(biāo)抗原具有特異性的施用抗體的百分比。對可用于確定百分比的方法的描述提供于實施例1中。已報道英夫利昔單抗的峰值血漿水平為118 μ g/ml，并且阿達木單抗的峰值血漿水平為4. 7 μ g/ml (Tracey, 2008上述)。所獲得的峰值血漿水平取決于施用途徑和給藥方案。所注射抗TNF抗體的臨床有效血清濃度是0. 8-1. 4 μ g/ml (Tracey等，2008, Pharmacol Ther,111,244-79)。在本發(fā)明的一個實施方案中，將對于調(diào)節(jié)炎癥的細(xì)胞因子(包括但不限于TNF、 TNF-k、Ifn-y , IL-I β、IL-2、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、 IL27、IL-32、IL-33和1レ3幻具有特異性的抗體局部施用于消化道通透性増加的患者的消化道，以防止由于化學(xué)療法或放射療法而發(fā)生顯性潰瘍或炎癥。在本發(fā)明的一個實施方案中，將對于調(diào)節(jié)炎癥的細(xì)胞因子(包括但不限于TNF、 TNF-k、Ifn-y , IL-I β、IL-2、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、 IL27、IL-32、IL-33和1レ3幻具有特異性的抗體局部施用于消化道通透性増加的患者的消化道，以防止由于暴露于高水平輻射而發(fā)生胃腸急性輻射綜合征。在本發(fā)明的一個實施方案中，將對于炎性細(xì)胞因子(包括但不限于TNF、TNF-K、 Ifn-y、IL-I β、IL-2、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL27、IL-32、 IL-33和1レ3幻具有特異性的抗體局部施用于消化道通透性増加的患者的消化道，以防止由于自身免疫疾病(包括炎性腸病)而發(fā)生顯性潰瘍或炎癥。在本發(fā)明的一個實施方案中，將對于炎性細(xì)胞因子(包括但不限于TNF、TNF-K、 Ifn-y、IL-I β、IL-2、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL27、IL-32、 IL-33和1レ3幻具有特異性的抗體局部施用于消化道通透性増加的患者的消化道，以治療乳糜瀉。在本發(fā)明的一個實施方案中，將對于表達于粘膜上皮細(xì)胞的基外側(cè)表面上的Toll 樣受體具有特異性的抗體作為治療劑施用于患有腸道炎性疾病的患者的消化道粘膜。在本發(fā)明的一個實施方案中，將對于炎性細(xì)胞因子(包括但不限于TNF、TNF-K、 Ifn-y、IL-I β、IL-2、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL27、IL-32、 IL-33和1レ3幻具有特異性的抗體作為治療劑施用于患有腸易激綜合征的患者的消化道。在本發(fā)明的一個實施方案中，將針對腸道神經(jīng)遞質(zhì)或其受體或在消化道粘膜屏障下方表達的轉(zhuǎn)運蛋白，包括在消化道表達的血清素受體(5-ΗΤ1Α、5-ΗΤ1Β/Β、5-ΗΤ2Α、 5-HT2B、5-HT3、5-HT4、5-HT7、5-HT1P)的抗體作為藥劑用于消化道通透性增加的患者。在本發(fā)明的一個實施方案中，將針對調(diào)節(jié)食物攝取的肽或此類肽的受體的抗體作為藥劑用于消化道通透性増加的患者。此類肽包括但不限于CCK、GLPU GIP、胃泌酸調(diào)節(jié)素、PYY3-36、腸抑素、APOAIV、PP、淀粉不溶素、GRP和NMB、胃瘦素和生長激素釋放激素 (Cummings 和 Overduin,2007,J Clin Invest,117,13-23)。在本發(fā)明的一個實施方案中，將針對結(jié)直腸癌細(xì)胞上的表皮生長因子受體的抗體作為治療劑用于消化道通透性増加的患者。在本發(fā)明的一個實施方案中，遞送至消化道的對于可溶性細(xì)胞因子具有特異性的抗體降低消化道中的那些細(xì)胞因子的水平，但是不降低體循環(huán)中的細(xì)胞因子的水平。細(xì)胞因子水平可通過直接測量細(xì)胞因子或通過分析對細(xì)胞因子起反應(yīng)的替代標(biāo)記物來確定。在本發(fā)明的ー個方面，遞送至消化道的對于可溶性細(xì)胞因子具有特異性的抗體降低消化道以及體循環(huán)中的那些細(xì)胞因子的水平。在本發(fā)明的一個實施方案中，遞送至消化道的具有臨床益處的抗體不誘導(dǎo)對于所施用抗體的抗體反應(yīng)，所述抗體反應(yīng)足以抑制對于抗體的后續(xù)劑量的反應(yīng)或引起對于抗體的后續(xù)劑量的有害反應(yīng)。在本發(fā)明的一個實施方案中，在維持療法之后，觀察到缺乏誘導(dǎo)抗體反應(yīng)。在本發(fā)明的一個實施方案中，在間歇給藥(印isodic dosing)之后，觀察到缺乏誘導(dǎo)抗體反應(yīng)?？贵w反應(yīng)可通過直接測量對于治療性抗體具有特異性的抗體或評定治療性抗體的重復(fù)劑量的生理反應(yīng)來測量。
在一個優(yōu)選實施方案中，少于2%的患者在暴露于3個或更多個劑量的治療性抗體后產(chǎn)生針對本發(fā)明治療性抗體的抗體。在一個優(yōu)選實施方案中，施用3個或更多個劑量的根據(jù)本發(fā)明的抗體不降低抗體功效。根據(jù)本發(fā)明，施用1個、2個、3個或更多個劑量之后， 抗體功效在從第一次施用抗體之日起約1個月期間，并且優(yōu)選在從第一次施用抗體之日起約6個月期間，更優(yōu)選地在從第一次施用抗體起約1年期間，并且甚至更優(yōu)選地在從第一次施用抗體起約10年期間并未降低。治療性抗體(TA)的抗體反應(yīng)的測量可使用現(xiàn)有技術(shù)中已知的標(biāo)準(zhǔn)分析來完成。 ー種分析是RIA(Svenson 2007上述)。治療性抗體使用氯胺-T以125I標(biāo)記，通過分子大小色譜純化，并且經(jīng)測試以確保其保持與已知對于治療性抗體具有特異性的合適抗體的結(jié)合。125I-標(biāo)記的TA在4°C下與患者血清(1%或更低)一起共同孵育18小吋?？?TA活性通過125I-TA與含有能夠特異性結(jié)合10%血清中的> 80% AA的第二抗體的親和基質(zhì)的結(jié)合來檢測。對于英夫利昔單抗，此第二抗體是抗人-λ-輕鏈。對于?？筎NF抗體，此第二抗體是抗牛IgG(h+l)。計算平均本底結(jié)合并且兩倍本底值用來區(qū)分陽性和陰性樣品?？捎糜跈z測對于治療性抗體的抗體反應(yīng)的另一分析是固相RIA (Svenson，2007上述)。TA(8yg/ml)結(jié)合微量滴定板，然后用人血清白蛋白阻斷未占據(jù)位點。使用10%或更低水平，以100微升/孔重復(fù)兩次添加患者血清。在4°C下孵育過夜之后，將孔用冷分析緩沖液洗滌并且每孔添加0. Iml 6000cpm125I-標(biāo)記的TA。在4°C下3小時之后，將孔洗滌并且確定結(jié)合的cpm。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知對于治療性抗體的抗體反應(yīng)的分析需要適應(yīng)具體情況并且對方法和考慮因素有充分的理解(Gorovits，The AAPS Journal，第11卷，第1期，2009年 3月)。特別重要的是可能存在對于治療性抗體的預(yù)先存在的抗體反應(yīng)，這可能使經(jīng)收集以計算用于區(qū)分陽性和陰性樣品的分析截斷參數(shù)的數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析復(fù)雜化。對于?？贵w治療劑的抗體反應(yīng)的分析，優(yōu)選使用既定患者的預(yù)處理和后處理樣品結(jié)果的直接比較。如果抗-TA抗體水平在用治療性抗體治療過程期間顯著増加，則將患者定義為具有針對治療性抗體的誘導(dǎo)抗體反應(yīng)。對于未檢測到預(yù)先存在的抗體反應(yīng)的治療性抗體，如果抗體反應(yīng)高于本底兩倍以上，則將患者定義為具有針對治療性抗體的誘導(dǎo)抗體反應(yīng)。在炎性腸病的維持療法期間，在2. 8% -3. 7%的用阿達木單抗治療的患者中，在 5% -18%的用英夫利昔單抗治療的患者中并且在8% -12. 3%的用賽妥珠單抗治療的患者中觀察到對于治療性抗體的抗體反應(yīng)(Cassinotti,Inflamm Bowel Dis,第15(8)卷，2009 年8月)。間歇給藥導(dǎo)致對治療性抗體的抗體反應(yīng)的發(fā)生率較高，其中36% -61%的接受英夫利昔單抗的患者產(chǎn)生抗體反應(yīng)。除了消化道以外，本發(fā)明也可用于具有粘膜屏障的其它組織，包括泌尿生殖系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)。此外，本發(fā)明也可用于具有上皮系統(tǒng)的其它組織，包括眼睛和皮膚。根據(jù)本發(fā)明方法，可通過機械性創(chuàng)傷破壞或損害消化道粘膜屏障，所述創(chuàng)傷包括但不限于牙齒和口腔傷ロ、食道傷ロ，或歸因于部分消化道切除術(shù)、空腸造口木、回腸造ロ 術(shù)、結(jié)腸造口木或其它手術(shù)程序的手術(shù)引起的創(chuàng)傷。消化道粘膜屏障也可因局部缺血或再灌注損傷而被破壞。消化道粘膜屏障也可通過癌癥化學(xué)療法、癌癥放射療法，或在治療環(huán)境以外的高劑量輻射暴露造成的損害而被破壞。消化道粘膜屏障可因肉眼可見的炎癥和/或潰瘍而被破壞或損害，所述炎癥和/或潰瘍包括但不限于牙周疾病、ロ瘡性口炎、消化道細(xì)菌、病毒、真菌或寄生蟲感染、消化性潰瘍、與壓力或幽門螺桿菌感染相關(guān)的潰瘍、食管返流、炎性腸病造成的損害、消化道癌癥、 食物不耐受(包括乳糜瀉)造成的損害，或非留體抗炎病(NSAID)或其它攝入或全身遞送藥物引起的潰瘍。消化道粘膜屏障的破壞或損害可為已在臨床上描述過但其中屏障缺陷的生物學(xué)基礎(chǔ)還未得到充分理解的破壞或損害，包括但不限干與以下相關(guān)的消化道屏障功能損失 外部燒傷、創(chuàng)傷、敗血癥或休克、腸易激綜合征、糖尿病(尤其I型糖尿病)、特應(yīng)性皮炎、患有自身免疫病癥(包括強直性脊柱炎、舍格倫氏綜合征、充血性心力衰竭或多發(fā)性硬化癥) 的患者。病原體感染也可能會導(dǎo)致屏障功能的特異性破壞。在本發(fā)明可應(yīng)用的ー些疾病或病癥中，改變的屏障通透性可在發(fā)生顯性炎癥和/ 或潰瘍之前存在，并且抗體可在屏障通透性改變時以及在炎癥和潰瘍期間施用。在炎癥之前包括増加的通透性的疾病和病癥包括但不限于由化學(xué)療法或放射療法、暴露于高水平的非治療性輻射、炎性腸病和乳糜瀉所引起的粘膜炎。在本發(fā)明可應(yīng)用的ー些疾病或病癥中，改變的屏障通透性可能存在于消化道的分立部分，同時顯性炎癥和/或潰瘍存在于消化道的其它部分。包括増加的通透性和炎癥或潰瘍的物理分離區(qū)域的疾病和病癥包括但不限于克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎。本發(fā)明抗體可用于接近改變通透性的區(qū)域以及顯性炎癥和潰瘍的區(qū)域。本發(fā)明包括使用旨在解決屏障缺陷的潛在原因的抗體治療劑。此類抗體可針對增強傷ロ愈合、改變緊密聯(lián)結(jié)部功能的生物靶標(biāo)，或現(xiàn)在已知或?qū)頃绊懲ㄍ感缘钠渌袠?biāo)。合適的靶標(biāo)可包括但不限于閉合蛋白、claudin蛋白、連接粘附分子、ZO-U E-鈣粘著蛋白、柯薩奇(coxackie)腺病毒受體和涉及釋放claudin蛋白的絲氨酸蛋白酶，諸如弾性蛋白酶。本發(fā)明包括使用旨在結(jié)合與屏障缺陷的潛在原因無關(guān)的生物靶標(biāo)的抗體藥劑。此類抗體可用于治療或預(yù)防與造成屏障缺陷的相同疾病狀況有關(guān)的疾病和病癥。此類抗體可用于治療或預(yù)防與造成屏障缺陷的相同疾病狀況無關(guān)的疾病和病癥。對于口腔病癥，本發(fā)明抗體可以嗽ロ水、沖洗劑、糊劑、凝膠劑或其它適合制劑形式遞送。本發(fā)明抗體可使用_在増加活性抗體和粘膜表面之間接觸的制劑，諸如口腔貼片劑、口腔條帶、粘膜粘著性膜、舌下片劑、錠劑、糯米紙囊劑、咀嚼片劑、快速或迅速溶解片劑、泡騰片劑或口腔或舌下固體來遞送。對于消化道病癥，抗體可以膠囊劑、片劑、液體制劑形式或_在將藥物引入消化道的類似形式的ロ服攝取來遞送?；蛘撸贵w可通過栓劑或灌腸劑施用以便遞送至下消化道。此類制劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。本文所使用的術(shù)語“抗體”是指包含來自免疫球蛋白基因或其特異性結(jié)合和識別抗原的片段的構(gòu)架區(qū)的多肽。已識別的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、Υ、δ、ε、和μ恒定區(qū)基因，以及無數(shù)的免疫球蛋白可變區(qū)基因。輕鏈分類為κ或λ輕鏈。重鏈分類為Y、 μ、α、δ、或ε重鏈，其進而分別定義免疫球蛋白類別IgG, IgM, IgA, IgD和IgE0通常情況下，抗體的抗原結(jié)合區(qū)在結(jié)合靶標(biāo)受體的特異性和親和カ中是最關(guān)鍵的。示例性免疫球蛋白(抗體)結(jié)構(gòu)單元包括四聚體。每個四聚體由兩對相同多肽鏈組成，每ー對具有ー個 “輕鏈”(約25kD)和ー個“重鏈”(約50-70kD)。每個鏈的N-末端定義具有約100到110 個或更多個氨基酸的主要負(fù)責(zé)抗原識別的可變區(qū)。術(shù)語可變輕鏈和可變重鏈(Vh)分
9別是指這些輕鏈和重鏈?？贵w以例如完整免疫球蛋白或通過各種肽酶降解所產(chǎn)生的能夠與完整抗體競爭以進行特異性結(jié)合的大量良好表征片段形式存在，除非本文另外規(guī)定。因此，例如，胃蛋白酶消化鉸鏈區(qū)中的ニ硫鍵下方的抗體以產(chǎn)生F(ab) ‘ 2，即本身是通過ニ硫鍵連接至Vh-ChI 的輕鏈的Fab ニ聚體。F(ab) ‘ 2可在溫和條件下還原以破壞鉸鏈區(qū)中的ニ硫鍵，從而將 F(ab)' 2 ニ聚體轉(zhuǎn)換為Fab'単體。Fab'単體基本上是具有鉸鏈區(qū)一部分的Fab (參見 Fundamental Immunology (Paul編，第3版199 。雖然各種抗體片段根據(jù)完整抗體的降解加以定義，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識到此類片段可以化學(xué)方法或使用重組DNA方法來重新合成。因此，本文所使用的術(shù)語“抗體”還包括通過修飾全抗體產(chǎn)生的抗體片段，或使用化學(xué)或重組DNA方法重新合成的那些抗體片段(例如，單鏈Fv、互補決定區(qū)(CDR)片段或含有足以將特異性受體結(jié)合力賦予多肽的至少一部分免疫球蛋白的多肽)或使用噬菌體展示文庫識別的那些抗體片段(參見，例如，McCafferty等，Nature 348 =552-554(1990)) 本文所使用的術(shù)語“單克隆抗體”是指具有単一分子成分的抗體制劑。單克隆抗體成分對于靶標(biāo)受體的特定表位顯示單ー結(jié)合特異性和親和力。“表位”是分子被抗體結(jié)合的部分。表位可包含分子的非連續(xù)部分(例如，在多肽中，氨基酸殘基在多肽的ー級序列中是不連續(xù)的，但是在多肽的三級和四級結(jié)構(gòu)的情況下， 彼此接近的程度足以由抗體結(jié)合)。本文所使用的術(shù)語“多克隆抗體”是指能夠結(jié)合同一抗原或不同抗原上的多種不同特定抗原決定簇或與其反應(yīng)的不同抗體分子成分。多克隆抗體的抗原特異性的可變性位于構(gòu)成多克隆抗體的個別抗體的可變區(qū)中，尤其在互補決定區(qū)(CDR) 1、CDR2和CDR3區(qū)中。 優(yōu)選地，通過用以下指定的靶標(biāo)抗原或其部分對動物進行免疫來制備多克隆抗體?；蛘?，可通過將具有針對靶標(biāo)受體的所需特異性的多種單克隆抗體(例如Nowakowski，A等，2002. Proc Natl Acad Sci USA 99，11346-11350和美國專利第5，126，130號)混合來制備多克隆抗體。從免疫動物的血液、乳汁、初乳或卵分離的多克隆抗體制劑除了包含對于靶標(biāo)抗原具有特異性的抗體以外，通常還包含對于免疫原不具有特異性的抗體。對于靶標(biāo)抗原具有特異性的抗體可從多克隆抗體制劑純化或多克隆抗體制劑可在未經(jīng)進ー步純化的情況下使用。因此，本文所使用的術(shù)語“多克隆抗體”是指對于靶抗原具有特異性的抗體已得以富集的抗體制劑和未純化的制劑。將多克隆抗體針對特定靶標(biāo)的抗體加以富集的眾多技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。最近已開發(fā)了一種用于重組產(chǎn)生適合于預(yù)防性和治療性施用的高度特異性多克隆抗體的技術(shù)(W0 2004/061104)。重組多克隆抗體(rpAb)可從生產(chǎn)生物反應(yīng)器中以單ー制劑形式純化，而無需對構(gòu)成重組多克隆蛋白的各成員進行単獨的處理、 制造、純化或表征。在一個實施方案中，抗體是來源于乳汁或初乳的多克隆抗體。在一個實施方案中， 多克隆抗體來源于諸如奶牛、山羊、綿羊、駱駝或水牛的反芻動物的乳汁或初乳。在另ー個實施方案中，抗體從人的乳汁或初乳分離。在一個優(yōu)選實施方案中，多克隆抗體從牛，優(yōu)選經(jīng)免疫的牛的乳汁或初乳分離。牛初乳(早期乳)是本發(fā)明抗體的優(yōu)選來源。在奶牛中， 抗體不穿過胎盤，并且因此所有被動免疫力通過乳轉(zhuǎn)移至新生小牛。因此，奶牛在分娩之后立即將大量抗體分泌至初乳中并且初乳中約50%的蛋白是免疫球蛋白。在出生之后前4小時，50mg/ml的免疫球蛋白濃度通常出現(xiàn)于初乳中(Butler和Kehrli，2005，Mucosal Immunology，1763-1793)，24 小時后下降至 25-30mg/ml(0ntsouka 等，2003，J Dairy Sci, 86,2005-11)。初乳和乳汁是ロ服遞送的多克隆抗體的唯一安全來源。因為正常乳汁含有 1. 5g/L IgG，所以人已經(jīng)廣泛接觸牛免疫球蛋白?！扒逗峡贵w”是這樣的抗體分子，其中(a)恒定區(qū)或其一部分經(jīng)改變、替換或交換以使得抗原結(jié)合部位(可變區(qū))與不同或改變類別、效應(yīng)子功能和/或物種，或?qū)⑿碌男再|(zhì)賦予嵌合抗體的完全不同分子(例如，酶、毒素、激素、生長因子、藥物等)的恒定區(qū)連接或 (b)可變區(qū)或其一部分經(jīng)改變、替換或與具有不同或改變抗原特異性的可變區(qū)交換。參見例如美國專利第 4，816，567 號和 Morrison, 1985，Science 229 1202-07。本發(fā)明進一步涵蓋使用用來模擬抗體的分子，諸如適體、納米抗體和基于纖連蛋白的抗體模擬物。本發(fā)明還涵蓋使用抗體分子的一部分與靶標(biāo)受體的配體融合，從而變得對于靶標(biāo)受體具有特異性的“融合蛋白”。在另ー個方面，本發(fā)明提供對于靶標(biāo)具有特異性的抗體的衍生物。衍生抗體可包含將所需性質(zhì)(諸如在特定用途中増加的半衰期)賦予抗體的任何分子或物質(zhì)。衍生抗體可包含例如可檢測(或標(biāo)記)部分(例如，放射性、比色、抗原或酶分子)、可檢測顆粒(諸如磁性或電子密度高顆粒(例如，金顆粒))，或結(jié)合另一分子的分子(例如，生物素或鏈霉抗生物素蛋白)，治療或診斷部分(例如，放射性、細(xì)胞毒性或藥學(xué)活性部分)，或増加抗體對于特定用途(例如，施用于受試者(諸如人受試者)，或其它體內(nèi)或體外用途)的適合性的分子?？捎糜谘苌贵w的分子的實例包括白蛋白(例如，人血清白蛋白)和聚乙ニ醇(PEG)。可使用在本領(lǐng)域中熟知的技術(shù)來制備抗體的與白蛋白連接和聚乙ニ醇化的衍生物。在一個實施方案中，抗體與甲狀腺素轉(zhuǎn)運蛋白(TTR)或TTR變體偶聯(lián)或以其它方式與其連接。TTR或TTR變體可以例如選自由以下組成的組的化學(xué)物化學(xué)修飾右旋糖酐、聚(η-乙烯基吡咯烷酮)、聚乙ニ醇、聚丙ニ醇均聚物、聚環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇和聚乙烯醇。在ー個方面，本發(fā)明提供使用本發(fā)明治療性組合物來治療患者的方法。本文所使用的術(shù)語“患者”是指動物。優(yōu)選地，動物是哺乳動物。更優(yōu)選地，哺乳動物是人?！盎颊摺?也指例如犬、貓、馬、奶牛、豬、豚鼠、魚、鳥類等。因此，本發(fā)明的組合物和方法也同樣適合用于獸醫(yī)治療。在本發(fā)明的一個實施方案中，抗體用于治療伴侶動物、役畜或飼養(yǎng)供食用的動物的疾病或病癥。在本發(fā)明的一個實施方案中，使用穩(wěn)定化抗體以向仔畜，優(yōu)選奶牛、馬、綿羊或豬提供被動免疫。術(shù)語“治療”涵蓋緩和、治愈或預(yù)防病癥、疾病、病患或其它病狀(在本文中統(tǒng)稱為 “病狀”)中的至少ー個癥狀或其它方面，或降低病狀的嚴(yán)重性等。為了構(gòu)成可行的治療劑， 本發(fā)明組合物不必實現(xiàn)完全治愈，或根除疾病的每ー種癥狀或表現(xiàn)。如相關(guān)領(lǐng)域中所公認(rèn)， 作為治療劑使用的藥物可降低指定疾病狀況的嚴(yán)重性，但是不必消除疾病的每ー種表現(xiàn)以便被視為有用的治療劑。同樣，為了構(gòu)成可行的預(yù)防劑，預(yù)防性施用的療法不必完全有效地預(yù)防病狀的發(fā)生。僅僅減少疾病的影響(例如，通過減少其癥狀的數(shù)量或嚴(yán)重程度，或増加另ー種療法的有效性，或產(chǎn)生另ー種有益的效果)，或減少疾病在受試者中發(fā)生或惡化的可能性就已足夠。在一個實施方案中，治療有效量的組合物已施用于患者的指示是反映特定病癥的嚴(yán)重性的指標(biāo)相比于基線的持續(xù)改善。本發(fā)明藥物組合物包含與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑一起配制的治療有效量的本發(fā)明抗體。本發(fā)明抗體的“治療有效量”是指在適用于任何醫(yī)學(xué)療法的合理利弊比率(benefit/risk ratio)下向所治療受試者賦予治療效果的組合物的量。本文所使用的術(shù)語治療效果是指足以“治療”患者。如本文所使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑”是指無毒、惰性固體、半固體或液體填料、稀釋劑、封裝材料或任何類型的配制助劑?？沙洚?dāng)藥學(xué)上可接受的載體的材料的一些實例是糖諸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素和其衍生物諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；粉狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石粉；賦形劑諸如椰子油和栓劑蠟；油諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和通過大豆油；二醇諸如丙ニ醇；酯諸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑諸如氫氧化鎂和氫氧化鋁；褐藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇，和磷酸鹽緩沖溶液，以及其它無毒相容潤滑劑諸如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、涂層劑、甜味劑、 調(diào)味劑和芳香剤、防腐劑和抗氧化劑也可根據(jù)配方設(shè)計師的判斷而存在于組合物中。ロ服施用的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。除了活性化合物以外，液體劑型可含有在本領(lǐng)域中通常使用的惰性稀釋劑，諸如例如水或其它溶劑、溶解劑和乳化劑諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酷、醋酸乙酷、苯甲醇、苯甲酸芐酷、 丙ニ醇、1，3_ 丁ニ醇、ニ甲基甲酰胺、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙ニ醇和山梨醇酐的脂肪酸酯和其混合物。除了惰性稀釋劑以外，ロ服組合物可還包含佐劑諸如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑。直腸施用的組合物優(yōu)選是可通過使本發(fā)明化合物與合適的非刺激性賦形劑或載體混合來制備的栓劑，所述賦形劑或載體諸如椰子油、聚乙ニ醇或在環(huán)境溫度下是固體但是在體溫下是液體并且因此在直腸或陰道腔中融化并釋放活性化合物的栓劑蠟。在ー個實施方案中，直腸施用組合物呈灌腸劑形式。ロ服施用的固體劑型包括膠囊、片劑、丸剤、粉末和顆粒。在此類固體劑型中，活性化合物與至少ー種惰性、藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體諸如檸檬酸鈉或磷酸氫鈣和/或以下物質(zhì)混合a)填充劑或増量劑諸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合劑諸如例如羧甲基纖維素、褐藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯樹膠；c)保濕劑諸如甘油；d)崩解劑諸如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉；e) 溶液延緩劑諸如烷烴ば)吸收加速劑諸如季銨化合物；g)潤濕劑諸如例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；h)吸收劑諸如高嶺土和膨潤土，和i)潤滑劑諸如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、 固體聚乙ニ醇、月桂基硫酸鈉和其混合物。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，劑型還可包含緩沖劑。相似類型的固體組合物也可使用諸如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)的賦形劑以及高分子量聚乙ニ醇等來用作軟質(zhì)和硬質(zhì)填充明膠膠囊中的填充劑。雖然穩(wěn)定化抗體具有針對胃降解的增強的穩(wěn)定性，但是在ー些條件下可能需要提供防止胃降解的額外水平的保護。如果需要，存在腸溶包衣的許多選擇方案(參見例如美國專利4，330，338和4，518，433)。在一個實施方案中，腸溶包衣利用胃后pH值變化以溶解膜包衣并釋放活性成分。已開發(fā)出包衣和制劑以便將蛋白治療劑遞送至小腸并且這些方法可經(jīng)調(diào)適以遞送本發(fā)明抗體。例如，已開發(fā)出包有腸溶衣形式的胰島素以便ロ服遞送 (Toorisaka 等，2005，J Control Release，107，91-6)。
另外，固體劑型的片劑、糖衣藥丸、膠囊、丸劑和顆粒可使用藥物配制領(lǐng)域中所熟知的其它包衣和殼層來制備。它們可任選地含有乳濁劑并且還可具有使得其僅在或優(yōu)先在腸道的某一部分，任選地以延遲方式釋放活性成分的組成。可使用的包埋組合物的實例包括聚合物和蠟。有效劑量取決于途徑施用，以及與其它藥劑共同使用的可能性而有所不同。然而， 應(yīng)理解，本發(fā)明化合物和組合物的總每日用量由主治醫(yī)師在合理醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)決定。任何特定患者的具體治療有效劑量水平取決于多種因素包括所治療的病癥和病癥的嚴(yán)重性；所使用的具體化合物的活性；所使用的具體組合物；患者年齢、體重、一般健康狀況、性別和飲食；所使用的具體化合物的施用時間、施用途徑和排泄速率；相對于食物攝取的化合物遞送時間；治療持續(xù)時間；與所使用的具體化合物組合或同時使用的藥物；以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中熟知的相似因素。 根據(jù)本發(fā)明，施用途徑包括經(jīng)由導(dǎo)管或飼管ロ服施用。本發(fā)明的特定實施方案涉及按以下量向受試者施用包含本發(fā)明抗體的藥物組合物lmg/天至約1克/天，更優(yōu)選地約10毫克/天至約500毫克/天，并且最優(yōu)選地約20 毫克/天至約100毫克/天劑量。在一個實施方案中，多克隆抗體制劑以約IOOmg至約50 克/天，更優(yōu)選地約500毫克/天至約10克/天，并且最優(yōu)選地約1克/天至約5克/天的抗體劑量向受試者施用，其中多克隆抗體制劑未針對對于靶標(biāo)抗原具有特異性的抗體而富集。治療方案包括每天一次、每天兩次或每天三次或更多次施用本發(fā)明抗體組合物以治療本文公開的醫(yī)學(xué)病癥。在一個實施方案中，本發(fā)明抗體組合物每天四次、每天6次或每天8次施用以治療本文公開的醫(yī)學(xué)病癥。在一個實施方案中，本發(fā)明抗體組合物每周一次、 每周兩次，或每周三次或更多次施用以治療本文公開的醫(yī)學(xué)病癥。本發(fā)明方法和組合物包括結(jié)合一種或多種適用于治療患者所患病狀的額外治療劑來使用本發(fā)明抗體。此類藥劑的實例包括蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)藥物。如在相關(guān)領(lǐng)域中所公認(rèn)，當(dāng)多種治療劑共同施用吋，可相應(yīng)地調(diào)整劑量。“共同施用”和組合療法不限于同時施用，而且包括在涉及向患者施用至少ー種其它治療劑的治療過程期間施用本發(fā)明抗體至少一次的治療方案。在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明包括使用對于TNF具有特異性的抗體，并且優(yōu)選多克隆乳源抗TNF抗體來治療炎癥，特別是炎性腸病，同時維持峰值抗TNF抗體血清濃度低于1 μ g/ml，優(yōu)選低于300ng/ml，優(yōu)選低于lOOng/ml的組合物和方法。在另ー個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明包括使用多克隆乳源抗TNF抗體來治療粘膜炎和尤其口腔粘膜炎，同時維持峰值抗TNF抗體血清濃度低于1 μ g/ml的組合物方法。本文還描述針對能夠使用治療的消化道病癥的其它優(yōu)選實施方案，本發(fā)明抗體在局部施用至消化道時對于此類抗體可接近的靶標(biāo)具有特異性，同時維持抗體血清濃度低于1 μ g/ml。提供以下實施例以用于說明本發(fā)明的具體實施方案或特征并且不欲限制其范圍。 實施例實施例1 牛抗TNF抗體的分析牛多克隆抗TNF抗體(AVX-470)通過用鼠TNF對奶牛進行免疫并且收集分娩后的
使用標(biāo)準(zhǔn)分析來檢測AVX-470的TNF中和活性。因為用AVX-470進行的首批功能性實驗在倉鼠中進行，所以評估中和倉鼠TNF的能力。將倉鼠脾細(xì)胞用2ng/ml的LPS 刺激Mhr并且將上清液用作倉鼠TNF來源。將不同濃度的AVX-470、對照?？?谷蛋白抗體或經(jīng)純化的兔抗TNF抗體(Biovision)在37°C下與1 100稀釋度的倉鼠LPS上清液 (以下稱為倉鼠TNF) —起孵育air。將倉鼠TNF-抗體組合與1 μ g/ml放線菌素D —起轉(zhuǎn)移至已涂布過夜的細(xì)胞(每孔3. 5 X IO4細(xì)胞)中。將培養(yǎng)物孵育過夜并且使用WST 測量細(xì)胞増殖。所有分析重復(fù)進行三次。如表I中所示，倉鼠TNF抑制細(xì)胞増殖。此抑制以劑量依賴性方式被經(jīng)純化的兔抗TNF抗體和AVX-470阻斷，但是不被對照?？?谷蛋白抗體阻斷。半最大抑制通過 0. 5 μ g/ml經(jīng)純化的抗TNF抗體和200 μ g/ml AVX-470來獲得?；谶@些數(shù)據(jù)，估計AVX-470 中的0. 25%抗體對于TNF具有特異性。
權(quán)利要求
1.一種治療炎性腸病的方法，所述方法包括將多克隆乳源抗TNF抗體施用于消化道， 其中在施用所述抗TNF抗體之后，患者血清中的抗TNF抗體的峰值水平小于約1 μ g/ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在暴露于3個或更多個劑量的治療性抗TNF抗體之后，少于約2%的患者產(chǎn)生針對所述治療性抗TNF抗體的抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中施用3個或更多個劑量的所述抗TNF抗體在6個月期間不降低所述抗TNF抗體的功效。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在施用所述抗TNF抗體之后，可在患者血清中檢測到的抗TNF抗體的峰值水平小于約10ng/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗TNF抗體經(jīng)ロ服施用或經(jīng)直腸施用。
6.ー種包含牛源多克隆抗TNF抗體的組合物，其中所述抗體以可有效地局部治療炎性腸病的量存在于所述組合物中，其中在施用所述組合物后，施用所述抗TNF抗體之后的抗 TNF抗體在患者血清中的峰值水平小于1 μ g/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中在施用所述抗TNF抗體之后，抗TNF抗體在患者血清中的峰值水平小于10ng/ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其經(jīng)配制以便經(jīng)ロ服施用或經(jīng)直腸施用。
9.包含牛源多克隆抗TNF抗體的組合物用于局部治療患有炎性腸病的患者的用途，其中在施用所述抗TNF抗體之后，可在患者血清中檢測到的抗體的峰值水平小于約1 μ g/ml。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中在暴露于3個或更多個劑量的治療性抗TNF抗體之后，少于約2%的患者產(chǎn)生針對所述治療性抗TNF抗體的抗體。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中3個或更多個劑量的所述抗TNF抗體在6個月內(nèi)不降低所述抗TNF抗體的功效。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中在施用所述抗TNF抗體之后，可在患者血清中檢測到的抗TNF抗體的水平小于約10ng/ml。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述抗TNF抗體經(jīng)ロ服施用或經(jīng)直腸施用。
14.ー種包含對于抗炎性細(xì)胞因子具有特異性的牛源多克隆抗體的組合物，其中所述抗體以可有效地局部治療患者消化道炎癥的量存在于所述組合物中，其中在施用所述抗體之后，可在患者血清中檢測到的抗體的峰值水平小于1 μ g/ml。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合物，其中所述抗炎性細(xì)胞因子選自TNF、TNF-k、 Ifn-y、IL-I β、IL-2、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL27、IL-32、 IL-33、IL-35或其任何組合。
16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合物，其中所述抗炎性細(xì)胞因子是TNF。
17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合物，其經(jīng)配制以便經(jīng)ロ服施用或經(jīng)直腸施用。
18.一種治療患者消化道炎癥的方法，所述方法包括向患者消化道施用對于炎性細(xì)胞因子具有特異性的抗體，其中在施用所述抗體之后，抗體在患者血清中的峰值水平小于 1 μ g/mlο
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述GI道的通透性由于所述炎癥而增加。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中炎癥由化學(xué)療法、放射療法、非治療性輻射暴露、炎性腸病、乳糜瀉、腸易激綜合征、癌癥、非留體抗炎病引起。
21.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述炎性細(xì)胞因子選自TNF、TNF-k、Ifn-γ,IL-I β、IL-2、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、IL-27、IL32、IL-33、 IL-35或其任何組合。
22.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中在暴露于3個或更多個劑量的治療性抗體之后， 少于2%的患者產(chǎn)生針對所述治療性抗體的抗體。
23.包含對于抗炎性細(xì)胞因子具有特異性的牛源多克隆抗體的組合物用于局部治療患者胃腸道炎癥的用途，其中在施用所述抗體之后，可在患者血清中檢測到的抗體的峰值水平小于1μ g/ml。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途，其中炎癥由化學(xué)療法、放射療法、非治療性輻射暴露、炎性腸病、乳糜瀉、腸易激綜合征、癌癥、非留體抗炎病引起。
25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途，其中所述炎性細(xì)胞因子選自TNF、TNF-K、Ifn-Y、 IL-I β、IL-2、IL-6、IL-12,IL-13,IL-15,IL-17,IL-18,IL-21、IL-23、IL-27,IL32、IL-33, IL-35或其任何組合。
26.根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途，其中在施用所述抗體之后，可在患者血清中檢測到的抗體的峰值水平小于約10ng/ml。
27.根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途，其中在暴露于3個或更多個劑量的治療性抗體之后， 少于2%的患者產(chǎn)生針對所述治療性抗體的抗體。
28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途，其中施用3個或更多個劑量的所述抗體在6個月期間不降低所述抗體的功效。
29.一種治療粘膜炎的方法，所述方法包括將多克隆乳源抗TNF抗體施用于胃腸(GI) 道，其中在施用所述抗TNF抗體之后，患者血清中的抗TNF抗體的峰值水平小于1 μ g/ml。
30.根據(jù)權(quán)利要求四所述的方法，其中在施用所述抗TNF抗體之后，可在患者血清中檢測到的抗TNF抗體的峰值水平小于10ng/ml。
31.根據(jù)權(quán)利要求四所述的方法，其中所述粘膜炎是口腔粘膜炎。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述抗TNF抗體經(jīng)配制以施用于口腔。
33.根據(jù)權(quán)利要求四所述的方法，其中所述粘膜炎是胃腸粘膜炎。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述抗TNF抗體經(jīng)配制以施用于胃腸道。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述抗TNF抗體經(jīng)配制以便ロ服或經(jīng)直腸遞送。
36.ー種將抗體遞送至消化道的方法，所述方法包括使所述抗體與所述消化道接觸，其中患者消化道的粘膜屏障任選地受到損害以使得其可使所述抗體透過，其中所述抗體對于所述消化道的管腔表面上或所述消化道的粘膜屏障下方的生物靶標(biāo)具有特異性，并且其中在施用所述抗體之后，抗體在患者血清中的峰值水平小于約ι μ g/ml。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述抗體是多克隆乳源抗體。
38.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述抗體對選自以下的生物靶標(biāo)具有特異性 TNF,TNF-κ、Ifn-γ、IL-I β、IL-2、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、 IL27、IL-32、IL-33、IL-35、toll樣受體、腸道神經(jīng)遞質(zhì)或其受體或轉(zhuǎn)運蛋白、調(diào)節(jié)食物攝取的肽或受體、結(jié)直腸癌細(xì)胞上的表皮生長因子受體。
全文摘要
本發(fā)明提供了在消化道中或在消化道粘膜屏障下方有治療效果，但不將已被證明對于全身施用抗體后獲得臨床益處所必需的抗體水平遞送至體循環(huán)的方法和抗體治療劑組合物。本發(fā)明進一步描述了抗體治療劑的治療性組合物，其在消化道中或在消化道粘膜屏障下方有治療效果，但不將與全身施用后抗體后所出現(xiàn)的不良事件和全身免疫抑制相關(guān)的抗體水平遞送至體循環(huán)。
文檔編號A61K39/395GK102596248SQ201080047092
公開日2012年7月18日 申請日期2010年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月15日
發(fā)明者B·S·?？怂? D·C·斯塔福德 申請人:艾瓦夏生物制劑公司