專利名稱：α-1-抗胰蛋白酶在制備用于治療慢性疲勞綜合癥的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及α-1-抗胰蛋白酶在制備用于治療慢性疲勞綜合癥的有效藥物中的 用途。
背景技術(shù)：
慢性疲勞綜合癥(CFS)是一種復(fù)雜的病癥，根據(jù)國際Fukuda標(biāo)準(zhǔn)(FukudaK等 人，The chronic fatigue syndrome -.a comprehensive approach to itsdefinition and study, Ann Intern Med. 1994 ；121 :953_959)在亞特蘭大疾病控制中心(Atlanta Center for Disease Control，⑶C)的指導(dǎo)下定義。根據(jù)這些標(biāo)準(zhǔn)，CFS的診斷是基于滿足兩個主 要標(biāo)準(zhǔn)且同時存在最少四個次要標(biāo)準(zhǔn)。主要標(biāo)準(zhǔn)1.持久的身體和心理疲勞，持續(xù)至少6個月，或新的或確定的發(fā)作的間歇性性狀， 其不是由近期的勞累引起，無法通過休息獲得緩解，且在運動時變得嚴(yán)重，并且引起患者日 ?；顒拥南惹八降膶嵸|(zhì)性降低，最終無法由患者克服。2.排除可能潛在引起慢性疲勞的其它病癥，例如內(nèi)分泌失調(diào)、傳染病、腫瘤病癥和 /或精神障礙。次要標(biāo)準(zhǔn)必須同時存在下列次要標(biāo)準(zhǔn)中的四種或以上，在疲勞出現(xiàn)后都持續(xù)六個月或以 上-注意力或短期記憶力衰退_吞咽痛-引起疼痛的頸部或腋窩腺病-肌痛-無發(fā)炎體征的多關(guān)節(jié)痛-最近發(fā)作或具有不同于以往的特征的頭痛-睡眠不能恢復(fù)體力-勞動后的不適持續(xù)24小時以上。可能會與CFS混淆的病癥為纖維肌痛(FM)，其是具有以下特征的綜合癥癥狀為 慢性全身性肌肉骨骼疼痛，但疼痛不是源自關(guān)節(jié)。根據(jù)美國風(fēng)濕病學(xué)會(American College of Rheumatology)的分類標(biāo)準(zhǔn)(The American College ofRheuma tology, 1990,Criteria for the Classification of Fibromyalgia. Report of the Multicenter Criteria Committee, Arthritis Rheum 1990 ；33 (2) : 160-172)，用于診斷 FM 的兩種基本特征是1)存在全身性疼痛，持續(xù)三個月以上；2)在18個特定點(稱為“壓痛點”)中的至少11個處，對約4kg的指壓異常敏
感。除了疼痛外，F(xiàn)M患者還經(jīng)歷一些以下癥狀睡眠障礙、腸易激綜合癥、關(guān)節(jié)僵硬和僵直、頭痛或面神經(jīng)痛、腹部不適、膀胱過敏、感覺異常、麻木或瘙癢、胸痛和肋軟骨痛(肋骨與胸 骨連接處的肌肉痛)、暈眩和惡心等。這些癥狀容易波動且不必同時出現(xiàn)。FM和CFS是兩種不同的病癥，但具有非常類似的表現(xiàn)和癥狀，這經(jīng)常會令非專業(yè) 人士困惑，但在許多患者中這兩種病癥可同時存在。幾乎80%的CFS患者都符合FM分類標(biāo) 準(zhǔn)，但只有7%到10%的FM患者符合CFS分類標(biāo)準(zhǔn)。鑒別診斷這兩種病癥且排除其它可能 的疼痛和疲勞原因?qū)τ谡_的診斷、預(yù)后和治療方法至關(guān)重要。CFS主要影響年輕人，發(fā)作高峰在20歲與40歲之間。其在女性中的發(fā)病率 是男性的 2-3 倍(Lloyd AR 等人’ Prevalence of chronic fatigue syndrome inan Australian population, Med J，1990 年 8 月；153 :522_528)，但這可能是因為各年齡 段的女性都比男性更頻繁地就醫(yī)(Henderson AS.，Care-eliciting behavior in man, J Nerv Ment Dis 1974;159:172-181)。CFS 在人群中的發(fā)病率介于 0. 4 % 與 2. 5 % 之 |、司(White PD 等 人’ Protocol for thePACE trial -.a randomised controlled trial of adaptive pacing, cognitivebehaviour therapy, and graded exercise, as supplements to standardisedspecialist medical care versus standardised specialist medical carealone for patients with the chronic fatigue syndrome/ myalgicencephalomyelitis or encephalopathy, BMC Neurol 2007, 7 :6)。在美國禾口英國， 四項研究得出0. 2%到0. 7%的估值，換句話說，每100，000人有200到700例病例。在日 本，發(fā)病率被記錄為1.5%。一般說來，視醫(yī)學(xué)、精神病學(xué)和實驗室評價的強(qiáng)度而定，估計主 要護(hù)理中心CFS的發(fā)病率是在0. 5%與2. 5%之間(澳洲皇家內(nèi)科醫(yī)學(xué)院，慢性疲勞綜合癥 臨床防治指南 2002 (The RoyalAustralasian College of Physicians. Chronic Fatigue Syndrome. ClinicalPractice Guidelines 2002))。CFS恢復(fù)的預(yù)后極差，且目前沒有通用療法被證實是治療CFS的有效選擇(Hill NF等人，Natural history of severe chronic fatigue syndrome,ArchPhys Med Rehabil 1999 ；80 (9) :1090-1094)。因此，按現(xiàn)狀看來，主要治療目標(biāo)是基于緩解癥狀。所提供的一 些治療包括認(rèn)知行為治療、漸進(jìn)性運動治療、藥物介入(例如抗病毒、抗抑郁、鎮(zhèn)靜、止痛、 抗炎藥物和其它藥物)和營養(yǎng)補(bǔ)品。然而，這些介入通常不產(chǎn)生被視為許多CFS患者所必 需的最低益處(Afari N 等人，Chronic fatigue syndrome :a review, Am J Psychiatry, 2003 ； 160 (2) :221_236/Rimes KA 等人’ Treatments for Chronic Fatigue Syndrome, Occupational Medicine 2005:5(1) ；32-39)。因此，很明顯對治療CFS的有效藥物存在需 求。CFS是一種多系統(tǒng)疾病，其病因或引發(fā)因子未知，但關(guān)于致病因子存在以下各種假 設(shè)遺傳缺陷、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、神經(jīng)肌肉和代謝紊亂、心理因素、毒劑、感染和因免疫系 統(tǒng)的慢性激活所引起的免疫不平衡(Afari N等人，Chronic fatigue syndrome a review, Am J Psychiatry, 2003 ； 160 (2) :221_236)。具體來說，基于慢性激活的免疫狀態(tài)，一些作 者提出在CFS中觀察到的臨床和免疫學(xué)異常可包括由干擾素誘發(fā)的2-5A防御路徑缺陷 (EnglebienneP 等人，Chronic Fatigue Syndrome. A Biological Approach, CRC Press LLC,2002)。干擾素(IFN)是免疫系統(tǒng)對例如細(xì)菌、病毒和寄生蟲等外部因子和癌細(xì)胞作出反 應(yīng)而天然產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。IFN刺激的兩種最重要的產(chǎn)物是蛋白激酶R(PKR)和核糖核酸酶L (RNase L)。PKR抑制病毒mRNA的翻譯，而RNase L則關(guān)閉dsRNA。兩種蛋白質(zhì)的最終目 的都是誘發(fā)感染原的凋亡。^t 1994 Suhadolnik 等人(Upregulation of the 2-5A synthetase/RNaseL antiviral pathway associated with chronic fatigue syndrome, Clin InfectDis 1994 ；18(增刊I) :S96-S104)中發(fā)現(xiàn)了 CFS患者的外周血單核細(xì)胞(PBMC)具有摩爾質(zhì)量 為37kDa的過度活躍RNase L，其是由天然形式的83kDa RNaseL通過蛋白水解產(chǎn)生。隨后 De Meirleir等人(A 37 kDa 2-5A binding proteinas a potential biochemical marker for chronic fatigue syndrome, Am J Med2000 ；108(2) :99_105)觀察至 Ij PBMC 中 37kDa 分 子與83kDa分子的濃度的比率可用于區(qū)別CFS患者與患有FM或重度抑郁癥的患者。CFS患者展現(xiàn)離子通道轉(zhuǎn)運功能障礙所特有的許多癥狀。在確定RNase L抑制劑 (RLI)屬于離子通道轉(zhuǎn)運體的ABC超家族時，考慮CFS患者發(fā)生離子通道中斷的可能性。RLI 通過與RNase L中存在的錨蛋白(ankyrin)結(jié)構(gòu)域組合而使RNase L失活。在CFS患者中 觀察到錨蛋白結(jié)構(gòu)域在RNase L裂解期間的消除，表明這些錨蛋白片段可能會與離子通道 相互作用且中斷離子通道的正常功能。這些轉(zhuǎn)運體的功能障礙將會解釋在CFS患者中所發(fā) 現(xiàn)的許多癥狀盜汗、肉狀瘤病、化學(xué)品過敏、巨噬細(xì)胞功能障礙、免疫系統(tǒng)缺陷、單胺轉(zhuǎn)運 中斷、疼痛敏感性增強(qiáng)、Th2優(yōu)勢(Th2 dominance)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、視力問題、肌肉中 的鉀流失、短暫低血糖癥和抑郁癥(Englebienne P等人，Interactionsbetween RNase L, ankyrin domain and ABC transporters as a possible originof pain,ion transport, CNS and immune disorders of chronic fatigue immunedysfunction syndrome, J Chronic Fatigue Syndrome 2001 ；8(3/4) :83_102)。彈性蛋白酶、組織蛋白酶-G和m-鈣蛋白酶是能夠引起RNase L的蛋白水解或 罾角軍白勺_ (Englebienne P 等入，Interactions between RNase L, ankyrindomain and ABC transporters as a possible origin of pain, ion transport, CNS and immune disorders of chronic fatigue immune dysfunction syndrome, J Chronic Fatigue Syndrome 2001,8(3/4) :83_102/Demetre E 等 人’ Ribonuclease L proteolysis in peripheral blood mononuclear cells ofchronic fatigue syndrome patients, J Biol Chem 2002 20 ；277 (38) :35746_35751)。這三種蛋白酶參與了對抗病原體的防御機(jī)制和炎 性過程，且在炎性反應(yīng)期間經(jīng)常發(fā)現(xiàn)其以異常高的濃度存在。在CFS的情況下，發(fā)現(xiàn)患有此 病癥的患者通常具有高濃度的彈性蛋白酶(Demetre E等人，Ribonuclease !^proteolysis in peripheral blood mononuclear cells of chronic fatiguesyndrome patients, J Biol Chem 2002 20 ；277 (38) :35746_35751/Ni js J 等人，Chronic fatigue syndrome exercise performance related to immunedysfunction, Med Sci Sports Exerc 2005 ； 37(10) 1647-1654)。Demetre E等人在證明彈性蛋白酶的特異性抑制劑能夠在很大程度上抑制在CFS 患者的PBMC培養(yǎng)物中的RNase L的蛋白水解時，證實了彈性蛋白酶在RNaseL降解中具有 重要作用。面對尋找治療CFS的有效藥物的需求，發(fā)明人進(jìn)行了非常廣泛的深入研究和測 試，因此得出本發(fā)明，其是基于使用α-1-抗胰蛋白酶(AAT)制備用于治療CFS的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
α-Ι-抗胰蛋白酶(AAT)是在肝細(xì)胞中分泌的糖蛋白，且通常在血清和大多數(shù) 組織中以高濃度存在，在其中用作絲氨酸蛋白酶抑制劑。AAT在健康受試對象的血清 中的參考值為 0. 83-2. 00g/l (Kratz A 等人，Laboratory ReferenceValues, N Engl J Med 2004 ；315 (15) =1548-1563) 0除了作為蛋白酶抑制劑的活性外，AAT還被描述成可 能具有重要的抗炎生物功能，因為其能夠顯著抑制許多炎性介質(zhì)和氧化自由基(Brantly Μ. , Alphal-antitrypsin :not just anantiprotease :extending the half-life of a natural anti-inflammatorymolecule by conjugation with polyethylene glycol,Am J Respir Cell MolBiol 2002 ；27 (6) :652_654)。AAT缺乏癥是一種遺傳疾病，其主要引起成人早期(30-40歲)的肺氣腫。第 二常見的表現(xiàn)是肝病，其可能影響新生兒、兒童和成人。較不常見的表現(xiàn)是稱為壞死性 月旨膜炎的炎性皮膚病(American Thoracic Society/EuropeanRespiratory Society Statement Standards for the diagnosis andmanagement of individuals with alpha-1 antitrypsin deficiency, Am JRespir Crit Care Med 2003;168:818-900)。當(dāng)前存在治療性AAT濃縮物，其是通過分餾人類血漿而制備，用于AAT替代療法 中以便治療缺乏這種蛋白質(zhì)且患有相關(guān)肺氣腫的受試對象。已顯示這些濃縮物可以生物 化學(xué)方式有效地將AAT的血清濃度提高到高于被認(rèn)為具有保護(hù)性的最低水平(llymol/ 1)(ffewers MD 等 人’ Replacement therapy foralphal-antitrypsin deficiency associated with emphysema, New Eng J Medl987 ;316 :1055_1062)。此夕卜，各種臨床 研究表明，AAT替代療法在臨床上可有效地減緩肺氣腫發(fā)展且降低死亡率(Seersholm N 等 入，Doesalpha-l-antitrypsin augmentation therapy slow the annual decline in FEVlin patients with severe hereditary alpha-l-antitrypsin deficiency ？, EurRespir J 1997 ;10 :2260_2263/The Alpha-I-Antitrypsin DeficiencyRegistry Study Group, Survival and FEVl decline in individuals withsevere deficiency of alpha-l-antitrypsin, Am J Respir Crit Care Med 1998 ；158 :49_59)。AAT替代療法的大量臨床經(jīng)驗證實，源自人類血漿的治療性AAT濃縮物 具有極佳的安全特征(safety profile) (ffencker M 等人，Long term treatment ofalpha-l-antitrypsin deficiency-related pulmonary emphysema with humanalpha-1-antitrypsiη, Eur Respir J 1998 ；11 428-433/Ameri can ThoracicSociety/European Respiratory Society Statement Standards for thediagnosis and management of individuals with alpha-1 antitrypsindeficiency, Am J Respir Crit Care Med 2003 ；168 :818_900)。為了檢驗AAT對彈性蛋白酶的抑制是否可以防止RNase L降解，發(fā)明人使用CFS患 者的活體外PBMC培養(yǎng)物以及AAT濃縮物進(jìn)行了各種研究?；谶@些研究，發(fā)明人證實CFS 患者的PBMC提取物顯示升高的彈性蛋白酶活性，其遠(yuǎn)高于健康受試對象的PBMC提取物。 來自6名健康受試對象的PBMC提取物顯示81U/mg提取物的平均彈性蛋白酶活性(CV = 38. 9)，最小-最大值為51-125U/mg提取物；而來自8名CFS患者的PBMC提取物顯示322U/ mg提取物的平均彈性蛋白酶活性(CV = 30. 5)，最小-最大值為193-453U/mg提取物。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)AAT能夠基本上抑制CFS患者的PBMC培養(yǎng)物的細(xì)胞內(nèi)彈性蛋白酶
6活性。將10名CFS患者的PBMC在不存在AAT和存在以下兩種不同AAT濃度的情況下培 養(yǎng)12小時3g/l和6g/l。關(guān)于無AAT的對照組中的彈性蛋白酶活性的抑制百分率，獲得如 下結(jié)果對于3mg/ml AAT培養(yǎng)物，細(xì)胞內(nèi)彈性蛋白酶活性的平均抑制率為-87. 2% (CV = 0. 09)，最低為-75. 3%，最高為-95. 4% ；而對于6mg/ml AAT培養(yǎng)物，細(xì)胞內(nèi)活性的平均抑 制率為-91.0% (CV = 0.08)，最低為-76. 1%，最高為-97.4%。此外，發(fā)明人證實了 AAT可防止CFS患者的PBMC培養(yǎng)物中的83kDa RNaseL降解產(chǎn) 生過度活躍形式的37kDa RNase L。將2名健康受試對象的PBMC和2名CFS患者的PBMC 在不存在AAT和存在3g/l AAT的情況下培養(yǎng)12小時。在2名健康受試對象的PBMC培養(yǎng)物 中，在這兩個培養(yǎng)物之間的RNase L降解分析中未觀察到顯著差異。在無AAT的情況下培 養(yǎng)PBMC之后，83kDa RNase L與37kDaRNase L的比率分別為0. 3和0. 4，而在存在AAT的情 況下培養(yǎng)之后，83kDa RNaseL與37kDa RNase L的比率分別為0. 2和0. 3。這兩個值都低 于0. 5的極限值，該極限值被視作表明83kDa RNase L發(fā)生蛋白水解。在CFS患者的PBMC 培養(yǎng)物中，發(fā)現(xiàn)在存在AAT的情況下，RNase L的降解降低80%。在無AAT的情況下培養(yǎng)2 名CFS患者的PBMC之后，83kDa RNase L與37kDa RNase L的比率分別為1. 4禾口 2. 4，而在 存在AAT的情況下培養(yǎng)之后，83kDa RNase L與37kDa RNaseL的比率分別為0. 2和0. 6。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)AAT激活2-5A合成酶路徑中所涉及的基因的表達(dá)，使得施用外源AAT 可使CFS患者的PBMC中的RNase L重新恢復(fù)正?；钚郧曳乐蛊浒l(fā)生蛋白水解。在不存在 和存在以下兩種不同AAT濃度的情況下培養(yǎng)6名CFS患者的PBMC 0. 5g/l和3. Og/Ι。隨 后用 Genechips Human Genome U133 Plus 2. 0 (Affymetrix)系統(tǒng)提取和分析 RNA。與不 存在AAT的培養(yǎng)物相比，存在0. 5g/l和3. Og/1 AAT的培養(yǎng)物中編碼2，5-寡腺苷酸合成酶 (該酶負(fù)責(zé)合成2-5A分子，因此是RNaseL激活因子)的基因的表達(dá)分別增加2. 9倍和3. 2 倍。因此，用AAT刺激2，5-寡腺苷酸合成酶的表達(dá)可重新恢復(fù)RNase L自身的活性且同時 有助于防止其發(fā)生蛋白水解。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)AAT抑制金屬硫蛋白(metallothionine)的表達(dá)，因此施用外源AAT 可降低CFS患者的PBMC的促炎性路徑的激活。在不存在和存在以下兩種不同AAT濃度的情 況下培養(yǎng) 6 名 CFS 患者的 PBMC :0.5g/l 和 3. Og/Ι。隨后用 Genechips Human Genome U133 Plus 2. 0 (Affymetrix)系統(tǒng)提取和分析RNA。結(jié)果表示為在存在AAT的情況下的基因表達(dá) 與不存在AAT的情況下的基因表達(dá)的比率。在存在AAT的情況下培養(yǎng)之后，編碼金屬硫蛋白 的各種基因的表達(dá)減少。具體來說，與不存在AAT的培養(yǎng)物相比，存在0. 5g/l和3. Og/1 AAT 的培養(yǎng)物中金屬硫蛋白2A、金屬硫蛋白IX、金屬硫蛋白1H、金屬硫蛋白IF和金屬硫蛋白IE 的表達(dá)分別平均減少2. 2倍和4. 5倍。如上所述，金屬硫蛋白缺乏會減少促炎性細(xì)胞因子 (ILlb、IL6、TNFa)的產(chǎn)生(Itoh N 等人，Cytokine-induced metallothionine expression and modulation of cytokineexpression by metallothionine， Yakugaku Zasshi 2007 ； 127(4) =685-694)。因此，AAT所引起的表達(dá)抑制可產(chǎn)生相同的作用且遏制PBMC中的促炎 性路徑。此外，金屬硫蛋白還在一氧化氮(NO)產(chǎn)生中扮演非常重要的角色，NO是免疫介質(zhì)， 在 CFS 患者中以高濃度存在(Kurup RK 等人，Hypothalamic digoxin, cerebral chemical dominance and myalgic encephalomyelitis, Int JNeurosci 2003 ；113 (5) :683_701)。 AAT誘導(dǎo)的金屬硫蛋白表達(dá)的減少會引起NO產(chǎn)生的減少，這是AAT在CFS患者中的另一種 有益作用。
發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)AAT激活編碼AAT的基因的表達(dá)，使得施用外源AAT可促進(jìn)其 在CFS患者的PBMC中的自身表達(dá)。在不存在和存在以下兩種不同AAT濃度的情況下培 養(yǎng) 6 名 CFS 患者的 PBMC :0. 5g/l 和 3. Og/Ι。隨后用 Genechips HumanGenome U133 Plus
2.O (Affymetrix)系統(tǒng)提取和分析RNA。結(jié)果表示為在存在AAT的情況下的基因表達(dá)與 不存在AAT的情況下的基因表達(dá)的比率。與不存在AAT的培養(yǎng)物相比，存在0.5g/l和
3.Og/1 AAT的培養(yǎng)物中編碼AAT的基因(SERPINA1)的表達(dá)分別平均增加1. 4倍和2. O 倍。雖然AAT主要在肝細(xì)胞中合成，但Perlmutter DH等人也描述了其在單核細(xì)胞中的表 達(dá)(The eellulardefect in alpha 1-proteinase inhibitor(alpha 1-PI)deficiency isexpressed in human monocytes and in Xenopus oocytes injected with humanliver mRNA,Proc Natl Acad Sci U S A, 1985 ；82 (20) :6918_6921)。因此，細(xì)胞內(nèi) AAT 的表達(dá)禾口 AAT的存在誘導(dǎo)的表達(dá)可對CFS患者的PBMC培養(yǎng)物的彈性蛋白酶具有抑制作用。此外，應(yīng) 當(dāng)相信AAT在PBMC細(xì)胞中內(nèi)在化之后可直接抑制細(xì)胞內(nèi)彈性蛋白酶，如在其他類型的細(xì)胞 所:yi白勺iP樣(Zhang B等人，Alphal—antitrypsin protects beta-cells from apoptosis, Diabetes 2007 ；56 (5) :1316_1323)。因此，CFS患者的PBMC培養(yǎng)物中的這兩種彈性蛋白酶 抑制機(jī)制可同時存在，甚至產(chǎn)生累積效應(yīng)。AAT迄今已知的應(yīng)用是嚴(yán)格基于補(bǔ)償表現(xiàn)為肺病(肺氣腫)或炎性皮膚病(脂膜 炎)的這種蛋白質(zhì)的天然缺乏，但來源于這些實驗的含AAT藥物的潛在新型治療應(yīng)用與這 些已知應(yīng)用毫無關(guān)聯(lián)，因此以上發(fā)現(xiàn)更加令人吃驚。雖然就在CFS治療中含有AAT的新型藥物所顯現(xiàn)的形式而言，發(fā)明人不希望受限 于任何假設(shè)，但他們已經(jīng)以非限制性方式確立了以下假設(shè):AAT在引起CFS相關(guān)癥狀的免疫 細(xì)胞的控制中和免疫系統(tǒng)的相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控中起重要作用。CFS可用從人類血漿純化或由重組或轉(zhuǎn)基因技術(shù)產(chǎn)生的治療性AAT濃縮物治療。 治療也可用含有足量AAT以便獲得最小劑量的血漿或其它治療產(chǎn)品進(jìn)行。和其它蛋白質(zhì)一樣，并不認(rèn)為獲得所需結(jié)果必需完全AAT分子的存在。因此，含有 自AAT分子的對應(yīng)序列獲得的部分氨基酸序列的分子可用于治療CFS。這些分子可從人類 血漿獲得，或通過合成方法或重組或轉(zhuǎn)基因技術(shù)產(chǎn)生。本發(fā)明還涉及一種治療CFS的方法，其包含對患有CFS或有發(fā)生CFS風(fēng)險的患者 施用治療有效量的AAT，以及一種或一種以上醫(yī)藥學(xué)上的惰性或活性載劑。
具體實施例方式本發(fā)明的治療方案包括周期性和重復(fù)施用AAT，以便減少或消除CFS癥狀。以1 天與31天之間的頻率，每千克(kg)體重輸注6mg或以上的AAT劑量被視為足以治療CFS。 AAT的優(yōu)選劑量是以1天與31天之間的頻率，每千克體重輸注15mg到360mg。更優(yōu)選的劑 量是每周每千克體重輸注25mg到60mg，或依據(jù)直到下個劑量的預(yù)期時間間隔按比例調(diào)整 的這些量的倍數(shù)。或者，本發(fā)明包括為了在施用24小時后，使血清中AAT的期望含量達(dá)到基礎(chǔ)含量 的8倍而制定的治療方案。根據(jù)本發(fā)明的該實施方案，AAT可通過腸胃外注射來施用，且根據(jù)一優(yōu)選實施方 案施用是靜脈內(nèi)進(jìn)行，但也可肌肉內(nèi)或真皮內(nèi)進(jìn)行?；蛘撸珹AT可通過吸入來施用。視給藥途徑而定，AAT制劑被制成于醫(yī)藥學(xué)上可接受的媒劑或載劑中的溶液或懸浮液形式。這 些媒劑的適當(dāng)實例包括注射用水、注射用無菌水和其它水性媒劑(例如氯化鈉注射液、林 格液(Ringer’ s solution)注射液、右旋糖注射液、右旋糖和氯化鈉注射液、林格乳酸鹽 (Ringer's lactate)注射液)；可混合于水的媒劑(例如乙醇、聚乙二醇、丙二醇)；非水性 媒劑(例如玉米油、棉籽油、花生油和芝麻油)。對其它賦形劑、防腐劑、緩沖溶液、抗微生物 劑和類似產(chǎn)品的需求和選擇是在所屬領(lǐng)域技術(shù)人員的范圍內(nèi)，且將取決于各種因素，包括 給藥系統(tǒng)和途徑、所需保存期限以及儲存和運輸條件。實施例在等待活體外結(jié)果的同時，發(fā)明人獲準(zhǔn)進(jìn)行了體恤授權(quán)使用(compassionate use)試驗，將基于AAT的制劑施予被診斷患有CFS的患者。在2003年被診斷患有CFS的女性患者達(dá)到了 Fukuda診斷標(biāo)準(zhǔn)，且其它誘導(dǎo)慢性 疲勞的醫(yī)學(xué)過程(例如內(nèi)分泌失調(diào)、傳染病、腫瘤病癥和/或精神障礙)已被排除在外。在 用AAT濃縮物開始治療之前，患者PBMC中的彈性蛋白酶濃度為1459U/mg (每毫克PBMC提取 物中的活性單位)；在功能儲備評估測試中，患者展現(xiàn)17. 2ml/kg/min(理論值的63. 5% ) 的最大耗氧量、64瓦(理論值的54. 0% )的最大功率、149跳(理論值的87. 6% )的最大 心率；且在神經(jīng)認(rèn)知功能障礙研究中，患者顯示非常嚴(yán)重的認(rèn)知損害。通過靜脈內(nèi)輸注基于 AAT的制劑(60毫克/千克體重，每周一次)持續(xù)8周，對患者進(jìn)行治療。在治療結(jié)束時，患 者PBMC中的彈性蛋白酶濃度為134U/mg(每毫克PBMC提取物中的活性單位)；在功能儲備 評估測試中，患者展現(xiàn)16. 4ml/kg/min(理論值的60. 6% )的最大耗氧量、85瓦(理論值的 71. 7% )的最大功率、151跳(理論值的88. 8% )的最大心率；且在神經(jīng)認(rèn)知功能障礙研究 中，患者顯示非常嚴(yán)重的認(rèn)知損害?？偠灾?，用基于AAT的制劑治療后，患者顯示明顯的 臨床改善，重新返回工作崗位，經(jīng)歷較少的疲勞，體育鍛煉的忍耐力得到提高，且認(rèn)知功能 障礙稍微有所減輕。本發(fā)明因此證實，通過本發(fā)明CFS患者可用基于AAT制備的藥物有效地治療。這些 患者將受免疫細(xì)胞的慢性炎癥影響，且根據(jù)本發(fā)明，AAT抑制彈性蛋白酶且因此避免RNase L降解，從而防止離子通道失去管制，而離子通道失去管制被認(rèn)為是造成CFS相關(guān)癥狀學(xué)的 原因。此外且根據(jù)活體外獲得的結(jié)果，AAT可調(diào)控免疫系統(tǒng)的相關(guān)特定基因的表達(dá)，以便重 新恢復(fù)免疫系統(tǒng)的正常功能且降低促炎性路徑的激活。雖然已通過優(yōu)選實施方案的實施例描述了本發(fā)明，但這些實施例不應(yīng)理解為限制 本發(fā)明，本發(fā)明是通過對以下權(quán)利要求的最寬的解釋來限定。
權(quán)利要求
α 1 抗胰蛋白酶在制備用以治療慢性疲勞綜合癥的藥物中的用途，所述藥物包括可對人類施用的治療形式的α 1 抗胰蛋白酶或衍生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其包括使用血漿或其它治療形式，其α-1-抗胰蛋白酶 含量足以獲得在1天與31天之間的頻率下每千克體重6mg或以上α 抗胰蛋白酶的劑量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述α-1-抗胰蛋白酶是從人類血漿純化的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述α-1-抗胰蛋白酶或含有其部分氨基酸序列 的分子通過合成、轉(zhuǎn)基因或重組技術(shù)產(chǎn)生。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用α-1-抗胰蛋白酶制備用于治療慢性疲勞綜合癥的有效藥物。此外，本發(fā)明涉及使用血漿或其它治療形式，其α-1-抗胰蛋白酶含量足以獲得1天與31天之間的頻率下的每千克體重6mg或以上α-1-抗胰蛋白酶的劑量。
文檔編號A61P39/00GK101934071SQ20101021684
公開日2011年1月5日 申請日期2010年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月30日
發(fā)明者喬斯·阿萊格里馬丁, 安娜·加西亞·昆塔納 申請人:基立福有限公司