專利名稱：一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法
一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物載體的制備領(lǐng)域，更具體地講，涉及多烯紫杉醇納米脂質(zhì)體的一種控制合成方法。
背景技術(shù)：
多烯紫杉醇是紫杉烷類化合物，具有較好的生物利用度，抗癌活性優(yōu)于紫杉醇，具有一定的毒副作用，以血液學(xué)毒性為主，表現(xiàn)為白細(xì)胞下降和貧血。因此人們?cè)O(shè)法降低藥物對(duì)人體的毒副作用和提高藥物的生物利用度。脂質(zhì)體是類脂雙分子層形成的超微型球體， 類似生物膜結(jié)構(gòu)，它能將藥物包裹于囊內(nèi)而成為一種新型藥物載體。其基本組分一磷脂是生物體內(nèi)固有的成分，可以在生物體內(nèi)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化而降解，具有無(wú)毒性及免疫原性。多烯紫杉醇脂質(zhì)體能減少藥物毒性，并增加其在生物體內(nèi)的藥物作用時(shí)間和提高生物利用度。目前，文獻(xiàn)中介紹的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法主要有兩類，分別為薄膜分散法和逆向蒸發(fā)法制備法。薄膜分散法為傳統(tǒng)脂質(zhì)體的制備方法(見(jiàn)參考文獻(xiàn)劉韜，黃紅兵等.多西紫杉醇脂質(zhì)體的制備及穩(wěn)定性考察.China Pharmacy, 2007, 25 (18) :1958)，是將藥物、磷脂和膽固醇等溶于有機(jī)溶劑后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜，用緩沖溶液水化后，可進(jìn)行超聲，擠出或高壓均質(zhì)制得脂質(zhì)體注射劑，目前運(yùn)用較為廣泛。逆向蒸發(fā)-超聲法(見(jiàn)參考文獻(xiàn)多烯紫杉醇脂質(zhì)體新劑型及其制備方法專利號(hào)200710007668)，是將藥物和磷脂等溶于有機(jī)溶劑，同時(shí)加入緩沖溶液，超聲乳化，再減壓蒸發(fā)至凝膠形成，繼續(xù)減壓蒸發(fā)形成水性混懸液。兩種方法都存在產(chǎn)物中有機(jī)溶劑殘留導(dǎo)致脂質(zhì)體安全性下降，顆粒單分散性差不利于體系穩(wěn)定，藥物的包封率偏低等不足之處。傳統(tǒng)制備法獲得的脂質(zhì)體，在制備過(guò)程中必須要使用氯仿，乙醚、甲醇等有機(jī)溶劑，這對(duì)環(huán)境和人體都是有害的。因此，近年國(guó)際上已開(kāi)始研究安全可靠、方便快速、可控制調(diào)節(jié)的微粒制備新技術(shù)。近些年來(lái)，隨著人們對(duì)超臨界流體性質(zhì)的認(rèn)識(shí)不斷深入，超臨界流體在材料領(lǐng)域中的應(yīng)用得到廣泛重視，超臨界流體技術(shù)已經(jīng)滲入生命科學(xué)與技術(shù)的諸多領(lǐng)域。超臨界二氧化碳流體是一種環(huán)境友好型溶劑，在制備結(jié)束后易于與產(chǎn)物分離且不造成環(huán)境污染，并具備優(yōu)良溶劑的特性。超臨界二氧化碳流體不僅有液體的高密度、強(qiáng)溶解性和高傳熱系數(shù)的性質(zhì)，而且有近似于氣體的粘度和擴(kuò)散系數(shù)。在臨界點(diǎn)附近，流體的物性隨溫度和壓力的變化十分敏感。這些特殊性質(zhì)使超臨界二氧化碳流體技術(shù)在萃取分離、化學(xué)反應(yīng)工程、生物工程、石油化工、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。通常，超臨界流體制備脂質(zhì)體分為兩類。一類(見(jiàn)參考文獻(xiàn)=Sachin Naik, Deepa Patel. Preparation of PEGylated liposomes of docetaxel using supercritical fluid technology. J. of Supercritical Fluids. 2010，54 :110-119)是用有機(jī)溶劑溶解藥物、磷脂、膽固醇等物質(zhì)，得到的混合溶液放入高壓釜中，通入二氧化碳?xì)怏w，當(dāng)體系到達(dá)穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，將上述含有藥物和磷脂等物質(zhì)的溶液通過(guò)一定速度的二氧化碳?xì)饬鲊娚涑鋈?。首先形成的是前體脂質(zhì)體，再溶解在緩沖溶液中，最終形成脂質(zhì)體溶液；還有一類(見(jiàn)參考文獻(xiàn)謝芳.超臨界技術(shù)制備低水溶性藥物脂質(zhì)體實(shí)驗(yàn)研究)是首先將藥物、磷脂及乙醇或有機(jī)溶劑形成W/0型膠束體系，將上述混合均勻的乳液通入(X)2達(dá)到超臨界狀態(tài)后，大量的CO2 進(jìn)入到溶液內(nèi)部形成了反膠束溶液。在反膠束中，磷脂作為一種表面活性劑，它的非極性基團(tuán)在外與非極性的有機(jī)溶劑接觸，而極性基團(tuán)則排列在內(nèi)形成一個(gè)極性核(polar core) 0 此極性核具有溶解極性物質(zhì)的能力，極性核溶解水后，就形成了“水池”(water pool)，體系經(jīng)平衡釋放壓力后得乳白色膠體溶液。此類技術(shù)是通過(guò)“反膠束”原理，自發(fā)地形成納米尺度的聚集體，是一種常用于制備親水性藥物，但并不適用于類似多烯紫杉醇等脂溶性藥物脂質(zhì)體的方法?，F(xiàn)有多烯紫杉醇脂質(zhì)體的制備方法，存在著顆粒粒徑大且分布較寬、單分散性和穩(wěn)定性差、粒徑大小不可控、藥物是通過(guò)緩釋釋放、包封率偏低、殘留有機(jī)溶劑，與雜質(zhì)等難以分離等問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種能控制合成出粒徑小、分散均勻、包封率高，可溫控釋放藥物的多烯紫杉醇納米脂質(zhì)體，且通過(guò)改變制備壓力控制合成具有不同粒徑和包封率的多稀紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法。為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法，低壓成膜-高壓孵化自組裝形成囊泡，包括如下步驟(1)低壓成膜取蛋黃卵磷脂及多烯紫杉醇置于圓底燒瓶中，用氯仿-甲醇混合液振蕩，使其完全溶解，在40°c恒溫和氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中成膜，然后在真空干燥箱內(nèi)抽真空，使有機(jī)溶劑揮發(fā)完全；(2)高壓孵化取二次重蒸水，置于上述圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落，制得多烯紫杉醇混懸液；將上述混懸液和攪拌磁子一起放入置于恒溫水浴中的高壓反應(yīng)釜中，通入二氧化碳?xì)怏w，待上述體系到達(dá)設(shè)定的溫度和壓力后，二氧化碳呈現(xiàn)超臨界流體狀態(tài)，關(guān)閉進(jìn)氣閥，在水浴中攪拌孵化一小時(shí)，所述設(shè)定的溫度和壓力依所制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的包封率和粒徑而定；孵化結(jié)束后，將恒溫水浴溫度降至室溫，并打開(kāi)放氣閥，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w， 將體系壓力降至常壓，即得多烯紫杉醇脂質(zhì)體溶液。步驟(1)中所述氯仿-甲醇混合液的體積比為氯仿甲醇=2 1。步驟O)中所述設(shè)定的溫度為50°C。步驟O)中所述設(shè)定的壓力為10MPa—30MPa中的任一值。步驟O)中所述設(shè)定的壓力優(yōu)選為14. 5MPaU9MPa或者24MPa。本發(fā)明應(yīng)用了超臨界二氧化碳流體的方法合成多烯紫杉醇脂質(zhì)體，該方法的有益效果主要是1、采用超臨界流體二氧化碳作為合成介質(zhì)制備多烯紫杉醇脂質(zhì)體，避免了脂質(zhì)體中有機(jī)溶劑的殘留，提高藥物的包封率。同時(shí)，超臨界二氧化碳流體環(huán)境可以塑化磷脂分子的結(jié)構(gòu)，這種塑化作用有利于磷脂分子形成熱力學(xué)更穩(wěn)定的構(gòu)象，使雙分子層的排列更加均勻，從而提高了脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。
2、該方法使卵磷脂和多稀紫杉醇混合成膜，以保證多稀紫杉醇被完全包封于脂質(zhì)體的雙分子層中，然后采用超臨界CO2流體作為孵化介質(zhì)，在一定溫度和孵化時(shí)間的條件下，通過(guò)自組裝形成結(jié)構(gòu)完好、單分散性好的脂質(zhì)體?？朔藗鹘y(tǒng)的薄膜分散法制備的脂質(zhì)體顆粒不均勻、分散性不好、穩(wěn)定性差、包封率低、有機(jī)溶劑殘留的缺點(diǎn)；也克服了逆向蒸發(fā)-超聲制備法中由于沒(méi)有成膜過(guò)程和孵化過(guò)程而帶來(lái)如下不足1)需要通過(guò)超聲乳化使脂質(zhì)體的粒徑分散，該過(guò)程使獲得的小的粒徑具有界面不穩(wěn)定問(wèn)題，導(dǎo)致脂質(zhì)體容易團(tuán)聚和穩(wěn)定性差；2)由于形成的不是具有雙分子層的脂質(zhì)體，在脂質(zhì)體中的多烯紫杉醇的釋放不能通過(guò)溫控釋藥，導(dǎo)致藥物釋放缺少集中性和針對(duì)性。3、通過(guò)改變超臨界CO2的孵化壓力，可以控制合成不同粒徑的多稀紫杉醇脂質(zhì)體， 即可以根據(jù)合成壓力的不同控制合成不同粒徑的脂質(zhì)體?？朔吮∧ふ舭l(fā)法和逆向蒸發(fā)-超聲制備法制備的粒徑大、單分散性差、粒徑不可控制等不足。

圖1為超臨界(X)2孵化壓力為14. 5MPa條件下制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的粒徑及其粒徑分布圖(動(dòng)態(tài)光散射法)；圖2超臨界(X)2孵化壓力為14. 5MPa條件下制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的形貌圖 (透射電子顯微鏡)；圖3為超臨界CO2孵化壓力為19MPa條件下制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的粒徑及其粒徑分布圖(動(dòng)態(tài)光散射法)；圖4超臨界(X)2孵化壓力為19MPa條件下制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的形貌圖(透射電子顯微鏡)；圖5為超臨界(X)2孵化壓力為24MPa條件下制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的粒徑及其粒徑分布圖(動(dòng)態(tài)光散射法)；圖6超臨界(X)2孵化壓力為24MPa條件下制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的形貌圖(透射電子顯微鏡)；圖7為多烯紫杉醇脂質(zhì)體溫控釋放藥物曲線圖；圖8為差示掃描量熱法檢測(cè)多烯紫杉醇脂質(zhì)體的相變-釋放藥物的熱流曲線圖。
具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
做詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1分析天平稱取20mg蛋黃卵磷脂置于圓底燒瓶中，預(yù)先用體積比2 1的氯仿與甲醇混合液作為溶劑，配制0. 25mg/mL的多烯紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，移液管量移取4mL多烯紫杉醇溶液于上述圓底燒瓶中，蛋黃卵磷脂完全溶解后將該圓底燒瓶連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在40°C水浴中，低壓(緩慢抽真空至-0. 25MI^壓力)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)60分鐘形成半透明薄膜，之后將圓底燒瓶放入真空干燥器中抽真空，使有機(jī)溶劑揮發(fā)完全。加入5mL 二次重蒸水于上述圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落，形成混懸液，將上述混懸液及磁子置于高壓反應(yīng)釜中，并將高壓釜放入溫度為50°C的水浴中穩(wěn)定一段時(shí)間。通入二氧化碳?xì)怏w，當(dāng)高壓釜達(dá)到設(shè)定的壓力時(shí)，關(guān)閉進(jìn)氣閥，讓高壓釜穩(wěn)定在50°C、14. 5MPa條件下，攪拌孵化一個(gè)小時(shí)，從而形成結(jié)構(gòu)完整、單分散性好的脂質(zhì)體。孵化結(jié)束后，將恒溫水浴溫度降至室溫，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，即得多烯紫杉醇脂質(zhì)體溶液。取一定量多烯紫杉醇脂質(zhì)體溶液于透析袋中，置于25mL體積分?jǐn)?shù)為5%的丙酮溶液中，在4°C下透析6小時(shí)，收集透析外液，避光保存，并加入同樣體積的新鮮丙酮溶液4°C 透析，共透析4次，最終定容于IOOmL容量瓶中。采用高效液相色譜(HPLC)，(流動(dòng)相分別為水甲醇乙腈，比例為30 30 40，在流速lmL/min，柱溫為30°C條件下)檢測(cè)透析外液多烯紫杉醇濃度，并通過(guò)公式計(jì)算出脂質(zhì)體的藥物包封率。公式如下包封率=(1-游離藥物質(zhì)量/藥物總質(zhì)量)X 100% )如圖1、圖2所示，為超臨界CO2孵化壓力為14. 條件下制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的粒徑及其粒徑分布和形貌圖。實(shí)施例2分析天平稱取20mg蛋黃卵磷脂置于圓底燒瓶中，預(yù)先用體積比2 1的氯仿與甲醇混合液作為溶劑，配制0. 25mg/mL的多烯紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，移液管量移取4mL多烯紫杉醇溶液于上述圓底燒瓶中，蛋黃卵磷脂完全溶解后將該圓底燒瓶連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在40°C水浴中，低壓(緩慢抽真空至-0. 25MI^壓力)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)60分鐘形成半透明薄膜，之后將圓底燒瓶放入真空干燥器中抽真空，使有機(jī)溶劑揮發(fā)完全。加入5mL 二次重蒸水于上述圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落，形成混懸液，將上述混懸液及磁子置于高壓反應(yīng)釜中，并將高壓釜放入溫度為50°C的水浴中穩(wěn)定一段時(shí)間。通入二氧化碳?xì)怏w，當(dāng)高壓釜達(dá)到設(shè)定的壓力時(shí)，關(guān)閉進(jìn)氣閥，讓高壓釜穩(wěn)定在50°C、19MPa 條件下，攪拌孵化一個(gè)小時(shí)，從而形成結(jié)構(gòu)完整、單分散性好的脂質(zhì)體。孵化結(jié)束后，將恒溫水浴溫度降至室溫，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，即得多烯紫杉醇脂質(zhì)體溶液。取一定量多烯紫杉醇脂質(zhì)體溶液于透析袋中，置于25mL 體積分?jǐn)?shù)為5%的丙酮溶液中，在4°C下透析6小時(shí)，收集透析外液，避光保存，并加入同樣體積的新鮮丙酮溶液4°C透析，共透析4次，最終定容于IOOmL容量瓶中。采用高效液相色譜(HPLC)，(流動(dòng)相分別為水甲醇乙腈，比例為30 30 40，在流速lmL/min，柱溫為 30°C條件下)檢測(cè)透析外液多烯紫杉醇濃度，并通過(guò)公式計(jì)算出脂質(zhì)體的藥物包封率。公式如下包封率=(1-游離藥物質(zhì)量/藥物總質(zhì)量)X 100%如圖3、圖4所示，超臨界(X)2孵化壓力為19MPa條件下制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體粒徑及其粒徑分布和形貌圖。實(shí)施例3分析天平稱取20mg蛋黃卵磷脂置于圓底燒瓶中，預(yù)先用體積比2 1的氯仿與甲醇混合液作為溶劑，配制0. 25mg/mL的多烯紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，移液管量移取4mL多烯紫杉醇溶液于上述圓底燒瓶中，蛋黃卵磷脂完全溶解后將該圓底燒瓶連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在40°C水浴中，低壓(緩慢抽真空至-0. 25MI^壓力)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)60分鐘形成半透明薄膜，之后將圓底燒瓶放入真空干燥器中抽真空，使有機(jī)溶劑揮發(fā)完全。加入5mL 二次重蒸水于上述圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落，形成混懸液，將上述混懸液及磁子置于高壓反應(yīng)釜中，并將高壓釜放入溫度為50°C的水浴中穩(wěn)定一段時(shí)間。通入二氧化碳?xì)怏w，當(dāng)高壓釜達(dá)到設(shè)定的壓力時(shí)，關(guān)閉進(jìn)氣閥，讓高壓釜穩(wěn)定在50°C、24MPa條件下，攪拌孵化一個(gè)小時(shí)，從而形成結(jié)構(gòu)完整、單分散性好的脂質(zhì)體。孵化結(jié)束后，將恒溫水浴溫度降至室溫，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w將體系壓力降至常壓，即得多烯紫杉醇脂質(zhì)體溶液。取一定量多烯紫杉醇脂質(zhì)體溶液于透析袋中，置于25mL 體積分?jǐn)?shù)為5%的丙酮溶液中，在4°C下透析6小時(shí)，收集透析外液，避光保存，并加入同樣體積的新鮮丙酮溶液4°C透析，共透析4次，最終定容于IOOmL容量瓶中。采用高效液相色譜(HPLC)，(流動(dòng)相分別為水甲醇乙腈，比例為30 30 40，在流速lmL/min，柱溫為 30°C條件下)檢測(cè)透析外液多烯紫杉醇濃度，并通過(guò)公式計(jì)算出脂質(zhì)體的藥物包封率。公式如下包封率=(1-游離藥物質(zhì)量/藥物總質(zhì)量)X 100% )如圖5、圖6所示，超臨界(X)2孵化壓力為24MPa條件下制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體粒徑及其粒徑分布和形貌圖。超臨界二氧化碳法控制合成多烯紫杉醇脂質(zhì)體的壓力-粒徑-包封率關(guān)系表如下
權(quán)利要求
1.一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法，其特征在于，低壓成膜-高壓孵化自組裝形成囊泡，包括如下步驟(1)低壓成膜取蛋黃卵磷脂及多烯紫杉醇置于圓底燒瓶中，用氯仿-甲醇混合液振蕩，使其完全溶解，在40°c恒溫和氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中成膜，然后在真空干燥箱內(nèi)抽真空，使有機(jī)溶劑揮發(fā)完全；(2)高壓孵化取二次重蒸水，置于上述圓底燒瓶中，磁力攪拌使膜脫落，制得多烯紫杉醇混懸液；將上述混懸液和攪拌磁子一起放入置于恒溫水浴中的高壓反應(yīng)釜中，通入二氧化碳?xì)怏w，待上述體系到達(dá)設(shè)定的溫度和壓力后，二氧化碳呈現(xiàn)超臨界流體狀態(tài)，關(guān)閉進(jìn)氣閥，在水浴中攪拌孵化一小時(shí)，所述設(shè)定的溫度和壓力依所制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的包封率和粒徑而定；孵化結(jié)束后，將恒溫水浴溫度降至室溫，并打開(kāi)放氣閥，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w，將體系壓力降至常壓，即得多烯紫杉醇脂質(zhì)體溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法，其特征在于， 步驟(1)中所述氯仿-甲醇混合液的體積比為氯仿甲醇=2 1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法，其特征在于， 步驟O)中所述設(shè)定的溫度為50°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法，其特征在于， 步驟O)中所述設(shè)定的壓力為10MPa—30MPa。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法，其特征在于， 步驟O)中所述設(shè)定的壓力為14. 5MPa。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法，其特征在于， 步驟O)中所述設(shè)定的壓力為19MPa。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法，其特征在于， 步驟O)中所述設(shè)定的壓力為24MPa。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物載體的制備領(lǐng)域，是一種納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的控制合成方法，它公開(kāi)了一種超臨界二氧化碳流體制備納米多烯紫杉醇脂質(zhì)體的新方法，該方法通過(guò)低壓成膜-高壓孵化過(guò)程合成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)體，通過(guò)改變制備壓力控制合成具有不同粒徑和包封率的多烯紫杉醇脂質(zhì)體。通過(guò)本發(fā)明公開(kāi)的方法獲得的脂質(zhì)體具有粒徑均勻、分散性好、包封率高、可通過(guò)溫控釋放藥物、無(wú)殘留有機(jī)溶劑等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102379847SQ20101026890
公開(kāi)日2012年3月21日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者嚴(yán)曉娟, 安學(xué)勤 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)