專利名稱：用于治療癌癥的針對cdcp1的抗體的制作方法
用于治療癌癥的針對CDCP1的抗體本發(fā)明涉及用于治療癌癥的與CUB4(保藏號DSMACC2551)結合相同表位的針對人 CDCPl的抗體。
背景技術：
人CDCP1((含有 CUB 域的蛋白 1、B345、CD318、SIMA135、TRASK ;SEQ ID N0:1 禾口具有突變R525Q (即SEQ ID NO 1的氨基酸位置525處用谷氨酰胺(Q)替換精氨酸(R))和 /或突變G709D (即SEQ ID NO 1的氨基酸位置709處用天冬氨酸(D)替換甘氨酸(G))的變體)是一種含有三個胞外CUB域的跨膜蛋白。發(fā)現(xiàn)此蛋白質在結腸和肺癌中過表達。其表達水平與癌瘤細胞的轉移能力相關聯(lián)。已經(jīng)顯示了它在癌細胞系中是酪氨酸磷酸化的 (W02002/004508 ；Scherl-Mostageer, M.等，Oncogene 20(2001)4402-8 ；Hooper, J. D.等， Oncogene 22 (2003) 1783-94 ；Perry, S. Ε.等，F(xiàn)EBS Lett. 581 (2007) 1137-42 ；Brown, Τ. Α., J. Biol. Chem. 279 (2004) 14772-14783 ；Ota, Τ.等，Nat. Genet. 36 (2004) 40-45)。已經(jīng)報告了編碼獨特同等型的可變剪接轉錄物變體。WO 2002/004508 提及 CDCPl 為腫瘤相關抗原 B345。WO 2004/074481 提及 CDCPl 為轉移性腫瘤細胞中表達的糖蛋白抗原SIMA135。W02005/042102提及CDCPl為牽涉卵巢癌的蛋白質。WO 2007/005502涉及靶向⑶CPl的用于治療疾病的方法和組合物。US 2004/0053343(及 Conze，Τ.等，Ann. N. Y. Acad. Sci. 996 (2003) 222-6 和 Buhring，H. J.等，Stem Cells 22(2004)334-43)涉及用于鑒定的CDCPl抗體和/或某些細胞干細胞群。發(fā)明概述本發(fā)明的一個方面是用于治療癌癥的特異性結合人CDCPl的抗體，其特征在于 與CUB4(保藏號DSMACC2551)結合相同表位。本發(fā)明進一步包括用于治療癌癥的抗體，其特征在于與CUB4(保藏號 DSMACC2551)結合相同表位，且進一步的特征在于a)重鏈可變域是SEQ ID NO :7，且輕鏈可變域是SEQ ID NO :8，b)重鏈可變域是SEQ ID NO 15，且輕鏈可變域是SEQ ID N0:16，或c)重鏈可變域是SEQ ID NO 23，且輕鏈可變域是SEQ ID NO 24，或d)重鏈可變域是SEQ ID NO :31，且輕鏈可變域是SEQ ID NO 32，或或其人源化型式。本發(fā)明進一步包括用于治療癌癥的抗體，其特征在于與CUB4(保藏號 DSMACC2551)結合相同表位，且進一步的特征在于a)重鏈可變域包含 CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :9、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :10、禾口 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 11，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :12、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :13、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :14，或b)重鏈可變域包含 CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :17、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :18、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 19，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :20、CDRL2 區(qū) SEQ ID N0:21、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :22，或
4
c)重鏈可變域包含 CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :25、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :26、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO :27，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :28、CDRL2 區(qū) SEQ ID N0:29、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :30ο本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于所述抗體是人IgGl亞類的。本發(fā)明的另一方面是一種用于治療癌癥的藥物組合物，其包含特異性結合人 CDCPl的抗體，該抗體的特征在于與CUB4(保藏號DSMACC2551)結合相同表位。本發(fā)明的另一方面是特異性結合人CDCPl的抗體用于制備供治療癌癥用的藥物中的用途，所述抗體的特征在于與CUB4(保藏號DSMACC2551)結合相同表位。本發(fā)明的另一方面是一種治療患有癌癥的患者的方法，其通過對需要此類治療的所述患者施用特異性結合人CDCPl的抗體來進行，所述抗體的特征在于與CUB4(保藏號 DSMACC2551)結合相同表位。本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于a)重鏈可變域是SEQ ID NO 15，且輕鏈可變域是SEQ ID N0:16，或b)重鏈可變域是SEQ ID NO 23，且輕鏈可變域是SEQ ID N0:24，或c)重鏈可變域是SEQ ID NO :31，且輕鏈可變域是SEQ ID NO 32，或或其人源化型式。本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于a)重鏈可變域包含 CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :9、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :10、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 11，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :12、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :13、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :14，或b)重鏈可變域包含 CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :17、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :18、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 19，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :20、CDRL2 區(qū) SEQ ID N0:21、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :22，或c)重鏈可變域包含 CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :25、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :26、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO :27，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :28、CDRL2 區(qū) SEQ ID N0:29、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :30ο優(yōu)選地，所述抗體的特征在于所述抗體是人IgGl亞類的。本發(fā)明進一步包括包含所述抗體的藥物組合物。本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的所述抗體用于制備供治療癌癥用的藥物的用途。本發(fā)明進一步包括一種治療患有癌癥的患者的方法，其通過對需要此類治療的所述患者施用所述抗體來進行。本發(fā)明提供了編碼依照本發(fā)明的抗體的核酸。本發(fā)明進一步提供了含有依照本發(fā)明的核酸且能夠在原核或真核宿主細胞中表達所述核酸的表達載體和含有此類載體的用于重組生成依照本發(fā)明的抗體的宿主細胞。本發(fā)明進一步包括包含依照本發(fā)明的載體的原核或真核宿主細胞。本發(fā)明進一步包括一種用于生成依照本發(fā)明的重組抗體的方法，其特征在于在原核或真核宿主細胞中表達依照本發(fā)明的核酸，并自所述細胞或細胞培養(yǎng)物上清液回收所述抗體。本發(fā)明進一步包括通過此類重組方法獲得的抗體?，F(xiàn)在已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn)了，與結合⑶CPl的其它表位的⑶CPl抗體，如例如 CUB1(保藏號DSM ACC2569)相比，以與CUB4 (保藏號DSM ACC2551)結合相同表位為特征的特異性結合CDCPl的抗體特別可用于治療癌癥。發(fā)明詳述CUB4 抗體指來自 DE 10242146 (EP 1396501, US 7，δ41, O3O)的具有保藏號 DSM ACC2551的保藏抗體，其具有重鏈可變域(VH)SEQ ID NO :7和輕鏈可變域(VL)SEQ ID NO :8ο所述CUB4抗體特異性結合人CDCPl。(編號為DSM ACC2551 (DSMZ)的保藏由 Eberhard-Karls-University Tiibingen, Univcrsitatsklinikum Tubingen, Geissweg 3, 72076Tubingen 做出)。本發(fā)明包括用于治療癌癥的特異性結合人⑶CPl的抗體，其特征在于與CUB4(保藏號DSMACC2551)結合相同表位。本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于重鏈可變域是SEQ ID NO -J,且輕鏈可變域是SEQ ID NO :8，或其人源化型式。本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于重鏈可變域是SEQ ID NO: 15，且輕鏈可變域是SEQ ID NO :16，或或其人源化型式。本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于重鏈可變域是SEQ ID NO 23，且輕鏈可變域是SEQ ID NO :24，或或其人源化型式。本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于重鏈可變域是SEQ ID NO 31，且輕鏈可變域是SEQ ID NO :32，或或其人源化型式。本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :9、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :10、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 11，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO 12、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO 13、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :14，或本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :17、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :18、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 19，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :20、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :21、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :22，或本發(fā)明進一步包括依照本發(fā)明的抗體，其特征在于重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :25、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :26、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 27，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :28、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :29、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :30。術語“抗體”涵蓋各種形式的抗體結構，包括但不限于完整的抗體和抗體片段。優(yōu)選地，依照本發(fā)明的抗體是人源化抗體、嵌合抗體、或進一步遺傳工程化改造的抗體，只要依照本發(fā)明的特征性特性得到保留?！翱贵w片段”包含全長抗體的一部分，優(yōu)選地其可變域， 或至少其抗原結合位點?？贵w片段的例子包括雙抗體、單鏈抗體分子、和自抗體片段形成的多特異性抗體。scFv抗體例如記載于Huston，J. S. ,Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-88。 另外，抗體片段包含具有結合CDCPl WVh域或\域的特征(即能夠與\域或Vh域一起裝配成功能性抗原結合位點，并且由此提供依照本發(fā)明的抗體的特性)的單鏈多肽。如本文中所使用的，術語“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”指單一氨基酸組成的抗體分子的制備物。術語“人源化抗體”或“抗體的人源化型式”指其中的框架和/或“互補決定區(qū)”(CDR)已經(jīng)進行過修飾以包含與親本免疫球蛋白的CDR相比不同物種的免疫球蛋白的CDR(例如CDR3)的抗體。在一個優(yōu)選的實施方案中，將小鼠CDR(例如CDR3)嫁接入人抗體的框架區(qū)中以制備“人源化抗體”(參見例如Riechmann，L.等，Nature332 (1988) 323-327 ； R Neuberger, M. S.等，Nature 314(1985)268-270)。如本文中所使用的，術語“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”指單一氨基酸組成的抗體分子的制備物。術語“嵌合抗體”指通常通過重組DNA技術制備的包含來自小鼠的可變區(qū)，即結合區(qū)和自不同來源或物種衍生的恒定區(qū)的至少一部分的單克隆抗體。包含小鼠可變區(qū)和人恒定區(qū)的嵌合抗體是特別優(yōu)選的。此類大鼠/人嵌合抗體是包含編碼大鼠免疫球蛋白可變區(qū)的DNA區(qū)段和編碼人免疫球蛋白恒定區(qū)的DNA區(qū)段的所表達免疫球蛋白基因的產物。本發(fā)明所涵蓋的“嵌合抗體”的其它形式是那些其中類別或亞類已經(jīng)自初始抗體的類別或亞類修飾或改變的。此類“嵌合”抗體又稱為“類別轉換抗體”。用于生成嵌合抗體的方法牽涉本領域現(xiàn)在公知的常規(guī)重組DNA和基因轉染技術(參見例如Morrison，S. L.等，Proc. Natl. Acad Sci. USA 81(1984)6851-6855 ；US 5，202，238 和 US 5,204,244)。人CDCP1((含有CUB域的蛋白1、B345、CD318、SIMA135、TRASK;SEQID NO :1 禾口具有突變R525Q (即SEQ ID NO 1的氨基酸位置525處用谷氨酰胺(Q)替換精氨酸(R))和 /或突變G709D (即SEQ ID NO 1的氨基酸位置709處用天冬氨酸(D)替換甘氨酸(G))的變體)是一種含有三個胞外CUB域的跨膜蛋白。發(fā)現(xiàn)此蛋白質在結腸和肺癌中過表達。其表達水平與癌瘤細胞的轉移能力相關聯(lián)。已經(jīng)顯示了它在癌細胞系中是酪氨酸磷酸化的 (W02002/004508 ；Scherl-Mostageer, M.等，Oncogene 20(2001)4402-8 ；Hooper, J. D.等， Oncogene 22 (2003) 1783-94 ；Perry, S. Ε.等，F(xiàn)EBS Lett. 581 (2007) 1137-42 ；Brown, Τ. Α., J. Biol. Chem. 279 (2004) 14772-14783 ；Ota, Τ.等，Nat. Genet. 36 (2004) 40-45)。已經(jīng)報告了編碼獨特同等型的可變剪接轉錄物變體。除非另有規(guī)定，術語“Kabat編號方式”或“依照Kabat的編號方式”或“EU索引” 定義為使用如在Kabat 等(Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版， Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))巾白勺 EU 索引為例如IgG抗體中的殘基編號。如本文中所使用的，“特異性結合人⑶CP1”指特異性結合人⑶CPl抗原的抗體。 結合親和力是1. 0X10_8mOl/l或更低的KD值的，優(yōu)選地1. OxlO^mol/l或更低的KD值的。 用標準的結合測定法，諸如表面等離振子共振技術(Biacore )來測定結合親和力。如此， 如本文中所使用的，“特異性結合人CDCPl的抗體”指以KD1.0X10_8mol/l或更低(例如 KDl. 0xl(T8mol/l 至 1. 0xl(T13mol/l，優(yōu)選地 KDl. 0xl(T9mol/l 至 1. 0xl(T12mol/l)的結合親和力結合人CDCPl抗原的抗體。本發(fā)明進一步包括特異性結合人⑶CPl的抗體，其特征在于重鏈可變域是SEQ ID NO 15，且輕鏈可變域是SEQ ID NO 16，或其人源化型式。本發(fā)明進一步包括特異性結合人⑶CPl的抗體，其特征在于重鏈可變域是SEQ ID NO :23，且輕鏈可變域是SEQ ID NO :24，或其人源化型式。本發(fā)明進一步包括特異性結合人⑶CPl的抗體，其特征在于重鏈可變域是SEQ ID NO :31，且輕鏈可變域是SEQ ID NO 32，或其人源化型式。本發(fā)明進一步包括特異性結合人⑶CPl的抗體，其特征在于
重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :9、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :10、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 11，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO 12、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO 13、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :14。本發(fā)明進一步包括特異性結合人⑶CPl的抗體，其特征在于重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :17、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :18、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 19，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :20、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :21、和 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :22。本發(fā)明進一步包括特異性結合人⑶CPl的抗體，其特征在于重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :25、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :26、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 27,且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQ ID NO :28、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :29、禾口 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :30。術語“表位”意指人CDCPl中能夠特異性結合抗體的蛋白質決定子。表位通常由分子諸如氨基酸或糖側鏈的化學活性表面聚集構成，并且通常表位具有特定的三維結構特征，及特定的電荷特征。構象性和非構象性表位的區(qū)別之處在于在存在變性溶劑的情況中喪失對前一種，而不是后一種的結合。如本文中所使用的，術語“與CUB4(保藏號DSMACC2551)結合相同表位”指結合 ⑶CPl上抗體CUB4(保藏號DSM ACC2551)結合的相同表位的本發(fā)明的抗⑶CPl抗體?？梢允褂帽绢I域中已知的技術來測定本發(fā)明的抗CDCPl抗體的表位結合特性。在體外競爭結合抑制測定法中通過表面等離振子共振(SPR)于25°C測定抗體CUB4(保藏號DSM ACC2551) 抑制測試抗體對CDCPl結合的能力，從而測量CDCPl抗體(參見圖幻。與CUB4結合相同表位的抗體的結合受到抑制，并且在添加測試抗體后沒有檢出結合信號。(例如，測試抗體的注射時間(=0秒)后100秒，結合信號不比注射時的信號高；以RU(相對單位)測量信號)(例如CDCP1-004、CDCP1-012、CDCP1-015，參見圖3a)。與CUB4結合不同表位的抗體的結合不受抑制，并且在添加測試抗體后檢出結合信號(例如CUBl和CUB3，參見圖3b)(例如，注射時間(=0秒)后100秒，結合信號比注射時的信號高；以RU(相對單位)測量信號)。^ !以fflil BIAcore 11] (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden) ^ijf g, 如記載于例如實施例2的。如本文中所使用的，“可變域”(輕鏈可變域(VL)、重鏈可變域(VH))意為直接牽涉抗體結合抗原的輕鏈和重鏈域對之每種。輕鏈和重鏈可變域具有相同的一般結構，并且每個域包含通過三個“高變區(qū)”(或互補決定區(qū)，CDR)連接的其序列廣泛保守的四個框架(FR) 區(qū)。框架區(qū)采用β-片層構象，而⑶R可以形成連接β-片層結構的環(huán)。每條鏈中的⑶R 通過框架區(qū)保持其三維結構，并且與來自另一條鏈的CDR—起形成抗原結合位點?？贵w的重鏈和輕鏈CDR3區(qū)在依照本發(fā)明的抗體的結合特異性/親和力中發(fā)揮特別重要的作用，并且因此提供本發(fā)明的別的目的。在本文中使用時，術語“抗體的抗原結合部分”指抗體中負責抗原結合的氨基酸殘基?？贵w的抗原結合部分包含來自“互補決定區(qū)”或“CDR”的氨基酸殘基。術語本發(fā)明的抗體的“抗原結合部分”可以含有6個互補決定區(qū)(CDR)，其以不同程度促成結合位點對抗原的親和力。存在著三個重鏈可變域⑶R (⑶RHl、⑶RH2和⑶Rro)和三個輕鏈可變域 ⑶R(⑶RLl、⑶RL2和⑶RU)。通過與匯編的氨基酸序列數(shù)據(jù)庫比較來確定⑶R和框架區(qū)(FR)的范圍，在所述數(shù)據(jù)庫中已經(jīng)依照序列間的可變性限定那些區(qū)域?！翱蚣堋被颉癋R”區(qū)是與如本文中所限定的高變區(qū)殘基不同的那些可變域區(qū)。因此，抗體的輕鏈和重鏈可變域包含自N至C端的域FRi、⑶R1、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3、和FR4。 CDR禾口 FR 區(qū)依照 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版， Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)白勺t示} 義和/或那些來自“高變環(huán)”的殘基來確定。如本文中所使用的，術語“核酸”或“核酸分子”意圖包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是單鏈或雙鏈，但是優(yōu)選的是雙鏈DNA。如本申請內所使用的，術語“氨基酸”意指天然存在的羧基α-氨基酸的組，包括丙氨酸(三字母代碼ala，單字母代碼A)、精氨酸(arg，R)、天冬酰胺(asn，N)、天冬氨酸 (asp, D)、半胱氨酸(cys，C)、谷氨酰胺(gln，Q)、谷氨酸(glu，Ε)、甘氨酸(gly，G)、組氨酸 (his, H)、異亮氨酸(ile，I)、亮氨酸(leu，L)、賴氨酸(lys，K)、甲硫氨酸(met，Μ)、苯丙氨酸(phe，F(xiàn))、脯氨酸(pro，P)、絲氨酸(ser，S)、蘇氨酸(thr，Τ)、色氨酸(trp，W)、酪氨酸 (tyr，Y)、和纈氨酸(val，V)。依照本發(fā)明的抗體的特征在于恒定區(qū)是人起源的，且優(yōu)選的是人IgGl亞類的。 恒定區(qū)包括抗體的重鏈和輕鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含以N端至C端方向的抗體重鏈恒定域1 (CHl)、抗體鉸鏈區(qū)(HR)、抗體重鏈恒定域2 (CH2)、和抗體重鏈恒定域3 (CH3)；和任選地在IgE亞類抗體的情況中抗體重鏈恒定域4 (CH4)。輕鏈恒定區(qū)包含抗體輕鏈恒定域 (CL)?？贵w輕鏈恒定域(CL)可以是κ (卡帕)或λ (拉姆達)。此類恒定鏈是現(xiàn)有技術公知的，并且例如由 Kabat，E.，Α.，描述(參見例如 Johnson，G.和 Wu，T.，Τ.，Nucleic Acids Res. 28(2000)214-218)。例如，有用的IgGl亞類人重鏈恒定區(qū)包含氨基酸序列SEQ ID NO 3。例如，有用的人輕鏈恒定區(qū)包含κ輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列SEQ ID NO :4;另一個有用的人輕鏈恒定區(qū)包含λ輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列SEQ ID NO :5?？贵w的“Fe部分”不直接牽涉抗體對抗原的結合，但是展現(xiàn)出各種效應器功能?！翱贵w的Fc部分”是熟練技術人員公知的術語，并且基于木瓜蛋白酶對抗體的切割限定。根據(jù)其重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列，抗體或免疫球蛋白分成類IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且這些中的數(shù)種可以進一步分成亞類(同種型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、和IgG4、IgAljP IgA2。 依照重鏈恒定區(qū)，免疫球蛋白的不同類分別稱作α、δ、ε、Y、和μ?？贵w的Fc部分直接牽涉ADCC(抗體依賴性細胞介導的細胞毒性)和基于補體激活、Clq結合和Fc受體結合的⑶C(補體依賴性細胞毒性)。補體激活(⑶C)是通過補體因子Clq結合大多數(shù)IgG抗體亞類的Fc部分啟動的。雖然抗體對補體系統(tǒng)的影響依賴于某些條件，但是對Clq的結合是由Fc部分中的限定結合位點引起的。此類結合位點是現(xiàn)有技術中已知的，并且例如由Boackle，R.J.等，Nature 282(1979)742-743 ； Lukas, Τ. J.等，J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560 ；Brunhouse, R.禾口 Cebra，J. J.， Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917 ；Burton, D. R.等，Nature 288 (1980) 338-344 ； Thommesen, J. Ε.等，Mo 1 · Immuno 1 · 37 (2000) 995-1004 ； Idusogie，Ε· Ε·等， J.Immunol. 164(2000)4178-4184 ；Hezareh, Μ.等，J.Virology 75 (2001) 12161-12168 ； Morgan, Α.等，Immunology 86 (1995) 319-324 ;EP 0307434 描述。此類結合位點是例如 L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331 和 P329 (依照 Kabat, Ε. A.的 EU 索引的編號方式，參見下文)。亞類IgGl、IgG2和IgG3的抗體通常顯示補體激活及Clq和C3結合， 而IgG4不激活補體系統(tǒng)，而且不結合Clq和C3。依照本發(fā)明的抗體包含自人起源衍生的Fc部分，且優(yōu)選地人恒定區(qū)的所有其它部分。如本文中所使用的，術語“自人起源衍生的Fc部分”意指作為IgGl、IgG2、IgG3或 IgG4亞類的人抗體的Fc部分，優(yōu)選地來自人IgGl亞類的Fc部分、來自人IgGl亞類的突變Fc部分(優(yōu)選地具有L234A+L235A方面的突變)、來自人IgG4亞類的Fc部分或來自人 IgG4亞類的突變Fc部分(優(yōu)選地具有S228P方面的突變)的Fc部分。最優(yōu)選的是人IgGl 亞類(參見例如SEQ IDNO 3)、具有突變L234A和L235A的人IgGl亞類、人IgG4亞類(參見例如SEQID NO 6)、或具有突變的人IgG4亞類的人重鏈恒定區(qū)。術語“抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC) ”指在存在效應細胞的情況中通過依照本發(fā)明的抗體來裂解人靶細胞。優(yōu)選地，通過在存在效應細胞，諸如新鮮分離的PBMC或來自血沉棕黃層的純化的效應細胞，如單核細胞或天然殺傷(NK)細胞或永久生長NK細胞系的情況中用依照本發(fā)明的抗體來處理CDCPl表達細胞的制備物來測量ADCC。術語“補體依賴性細胞毒性(⑶C) ”意指通過補體因子Clq與大多數(shù)IgG抗體亞類的&部分的結合啟動的過程。通過在所謂的結合位點處限定的蛋白質-蛋白質相互作用引起Clq與抗體的結合。此類Fc部分結合位點是現(xiàn)有技術中已知的(參見上文)。此類Fc 部分結合位點例如以氨基酸 L2;34、L235、D270、^97、E318、K320、K322、P33Un P329 (依照 Kabat的EU索引編號)為特征。亞類IgGl、IgG2、和IgG3的抗體通常顯示包括Clq和C3 結合的補體激活，而IgG4不激活補體系統(tǒng)，而且不結合Clq和/或C3。單克隆抗體的細胞介導的效應器功能可以通過工程化改造其寡糖組分來增強， 如記載于 Umana，P.等，Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180，及 US6, 602，684 的。IgGl 型抗體(最常使用的治療性抗體)是在每個CH2域中具有Asn297處的保守的N連接的糖基化位點的糖蛋白。兩個附著于Asn297的復合雙觸角寡糖掩埋于CH2域間，這形成與多肽主鏈的廣泛接觸，并且其存在對于抗體介導效應器功能諸如抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)是至關重要的(Lifely，Μ. R.等，Glycobiology 5(1995)813-822 ； Jefferis, R.等，Immunol. Rev. 163(1998)59—76 ；Wright, Α.禾口 Morrison， S. L. ，Trends Biotechnol. 15(1997)26-32)。Umana，P.等 Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 和 WO 99/54342顯示了 β (1，4)-N-乙酰葡糖胺轉移酶III ( “&ιΤΙΙΙ”)(即一種催化兩分型寡糖形成的糖基轉移酶)在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中的過表達顯著提高抗體的體外ADCC活性。Asn297碳水化合物的組成改變或其消除還影響與Fc γ R和C1 q的結 ^ (Umana, P.等，Nature Biotechnol. 17(1999) 176-180 ；Davies, J.等，Biotechnol. Bioeng. 74(2001) 288-294 ；Mimura, Y.等,J. Biol. Chem. 276 (2001)45539-45547 ； Radaev, S.等,J. Biol. Chem. 276(2001) 16478-16483 ；Shields, R. L.等，J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604 ；Shields, R. L.等，J. Biol. Chem. 277 (2002) 26733-26740 ； Simmons, L. C.等，J. Immunol. Methods 263(2002) 133-147)。例如在WO 2005/044859, WO 2004/065540, W02007/031875, Umana, P.等，Nature Biotechnol. 17(1999) 176-180，WO 99/154342, WO 2005/018572, WO 2006/116260, WO 2006/114700, WO 2004/065540, WO 2005/011735, W02005/027966, WO 1997/028267， US 2006/0134709， US 2005/0054048, US2005/0152894, WO 2003/035835 和 WO 2000/061739中，或者例如在 Niwa，R.等，J. Immunol. Methods 306(2005) 151-160 ；Shinkawa, Τ.等， J. Biol. Chem. 278 (2003) 3466-3473 ；WO 03/055993 和 US 2005/0249722 中報告了增強單克隆抗體的細胞介導的效應器功能的方法。因此，在本發(fā)明的一個實施方案中，依照本發(fā)明的抗體在Asn297處用糖鏈糖基化 (若它包含IgGl或IgG3亞類的Fc部分)，由此所述糖鏈內的巖藻糖量是65%或更低(依照Kabat的編號方式)。在另一個實施方案中，所述糖鏈內的巖藻糖量是在5%和65%之間，優(yōu)選地在20%和40%之間。依照本發(fā)明的“Asr^97”意指位于Fc區(qū)中的約第297位的氨基酸天冬酰胺。基于抗體的次要序列變異，Asn297也可以位于第297位上游或下游的一些氨基酸(通常不超過士3個氨基酸)，即第294位和第300位之間。在一個實施方案中， 依照本發(fā)明的糖基化抗體，IgG亞類是人IgGl亞類的、具有突變L234A和L235A的人IgGl 亞類的或IgG3亞類的。在又一個實施方案中，N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(NGNA)的量是或更小和/或N端α-1，3-半乳糖的量是所述糖鏈內的或更小。優(yōu)選地，糖鏈顯示了附著于 CHO細胞中重組表達的抗體的Asn297的N連接聚糖的特征。術語“糖鏈顯示了附著于CHO細胞中重組表達的抗體的Asn297的N連接聚糖的特征”意指依照本發(fā)明的抗體的Asn297處的糖鏈與未修飾的CHO細胞中表達的相同抗體的糖鏈，例如如那些在WO 2006/103100中報告的糖鏈具有相同的結構和糖殘基序列(除了巖藻糖殘基外)。如本申請內所使用的，術語“NGNA”意指糖殘基N-羥乙酰神經(jīng)氨酸。在Asn297處發(fā)生人IgGl或IgG3的糖基化，作為以多至兩個Gal殘基為末端的核心巖藻糖化雙觸角復合寡糖糖基化。Kabat，E.A.等，kquences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)及 Brueggemann, Μ.等，J. Exp. Med. 166(1987) 1351-1361 ； Love，Τ. W.等，Methods Enzymol. 178 (1989) 515-527 詳細報告了 IgGl 或 IgG3 亞類的人重鏈恒定區(qū)。根據(jù)末端Gal殘基的量，這些結構稱為G0、Gl(a-l，6-或α _1，3_)、或G2聚糖殘基(Raju, Τ. S.，Bioprocess Int. 1 (2003)44-53)?？贵w Fc 部分的 CHO 型糖基化例如由 Routier, F. H.，Glycoconjugate J. 14 (1997) 201-207 描述。在非糖修飾的 CHO 宿主細胞中重組表達的抗體在Asn297處通常以至少85%的量進行巖藻糖化?？贵w的經(jīng)修飾的寡糖可以是雜合的或復合的。優(yōu)選地，兩分型、還原的/非巖藻糖化的寡糖是雜合的。在另一個實施方案中，兩分型、還原的/非巖藻糖化的寡糖是復合的。依照本發(fā)明，“巖藻糖的量”意指通過MALDI-T0F質譜術測量的，并以平均值計算的，相對于附著于Asn297的所有糖結構(例如復合的、雜合的和高甘露糖結構)的總和，Asn297處糖鏈內所述糖的量(參見例如W02008/077M6)。巖藻糖的相對量是通過 MALDI-T0F,含有巖藻糖的結構相對于經(jīng)N-糖苷酶F處理的樣品中鑒定的所有糖結構(例如分別為復合的、雜合的及寡和高甘露糖結構)的百分比。優(yōu)選地，通過重組手段來生成依照本發(fā)明的抗體。此類方法是現(xiàn)有技術中普遍已知的，并且包括在原核和真核細胞中的蛋白質表達，隨后分離抗體多肽，并且通常純化至藥學可接受純度。對于蛋白質表達，通過標準的方法將編碼輕鏈和重鏈或其片段的核酸插入表達載體中。在合適的原核或真核宿主細胞，如CHO細胞、NSO細胞、SP2/0細胞、HEK293細胞、COS細胞、酵母、或大腸桿菌細胞中實施表達，并且自細胞(上清液或裂解后的細胞)回
11收抗體?？贵w的重組生成是現(xiàn)有技術中公知的，并且例如記載于綜述文章Makrides， S. C. , Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202 ；Geisse, S. φ, Protein Expr. Purif. 8(1996) 271—282 ；Kaufman, R. J.，Mol. Biotechnol. 16(2000) 151 — 160 ；Werner, R. G.，Drug Res. 48 (1998) 870-880?？贵w可以存在于整個細胞中，在細胞溶胞物中，或者為部分純化的或基本上純的形式。通過標準的技術，包括堿/SDS處理、CsCl分帶、柱層析、瓊脂糖凝膠電泳、和本領域中公知的其它技術(參見 Ausubel，F(xiàn).等編 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York(1987))來實施純化以消除其它細胞組分或其它污染物，例如其它細胞核酸或蛋白質。例如，Barnes, L. Μ.等，Cytotechnology 32(2000) 109-123 ；及 Barnes，L. Μ.等， Biotech. Bioeng. 73^001061-270 描述了 NSO 細胞中的表達。例如，Durocher, Y.等， Nucl. Acids. Res. 3(K2002)E9 描述了瞬時表達。Orlandi，R.等，Proc. Natl. Acad, ki. USA 86(1989)3833-3837 ；Carter, P.等，Proc. Natl. Acad. ki. USA 89(1992)4285-4289; 及 Norderhaug，L.等，J. Immunol. Methods 204(1997)77-87 描述了可變域的克隆。 Schlaeger, Ε. -J.禾口 Christensen, K.,于 Cytotechnology 30 (1999) 71-83 及 Schlaeger, Ε. -J.，于 J. Immunol. Methods 194(1996) 191-199 描述了一種優(yōu)選的瞬時表達系統(tǒng)(HEK 293)。適合于原核生物的控制序列例如包括啟動子，任選地操縱基因序列，和核糖體結合位點。已知真核細胞利用啟動子、增強子和多腺苷酸化信號。在將核酸放置在與另一種核酸序列的功能性關系中時，它是“可操作連接的”。例如，若前序列或分泌前導的DNA以參與多肽分泌的前蛋白表達，則它與多肽的DNA可操作連接；若啟動子或增強子影響序列的轉錄，則它與編碼序列可操作連接；或者若核糖體結合位點定位為使得便于翻譯，則它與編碼序列可操作連接。一般而言，“可操作連接的”意指所連接的DNA序列是連續(xù)的，并且在分泌前導的情況中，是連續(xù)的且在讀碼框中。然而，增強子不必是連續(xù)的。通過在方便的限制性位點處的連接來實現(xiàn)連接。若不存在此類位點，則依照常規(guī)的實踐使用合成的寡核苷酸銜接頭或接頭。通過常規(guī)的免疫球蛋白純化規(guī)程，諸如例如蛋白A-kpharose、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析、或親和層析來自培養(yǎng)液適當?shù)胤蛛x單克隆抗體。容易使用常規(guī)規(guī)程將編碼單克隆抗體的DNA和RNA分離并測序。雜交瘤細胞可以充當此類DNA和RNA的來源。一旦分離，可以將DNA插入表達載體中，然后將所述表達載體轉染入在其它情況中不生成免疫球蛋白蛋白質的宿主細胞諸如HEK 293細胞、CHO細胞、或骨髓瘤細胞中，以獲得重組單克隆抗體在宿主細胞中的合成。如本文中所使用的，表述“細胞”、“細胞系”、和“細胞培養(yǎng)物”可互換使用，并且所有此類名稱包括后代。如此，詞語“轉化體”和“經(jīng)轉化的細胞”包括原代主題細胞和自其衍生的培養(yǎng)物，而不管傳遞的次數(shù)。還應當理解，由于有意或無意的突變，所有后代在DNA內容上可能不是正好相同的。包括具有如在初始轉化細胞中篩選的相同功能或生物學活性的變體后代。在意圖獨特名稱的情況中，它從上下文看會是清楚的。如本文中所使用的，術語“轉化”指將載體/核酸轉移入宿主細胞中的過程。若使用沒有難以應付的細胞壁屏障的細胞作為宿主細胞，則例如通過磷酸鈣沉淀法來實施轉染，如 Graham，F(xiàn). L.和 van der Eb, A. J. ,Virology 52 (1973) 456-467 所描述的。然而，也可以使用其它用于將DNA導入細胞中的方法，諸如通過核注射或者通過原生質體融合來進行。若使用原核細胞或含有堅固細胞壁構造的細胞，則例如一種轉染方法是使用氯化鈣進行的鈣處理，如 Cohen, S. N.等，PNAS. 69(1972)2110-2114 所描述的。如本文中所使用的，“表達”指將核酸轉錄成mRNA的過程和/或隨后將轉錄的 mRNA(又稱為轉錄物)翻譯成肽、多肽、或蛋白質的過程。轉錄物和編碼的多肽統(tǒng)稱為基因產物。若多核苷酸是自基因組DNA衍生的，則真核細胞中的表達可以包括mRNA的剪接。“載體”指將插入的核酸分子轉移入宿主細胞中和/或在宿主細胞間轉移的核酸分子，特別是自我復制的。該術語包括主要在將DNA或RNA插入細胞(例如，染色體整合)方面發(fā)揮功能的載體、主要在DNA或RNA復制方面發(fā)揮功能的復制載體、和在DNA或RNA的轉錄和/或翻譯方面發(fā)揮功能的表達載體。還包括提供超過一種功能的載體，如所描述的?！氨磉_載體”指在導入合適的宿主細胞中時可以被轉錄和翻譯成多肽的多核苷酸。 “表達系統(tǒng)”通常指包含能發(fā)揮功能以產生期望的表達產物的表達載體的合適的宿主細胞。本發(fā)明的一個方面是包含依照本發(fā)明的抗體的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是依照本發(fā)明的抗體用于制造藥物組合物的用途。本發(fā)明的又一方面是用于制造包含依照本發(fā)明的抗體的藥物組合物的方法。在另一方面，本發(fā)明提供了含有與藥用載體一起配制的依照本發(fā)明的抗原結合蛋白的組合物，例如藥物組合物。已經(jīng)證明了與其它抗⑶CPl抗體，如例如CUBl抗體(來自DE 10242146 (EP 1396501,US 7，541，030)的具有保藏號DSMACC2569的保藏抗體)相比，所述以與CUB4(保藏號DSMACC2551)結合相同表位為特征的特異性結合人CDCPl的抗體特別可用于治療癌癥。因此，本發(fā)明的一個方面是用于治療癌癥的所述藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是依照本發(fā)明的抗體用于制造供治療癌癥用的藥物的用途。本發(fā)明的另一方面是治療患有癌癥的患者的方法，其通過對需要此類治療的所述患者施用依照本發(fā)明的抗體來進行。如本文中所使用的，“藥用載體”包括生理學相容的任何和所有溶劑、分散介質、涂層材料、抗細菌劑和抗真菌劑、等張劑和吸收延遲劑，等等。優(yōu)選地，載體適合于靜脈內、肌肉內、皮下、胃腸外、脊柱或表皮施用(例如通過注射或輸注)?？梢酝ㄟ^本領域中已知的多種方法來施用本發(fā)明的組合物。如熟練技術人員會領會的，施用的路徑和/或模式會隨期望的結果而變化。為了通過某些施用路徑來施用本發(fā)明的化合物，可能有必要用某種材料包被化合物，或者與某種材料共施用化合物以阻止其失活。例如，可以將化合物在合適的載體，例如脂質體或稀釋劑中對受試者施用。藥學可接受稀釋劑包括鹽水和水性緩沖溶液。藥用載體包括無菌水溶液或分散體和供臨場制備無菌可注射溶液或分散體用的無菌粉劑。對藥學活性物質使用此類介質和藥劑是本領域中已知的。如本文中所使用的，短語“胃腸外施用”意指通常通過注射進行的與腸和表面施用不同的施用模式，并且包括但不限于靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、 腹膜內、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關節(jié)內、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內、硬膜外和胸骨內注射和輸注。如本文中所使用的，術語“癌癥”可以是例如肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、皮膚或眼內黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛區(qū)癌、胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、結腸癌、乳腺癌、子宮癌、 輸卵管癌、子宮內膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、何杰金(Hodgkin)氏病、食管癌、小腸癌、 內分泌系統(tǒng)癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、 膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細胞癌、膽癌(biliary cancer)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)新生物、脊柱軸腫瘤、腦干膠質瘤、多形性成膠質細胞瘤(glioblastoma multiforme)、星形細胞瘤、神經(jīng)鞘瘤(schwanoma)、室鼓膜瘤(印endymona)、髓母細胞瘤、 腦脊膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤、淋巴瘤、淋巴細胞性白血病，包括任何上述癌癥的頑固性型式、或一種或多種上述癌癥的組合。優(yōu)選地，此類癌癥是乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、肺癌或前列腺癌，且更優(yōu)選地肺癌。優(yōu)選地，此類癌癥的進一步特征在于CDCPl表達或過表達。更優(yōu)選地，此類癌癥的進一步特征在于過表達。這些組合物還可以含有佐劑諸如防腐劑、濕潤劑、乳化劑和分散劑。可以通過滅菌規(guī)程，見上文，及通過包括各種抗細菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、 酚、山梨酸等來確保阻止微生物的存在。還可能期望將等張劑，諸如糖、氯化鈉等納入組合物中。另外，可以通過包括延遲吸收的藥劑諸如單硬脂酸鋁和明膠來引起可注射藥物形式的吸收延遲。不管選擇的施用路徑，通過本領域技術人員已知的常規(guī)方法來將本發(fā)明的化合物 (其可以以合適的水合形式使用)和/或本發(fā)明的藥物組合物配制成藥學可接受劑量形式?？梢愿淖兓钚猿煞衷诒景l(fā)明的藥物組合物中的實際劑量水平，從而獲得對于實現(xiàn)特定患者的期望的治療響應、組成、和施用模式有效的，而對患者無毒的活性成分量。選定的劑量水平會取決于多種藥動學因素，包括所采用的本發(fā)明的特定組合物的活性、施用路徑、施用時間、所采用的特定化合物的排泄速率、治療的持續(xù)時間、與所采用的特定組合物組合使用的其它藥物、化合物和/或材料、所治療的患者的年齡、性別、重量、狀況、一般健康和先前的醫(yī)學史等醫(yī)學領域公知的因素。組合物必須是無菌的，而且是流體的，其程度使得組合物通過注射器可投遞。在水夕卜，載體優(yōu)選地是等張緩沖鹽水溶液?？梢岳缤ㄟ^使用涂層材料諸如卵磷脂、在分散體的情況中通過維持所要求的粒度、及通過使用表面活性劑來維持適當?shù)牧鲃有?。在許多情況中，優(yōu)選在組合物中包含等張劑(例如糖、多元醇諸如甘露醇或山梨醇、和氯化鈉)。提供以下實施例、序列表和圖以幫助理解本發(fā)明，其實際范圍在所附權利要求書中列出。應當理解，可以在不背離本發(fā)明的精神的前提下對所列規(guī)程做出修飾。序列表的描述SEQ ID NO 1 人 CDCPlSEQ ID NO 2 包含胞外域(ECD)的人CDCPl片段SEQ ID NO 3 來自人起源的IgGl重鏈恒定區(qū)SEQ ID NO 4 來自人起源的κ輕鏈恒定區(qū)SEQ ID NO 5 來自人起源的λ輕鏈恒定區(qū)
14
SEQ ID NO 6 來自人起源的IgG4重鏈恒定區(qū)SEQ ID NO 7 重鏈可變域 VH，CUB4(保藏號 DSMACC2551)SEQ ID NO 8 輕鏈可變域 VL，CUB4(保藏號 DSMACC2551)SEQ ID NO 9 重鏈 CDRH1，單抗 CDCP1-004SEQ ID NO 10 重鏈 CDRH2，單抗 CDCP1-004SEQ ID NO 11 重鏈 CDRH3，單抗 CDCP1-004SEQ ID NO 12 輕鏈 CDRLl，單抗 CDCP1-004SEQ ID NO 13 輕鏈 CDRL2，單抗 CDCP1-004SEQ ID NO 14 輕鏈 CDRL3，單抗 CDCP1-004SEQ ID NO: 15 重鏈可變域 VH，單抗 CDCP1-004SEQ ID NO: 16 輕鏈可變域 VL，單抗 CDCP1-004SEQ ID NO 17 重鏈 CDRH1，單抗 CDCP1-012SEQ ID NO 18 重鏈 CDRH2，單抗 CDCP1-012SEQ ID NO 19 重鏈 CDRH3，單抗 CDCP1-012SEQ ID NO 20 輕鏈 CDRLl，單抗 CDCP1-012SEQ ID NO 21 輕鏈 CDRL2，單抗 CDCP1-012SEQ ID NO 22 輕鏈 CDRL3，單抗 CDCP1-012SEQ ID NO 23 重鏈可變域 VH，單抗 CDCP1-012SEQ ID NO 24 輕鏈可變域 VL，單抗 CDCP1-012SEQ ID NO 25 重鏈 CDRH1，單抗 CDCP1-015SEQ ID NO 26 重鏈 CDRH2，單抗 CDCP1-015SEQ ID NO 27 重鏈 CDRH3，單抗 CDCP1-015SEQ ID NO 28 輕鏈 CDRL1，單抗 CDCP1-01510SEQ ID NO 29 輕鏈 CDRL2，單抗 CDCP1-015SEQ ID NO 30 輕鏈 CDRL3，單抗 CDCP1-015SEQ ID NO 31 重鏈可變域 VH，單抗 CDCP1-015SEQ ID NO 32 輕鏈可變域 VL，單抗 CDCP1-015附圖簡述

圖1抗⑶CPl抗體CUB4和CUBl在人肺癌H322M異種移植物中的體內腫瘤生長抑制。圖2用固定化的CUB4抗體、⑶CPl的胞外域(EOT)、和別的抗⑶CPl測試抗體(例如CUBl和CUB3)的表面等離振子共振(SPR-)技術(BIAcore )的示意性測定法形式。圖3固定化的CUB4抗體、CDCPl的胞外域(ECD)和抗CDCPl抗體CUBl和CUB3的 Biacore傳感圖(χ軸=時間；y軸=以相對單位(RU)計的響應)圖 3a 顯示了 CDCP1-004、CDCP1-012 和 CDCP1-015 抗體結合 CDCPl 上與 CUB4 抗體相同的表位。圖3b 顯示了 CUBl和CUB3抗體結合CDCPl上與CUB4抗體不同的另一表位。圖4依照本發(fā)明的⑶CPl抗體結合人⑶CPl胞外域(⑶CPl-E⑶)和人⑶CPl-E⑶ 的亞域
圖5在HCT 116細胞中刺激⑶CPl磷酸化圖6在MDAMB-231細胞中刺激⑶CPl內在化和磷酸化
實施例實施例1抗⑶CPl抗體CUB4的體內腫瘤生長抑制及與CUBl抗體比較研究名稱CDCP1_PZ_H322M_002實施本體內研究以比較特異性抗CDCPl抗體CUB4與結合另一表位的抗體，如例如 CUBl的功效。H322M非小細胞肺癌細胞最初自NCI保藏中心獲得，并在擴充后保藏于Roche細胞庫，Penzbergo將腫瘤細胞系常規(guī)地在補充有10%胎牛血清和2mML_谷氨酰胺的RPMI 1640培養(yǎng)基中于37°C在水飽和的氣氛中于5% C02培養(yǎng)。使用傳代4來進行細胞移植。將人非小細胞肺癌細胞系H322M與Matrigel —起皮下接種(5xl06個細胞)入小鼠的右體側中。動物處理在細胞移植后17天在隨機化當天開始。以10mg/kg的指定劑量i. p. q7d 施用抗體，直至研究終止第62天。還在同一天施用相應的媒介物。施用體積是10ml/kg。組處理組1:媒介物處理組2:鼠 CUB4 10mg/kg i. p.；處理組3:鼠 CUBl 10mg/kg i. p.；TGI (以％計的腫瘤生長抑制)下表顯示了腫瘤生長抑制的數(shù)值，其基于均值和中值分別對每組和時間點以 100-平均值(T_處理[第X天]-τ_處理[基線])/平均值(Τ_參照[第X天]-τ_參照 [基線])*100計算。TGI計算的參照選擇為組“媒介物”。圖1中也顯示了結果。表1 腫瘤生長抑制(TGI)
權利要求
1.一種用于治療癌癥的特異性結合人CDCPl的抗體，其特征在于與CUB4(保藏號 DSMACC2551)結合相同表位。
2.依照權利要求1的抗體，其特征在于a)重鏈可變域是SEQID NO :7，且輕鏈可變域是SEQ ID NO :8，b)重鏈可變域是SEQID NO 15，且輕鏈可變域是SEQ ID NO: 16，或c)重鏈可變域是SEQID NO 23，且輕鏈可變域是SEQ ID N0:24，或d)重鏈可變域是SEQID NO :31，且輕鏈可變域是SEQ ID NO 32，或或其人源化型式。
3.依照權利要求1的抗體，其特征在于a)重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :9、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :10、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO :11，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQID NO :12、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :13、禾口 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :14，或b)重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :17、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :18、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 19，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQID NO :20、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :21、禾口 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :22，或c)重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :25、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :26、禾口 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO :27，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQID NO :28、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :29、禾口 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :30。
4.依照權利要求1至3中任一項的抗體，其特征在于所述抗體是人IgGl亞類的。
5.一種用于治療癌癥的藥物組合物，其包含依照權利要求1至4中任一項的抗體。
6.依照權利要求1至4中任一項的抗體用于制備供治療癌癥用的藥物的用途。
7.一種治療患有癌癥的患者的方法，其通過對需要此類治療的所述患者施用依照權利要求1至4中任一項的抗體來進行。
8.一種特異性結合人CDCPl的抗體，其特征在于a)重鏈可變域是SEQID NO 15，且輕鏈可變域是SEQ ID N0:16，或b)重鏈可變域是SEQID NO 23，且輕鏈可變域是SEQ ID N0:24，或c)重鏈可變域是SEQID NO :31，且輕鏈可變域是SEQ ID NO 32，或或其人源化型式。
9.依照權利要求8的抗體，其特征在于a)重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :9、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :10、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 11，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQID NO :12、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :13、禾口 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :14，或b)重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :17、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :18、和 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO 19，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQID NO :20、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :21、禾口 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :22，或c)重鏈可變域包含CDRHl 區(qū) SEQ ID NO :25、CDRH2 區(qū) SEQ ID NO :26、禾口 CDRH3 區(qū) SEQ ID NO :27，且輕鏈可變域包含 CDRLl 區(qū) SEQID NO :28、CDRL2 區(qū) SEQ ID NO :29、禾口 CDRL3 區(qū) SEQ ID NO :30。
10.依照權利要求8至9中任一項的抗體，其特征在于所述抗體是人IgGl亞類的。
11.一種藥物組合物，其包含依照權利要求8至10中任一項的抗體。
12.依照權利要求8至10中任一項的抗體用于制備供治療癌癥用的藥物的用途。
13.一種治療患有癌癥的患者的方法，其通過對需要此類治療的所述患者施用依照權利要求8至10中任一項的抗體來進行。
14.編碼依照權利要求8至10中任一項的抗體的核酸。
15.含有依照權利要求14的核酸的表達載體，其能夠在原核或真核宿主細胞中表達所述核酸。
16.包含依照權利要求15的載體的原核或真核宿主細胞。
17.一種用于生成依照權利要求8至10中任一項的重組抗體的方法，其特征在于在原核或真核宿主細胞中表達依照權利要求14的核酸，并自所述細胞或細胞培養(yǎng)物上清液回收所述抗體。
全文摘要
本公開內容涉及用于治療癌癥的與CUB4(保藏號DSMACC2551)結合相同表位的針對人CDCP1的抗體。
文檔編號A61P35/00GK102481366SQ201080038278
公開日2012年5月30日 申請日期2010年8月26日 優(yōu)先權日2009年8月28日
發(fā)明者A.利夫克, B.博森梅爾, G.尼德費爾納, G.費爾蒂格, H-W.克雷爾, R.拉默斯 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司