專利名稱：：包含來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物的抗炎藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于預(yù)防、減輕、或治療炎癥或疼痛的藥物組合物，所述藥物組合物包含來(lái)自構(gòu)樹(Broussonetiapapyrifera)和忍冬(Lonicerajaponica)的提取物作為有效成分。
背景技術(shù)：
：炎癥是當(dāng)生物組織受到損傷時(shí)體內(nèi)發(fā)生的預(yù)防性反應(yīng)，并可以對(duì)外傷、燒傷、或細(xì)菌感染發(fā)生反應(yīng)而在身體的一部分中引起充血、水腫、發(fā)熱、和疼痛。炎性信號(hào)通過環(huán)加氧酶(COX)途徑和脂加氧酶(LOX)途徑產(chǎn)生，并且前列腺素、白三烯、血栓烷等通過這些途徑產(chǎn)生。一旦炎性信號(hào)轉(zhuǎn)移到體內(nèi)的靶位點(diǎn)，發(fā)生多種生物學(xué)變化。例如，靠近靶位點(diǎn)的將遭受炎癥的血管擴(kuò)張，由此容許更多血液供給到血管，以使炎性反應(yīng)所需的血液細(xì)胞，諸如消滅細(xì)菌的嗜中性粒細(xì)胞被供給到靶位點(diǎn)。然而，如果該預(yù)防性反應(yīng)在體內(nèi)異常地或過度地發(fā)生，則可以形成多種炎性疾病。因此，已經(jīng)開發(fā)了通過阻礙生成參與產(chǎn)生炎性信號(hào)的途徑的酶(例如，C0X-l、C0X-2、5-L0X、或12-L0X)來(lái)阻斷該途徑從而抑制炎性反應(yīng)的藥物。同時(shí)，除炎性反應(yīng)外，已經(jīng)已知LOX參與支氣管哮喘(bronchialasthma)，慢性PlSftli^^l(chronicobstructivepulmonarydisease)(COPD),#ft(atopicdermatitis)，銀屑病(psoriasis)等。到目前為止，已經(jīng)開發(fā)了具有不同機(jī)制的抗炎藥物，例如NSAID和SAID。然而，它們具有副作用且不能根本性地治療C0PD，慢性炎癥諸如特應(yīng)性疾病，和變應(yīng)性疾病。因此，存在對(duì)開發(fā)用于抑制炎癥的有效、穩(wěn)定、和經(jīng)濟(jì)的藥物產(chǎn)品的需要。I^JM(Broussonetiapapyrifera(L.)Vent.)(#禾斗(Moraceae))^$中15、日本和韓國(guó)，且構(gòu)樹的樹皮已經(jīng)在韓國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中作為抗炎藥物，抗支氣管炎藥物，止咳劑使用。根據(jù)一篇報(bào)告，構(gòu)樹的根對(duì)PTPlB和酪氨酸酶具有抑制活性(Chen等，2002;Hwang和Lee，2007)，并且，最近報(bào)告了來(lái)自構(gòu)樹的根、莖、葉和果實(shí)的95%乙醇提取物在體內(nèi)具有鎮(zhèn)痛和抗炎作用(Lin等，2008)。而且，從構(gòu)樹的根部樹皮成功地分離了數(shù)種異戊二烯化黃酮類化合物包括papyriflavonolA和構(gòu)查耳酮(broussochalcone)A(Son等，2001)。忍冬(Thunb.)(忍冬科(Caprifoliaceae))是纏繞其他物體生長(zhǎng)的灌木，且用作解毒藥，并用于治療泌尿系統(tǒng)病癥、高燒、和頭痛(aiougakukan，1985)。忍冬被認(rèn)為是抗炎藥物并用于治療上呼吸道感染、糖尿病和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Lee等，1998)。而且，從忍冬的整株植物分離了數(shù)種成分包括忍冬苦苷(lonicerosides)和環(huán)烯醚萜(iridoids)(Lee等，1995；Kwak等，2003和Qian等，2007)。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問題到目前為止，已經(jīng)開發(fā)了具有不同機(jī)制的抗炎藥物。然而，它們具有副作用，并且在治療一些疾病中，不能有效地作為基礎(chǔ)治療。因此，存在對(duì)開發(fā)有效、穩(wěn)定和經(jīng)濟(jì)的藥物產(chǎn)品的需要。這樣的藥物產(chǎn)品可以是包括兩種以上有效成分的復(fù)合物。然而，當(dāng)具有抗炎和鎮(zhèn)痛作用的物質(zhì)聯(lián)合施用于身體時(shí)，很難預(yù)測(cè)在體內(nèi)產(chǎn)生的作用。本發(fā)明的目的是提供一種新型抗炎聯(lián)合組合物，其在聯(lián)合施用不同的有效物質(zhì)時(shí)具有協(xié)同性抗炎作用。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)該目的，本發(fā)明的發(fā)明人研究并發(fā)現(xiàn)當(dāng)來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物聯(lián)合使用時(shí)，這些提取物具有比分別使用時(shí)更好的抗炎和鎮(zhèn)痛效果，并且基于該發(fā)現(xiàn)，他們開發(fā)了用于預(yù)防、減輕、或治療炎癥或疼痛的組合物，所述組合物包括來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物作為有效成分。所述藥物組合物中包含的來(lái)自構(gòu)樹的提取物優(yōu)選是富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物，并且來(lái)自忍冬的提取物優(yōu)選是來(lái)自忍冬的乙醇提取物。有利效果根據(jù)本發(fā)明，包括來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物作為有效成分的組合物可以用作有效的抗炎劑、消炎劑、或鎮(zhèn)痛劑，因?yàn)楫?dāng)該提取物聯(lián)合使用時(shí)，獲得比它們分別使用時(shí)更好的抗炎和鎮(zhèn)痛效果。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物具有廣泛的治療范圍和協(xié)同性的強(qiáng)治療效果，這歸因于包含來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物。當(dāng)來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物聯(lián)合使用時(shí)，治療效果增加。因此，理想的效果可以通過使用比分別使用所述提取物時(shí)更小的量來(lái)獲得。而且，使用較小量可以導(dǎo)致較少的副作用或不良作用。圖1顯示來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物對(duì)通過5-L0X介導(dǎo)由A23187-處理的RBL-I細(xì)胞生成白三烯的影響。*和#分別表示與用A23187處理的對(duì)照組相比P<0.<0.01的顯著性。圖2顯示來(lái)自構(gòu)樹的富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物和/或來(lái)自忍冬的乙醇提取物對(duì)由LPS-處理的RAW264.7細(xì)胞生成PGE2的影響。LPS-處理的組生成120士8.OnMPGE2(各組的基礎(chǔ)水平分別為1.2士0.4nMPGE2and0.8士0.3μΜNO)。η=3。*和#分別表示與用LPS-處理的對(duì)照組相比P<0.05和P<0.01的顯著性。發(fā)明實(shí)施方式本發(fā)明涉及用于減輕或治療炎癥和/或疼痛的藥物組合物，所述組合物包含來(lái)自構(gòu)樹的提取物或所述提取物的餾分和來(lái)自忍冬的提取物作為有效成分，還涉及通過使用所述藥物組合物治療炎癥和疼痛的方法。本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即當(dāng)來(lái)自構(gòu)樹的富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物和來(lái)自忍冬的乙醇提取物聯(lián)合施用時(shí)，與當(dāng)所述提取物分別施用時(shí)相比，在體外和體內(nèi)試驗(yàn)中發(fā)生優(yōu)秀的協(xié)同性抗炎和鎮(zhèn)痛作用。本發(fā)明的發(fā)明人通過使用乙酸乙酯分餾來(lái)自構(gòu)樹根部樹皮的提取物制備富含疏水性異戊二烯化黃酮類化合物的餾分(EBP)并制備來(lái)自忍冬整株植物的乙醇提取物(ELJ)。EBP強(qiáng)烈抑制5-脂加氧酶(5-L0X)介導(dǎo)的由A23187-處理的大鼠嗜堿細(xì)胞性白血病(RBL-I)細(xì)胞生成白三烯。ELJ對(duì)此具有弱抑制活性。然而，當(dāng)EBP和ELJ聯(lián)合使用時(shí)，顯示出強(qiáng)協(xié)同性抑制活性(圖1)。EBP和ELJ還抑制環(huán)加氧酶_2_催化的PGE2的生成(圖幻。關(guān)于花生四烯酸誘導(dǎo)的小鼠耳水腫，5-200mg/kg的口服施用的EBP抑制耳水腫。包括重量比11的EBP和ELJ的混合物，即BL比分別施用的EBP和ELJ更強(qiáng)地抑制耳水腫(表1)。關(guān)于λ-角叉藻聚糖(Carrageenan)誘導(dǎo)的爪水腫，BL具有強(qiáng)協(xié)同性抗炎作用(表2)。在乙酸誘導(dǎo)的扭體試驗(yàn)中，BL當(dāng)以50-400mg/kg的量口服施用時(shí)，表現(xiàn)出強(qiáng)鎮(zhèn)痛活性(表3)。這樣的結(jié)果顯示被測(cè)試的物質(zhì)均具有體外和體內(nèi)的抗炎活性，并且還顯示當(dāng)EBP和ELJ聯(lián)合使用時(shí)，獲得比當(dāng)它們分別使用時(shí)更強(qiáng)的協(xié)同性抗炎作用?；谠搶?shí)驗(yàn)結(jié)果，本發(fā)明提供用于預(yù)防、減輕、或治療炎癥和/或疼痛的藥物組合物，其包含來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物作為有效成分。本發(fā)明還提供預(yù)防、減輕、或治療炎癥和/或疼痛的方法，其通過將來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物作為有效成分施用于受試者來(lái)實(shí)現(xiàn)。來(lái)自構(gòu)樹的提取物可以通過，例如，利用水熱流體醇水溶液、或疏水性溶劑進(jìn)行提取來(lái)制備。另外，含水醇提取物也可以利用疏水性溶劑提取。然而，提取方法不局限于此。來(lái)自忍冬的提取物可以通過，例如，利用水熱流體、醇水溶液、或疏水性溶劑進(jìn)行提取來(lái)制備。然而，提取方法不局限于此。為了用于根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物中，來(lái)自構(gòu)樹的富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物可以作為來(lái)自構(gòu)樹根部樹皮的提取物來(lái)使用，且來(lái)自忍冬的乙醇提取物可以作為來(lái)自忍冬的提取物來(lái)使用。來(lái)自構(gòu)樹的富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物可以通過，例如，使用乙醇提取構(gòu)樹，真空條件下干燥所述提取物，和利用乙酸乙酯分餾所述提取物來(lái)制備。然而，多種用于制備富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物的方法中的任一種也可以用于此。所用的乙醇的量可以在5-100%，且優(yōu)選50-100%的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物中作為有效成分使用的來(lái)自構(gòu)樹的富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物與來(lái)自忍冬的乙醇提取物的重量比可以在10.1-110的范圍內(nèi)，優(yōu)選10.5-14，更優(yōu)選11。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以作為適合于根據(jù)制藥領(lǐng)域中普遍使用的方法口服施用并以施用單位制備的制劑或作為注射制劑來(lái)施用。適合于口服施用的制劑實(shí)例是硬膠囊和軟膠囊、片劑、混懸劑、糖漿劑、散劑、持續(xù)釋放制劑、腸溶衣制劑、顆粒劑、油糖劑、微粒劑、丸劑、提取物、液體制劑、芳香水制劑、乳劑、酏劑、流浸膏劑、沉淀制劑、酊劑、醑劑等。所述口服施用的制劑，除兩種以上藥物有效成分以外，可以包括，一種或多種無(wú)藥物活性的常用載體。無(wú)藥物活性載體的實(shí)例是填充劑，諸如淀粉、乳糖、羧甲基纖維素、或高嶺土；粘合劑，諸如水、明膠、醇、葡萄糖、阿拉伯膠(GummiArabicum)、或黃蓍膠；崩解劑，諸如淀粉、糊精、藻酸鈉；和潤(rùn)滑劑，諸如滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、或液體石蠟。另外，還可以使用用于促進(jìn)溶解的溶解助劑。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以通過，例如，口服施藥、鼻內(nèi)施藥、靜脈內(nèi)施藥、腹膜內(nèi)施藥、皮下施藥、或局部施藥，根據(jù)適合于藥物施用類型和治療有效劑量的方法來(lái)施用。所述藥物組合物還可以通過利用其他已知的方法，例如雷明頓藥物科學(xué)(Remington'sPharmaceuticalScience)中公開的方法來(lái)施用。例如，注射劑可以通過利用生理學(xué)適合的緩沖溶液，例如Hank溶液，Ringer溶液，或鹽水緩沖溶液來(lái)制備。所述溶液可以包括混懸液、穩(wěn)定劑、和/或分散劑。備選地，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物還可以以粉末形式制備，并且在施用前，可以與合適的載體，諸如無(wú)菌水一起使用。備選地，所述藥物組合物可以以脂質(zhì)體制劑、混懸液、或持續(xù)釋放制劑來(lái)制備。所述藥物組合物可以單獨(dú)使用或與手術(shù)、激素治療、藥物治療、和生物反應(yīng)控制劑聯(lián)合使用。本發(fā)明的藥物組合物可以用于治療多種需要抗炎和鎮(zhèn)痛作用的疾病，諸如急性或慢性支氣管炎(AcuteorchronicBronchitis)、哮喘(Asthma)、C0PD、特應(yīng)性皮炎、銀屑病、變應(yīng)性鼻炎(Allergicrhinitis)、胃炎(Gastritis)、消化性潰瘍(P印ticulcers)、腸易激綜合征(Irritablebowelsyndrome)、胃食管返流疾病(gastroesophagealrefluxdisease)、月干炎(Hepatitis)、血管炎性疾病(Vascularinflammatorydiseases)、骨關(guān)節(jié)炎(osteo-arthritis)、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumaticarthritis)、退行性關(guān)節(jié)炎(degeneraticarthritis)禾口多發(fā)性關(guān)節(jié)炎(polyarthritis)、腰痛(lumbago)、拔31jpSt^(achingpainsafterdentalextraction)>^^(headaches)>7^jp^(postoperativepains)禾口炎癥、牙痛(toothache)、或痛經(jīng)(menalgia)，并且所述藥物組合物還可以用于治療其他種類的疾病。本發(fā)明的藥物組合物可以用于治療多種炎性呼吸系統(tǒng)疾病、炎性自身免疫疾病、炎性皮膚疾病、炎性胃腸疾病、和炎性心血管疾病、炎性骨骼肌疾病，等。所述藥物組合物的施用劑量和施用時(shí)間根據(jù)受試者的年齡、性別、狀態(tài)、重量、施用途徑、所用藥物類型而不同。每日施用劑量可以在約0.0lug/kg10g/kg的范圍內(nèi)，并可以在0.01mg/kg100mg/kg的范圍內(nèi)。本文中使用的全部技術(shù)術(shù)語(yǔ)，除非另外定義，可以被理解為具有與相關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
中一般技術(shù)人員已知的相同含義。另外，盡管在本說明書中引入了理想的方法和樣品，但是與其類似或等同的方法和樣品也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本說明書中提到的所有參考文獻(xiàn)可以通過引用結(jié)合在本文中。本發(fā)明將參考以下實(shí)施例進(jìn)行詳述。然而，本發(fā)明不局限于這些實(shí)施例。實(shí)施例試劑和動(dòng)物A23187和N-[2-環(huán)己基氧_4_硝基苯基]甲磺酰胺(NS-398)獲自Biomol(PlymouthMeeting,PA)；2-氨基-5，6-二氫-6-甲基-4H-1，3-噻嗪鹽酸鹽(AMT)獲自TocrisCooksonLtd.(UK)；花生四烯酸(AA，99%)，溴化3-G，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑(MTT)，去甲二氫愈創(chuàng)木酸(NDGA)，潑尼松龍(prednisolone)，吲哚美辛(indomethacin)，阿司匹林(aspirin)，和脂多糖(LPS,大腸桿菌(Escherichiacoli)0127:B8)獲自西格瑪化學(xué)(SigmaChem.)(St.Louis,MO)；且培養(yǎng)試劑諸如DMEM和FBS獲自GibcoBRL(GrandIsland，NY)，且量化蛋白質(zhì)試劑盒獲自Bio-Rad實(shí)驗(yàn)室(Hercules,CA)。雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠和ICR小鼠G周齡，無(wú)特殊病原體)獲自O(shè)rient-bio(韓國(guó))。實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室食物(PurinaKorea)和水自由喂養(yǎng)，并且在測(cè)試前至少7天時(shí)，在溫度2022°C，相對(duì)濕度4060%，12小時(shí)/12小時(shí)(明/暗)的光照周期條件下的動(dòng)物飼養(yǎng)室中調(diào)節(jié)動(dòng)物。使用的動(dòng)物測(cè)試設(shè)計(jì)得到KNU動(dòng)物實(shí)驗(yàn)委員會(huì)(KIACUC-09-0012)的批準(zhǔn)，并且該實(shí)驗(yàn)根據(jù)在韓國(guó)食品藥品管理局(KoreaFood&DrugAdministration)關(guān)于保護(hù)和使用實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的準(zhǔn)則中考慮的道德規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)值表示為算術(shù)平均值士SD。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過進(jìn)行ANOVA檢驗(yàn)來(lái)確定。實(shí)施例1由構(gòu)樹和忍冬制備提取物構(gòu)樹由韓國(guó)的南部地區(qū)(靠近安東(Andong))收集。干燥構(gòu)樹的根部樹皮，并且細(xì)切干燥的根部樹皮并使其進(jìn)行利用100%乙醇的提取過程。乙醇提取物在真空條件下干燥并將最終提取物分散在水中并用乙酸乙酯分餾，然后干燥乙酸乙酯餾分。干燥的乙酸乙酯餾分(EBP)用于實(shí)驗(yàn)。根據(jù)Son等Q001)中所述的方法，由EBP中分離PapyriflavonolA和構(gòu)查耳酮A。忍冬獲自東方醫(yī)藥市場(chǎng)(orientalmedicinemarket)。細(xì)切干燥的忍冬并然后使其進(jìn)行利用70%乙醇的提取過程。乙醇提取物在真空條件下干燥并將干燥的乙醇提取物(ELJ)用于實(shí)驗(yàn)。根據(jù)Kawai等，1988中公開的方法，由該乙醇提取物中分離馬錢子苷(Loganin)禾口猜芽菜苷(Sweroside)。EBP中異戊二烯化黃酮類化合物(papyriflavonolA和構(gòu)查耳酮A)的量和ELJ中環(huán)烯醚萜(馬錢子苷和獐芽菜苷)的量通過HPLC分析來(lái)驗(yàn)證。BL是包含比例為11(w/w)的EBP和ELJ的混合物。實(shí)施例2大鼠嗜堿性白血病-1(RBL-I)細(xì)胞培養(yǎng)和白三烯(LT)測(cè)量獲自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)(ATCC,Rocksville)的RBL-I細(xì)胞在加有10%FBS、2mM谷氨酰胺、和抗生素的RPMI1640中，在5%CO2和溫度37°C條件下溫育。將細(xì)胞置于96孔板中2小時(shí)，并預(yù)先用測(cè)試物質(zhì)溫育10分鐘。測(cè)試物質(zhì)溶解在DMSO中，并用合適濃度的無(wú)血清DMEM來(lái)稀釋。將DMSO的終濃度調(diào)節(jié)為0.1%(ν/ν)0細(xì)胞活力根據(jù)Mossman(1983)中公開的方法，通過MTT測(cè)定來(lái)驗(yàn)證。為了激活5-L0X，將A-23187(離子載體，3μΜ)加至所述細(xì)胞，并根據(jù)Tries等O002)中公開的稍微改良的方法溫育細(xì)胞15分鐘。收集所用的培養(yǎng)基，并利用ELISA試劑盒(CaymanChem.)，根據(jù)制造商建議的方法，測(cè)量由5-L0X生成的半胱氨酰白三烯(LTC4/D4/E4)的濃度。已知當(dāng)RBL-I細(xì)胞通過A23187(鈣離子載體)激活時(shí)，通過5-L0X生成大量半胱氨酰-LTs。在本實(shí)驗(yàn)中，關(guān)于15分鐘，由RBL-I細(xì)胞生成的LTC4/D4/&的量是1，109.5士93.6pg/ml，關(guān)于15分鐘的基礎(chǔ)水平為4.2士1.2pg/ml(η=3)。在上述條件下，當(dāng)來(lái)自構(gòu)樹的富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物餾分(EBP)以lyg/ml、2yg/ml、5yg/ml、10yg/ml、和100μg/ml的量使用時(shí)，相應(yīng)的抑制活性分別為5%、M%、96%、99%和99%。換言之，EBP劑量依賴性地抑制5-L0X-介導(dǎo)的LTC4/D4/h的生成(圖1)。作為線性回歸分析的結(jié)果，IC50值是3.1μg/ml。同時(shí)，當(dāng)ELJ以10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、和250μg/ml的量使用時(shí)，相應(yīng)的抑制活性分別為1^^6%.18^^74%和99%。換言之，ELJ具有相對(duì)弱的抑制活性，并且微弱地抑制5-L0X-介導(dǎo)的LTC4/D4/E4生成(IC50=78.7μg/ml)。包含EBP和ELJ的混合物比單獨(dú)的EBP或ELJ更強(qiáng)地抑制5-L0X的活性。基于EBP的重量，IC50小于1μg/ml。當(dāng)該混合物的抑制活性與EBP和ELJ的抑制活性的總和相比時(shí)，證實(shí)該混合物針對(duì)5-L0X活性的抑制作用比當(dāng)分別使用EBP和ELJ時(shí)更強(qiáng)得多，并且因此存在由使用該混合物引起的協(xié)同作用。例如，當(dāng)lyg/mlEBP和4g/mlELJ分別使用時(shí)，在各情形中，不發(fā)生針對(duì)生成白三烯(LT)的抑制活性。然而，當(dāng)EBP和ELJ聯(lián)合使用時(shí)(以重量比14)，抑制活性預(yù)測(cè)不到地協(xié)同增加至61%。當(dāng)2yg/mlEBP和3μg/mlELJ分別使用時(shí)，針對(duì)生成白三烯(LT)的抑制活性分別為和0%。然而，當(dāng)EBP和ELJ聯(lián)合使用時(shí)(以重量比11.5)，抑制活性預(yù)測(cè)不到地協(xié)同增加至92%。當(dāng)2.5μg/mlEBP和2.5μg/mlELJ聯(lián)合使用時(shí)(以重量比11)，幾乎完全抑制5-L0X-介導(dǎo)的LT生成并且抑制活性預(yù)測(cè)不到地協(xié)同增加至96%。該實(shí)驗(yàn)中使用的ELJ的量對(duì)應(yīng)于這樣的水平，在該水平下，當(dāng)單獨(dú)EJL使用時(shí)，白三烯生成抑制活性不出現(xiàn)。然而，當(dāng)ELJ與EBP—起使用時(shí)，EBP的5-L0X抑制活性通過添加ELJ而大幅提高，并且包含EBP和ELJ的混合物表現(xiàn)出非常高的抑制作用。此外，另外的實(shí)驗(yàn)通過利用包含重量比為11的EBP和ELJ的混合物(BL)來(lái)進(jìn)行。去甲二氫愈創(chuàng)木酸(NDGA)用作比較化合物，并且也具有強(qiáng)5-L0X抑制活性(在1口厘時(shí)，99%抑制活性)。實(shí)施例3對(duì)RAW264.7細(xì)胞中生成PGE2的影響進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)，以確定來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物對(duì)生成PGE2的影響，PGE2是炎性反應(yīng)的介質(zhì)。獲自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)(ATCC,Rocksvilie)的RAW264.7細(xì)胞在增補(bǔ)有10%FBS和1%抗生素(100U/ml青霉素(penicillin)和100μg/ml鏈霉素(streptomycin))的DMEM中，在5%CO2和溫度37°C條件下溫育。根據(jù)Chi等O001)中公開的方法，用脂多糖(LPQ激活所述細(xì)胞。將細(xì)胞加載于96孔板OxlO5個(gè)細(xì)胞/孔)并預(yù)溫育2小時(shí)，然后將測(cè)試物質(zhì)和LPS(1μg/ml)加入其中，并且將由此生成培養(yǎng)基溫育M小時(shí)，除非另外規(guī)定。培養(yǎng)基中PGE2的濃度通過利用PGE2的ELISA試劑盒(CaymanChem.Co.)，根據(jù)制造商建議的方法來(lái)測(cè)量。在50ug/ml濃度下EBP和BL統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地抑制由RAW264.7細(xì)胞生成C0X-2-催化的PGE2，所述7細(xì)胞是LPS-處理的小鼠小噬細(xì)胞系(圖2)。EBP和BL關(guān)于生成PGE2的IC50值分別為21.4μg/ml和29.0μg/ml。實(shí)施例4對(duì)花生四烯酸(AA)-誘導(dǎo)的小鼠水腫的影響AA-誘導(dǎo)的小鼠耳水腫測(cè)定用于確定抗炎動(dòng)物模型中的體內(nèi)抗炎活性。根據(jù)Kim等(1993)中公開的方法，將2%AA丙酮溶液涂于小鼠耳上(20μ1/耳)，并且在1小時(shí)后，利用刻度盤式測(cè)厚儀(Mitutoyo，日本)測(cè)量耳厚度。AA處理前1小時(shí)，將溶解在包含混合比為11的DMSO和水的混合物中的測(cè)試物質(zhì)口服施用于小鼠(0.Iml/小鼠)。各組由5只小鼠組成，并且測(cè)量值通過算術(shù)平均值士S.D(表1的a)表示。表1的b表示與用AA處理的對(duì)照組相比的抑制活性％。*表示與AA處理的對(duì)照組相比P<0.05的顯著性差異。表1權(quán)利要求1.一種用于預(yù)防、減輕、或治療炎癥和/或疼痛的藥物組合物，所述藥物組合物包含作為有效成分的第一物質(zhì)，其選自由來(lái)自構(gòu)樹的提取物、來(lái)自構(gòu)樹的提取物的餾分及其藥用鹽組成的組；作為有效成分的第二物質(zhì)，其選自由來(lái)自忍冬的提取物及其藥用鹽組成的組；和藥用載體。2.一種用于預(yù)防或治療選自由以下組成的組中的疾病的藥物組合物炎性呼吸系統(tǒng)疾病、炎性自身免疫疾病、炎性皮膚疾病、炎性胃腸疾病、炎性心血管疾病和炎性骨骼肌疾病，所述藥物組合物包含第一物質(zhì)，其選自由來(lái)自構(gòu)樹的提取物、來(lái)自構(gòu)樹的提取物的餾分及其藥用鹽組成的組；第二物質(zhì)，其選自由來(lái)自忍冬的提取物及其藥用鹽組成的組；和藥用載體。3.一種用于預(yù)防或治療選自由以下組成的組中的疾病的藥物組合物急性或慢性支氣管炎、哮喘、C0PD、特應(yīng)性皮炎、銀屑病、變應(yīng)性鼻炎、胃炎、消化性潰瘍、腸易激綜合征、胃食管回流病、肝炎、血管炎性疾病、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、腰痛、拔牙后酸痛、頭痛、術(shù)后疼痛和炎癥、牙痛、和痛經(jīng)，所述藥物組合物包含第一物質(zhì)，其選自由來(lái)自構(gòu)樹的提取物、來(lái)自構(gòu)樹的提取物的餾分及其藥用鹽組成的組；第二物質(zhì)，其選自由來(lái)自忍冬的提取物及其藥用鹽組成的組；和藥用載體。4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述來(lái)自構(gòu)樹的提取物的餾分是通過使用含水醇提取構(gòu)樹和使用疏水性溶劑分餾該醇提取物制備的餾分或富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物，且所述來(lái)自忍冬的提取物是乙醇提取物。5.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中來(lái)自構(gòu)樹的提取物或來(lái)自構(gòu)樹的提取物的餾分與來(lái)自忍冬的提取物的重量比是10.110。6.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中來(lái)自構(gòu)樹的提取物或來(lái)自構(gòu)樹的提取物的餾分與來(lái)自忍冬的提取物的重量比是11。7.利用權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的藥物組合物制備的藥物制劑，其中所述藥物制劑選自由用于口服施用的制劑、適用于粘膜的制劑、注射制劑、吸入制劑、和外用制劑組成的組。8.權(quán)利要求7的藥物制劑，其中所述用于口服施用的制劑選自由硬膠囊和軟膠囊、片劑、混懸劑、糖漿劑、散劑、持續(xù)釋放制劑、腸溶衣制劑、顆粒劑、油糖劑、微粒劑、丸劑、提取物、液體制劑、芳香水制劑、乳劑、酏劑、流浸膏劑、沉淀制劑、酊劑、醑劑組成的組。全文摘要本發(fā)明涉及用于減輕或治療炎癥和/或疼痛的藥物組合物，所述藥物組合物包括來(lái)自構(gòu)樹和忍冬的提取物作為有效成分。本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即當(dāng)來(lái)自構(gòu)樹的富含異戊二烯化黃酮類化合物的提取物和來(lái)自忍冬的乙醇提取物聯(lián)合施用時(shí)，與所述提取物分別施用時(shí)相比，在體外和體內(nèi)測(cè)試中獲得優(yōu)秀的協(xié)同性抗炎和鎮(zhèn)痛作用。文檔編號(hào)A61K36/60GK102292095SQ201080002411公開日2011年12月21日申請(qǐng)日期2010年12月7日優(yōu)先權(quán)日2009年12月7日發(fā)明者孫建鎬,方誠(chéng)惠,郭義宗,金光淳,金完培,金顯杓,金淳培申請(qǐng)人:Pharmaking株式會(huì)社,江原大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)