專利名稱：一種同時制備芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及化學(xué)領(lǐng)域化合物的分離提取方法，具體涉及植物天然生理活性物質(zhì)芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的制備工藝。
背景技術(shù)：
芍藥是毛茛科芍藥亞科芍藥屬多年生草本植物，常用其干燥根入藥。中國藥典2010年版中收錄2種芍藥。一種是白芍(Radix Paeoniae Alki)，為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall.的干燥根；一種是赤芍(Radix Paeoniae Rubra),為毛茛科植物川赤芍I^aeonia veitchii Lynch的干燥根。目前市場上已有多種含芍藥的中藥制劑，如腦血栓片、益腦復(fù)健膠囊、偏癱復(fù)原片、回生再造丸、大活絡(luò)丸等。主要用于治療心腦血管疾病、神經(jīng)痛、高血壓、流產(chǎn)、痛經(jīng)等癥?，F(xiàn)代化學(xué)研究表明芍藥主要含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等成分。由于芍藥苷在藥材中含量高，純品較易獲得，所以對芍藥苷的研究報道較多。長期以來，大多數(shù)研究認(rèn)為芍藥苷是芍藥的主要有效成分，從而以芍藥苷作為指標(biāo)來測量含芍藥藥物，并以其含量的高低來評價藥物的質(zhì)量性能。近年來，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)芍藥內(nèi)酯苷具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗驚厥作用，對免疫系統(tǒng)的作用，對平滑肌的作用，抗炎作用，抗病原微生物，護(hù)肝作用，臨床上主要用于抗癲癇，鎮(zhèn)痛、戒毒，止眩暈，治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，治療細(xì)菌性痢疾及腸炎，治療病毒性肝炎，老年性疾病，抗硫酸鋇絮凝和溶解粘液的作用。因此，對芍藥內(nèi)酯苷的藥理研究越來越受到重視，芍藥內(nèi)酯苷的研究日益增多，例如申請?zhí)枮?00510045840.0的發(fā)明專利申請公開了一種從白芍(毛茛科芍藥屬植物芍藥 Paeonia lactifora Pall)中提取分離得到的含有活性化合物芍藥苷(paeoniflorin)和芍藥內(nèi)酯苷(albiflorin)的組合物，兩組分含量之和在50%-95%之間，并且芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷在該組合物中的比例為1 10 10 1，該組合物用于制備治療各種原因引起的白細(xì)胞減少、血小板和血紅球蛋白降低的病癥的藥物。又如申請?zhí)枮?0071013^10. 2的發(fā)明專利申請公開了一種含有芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷藥物組合物，該組合物中芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷的重量之比為10 1-50 1，該明藥物組合物可用于預(yù)防和治療心腦血管疾病。但是上述研究僅僅是對芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的藥理用途進(jìn)行了研究，制備的是芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的組合物。由于芍藥內(nèi)酯苷的化學(xué)特性，制備純度高的芍藥內(nèi)酯苷的方法困難，現(xiàn)有的研究中還沒有一種簡便易行的工藝方法，可以低成本、大規(guī)模制備得到高純度的芍藥內(nèi)酯苷。例如申請?zhí)枮?00910100680. 3的發(fā)明專利申請公開了一種模擬移動床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法。該方法模擬移動床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷，采用白芍總苷提取物作為原料，應(yīng)用模擬移動床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷，模擬移動床色譜的固定相采用C18硅膠，流動相采用甲醇或乙腈與水、甲酸、異丙醇的混合溶液，混合溶液中按體積百分計甲醇或乙腈10% 50%、水50% 90%、甲酸0 1%、異丙醇0 2%，上述的各組分的總和為 100%，該方法制備的芍藥內(nèi)酯苷的純度雖然可以達(dá)到90%以上，但因為該技術(shù)需要使用大量價格昂貴的反相硅膠(RP-C18)，且制備工藝流程復(fù)雜，操作工藝控制條件苛刻，導(dǎo)致產(chǎn)品成本高，不適合大規(guī)模生產(chǎn)。迄今為止，尚未有一種適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)同時制備高純度芍藥內(nèi)酯苷和高純度芍藥苷的工藝路線披露。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種同時制備高純度芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的方法，本發(fā)明方法操作工藝過程簡單，生產(chǎn)周期短。運(yùn)用本發(fā)明方法，可在一個工藝流程中，分別制備得到公斤級的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷，且所得到的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷純度可達(dá)到90%以上。 采取這種制備方法提取純化芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷，顯著地降低了生產(chǎn)成本，適宜批量制備和工業(yè)化生產(chǎn)。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供一種同時制備芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的方法，包括以柱層析方法對芍藥藥材或芍藥提取物進(jìn)行分離、純化。其中，柱層析選擇大孔樹脂柱層析和硅膠柱層析。當(dāng)采用芍藥藥材作為原料進(jìn)行提取，提取溶液選擇水、質(zhì)量百分比濃度為20-70% 的乙醇或質(zhì)量百分比濃度為20-70 %的甲醇，優(yōu)選用水提取。提取方法可以采用回流提取法或滲漉提取法進(jìn)行所述的提取處理。采用回流提取法提取時，每次回流提取過程中藥材重量與提取溶劑的體積之比為1 5-8，提取時間2-3h/次。為避免藥材提取后的濃縮液經(jīng)大孔吸附樹脂柱時，因過濃或渾濁，而導(dǎo)致樹脂柱堵塞?？刹扇∫韵聝煞N預(yù)處理方法(1)藥材濃縮液，按常規(guī)的酒精沉淀去雜方法，加適量高濃度乙醇(95%乙醇或無水乙醇)，使乙醇終濃度達(dá)到70-75%，靜置后，取上清液，減壓回收，去除乙醇，回收液再經(jīng)大孔吸附樹脂柱。( 藥材濃縮液，加2-4倍量水，靜置過夜，取上清液，再經(jīng)大孔吸附樹脂柱。大孔樹脂柱層析選用的樹脂型號可以為非極性、弱極性、中等極性的大孔樹脂，如 D101、AB-8、DM130H、XAD-2、D201、HP-20、X-5、H103、DM11 或 ADS-17 型樹脂。優(yōu)選為非極性大孔吸附樹脂，如AB-8、DlOl型樹脂。大孔樹脂柱層析過程中，大孔樹脂柱的柱直徑與柱高之比為1 10-50。大孔樹脂的柱體積與芍藥藥材重量之比為8-25 10，即當(dāng)芍藥藥材重量為100g，則大孔樹脂柱的柱體積為80-250ml ；當(dāng)芍藥藥材重量為100kg，則大孔樹脂柱的柱體積為80-250L。大孔樹脂柱層析洗脫劑可以為不同濃度的含水乙醇、含水甲醇或含水丙酮。在上樣結(jié)束后，先用3-6倍量柱體積的水洗滌，除去樹脂不吸附的雜質(zhì)(包括多糖等)，然后再用洗脫劑洗脫，洗脫方法可采用單一濃度洗脫，或采用梯度洗脫。為避免樹脂柱在洗脫過程中，因高濃度洗脫劑遇水會產(chǎn)生氣泡，影響樹脂柱洗脫效果；優(yōu)先使用較低濃度的洗脫劑洗脫1-2個柱床體積，再使用較高濃度的洗脫劑洗脫。亦可采用高濃度甲醇或者高濃度乙醇對藥材進(jìn)行加熱提取，得到的提取液中糖分較少，可不經(jīng)過大孔吸附樹脂柱層析步驟，而直接進(jìn)行1-3次硅膠柱層析，得到符合質(zhì)量要求的芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷。硅膠柱層析使用的硅膠粒度對分離效果亦有較大影響，理論上，粒度越細(xì)的硅膠， 分離效果越好，但是柱壓會明顯升高，對設(shè)備的要求也相應(yīng)增加，且硅膠的成本也會顯著增加。本發(fā)明優(yōu)選粒度為100-200目硅膠。硅膠柱層析的洗脫溶劑選擇乙酸乙酯與甲醇的混合物，其中甲醇與乙酸乙酯的體積之比為0-15 100。亦可選擇乙酸乙酯與乙醇的混合物，其中乙醇與乙酸乙酯的體積之比為0-10 100?；蜻x擇乙酸乙酯與丙酮的混合物，其中丙酮與乙酸乙酯的體積之比為 0-20 100。或選擇乙酸乙酯與水的混合物，其中水與乙酸乙酯的體積之比為0-3. 5 100。硅膠柱層析使用的硅膠與待純化樣品的重量之比為5-50 1。當(dāng)硅膠與待純化樣品的重量份之比較低時，會影響目標(biāo)產(chǎn)品的分離效果，即得到的產(chǎn)品的純度會有下降。提高硅膠與待純化樣品的重量份之比，能提高目標(biāo)產(chǎn)品，尤其是芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷之間的分離效果。但成本(包括柱層析的硅膠使用量，洗脫溶劑用量)均會相應(yīng)增加。本發(fā)明優(yōu)選硅膠與待純化樣品的重量之比為8-20 1。為進(jìn)一步提高芍藥苷或芍藥內(nèi)酯苷的純度，可對產(chǎn)品再經(jīng)過1-2次硅膠柱層析步驟，得到的產(chǎn)品純度可達(dá)到98. 0%以上，但生產(chǎn)成本亦會相應(yīng)增加。本發(fā)明制備芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷所用的原料包括從植物、特別是藥用植物芍藥和川赤芍中分離提純得到，所選取的原料可以是這些藥材的根莖、根、葉、枝、莖、果實(shí)、花等任一部位或全部植株，其中優(yōu)選的部位是根與根莖。制備工藝中所述的提取溶劑可以是水或任一種常用醇類、酮類及酯類溶劑、或由這些溶劑按一定比例配成的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿配成的酸性或堿性溶劑，因為芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷為水溶性成分，綜合考慮提取成本，優(yōu)選為水，其次為含水甲醇或含水乙醇。本發(fā)明制備芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷使用的原料也可以直接采用芍藥提取物。所涉及的芍藥提取物，包括(1)直接以芍藥藥材經(jīng)過常規(guī)溶劑提取后濃縮得到；( 芍藥藥材經(jīng)過溶劑提取后，再采用常規(guī)的溶劑萃取方法，濃縮后得到；C3)芍藥藥材經(jīng)過溶劑提取，再經(jīng)過大孔吸附樹脂吸附、洗脫，濃縮后得到。當(dāng)使用直接以芍藥藥材提取濃縮得到的芍藥提取物為原料時，則可將原料直接溶解后經(jīng)過大孔樹脂柱層析，再經(jīng)過硅膠柱層析，得到芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷。當(dāng)使用芍藥藥材經(jīng)過溶劑提取后再采用常規(guī)溶劑萃取方法濃縮后得到的芍藥提取物作為原料，或使用已經(jīng)經(jīng)過大孔樹脂柱處理后的芍藥提取物(如芍藥總苷)作為原料時，則可不需要再經(jīng)過大孔吸附樹脂柱，直接將原料溶解，硅膠拌樣后，再經(jīng)1-3次硅膠柱層析，分別得到芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷。得到的芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷的純度均可達(dá)到 50-99. 9%。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1、應(yīng)用本發(fā)明方法，可在同一個工藝流程中，制備得到芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷，充分利用藥材資源的綜合使用價值。2、應(yīng)用本發(fā)明方法，可在同一個工藝流程中，分別得到公斤級的芍藥苷和公斤級的芍藥內(nèi)酯苷。3、應(yīng)用本發(fā)明方法，得到的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷純度高，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量達(dá)到50-99. 9%o4、本發(fā)明制備工藝方法簡單，精制效率高，耗能低，環(huán)保，操作工藝條件容易控制， 質(zhì)量可控性強(qiáng)。5、本發(fā)明所述的高純度芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷，可以單獨(dú)用于制備藥物和功能性保健食品，也可以與其它任何中西藥物或食物，尤其是與某些具有活血化淤和保護(hù)心腦血管疾病的中藥或是與鎮(zhèn)靜安神和抗抑郁抗焦慮的中藥配伍，起到協(xié)同或者增效之目的，用于制備藥物和功能性保健食品。


附圖1為實(shí)施例1制備所得芍藥苷的HPLC檢測圖譜附圖2為實(shí)施例1制備所得芍藥內(nèi)酯苷的HPLC檢測圖譜附圖3為實(shí)施例2制備所得芍藥苷的HPLC檢測圖譜附圖4為實(shí)施例2制備所得芍藥內(nèi)酯苷的HPLC檢測圖譜附圖5為實(shí)施例7制備所得芍藥內(nèi)酯苷的HPLC檢測圖譜
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明。實(shí)施例11、藥材的提取干燥的芍藥根150公斤，粉碎成粗粉后，裝入2噸不銹鋼中藥提取罐中，加入質(zhì)量百分比濃度為70%的乙醇溶液，加熱回流提取三次，提取用的乙醇溶液的體積依次為 1200L，900L，900L，提取時間依次為 3h、2. 5h、2h。將三次提取液合并后，采用真空減壓濃縮罐(無錫市華新藥化設(shè)備有限公司產(chǎn)) 進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至無醇味，制得芍藥濃縮液，其中減壓濃縮的溫度為70°C，相對真空度為-0. 09 -0. 075MPa，芍藥濃縮液的相對密度為1. 25，體積為220L。2、分離處理1)向芍藥濃縮液加入95%乙醇700L，靜置過夜，取上清液，濃縮至200L，加入400L 水稀釋。經(jīng)大孔吸附樹脂柱進(jìn)行分離處理。其中，大孔吸附樹脂選擇AB-8型大孔吸附樹脂， 大孔吸附樹脂柱的柱體積為200L (柱直徑0. 4米，柱高1. 6米)，上樣結(jié)束后，先用500L水洗滌至流出液清澈透明后，再用1000L質(zhì)量百分比濃度為60%的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫流速為150L/h，每50L洗脫液收集為一流份；2)采用薄層色譜法(TLC法)檢測收集的洗脫液中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，將含有芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷的洗脫液流份合并到一起，得到樹脂柱洗脫液。其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板，展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加熱5分鐘后顯色；3)將含芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷組分的樹脂柱洗脫液置于真空減壓濃縮罐(無錫市華新藥化設(shè)備有限公司產(chǎn))內(nèi)進(jìn)行減壓濃縮，濃縮后水浴蒸干、粉碎，得到芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的混合物粗品7. 5公斤，其中，減壓濃縮的溫度為70°C，相對真空度為-0. 095 -0. 08Mpa ；3、純化處理1)將芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的混合物粗品用20L甲醇全部溶解后加入8. 9公斤硅膠粉(100-200目)，攪拌均勻，干燥，得到混合物樣品；2)將混合物樣品進(jìn)行硅膠柱層析，以乙酸乙酯與甲醇的混合物為洗脫劑進(jìn)行洗脫，其中，硅膠柱內(nèi)的吸附劑硅膠的粒度為100-200目，硅膠柱的柱直徑與柱高之比為 1 8;吸附劑硅膠與混合物樣品的重量之比為6 1，洗脫劑為乙酸乙酯與甲醇的混合溶劑(體積比為20 1)，洗脫劑用量4000L，洗脫流速為200L/h，每50L洗脫液收集一流份；3)采用薄層色譜法(TLC法)檢測洗脫液中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，將洗脫液合并為三個部分含有芍藥苷的部分、芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷混合部分、含芍藥內(nèi)酯苷部分，分別蒸干，得芍藥苷1.74公斤、芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷混合物0. 37公斤、芍藥內(nèi)酯苷0. 86 公斤，其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板，展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加熱5分鐘后顯色。經(jīng)HPLC檢測芍藥苷含量為88.沈％，見附圖1 ；芍藥內(nèi)酯苷含量為92. 23%，見附圖2。HPLC檢測條件為儀器Water 515泵，2487檢測器；色譜柱KromasilRP-C 18 ；流動相乙腈0. 磷酸水溶液(13 87)；檢測波長:230nm ；流速1. Oml/min。實(shí)施例21、藥材的提取新鮮的杭白芍根300公斤，切碎后，裝入3噸中藥提取罐中，加入質(zhì)量百分比濃度為40%的乙醇，加熱回流提取三次，提取用的乙醇的體積依次為2200L，1800L，1800L，提取時間依次為3h,3h,2h ；將三次提取液合并后，采用真空減壓濃縮罐進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至無醇味，制得芍藥濃縮液，其中減壓濃縮的溫度為60°C，相對真空度為-0. 09 -0. 08MPa，芍藥濃縮液的相對密度為1.21，體積為250L。2、分離處理1)向芍藥濃縮液加入95%乙醇800L，靜置過夜，取上清液，濃縮至250L，加入500L 水稀釋。采用大孔吸附樹脂柱進(jìn)行分離處理，其中，大孔吸附樹脂選擇D-IOl型大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂柱的柱體積為225L (直徑0. 4米，高2. O米)，上樣結(jié)束后，先用700L水洗滌至流出液清澈透明后，再1200L質(zhì)量百分比濃度為50%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫流速為200L/h，每50L洗脫液收集為一流份；2)采用薄層色譜法(TLC法)檢測收集的洗脫液中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，將含有芍藥苷或芍藥內(nèi)酯苷(或兩者混合)的洗脫液流份合并到一起，得到樹脂柱洗脫液，其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板，展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加熱5分鐘后顯色；3)將含芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷組分的樹脂柱洗脫液置于真空減壓濃縮罐(無錫市華新藥化設(shè)備有限公司產(chǎn))內(nèi)進(jìn)行減壓濃縮，濃縮后水浴蒸干、粉碎，得到芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的混合物粗品8. 1公斤，其中，減壓濃縮的溫度為70°C，相對真空度為-0. 09 -0. 075MPa ；3、純化處理1)將芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的混合物粗品用15L乙酸乙酯與甲醇混合液(其中乙酸乙酯、甲醇體積比為4 1)全部溶解后加入10公斤層析用硅膠粉Q00-300目)，攪拌均勻，干燥，得到混合物樣品；2)將混合物樣品進(jìn)行硅膠柱層析，以乙酸乙酯與乙醇混合溶劑為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，其中，硅膠柱內(nèi)的吸附劑硅膠的粒度為100-200目，硅膠柱的柱直徑與柱高之比為 1 8;吸附劑硅膠與芍藥內(nèi)酯苷粗品的重量之比為12 1，洗脫劑中乙酸乙酯與乙醇的體積比為10 1，洗脫劑用量6000L，洗脫流速為每小時200L/h，每50L洗脫液收集為一流份；3)采用薄層色譜法(TLC法)檢測洗脫液中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，將洗脫液合并為兩個部分含有芍藥苷的部分、含芍藥內(nèi)酯苷部分(兩者交叉部分并入芍藥苷部分)，分別蒸干，得芍藥苷2. 42公斤、芍藥內(nèi)酯苷1. 16公斤，其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板，展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以 5%的硫酸乙醇溶液，150°C加熱5分鐘后顯色。經(jīng)HPLC檢測芍藥苷含量為84. 78%，見附圖3 ；芍藥內(nèi)酯苷含量為94. 71%，見附圖4。HPLC檢測條件為儀器Water 515泵，2487檢測器；色譜柱KromasilRP-C 18 ；流動相乙腈0. 磷酸水溶液(13 87)；檢測波長:230nm ；流速1. Oml/min。實(shí)施例31、藥材的提取干燥的芍藥根100公斤，粉碎成粗粉后，用400L去離子水浸泡5小時后，裝入1噸不銹鋼滲漉罐中，用去離子水滲漉，收集滲漉液約1500L。2、分離處理1)將滲漉液采用大孔吸附樹脂柱進(jìn)行分離處理。其中，大孔吸附樹脂選擇AB-SS 大孔吸附樹脂，大孔吸附樹脂柱的柱體積為150L，上樣結(jié)束后，先用500L水洗滌至流出液清澈透明后，再用800L質(zhì)量百分比濃度為50%的乙醇洗脫，洗脫流速為100L/h，收集洗脫液，每50L洗脫液收集為一流份；2)采用薄層色譜法(TLC法)檢測收集的洗脫液中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，將含有芍藥苷或芍藥內(nèi)酯苷(或兩者混合)的洗脫液流份合并到一起，得到樹脂柱洗脫液，其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板，展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加熱5分鐘后顯色；3)將含芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷組分的樹脂柱洗脫液置于真空減壓濃縮罐內(nèi)進(jìn)行減壓濃縮，濃縮后水浴蒸干、粉碎，得到芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的混合物粗品4. 81公斤，其中， 減壓濃縮的溫度為70°C，相對真空度為-0. 09 -0. 075MPa ；3、純化處理1)將混合物粗品用適量甲醇全部溶解后加入6. 4公斤硅膠粉(100-200目)，攪拌均勻，干燥，得到混合物樣品；2)將混合物樣品進(jìn)行硅膠柱層析，以乙酸乙酯為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，其中，硅膠柱內(nèi)的吸附劑硅膠的粒度為100-200目，硅膠柱的柱直徑與柱高之比為1 10;吸附劑硅膠與混合物粗品的重量之比為20 1，洗脫劑為乙酸乙酯，用量6000L，洗脫流速為300L/ h，每50L洗脫液收集一流份；3)采用薄層色譜法(TLC法)檢測洗脫液中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，將洗脫液合并為兩個部分含有芍藥苷的部分、含芍藥內(nèi)酯苷部分(兩者無交叉)，分別蒸干，得芍藥苷1. 73公斤、芍藥內(nèi)酯苷1. 02公斤，其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板，展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以5%的硫酸乙醇溶液， 150°C加熱5分鐘后顯色。經(jīng)HPLC檢測芍藥苷含量為93. 42% ；芍藥內(nèi)酯苷含量為92. 77%。
實(shí)施例4以市售芍藥總苷為原料(經(jīng)測定芍藥苷含量24. 2%、芍藥內(nèi)酯苷15. 9% )。1、純化處理1)芍藥提取物10公斤，以70%乙醇全部溶解后加入12. 1公斤硅膠粉(100-200 目)，攪拌均勻，蒸干，得混合物樣品；2)將混合物樣品進(jìn)行硅膠柱層析，以乙酸乙酯與水的混合物為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，其中，硅膠柱內(nèi)的吸附劑硅膠的粒度為100-200目，硅膠柱的柱直徑與柱高之比為 1 6;吸附劑硅膠與混合物樣品的重量之比為16 1，洗脫劑中乙酸乙酯與水的體積比為 100 3. 5，洗脫劑用量為5000L，洗脫流速為200L/h，每50L洗脫液收集一流份；3)采用薄層色譜法(TLC法)檢測洗脫液中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，將洗脫液合并為兩個部分含有芍藥苷的部分、含芍藥內(nèi)酯苷部分(兩者交叉部分并入芍藥內(nèi)酯苷部分)，分別蒸干，得芍藥苷2. 53公斤、芍藥內(nèi)酯苷1. 08公斤，其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板，展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加熱5分鐘后顯色。經(jīng)HPLC檢測芍藥苷含量為93. 4% ；芍藥內(nèi)酯苷含量為82. 9%。實(shí)施例51、藥材的提取干燥的毫白芍根100公斤，粉碎后，裝入2噸中藥提取罐中，加入質(zhì)量百分比濃度為95%的乙醇，加熱回流提取三次，提取用的乙醇的體積依次為800L，600L，600L，提取時間依次為3h，3h，2h ；將三次提取液合并后，采用真空減壓濃縮罐進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至干，制得芍藥提取物18公斤，其中減壓濃縮的溫度為60°C，相對真空度為-0. 09 -0. 08MPa，芍藥濃縮液的相對密度為1. 21，體積為250L。2、純化處理1)向芍藥提取物中加入70%乙醇25L全部溶解后，加入20公斤層析用硅膠粉 (100-200目)，攪拌均勻，干燥，得到混合物樣品；2)將混合物樣品進(jìn)行硅膠柱層析，以乙酸乙酯與水混合溶劑為洗脫劑，進(jìn)行洗脫， 其中，硅膠柱內(nèi)的吸附劑硅膠的粒度為100-200目，硅膠柱的柱直徑與柱高之比為1 8; 吸附劑硅膠與芍藥內(nèi)酯苷粗品的重量之比為6 1，洗脫劑中乙酸乙酯與水的體積比為 100 2.5，洗脫劑用量25001^，洗脫流速為每小時200171!，每5(^洗脫液收集為一流份；3)采用薄層色譜法(TLC法)檢測洗脫液中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，將洗脫液合并為兩個部分含有芍藥苷的部分、含芍藥內(nèi)酯苷部分(兩者交叉部分并入芍藥內(nèi)酯苷部分)，分別蒸干，得芍藥苷3. 61公斤、芍藥內(nèi)酯苷2. 16公斤，其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板，展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加熱5分鐘后顯色。經(jīng)HPLC檢測芍藥苷含量為72. 83% ；芍藥內(nèi)酯苷含量為64. 59%。3、精制處理1)取上一步驟得到的芍藥內(nèi)酯苷粗品2公斤，以70%乙醇3. 5L完全溶解后，加入 2. 5公斤層析用硅膠粉(100-200目)，攪拌均勻，干燥，得到芍藥內(nèi)酯苷樣品；
2)將芍藥內(nèi)酯苷樣品進(jìn)行硅膠柱層析，以乙酸乙酯與丙酮混合溶劑為洗脫劑，進(jìn)行洗脫，其中，硅膠柱內(nèi)的吸附劑硅膠的粒度為100-200目，硅膠柱的柱直徑與柱高之比為 1 10;吸附劑硅膠與芍藥內(nèi)酯苷粗品的重量之比為15 1，洗脫劑中乙酸乙酯與丙酮的體積比為10 1，洗脫劑用量1000L，洗脫流速為每小時200L/h，每50L洗脫液收集為一流份；3)采用薄層色譜法(TLC法)檢測洗脫液中芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，得到芍藥內(nèi)酯苷洗脫部分，蒸干，得芍藥內(nèi)酯苷1. 17公斤，其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板，展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加熱5分鐘后顯色。經(jīng)HPLC檢測芍藥內(nèi)酯苷含量為93. 。實(shí)施例6除了藥材提取步驟采用新鮮的川赤芍枝葉、根的混合物500公斤為原料，切碎后， 裝入3噸滲漉罐中，以去離子水為滲漉提取液進(jìn)行滲漉提取，滲漉提取液的體積為3800L， 滲漉提取的流速為50L/h ；滲漉液合并后進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至無醇味，制得芍藥濃縮液， 其中減壓濃縮的溫度為80°C，相對真空度為-0. 095 -0. 08MPa，芍藥濃縮液的相對密度為 1. 25之外，其余與實(shí)施例3相同，精制得到的芍藥苷1. 96公斤、芍藥內(nèi)酯苷0. 67公斤。經(jīng) HPLC檢測，芍藥苷含量為79. 4% ；芍藥內(nèi)酯苷含量為73. 7%。實(shí)施例71)取實(shí)施例3得到的芍藥內(nèi)酯苷(純度92.77%)1.0公斤作為試樣，用少量甲醇將芍藥內(nèi)酯苷試樣全部溶解后加入1. 2公斤硅膠粉(100-200目)，攪拌均勻，干燥，制得芍藥內(nèi)酯苷樣品；2)將芍藥內(nèi)酯苷樣品進(jìn)行硅膠柱層析，以乙酸乙酯-水的混合物為洗脫劑進(jìn)行洗脫，其中，硅膠柱內(nèi)的吸附劑硅膠的粒度為100-200目，硅膠柱的柱直徑與柱高之比為 1 5;吸附劑硅膠與芍藥內(nèi)酯苷試樣的重量之比為30 1，洗脫劑中乙酸乙酯與水的體積比為100 3，洗脫體積為2000L，洗脫流速為80L/h，每50L洗脫液收集一流份；3)采用薄層色譜法(TLC法)檢測洗脫液中芍藥內(nèi)酯苷的含有情況，合并含有芍藥內(nèi)酯苷的洗脫液，蒸干后得芍藥內(nèi)酯苷0. 65公斤，其中，TLC法使用的薄層板為硅膠G板， 展開劑為氯仿、甲醇的混合液，氯仿與甲醇的體積比為4 1，上行展開后，噴以5%的硫酸乙醇溶液，150°C加熱5分鐘后顯色。經(jīng)HPLC檢測，芍藥內(nèi)酯苷含量為99. 3%，見附圖5。HPLC檢測條件為儀器Water 515泵，2487檢測器；色譜柱KromasilRP-C 18 ；流動相乙腈0. 磷酸水溶液(13 87)；檢測波長:230nm ；流速1. Oml/min。實(shí)施例8芍藥內(nèi)酯苷片取實(shí)施例2所得的芍藥內(nèi)酯苷400克，加入淀粉100克，硬脂酸鎂30克，混合均勻，在壓片機(jī)上壓制10000粒。每粒含芍藥內(nèi)酯苷約40mg，患者每日服用3粒，用于治療冠狀動脈硬化性心臟病及心絞痛。實(shí)施例9芍藥苷復(fù)方制劑的制備芍藥苷(純度93· 4%)克丹參酚酸B (純度98. 1)70克人參皂苷Rgl (純度99. 3)50克
冰片45克淀粉120克上述組分混合均勻，裝入硬明膠膠囊中，制得4000粒膠囊，用于治療冠狀動脈硬化性心臟病及心絞痛。
權(quán)利要求
1.一種同時制備芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷的精制方法，包括以硅膠柱層析方法對芍藥藥材或芍藥提取物進(jìn)行分離、純化。
2.一種同時制備芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷的精制方法，包括如下順序進(jìn)行的步驟1)將粉碎的芍藥藥材加入到提取溶液中，進(jìn)行提取處理，提取液濃縮后采用大孔吸附樹脂進(jìn)行除雜分離處理，收集、合并含有芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的樹脂柱洗脫液，得到樹脂柱洗脫物；2)將樹脂柱洗脫物進(jìn)行1-2次硅膠柱層析純化處理，洗脫劑洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)薄層檢測后，分別合并含有芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的硅膠柱洗脫液；3)硅膠柱洗脫液減壓濃縮，分別得到芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷。
3.一種同時制備芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷的精制方法，包括如下順序進(jìn)行的步驟1)將粉碎的芍藥藥材加入到提取溶液中，進(jìn)行提取處理，提取液濃縮后進(jìn)行進(jìn)行1-3 次硅膠柱層析純化處理，洗脫劑洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)薄層檢測后，分別合并含有芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的硅膠柱洗脫液；2)硅膠柱洗脫液減壓濃縮，分別得到芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷。
4.一種同時制備芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷的精制方法，包括如下順序進(jìn)行的步驟1)將白勺總苷直接進(jìn)行進(jìn)行1-3次硅膠柱層析純化處理，洗脫劑洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)薄層檢測后，分別合并含有芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的硅膠柱洗脫液；2)硅膠柱洗脫液減壓濃縮，分別得到芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷。
5.如權(quán)利要求2所述的精制方法，其特征是步驟1)中所述的提取溶液選擇水、質(zhì)量百分比濃度為20-70%的乙醇或質(zhì)量百分比濃度為20-70%的甲醇，優(yōu)選為水提取。
6.如權(quán)利要求2所述的精制方法，其特征是步驟1)中所述的大孔吸附樹脂選擇D101、 AB-8、DMl30H、XAD-2、D201、HP-20、X_5、H103、DMll 或 ADS-17 型樹脂。
7.如權(quán)利要求3、4所述的精制方法，其特征是步驟1)中所述的提取溶液選擇質(zhì)量百分比濃度為90-99. 9%的乙醇或質(zhì)量百分比濃度為90-99. 9%的甲醇，優(yōu)選為95%的乙醇提取。
8.如權(quán)利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅膠柱層析純化處理的硅膠與待純化樣品的重量之比為5-50 1，優(yōu)選為6-20 1。
9.如權(quán)利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅膠柱層析純化處理的洗脫劑為乙酸乙酯與甲醇的混合物，其中，甲醇與乙酸乙酯的體積之比為0-15 100，按照單一濃度配比進(jìn)行洗脫。
10.如權(quán)利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅膠柱層析純化處理的洗脫劑為乙酸乙酯與乙醇的混合物，其中，乙醇與乙酸乙酯的體積之比為0-10 100，按照單一濃度配比進(jìn)行洗脫。
11.如權(quán)利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅膠柱層析純化處理的洗脫劑為乙酸乙酯與丙酮的混合物，其中，丙酮與乙酸乙酯的體積之比為0-20 100，按照單一濃度配比進(jìn)行洗脫。
12.如權(quán)利要求2、3、4所述的精制方法，其特征是所述的硅膠柱層析純化處理的洗脫劑為乙酸乙酯與水的混合物，其中，水與乙酸乙酯的體積之比為0-3. 5 100，按照單一濃度配比進(jìn)行洗脫。
13.如權(quán)利要求1、2、3、4所述的的精制方法，其特征在于制備得到的芍藥內(nèi)酯苷的純度為50-99.9%，其中優(yōu)選純度為86% -99%，進(jìn)一步優(yōu)選純度為91-97%。
14.如權(quán)利要求1、2、3、4所述的的精制方法，其特征在于制備得到的芍藥苷的純度為 50-99. 9%，其中優(yōu)選純度為86% -99%,進(jìn)一步優(yōu)選純度為91-97%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種同時制備芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的提純方法，包括以芍藥藥材或芍藥提取物為原料，采用柱層析方法進(jìn)行芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的純化。本發(fā)明的精制工藝簡單，易于操作，純化效率高，精制時間短，可在同一個工藝流程中低成本、低能耗得到高純度的芍藥內(nèi)酯苷與芍藥苷，既環(huán)保，又提高了經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號A61K31/343GK102372750SQ20101024942
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月10日
發(fā)明者顧正兵 申請人:張作光