專(zhuān)利名稱(chēng)：一種多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
多烯紫杉醇(Docetaxel， Taxotere )是一種半合成的抗腫瘤藥物，是FDA批 準(zhǔn)的紫杉烷類(lèi)抗癌藥物之一。多烯紫杉醇是從歐洲紫杉樹(shù)針葉中提取的無(wú)活性前體
(二萜紫杉垸io-脫乙?；鶟{果赤霉素in)開(kāi)始半合成制得的，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與紫杉
醇(Paclitaxel， Taxol )相比存在兩個(gè)改變，其一是在紫杉酚B環(huán)的C-10位置 上用羧基代替乙?；涠荂-13側(cè)鏈發(fā)生變化(例如在紫杉酚的側(cè)鏈上用N-叔 丁氧基羰基代替N-苯甲?；??；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)的差別導(dǎo)致多烯紫杉醇和紫杉醇的活性有 所不同，其細(xì)胞毒作用是紫杉醇的1. 3-12倍。
多烯紫杉醇屬于微管解聚抑制劑，作用于微管/微管蛋白系統(tǒng)，促進(jìn)微管雙聚 體裝配成微管，同時(shí)防止去多聚化過(guò)程而使微管穩(wěn)定，使細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯， 從而抑制癌細(xì)胞的有絲分裂和增殖，這種作用機(jī)理導(dǎo)致它與紫杉醇相比具有較少的 嚴(yán)重的副反應(yīng)。臨床研究表明，多烯紫杉醇對(duì)各種腫瘤疾病具有良好的抗癌活性， 對(duì)于治療乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、頭頸癌、胃癌、卵巢癌和 前列腺癌等有很好的療效。
多烯紫杉醇(Taxotere②)由法國(guó)安萬(wàn)特公司開(kāi)發(fā)，1996年獲得FDA批準(zhǔn)，用 于蒽環(huán)類(lèi)藥物化療失敗后的局部晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌，1999年被批準(zhǔn)局部晚期或轉(zhuǎn) 移性非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的二線應(yīng)用，2002年11月被FDA批準(zhǔn)與順鉑聯(lián)合使用， 用于不能切除的、局部晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLC患者(之前未接受化療)的治療。之后， Taxotere1皮批準(zhǔn)與潑尼松聯(lián)合應(yīng)用于非雄激素依賴(lài)的(耐激素的)轉(zhuǎn)移性前列腺癌 患者的治療，與多柔比星和環(huán)磷酰胺聯(lián)用也被批準(zhǔn)用于可手術(shù)的、結(jié)節(jié)陽(yáng)性 (node-positive)乳腺癌患者的輔助治療。
由于多烯紫杉醇水溶性差，目前臨床使用的主要有凍干粉針和水針注射劑。目 前市售的多烯紫杉醇(Taxotere )采用聚山梨醇酯80 (吐溫80) /乙醇作為溶媒， 其規(guī)格為含有20mg (0.5ml)或80mg (2.0ml)多烯紫杉醇(無(wú)水的)單次劑量小 瓶，每ml含有40mg的多烯紫杉醇(無(wú)水的)和1040mg的吐溫80。 1&又(^6^ 要求使用前稀釋?zhuān)虼伺溆袩o(wú)菌無(wú)熱原的單次劑量稀釋液，為含有13%乙醇的注射用水。 吐溫80和乙醇主要用于增加多烯紫杉醇的溶解度，但該溶媒的存在可引起溶 血及嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)，如低血壓和/或支氣管痙攣和/或全身性疹/紅斑。為降低過(guò)敏 反應(yīng)的發(fā)生率和嚴(yán)重度，臨床需預(yù)先給予類(lèi)固醇和其它組胺阻斷藥物，但是這種前 驅(qū)給藥法也存在一些不良反應(yīng)，例如庫(kù)欣(Cushing' s)綜合征、傳染性并發(fā)癥、 高血糖癥、高血壓和精神病的效應(yīng)(包括類(lèi)固醇誘導(dǎo)的精神病)等，尤其是在長(zhǎng)期 給藥時(shí)，溶劑也促進(jìn)增塑劑從聚氧乙烯(PVC)袋和管中溶出，并可能產(chǎn)生與這些 試劑有關(guān)的其它不良反應(yīng)，例如神經(jīng)疾病和腫瘤細(xì)胞耐藥性。不良反應(yīng)限制了該藥 物在臨床上的應(yīng)用，因此，通過(guò)新的給藥系統(tǒng)或制劑來(lái)提高多烯紫杉醇的溶解特性， 進(jìn)一步提高其生物利用度，降低其毒性是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑及其制備方法。 本發(fā)明提供的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，包括如下組分多烯紫杉醇、聚乙二醇-
十二羥基硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰膽堿含量大于80%。
所述制劑中還包括助溶劑；所述助溶劑為碳原子總數(shù)為三以下的一元醇、二元
醇或三元醇。
所述助溶劑具體可為無(wú)水乙醇、丙二醇、甘油中的至少一種。 所述制劑中還可包括PH調(diào)節(jié)劑。 所述pH調(diào)節(jié)劑具體可為無(wú)水檸檬酸。
所述制劑可包括如下質(zhì)量份的各組分多烯紫杉醇O. 1-5，聚乙二醇-十二羥基 硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無(wú)水檸檬酸0. 1_0. 2。
所述制劑具體可包括如下質(zhì)量份的各組分多烯紫杉醇l，聚乙二醇-十二羥基 硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無(wú)水檸檬酸O. 18。
當(dāng)然，該所述制劑也可以僅由如下質(zhì)量份的各組分組成多烯紫杉醇l，聚乙 二醇-十二羥基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無(wú)水檸檬酸O. 18。
上述多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑為淡黃色油狀液體，穩(wěn)定性良好，稀釋后能自發(fā)乳化 形成粒徑為10-200nm范圍的納米粒子。
本發(fā)明還提供了一種制備所述的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的方法，包括如下步驟
1)將所述磷脂加入助溶劑，45-55X:加熱溶解，得到溶液A;將多烯紫杉醇、 無(wú)水檸檬酸和聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯加入助溶劑、常溫溶解，得到溶液B;2)將溶液A和溶液B混合。
本發(fā)明還提供了一種多烯紫杉醇納米制劑，是用生理鹽水溶液、葡萄糖水溶液 或注射用水將所述多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑稀釋5-100倍，優(yōu)選稀釋20倍，得到的納 米制劑。
上述多烯紫杉醇納米制劑可直接作為注射用劑。 以上多烯紫杉醇納米制劑的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。 發(fā)明人針對(duì)多烯紫杉醇臨床應(yīng)用存在的問(wèn)題，采用高純度磷脂和一種新的增溶 劑SolutoWHS15 (聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯)，制成一種新的脂質(zhì)制劑，可以 降低毒性及過(guò)敏反應(yīng)，同時(shí)該制劑在臨用時(shí)用生理鹽水溶液、葡萄糖水溶液、或注 射用水稀釋后可自發(fā)乳化成納米級(jí)的粒子，吸收效果大大增強(qiáng)，從而藥效得以進(jìn)一 步提高。
Solutol HS15，是一種新型的高性能、極低毒性的增溶劑，其優(yōu)越性體現(xiàn)在
① 高增溶能力與吐溫80的對(duì)比研究表明，Solutol HS15對(duì)疏水藥物的溶解 能力隨著溶劑濃度的增加而呈線性增加，而使用吐溫80時(shí)，在達(dá)到較高濃度時(shí)藥 物的溶解量并沒(méi)有進(jìn)一步增加。而另一實(shí)驗(yàn)表明，隨著20%的Solutol HS15的使用， 不同藥物如克霉唑、雌二醇、磺胺噻唑、心痛定、酰胺咪嗪、吡羅昔康等的水溶性 增加，根據(jù)分子結(jié)構(gòu)不同其水溶解度被提高10-100因數(shù)，不管化學(xué)結(jié)構(gòu)或藥物溶 解的最大劑量怎樣，膠粒的直徑不變，均在13nm左右。Solutol HS15的這種高增 溶能力使低容量高劑量的注射成為可能。
② 低組胺釋放使用前無(wú)需使用抗組胺劑和類(lèi)皮質(zhì)激素。與吐溫80相比，靜 脈注射SolutoWHS15后，狗的血清組胺水平低很多倍，15min后吐溫80組的血清 組胺水平大于50000nMo1，而Solutol HS15組僅為220nMol; 60min后吐溫80組的 血清組胺水平為247 nMol，而Solutol HS15組僅為8nMo1。
③ 低溶血作用與吐溫80的對(duì)比研究表明，雖然隨著增溶劑濃度的增加溶血 作用增強(qiáng)，但是吐溫80組的紅血球溶解量高于Soluto^HS15組10倍以上，表明 這種新的增溶劑具有較低的毒性和刺激性。
此外這種新的增溶劑還具有較高的生理耐受性、較低的粘度，并且可以采用蒸 汽滅菌法，無(wú)需昂貴的無(wú)菌制造工藝，目前該溶劑已收入德國(guó)藥典，在美國(guó)和加拿 大已通過(guò)用于人體注射的審定。
本發(fā)明提供的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑由于選用了新型的增溶劑Solutol⑧HS15以及合適的載體材料，大大提高了多烯紫杉醇的溶解性，同時(shí)可避免使用吐溫80帶 來(lái)的毒副作用，提高了多烯紫杉醇制劑的安全性和順應(yīng)性；而且該制劑稀釋后自發(fā) 乳化形成納米粒子，用于靜脈注射，可以增加多烯紫杉醇的體內(nèi)吸收，并且通過(guò)控 制其乳化粒度的大小可達(dá)到腫瘤靶向的目的；本發(fā)明的制備工藝簡(jiǎn)單易行，適合工 業(yè)化生產(chǎn)。
以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。


圖1為多烯紫杉醇納米制劑乳化后粒度檢測(cè)結(jié)果-光強(qiáng)粒度多峰分布 圖2為多烯紫杉醇納米制劑乳化后粒度檢測(cè)結(jié)果-光強(qiáng)粒度正態(tài)分布
具體實(shí)施例方式
下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。 實(shí)施例1、多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
一、 多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
1、 稱(chēng)取5g磷脂(德國(guó)Lipoid公司)和10g無(wú)水乙醇，45。C水浴加熱溶解， 得到溶液A。
2、 稱(chēng)取lg多烯紫杉醇、15gHS15 (德國(guó)BASF公司)、0. 18g檸檬酸、20g甘 油、50g無(wú)水乙醇，常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫?cái)嚢?、混合均勻，過(guò)濾，得到多烯紫杉醇脂 質(zhì)制劑，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
二、 多烯紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑用20倍體積的葡萄糖溶液稀釋?zhuān)玫蕉?烯紫杉醇納米制劑。
三、 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑測(cè)定
用美國(guó)Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動(dòng)態(tài)光散射儀檢測(cè)多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑。多烯紫杉醇納米制劑的平均粒徑為76nm。 6個(gè)月后，再次檢測(cè)多烯 紫杉醇納米制劑的粒徑，平均粒徑為74nm，無(wú)明顯變化。
實(shí)施例2、多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
一、多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
1、稱(chēng)取8g磷脂(德國(guó)Lipoid公司)和12g丙二醇，55'C水浴加熱溶解，得 到溶液A。2、 稱(chēng)取lg多烯紫杉醇、30gHS15 (德國(guó)BASF公司)、0. 18g檸檬酸、50g無(wú) 水乙醇，常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫?cái)嚢?、混合均勻，過(guò)濾，得到多烯紫杉醇脂 質(zhì)制劑，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
二、 多烯紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑用20倍體積的生理鹽水稀釋?zhuān)玫蕉嘞?紫杉醇納米制劑。
三、 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑測(cè)定
用美國(guó)Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動(dòng)態(tài)光散射儀檢測(cè)多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑。在25±0. 1'C的穩(wěn)定環(huán)境下，粒徑檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖l和圖2。結(jié)果表 明，多烯紫杉醇納米制劑的平均粒徑為18. 4nm。 6個(gè)月后，再次檢測(cè)多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑，平均粒徑為23.8nm，無(wú)明顯變化。
實(shí)施例3、多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
一、 多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
1、 稱(chēng)取12g磷脂(德國(guó)Lipoid公司)和12g丙二醇，5(TC水浴加熱溶解，得 到溶液A。
2、 稱(chēng)取lg多烯紫杉醇、36g HS15 (德國(guó)BASF公司)、6g甘油、0. 18g檸檬 酸、34g無(wú)水乙醇，常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫?cái)嚢?、混合均勻，過(guò)濾，得到多烯紫杉醇脂 質(zhì)制劑，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
二、 多烯紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑用20倍體積的注射用水稀釋?zhuān)玫蕉嘞?紫杉醇納米制劑。
三、 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑測(cè)定
用美國(guó)Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動(dòng)態(tài)光散射儀檢測(cè)多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑。多烯紫杉醇納米制劑的平均粒徑為126. 9rnn。 6個(gè)月后，再次檢測(cè) 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑，平均粒徑為101. 9nm，無(wú)明顯變化。
實(shí)施例4、多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
一、多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的制備
1、稱(chēng)取20g磷脂(德國(guó)Lipoid公司)和10g無(wú)水乙醇，45。C水浴加熱溶解，得到溶液A。
2、 稱(chēng)取lg多烯紫杉醇、50gHS15 (德國(guó)BASF公司)、0. 18g檸檬酸、20g無(wú) 水乙醇，常溫溶解，得到溶液B。
3、 將溶液A和溶液B混合，室溫?cái)嚢?、混合均勻，過(guò)濾，得到多烯紫杉醇脂 質(zhì)制劑，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
二、 多烯紫杉醇納米制劑的制備
將步驟一制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑用20倍體積的葡萄糖溶液稀釋?zhuān)玫蕉?烯紫杉醇納米制劑。
三、 多烯紫杉醇納米制劑的粒徑測(cè)定
用美國(guó)Brookhaven儀器公司的ZetaPALS激光動(dòng)態(tài)光散射儀檢測(cè)多烯紫杉醇納 米制劑的粒徑。多烯紫杉醇納米制劑的平均粒徑為178nm。 6個(gè)月后，再次檢測(cè)多 烯紫杉醇納米制劑的粒徑，平均粒徑為181nm，無(wú)明顯變化。
實(shí)施例5、急性毒性試驗(yàn)
1、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
健康昆明種小鼠(18-22g) 100只，雌雄各半。將小鼠隨機(jī)分為10組，每組IO只。
2、 多烯紫杉醇注射液的制備
按市售多烯紫杉醇注射液規(guī)格配制每ml含40mg多烯紫杉醇和1040mg吐溫80的 樣品，用含13%乙醇的注射用水稀釋4倍，得到多烯紫杉醇注射液，作為對(duì)照組受試 物。
3、 給藥
對(duì)照組I (IO只小鼠)腹腔注射多烯紫杉醇注射液，給藥劑量為100mg/Kg。 對(duì)照組II (IO只小鼠)腹腔注射多烯紫杉醇注射液，給藥劑量為150mg/Kg。 實(shí)驗(yàn)組I (IO只小鼠)腹腔注射實(shí)施例l制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥 劑量為100mg/Kg。
實(shí)驗(yàn)組II (IO只小鼠)腹腔注射實(shí)施例l制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥 劑量為150mg/Kg。
實(shí)驗(yàn)組III (IO只小鼠)腹腔注射實(shí)施例2制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥 劑量為100mg/Kg。
實(shí)驗(yàn)組IV (IO只小鼠)腹腔注射實(shí)施例2制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥劑量為150mg/Kg。
實(shí)驗(yàn)組V (IO只小鼠)腹腔注射實(shí)施例3制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥 劑量為100mg/Kg。
實(shí)驗(yàn)組VI (IO只小鼠)腹腔注射實(shí)施例3制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥 劑量為150mg/Kg。
實(shí)驗(yàn)組VH (IO只小鼠)腹腔注射實(shí)施例4制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥 劑量為100mg/Kg。
實(shí)驗(yàn)組VIII (IO只小鼠)腹腔注射實(shí)施例4制備的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，給藥 劑量為150mg/Kg。
觀察給藥后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠的毒性反應(yīng)癥狀。
結(jié)果表明給藥劑量為100mg/kg時(shí)，對(duì)照組小鼠表現(xiàn)出明顯的毒性反應(yīng)癥狀， 四肢伏地、呼吸急促、狀態(tài)萎靡，給藥后3天有小鼠死亡， 一周后小鼠死亡率為20%; 而注射多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的4組小鼠毒性反應(yīng)癥狀較輕，表現(xiàn)為反應(yīng)遲緩、狀態(tài) 萎靡、體重減輕，給藥后一周小鼠無(wú)死亡。
給藥劑量為150mg/kg時(shí)，對(duì)照組小鼠給藥后l天出現(xiàn)死亡， 一周后小鼠死亡率 為70%;而注射多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的4組小鼠毒性反應(yīng)癥狀有所減輕，實(shí)驗(yàn)組II、 IV、 VI、 VE1分別在給藥后第2天、第3天、第2天、第3天開(kāi)始有小鼠死亡，給藥后一 周小鼠死亡率分別為40%、 50%、 50%、 40%，低于對(duì)照組。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與多烯紫杉醇注射液相比較，多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的毒性 有所降低。
權(quán)利要求
1、一種多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，包括如下組分多烯紫杉醇、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯和磷脂；所述磷脂中磷脂酰膽堿含量大于80％。
2、 如權(quán)利要求l所述的制劑，其特征在于所述制劑中還包括助溶劑；所述助 溶劑為碳原子總數(shù)為三以下的一元醇、二元醇或三元醇。
3、 如權(quán)利要求2所述的制劑，其特征在于所述助溶劑為無(wú)水乙醇、丙二醇、 甘油中的至少一種。
4、 如權(quán)利要求1至3中任一所述的制劑，其特征在于所述制劑中還包括pH調(diào) 節(jié)劑。
5、 如權(quán)利要求4所述的制劑，其特征在于所述pH調(diào)節(jié)劑為無(wú)水?dāng)Q檬酸。
6、 如權(quán)利要求5所述的制劑，其特征在于所述制劑包括如下質(zhì)量份的各組分 多烯紫杉醇0.1-5，聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80， 無(wú)水檸檬酸0. 1-0.2。
7、 如權(quán)利要求6所述的制劑，其特征在于所述制劑包括如下質(zhì)量份的各組分 多烯紫杉醇l，聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯15-50，磷脂5-20，助溶劑30-80，無(wú)水 檸檬酸O. 18。
8、 一種制備權(quán)利要求7所述的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑的方法，包括如下步驟1) 將所述磷脂加入助溶劑，45-55t:加熱溶解，得到溶液A;將多烯紫杉醇、無(wú) 水檸檬酸和聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯加入助溶劑、常溫溶解，得到溶液B;2) 將溶液A和溶液B混合。
9、 一種制備多烯紫杉醇納米制劑的方法，是用生理鹽水溶液、葡萄糖水溶液或 注射用水將權(quán)利要求1至7中任一所述多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑稀釋5-100倍，優(yōu)選稀釋 20倍，得到的納米制劑。
10、 一種多烯紫杉醇納米制劑，是用權(quán)利要求9所述方法制備得到的。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑及其制備方法。本發(fā)明的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，包括如下組分多烯紫杉醇、聚乙二醇-十二羥基硬脂酸酯和磷脂。本發(fā)明提供的多烯紫杉醇脂質(zhì)制劑，提高了多烯紫杉醇制劑的安全性和順應(yīng)性，該制劑稀釋后可自發(fā)乳化形成納米粒子用于靜脈注射，增加多烯紫杉醇的體內(nèi)吸收，并且可達(dá)到腫瘤靶向的目的。本發(fā)明的制備工藝簡(jiǎn)單易行，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K9/127GK101632637SQ20081011697
公開(kāi)日2010年1月27日 申請(qǐng)日期2008年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月22日
發(fā)明者張小寧, 晚 王, 鄔月明, 文 邰, 郝艷麗 申請(qǐng)人:清華大學(xué)