專利名稱：用于檢測(cè)上皮癌的若丹明診斷劑和診斷方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的診斷劑，用于檢測(cè)癌性與癌前期上皮組織。
按照另一方面，本發(fā)明涉及新穎的方法，其用于檢測(cè)和/或描繪癌性和/或癌前期上皮組織。
本發(fā)明在另一方面涉及這樣的診斷程序及其所用試劑，它們尤其可用于體內(nèi)篩選可能的口腔癌患者，作為牙醫(yī)師或內(nèi)科醫(yī)師的例行檢查或程序的一部分，例如定期的牙科或內(nèi)科檢查、牙齒清洗等。
本發(fā)明在另外一方面涉及這樣的程序及其所用組合物，它們使用比現(xiàn)有技術(shù)程序所用染劑更易獲得和/或合成更便宜與更簡(jiǎn)單和/或更純的染劑。
本發(fā)明在另外一方面涉及采用這樣一種染劑的體內(nèi)程序和組合物，盡管現(xiàn)有技術(shù)有相反的教導(dǎo)，不過(guò)該染劑是足夠無(wú)毒的，以便通過(guò)清洗整個(gè)口腔和/或漱口而能夠被采用。
用于檢測(cè)惡化前上皮損傷、例如口腔損傷和口腔癌的體內(nèi)診斷程序采用這樣的染劑組合物，它們被因發(fā)育異常、增生、腫瘤發(fā)生和其他活性表面損傷而異常的組織所選擇性地保留，這些程序是本領(lǐng)域已知的。例如，采用熒光素或熒光素衍生物的程序公開在Chenz《中國(guó)口腔學(xué)雜志》(2744-47(1992))和Filurin(《口腔學(xué)》(俄羅斯)7244-47(1993))中。這些程序涉及涂以染劑，然后在紫外燈下用肉眼檢查，以檢測(cè)選擇性發(fā)熒光的癌性/癌前期組織。
另一種現(xiàn)有技術(shù)程序涉及體內(nèi)用甲苯胺藍(lán)O清洗，然后是正常的肉眼檢查，以檢測(cè)所有選擇性染色的組織。這樣的程序例如公開在Tucci等的美國(guó)專利5,372,801和Mashberg的美國(guó)專利4,321,251中。甲苯胺藍(lán)作為體外組織病理學(xué)染劑已經(jīng)使用了數(shù)十年。通過(guò)這種用途它已經(jīng)成為已知的異染性染劑，把富含在DNA與RNA中的核染成紫色至粉紅色。當(dāng)染劑與核酸或其他酸性細(xì)胞大分子結(jié)合時(shí)，甲苯胺藍(lán)O固有的深藍(lán)色變?yōu)樽仙蚍奂t色。當(dāng)然，這種類型的染色取決于染劑進(jìn)入內(nèi)部亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，例如核。僅用甲醛或其他破裂細(xì)胞膜但不破壞細(xì)胞一般結(jié)構(gòu)的試劑“固定”組織樣本即可易于實(shí)現(xiàn)這種進(jìn)入。
與涉及體外用途的機(jī)理相反，甲苯胺藍(lán)O體內(nèi)染色口腔組織是由于它能夠穿透細(xì)胞壁和依附于線粒體，線粒體保留染劑的時(shí)間比細(xì)胞外基質(zhì)組分更長(zhǎng)。
Mashberg的程序涉及用甲苯胺藍(lán)O溶液漱口清洗整個(gè)口腔，然后用水和乙酸清洗以除去未被癌性或癌前期組織保留的染劑。然后在10-14天后，直接對(duì)懷疑部位涂以甲苯胺藍(lán)O組合物，通過(guò)Mashberg程序進(jìn)行初步診斷。Tucci的’801專利公開了按照Mashberg教導(dǎo)的通用程序所使用的改進(jìn)甲苯胺藍(lán)O組合物。
Papazian《胃腸病學(xué)臨床與生物學(xué)》916-22(1985)提出了一種體內(nèi)程序，涉及呂戈?duì)柸芤?Lugol’s solution)(碘)和甲苯胺藍(lán)O的用途，用于同時(shí)檢測(cè)食管癌和上氣道消化道癌。
最近，Pomerantz的美國(guó)專利5,882,627公開了一類結(jié)構(gòu)明確的噁嗪與噻嗪染劑，它們一般可用于Mashberg診斷方案。
Bemal等《癌癥研究》43,716-720(1983)公開了若丹明染劑體外選擇性地抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)并殺死癌細(xì)胞。Gaboury等的美國(guó)專利5,773,460公開了若丹明優(yōu)先地被很多腫瘤細(xì)胞所保留，提出了某些若丹明酯可用于某些腫瘤細(xì)胞系的體外光動(dòng)力抑制，但是也指出全身毒性可能限制它在化學(xué)療法中的有用性。
若丹明即2-(6-氨基-3-亞氨基-3H-呫噸-9-基)苯甲酸甲酯及其離子鹽、例如鹽酸鹽，是吡啶鎓類親脂性陽(yáng)離子染劑。一般按照Mashberg的’251專利所公開的方案，通過(guò)局部涂于上皮，然后通過(guò)正常的肉眼檢查，它有效地選擇性鑒別和/或描繪癌性與癌前期上皮組織。
適合涂于上皮組織的染劑用若丹明組合物是這樣制備的，將該染劑與適合的藥學(xué)上可接受的溶劑混合。優(yōu)選地，用適合的藥學(xué)上可接受的緩沖系統(tǒng)調(diào)節(jié)若丹明溶液的pH，以便最終的溶液是基本上等滲的，pH范圍大約為2.5至7，優(yōu)選為4.0-5.0。這可以用乙酸-乙酸鈉緩沖體系來(lái)實(shí)現(xiàn)。其他適合的緩沖體系包括檸檬酸-檸檬酸鈉，或混合的酸鹽體系，例如檸檬酸-磷酸鈉等。
用于提供本發(fā)明的液體若丹明染劑組合物的溶劑是一種水性溶劑。按照目前本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式，溶劑包括藥學(xué)上可接受的、也就是無(wú)毒、無(wú)反應(yīng)性醇，例如乙醇。這樣的溶劑不會(huì)可感知地干擾染色機(jī)制，本身也不會(huì)有助于染劑從顯色形式還原為隱色形式。
如果作為口腔“洗液”使用，可以加入對(duì)染劑組合物其他組分穩(wěn)定的矯味劑，以提高組合物的可口性。
優(yōu)選地調(diào)節(jié)若丹明染劑在液體組合物中的量至濃度大約占最終組合物重量的1％，不過(guò)也可以采用更高的濃度，更低的濃度也至少是部分有效的。現(xiàn)在，我優(yōu)先采用含有約0.5至約3.5重量％若丹明組分的染劑組合物。
本發(fā)明還涵蓋用于本發(fā)明方法的組合物，其中通過(guò)以類似于Tucci的’801專利所公開的方式包含藥學(xué)上可接受的氧化劑，存在于組合物中的染劑的任何隱色形式被氧化為顯色形式。
實(shí)施例提供下列實(shí)施例的目的是向本領(lǐng)域技術(shù)人員闡述發(fā)明的實(shí)施，但不限制其范圍，發(fā)明范圍僅由權(quán)利要求書限定。
實(shí)施例1診斷組合物的制備按下列比例(重量％)混合所示各組分，制備診斷組合物
純凈水U.S.P. 83.85冰乙酸U.S.P. 4.61乙酸鈉三水合物U.S.P. 2.45SD18乙醇 7.4830％過(guò)氧化氫，U.S.P. 0.41IFF覆盆子IC563457 0.20若丹明 1.00實(shí)施例2清洗溶液的制備按所示比例(重量％)混合下列組分，制備清洗溶液純凈水U.S.P. 98.70冰乙酸U.S.P. 1.00苯甲酸鈉U.S.P. 0.10IFF覆盆子IC563457 0.20實(shí)施例3臨床有效性利用Mashberg的’251專利所公開的診斷方案，比較實(shí)施例1和2組合物與按照Tucci的’801專利所制備的甲苯胺藍(lán)O診斷對(duì)照組合物(diagnostic control composition)的臨床有效性。
首先采用TBO對(duì)照組合物篩選口腔病變患者。鑒別潛在的癌性或癌前期病變后，用水和實(shí)施例2乙酸洗液反復(fù)清洗懷疑部位，除去所有TBO痕跡。
然后使用表現(xiàn)口腔病變的患者作為實(shí)施例1若丹明診斷組合物的受試驗(yàn)者。將2-3cc若丹明組合物涂于病變黏膜表面，然后用清洗混合物和水清洗，以除去過(guò)量若丹明組合物。
實(shí)施例1若丹明診斷組合物染色部位組織的組織學(xué)檢查確認(rèn)，若丹明組合物至少在鑒別和描繪癌性與癌前期上皮組織上同甲苯胺藍(lán)O一樣有效。
實(shí)施例4重復(fù)實(shí)施例3的程序，但是用試驗(yàn)與對(duì)照組合物漱口，通過(guò)清洗涂于口腔黏膜，而不是直接涂于懷疑部位局部。得到相同結(jié)果。
我的發(fā)明已經(jīng)公開到使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解和實(shí)施的程度，并且已經(jīng)公開了目前優(yōu)選的實(shí)施方式。
權(quán)利要求
1.用于鑒別和描繪癌性上皮組織的診斷方法，包含(a)將若丹明涂于上皮，以選擇性標(biāo)記癌性組織；和(b)肉眼檢查所述上皮，通過(guò)比較被懷疑部位的顏色與相鄰組織的顏色，鑒別和描繪被懷疑為癌性的組織部位。
2.惡化前上皮損傷和癌的體內(nèi)檢測(cè)方法，包括下列連續(xù)步驟用被癌性與癌前期組織選擇性保留的染劑組合物清洗上皮，其中該染劑組合物基本上由甲苯胺藍(lán)O組成，和用清洗組合物清洗上皮，以除去未被保留的染劑組合物，該方法的改進(jìn)在于其中該染劑組合物包含若丹明。
3.用于體內(nèi)檢測(cè)癌性與癌前期組織的生物染劑組合物，包含(a)若丹明，(b)藥學(xué)上可接受的水性溶劑，和(c)用于隱色若丹明的藥學(xué)上可接受的氧化劑。
全文摘要
用于檢測(cè)和/或描繪癌性與癌前期上皮組織的若丹明染劑組合物和方法。
文檔編號(hào)A61KGK1371290SQ00812220
公開日2002年9月25日 申請(qǐng)日期2000年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月30日
發(fā)明者道格拉斯·D·伯克特 申請(qǐng)人:日拉公司