專(zhuān)利名稱(chēng)：：貫眾烏梅中藥組合物制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種貫眾烏梅中藥組合物、其制備方法及應(yīng)用。技術(shù)背景細(xì)菌耐藥性的普遍產(chǎn)生和耐藥感染已經(jīng)成為影響現(xiàn)代畜牧業(yè)發(fā)展的一大難題。在養(yǎng)殖業(yè)方面，期望通過(guò)合理用藥來(lái)減少耐藥菌的產(chǎn)生并通過(guò)新藥的開(kāi)發(fā)來(lái)應(yīng)對(duì)不斷產(chǎn)生的耐藥菌，而這恰好為中藥抗感染研究提供了機(jī)會(huì)。畜禽重大疫病在全球不斷爆發(fā)，禽流感、口蹄疫等重大公共衛(wèi)生疾病嚴(yán)重影響了畜牧業(yè)的發(fā)展。因此，抗家禽細(xì)菌性疾病和病毒性疾病藥物的研究已經(jīng)成為當(dāng)務(wù)之急。貫眾始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為多年生常綠草本，味苦，性微寒，有小毒，有驅(qū)蟲(chóng)、止血、清熱解毒的功效。近代醫(yī)學(xué)證明其具有抗菌、抗腫瘤、抗流感病毒等作用，采用貫眾與其它中草藥合理配伍對(duì)預(yù)防和治療病毒性疾病屢見(jiàn)報(bào)道，它作為我國(guó)的傳統(tǒng)醫(yī)藥越來(lái)越受到重視。烏梅(FructusMume)是由薔薇科植物梅干燥未成熟果實(shí)加工而成，別名有梅實(shí)、熏梅、桔梅肉。該植物味酸、性澀、平，具有斂肺止咳、澀腸止瀉、固崩止血、生津止渴、安蛔等功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明烏梅主要功能為抑菌、鎮(zhèn)咳、安蛔、抗腫瘤、抗過(guò)敏、抗氧化和抗生育等。有報(bào)道稱(chēng)從烏梅中分離出來(lái)的3-羥基-3-羧基戊二酸二甲酯對(duì)肉雞大腸桿菌具有一定的預(yù)防效果，體外最小抑菌濃度為3.125mg/mL。目前，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)關(guān)于貫眾和烏梅提取物一起配伍的報(bào)道，也未見(jiàn)二者提取物在防治家禽細(xì)菌性疾病和病毒性疾病方面療效的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種能夠有效預(yù)防和治療家禽細(xì)菌性疾病和病毒性疾病的貫眾烏梅中藥組合物。本發(fā)明的另一目的是提供上述貫眾烏梅中藥組合物的制備方法。本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供上述貫眾烏梅中藥組合物在制備用于預(yù)防和治療家禽細(xì)菌性疾病和病毒性疾病的藥物中的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種貫眾烏梅中藥組合物，由下述重量份的原料藥制成貫眾2070、烏梅2040、肉桂酸1040。優(yōu)選地，前述的中藥組合物，由下述重量份的原料藥制成貫眾3060、烏梅2040、肉桂酸2030。更優(yōu)選地，前述的中藥組合物，貫眾和烏梅的重量比為32。前述的中藥組合物，其還包括常規(guī)的輔料如無(wú)水乙醇、吐溫-20或吐溫-80。前述的中藥組合物，其還包括常規(guī)的藥用賦形劑如淀粉、糊精、乳糖、甜菊苷、蔗糖、甘草甜素、果葡糖漿、三氯蔗糖、木糖醇、山梨糖醇、葡萄糖、預(yù)膠化淀粉和/或羧甲基淀粉鈉。前述的中藥組合物，是由貫眾的醇提物和烏梅的醇提物按比例組成的混合物或?yàn)趺泛拓灡姲幢壤旌虾筮M(jìn)行醇提的提取物。前述的中藥組合物，其為片劑、顆粒劑、口服液、注射劑或凍干粉針劑。上述貫眾烏梅中藥組合物口服液的制備方法，其包括方法I貫眾烏梅提取物口服液的單獨(dú)制備方法，其包括步驟1)貫眾提取物的制備a、稱(chēng)取適量貫眾，粉碎，用48倍體積6080%乙醇浸泡8小時(shí)后，將貫眾以及乙醇浸提液煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；b、向倒出浸提液的貫眾中加入4倍體積60%80%乙醇，煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；C、重復(fù)步驟b2次；d、合并上述步驟得到的上清液，減壓濃縮，得到浸膏備用；2)烏梅提取物的制備a、稱(chēng)取適量烏梅，用48倍體積6080%乙醇浸泡8小時(shí)后，將烏梅以及乙醇浸提液煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；b、向倒出浸提液的烏梅中加入4倍體積60%80%乙醇，煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；C、重復(fù)步驟b2次；d、合并上述步驟得到的上清液，減壓濃縮，得到浸膏備用；3)貫眾烏梅口服液的制備分別用75%酒精溶解貫眾、烏梅提取物浸膏，加入吐溫-20，然后加入20%重量肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液，搖勻即得；其中，75%酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20的用量為終體積的40%，貫眾、烏梅提取物與肉桂酸按照重量比645配伍。方法II貫眾烏梅提取物口服液的混合制備方法，其包括步驟1)貫眾烏梅提取物的制備a、按照貫眾和烏梅的重量比為32分別稱(chēng)取原料藥，用48倍體積6080%乙醇浸泡8小時(shí)后，將貫眾、烏梅以及乙醇浸提液煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；b、向倒出浸提液的貫眾、烏梅中加入4倍體積60%80%乙醇，煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；C、重復(fù)步驟b2次；d、合并上述步驟得到的上清液，減壓濃縮，得到浸膏備用；2)貫眾烏梅口服液的制備用75%酒精溶解貫眾、烏梅混合提取物浸膏，加入20%重量肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液，然后加入吐溫-20，搖勻即得；其中，75%酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20的用量為終體積的40%，貫眾、烏梅混合提取物與肉桂酸按照重量比21配伍。上述貫眾烏梅中藥組合物在制備用于預(yù)防和治療家禽細(xì)菌性疾病和病毒性疾病的藥物中的應(yīng)用，其中，所述的家禽細(xì)菌性疾病包括大腸桿菌、衣原體所致疾病，所述的家禽病毒性疾病包括法氏囊病毒所致疾病、禽流感病毒，特別是IBDVLX毒株、禽流感H9N2毒株所致疾病。具體方法為按照每天200400mg/Kg體重的方式對(duì)家禽喂藥，連續(xù)4_5天飲水或拌料給藥。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于(1)首次將貫眾提取物和烏梅提取物進(jìn)行科學(xué)配伍，得到本發(fā)明抗家禽細(xì)菌性疾病和病毒性疾病的中藥組合物產(chǎn)品；(2)本品貫眾烏梅中藥組合物對(duì)家禽細(xì)菌性疾病和病毒性疾病，特別針對(duì)大腸桿菌、衣原體所致家禽疾病以及法氏囊病毒、禽流感所致家禽疾病具有良好的預(yù)防和治療效果；(3)本發(fā)明貫眾烏梅中藥組合物，其原料易得且成本較低，制備工藝簡(jiǎn)便。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1貫眾提取物的制備a、取IKg貫眾，粉碎，用6倍體積75%乙醇浸泡8小時(shí)后，將貫眾以及乙醇浸提液倒入三口燒瓶并放入電子調(diào)溫電熱套上，煮沸后保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；b、向倒出浸提液的貫眾中加入4倍體積75%乙醇，煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；C、重復(fù)步驟b2次；d、合并上清液，減壓濃縮，得到202克浸膏備用，得率20.2%。實(shí)施例2烏梅提取物的制備a、取IKg烏梅，用6倍體積75%乙醇浸泡8小時(shí)后，將烏梅以及乙醇浸提液倒入三口燒瓶并放入電子調(diào)溫電熱套上，煮沸后保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；b、向倒出浸提液的烏梅中加入4倍體積75%乙醇，煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；C、重復(fù)步驟b2次；d、合并上清液，減壓濃縮，得到307g浸膏備用，得率在30.7%左右。實(shí)施例3復(fù)方貫眾烏梅口服液的制備分別用75%酒精溶解貫眾提取物和烏梅提取物，加入吐溫-20，然后加入20wt%肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液。其中75%酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20占40%，水占30%。藥物由貫眾、烏梅提取物浸膏與肉桂酸按照重量比915配伍制成有效成分貫眾烏梅的藥物濃度為200mg/mL的液體。復(fù)方為深褐色液體，長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存有輕搖易散的浸膏，pH34，相對(duì)密度為1.051.08(要求應(yīng)不低于1.01)。實(shí)施例4復(fù)方貫眾烏梅口服液的制備分別用75%酒精溶解貫眾提取物和烏梅提取物，加入吐溫-20，然后加入20wt%肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液。其中75%酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20/吐溫-80占40%，水占30%。藥物由貫眾、烏梅提取物浸膏與肉桂酸按照重量比735配伍制成有效成分貫眾烏梅的藥物濃度為200mg/mL的液體。復(fù)方為深褐色液體，長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存有輕搖易散的浸膏，PH34，相對(duì)密度為1.051.08(要求應(yīng)不低于1.01)實(shí)施例5復(fù)方貫眾烏梅口服液的制備分別用75%酒精溶解貫眾提取物和烏梅提取物，加入吐溫-20/吐溫-80，然后加入20wt%肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液。其中75%酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20/吐溫-80占40%，水占30%。藥物由貫眾、烏梅提取物浸膏與肉桂酸按照重量比645配伍制成有效成分貫眾烏梅的藥物濃度為200mg/mL的液體。復(fù)方為深褐色液體，長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存有輕搖易散的浸膏，PH34，相對(duì)密度為1.051.08(要求應(yīng)不低于1.01)實(shí)施例6復(fù)方貫眾烏梅口服液的制備分別用75%酒精溶解貫眾提取物和烏梅提取物，加入吐溫-20/吐溫-80，然后加入20wt%肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液。其中75%酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20/吐溫-80占40%，水占30%。藥物由貫眾、烏梅提取物浸膏與肉桂酸按照重量比111配伍制成有效成分貫眾烏梅的藥物濃度為200mg/mL的液體。復(fù)方為深褐色液體，長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存有輕搖易散的浸膏，PH34，相對(duì)密度為1.051.08(要求應(yīng)不低于1.01)。實(shí)施例7復(fù)方貫眾烏梅口服液的制備分別用75%酒精溶解貫眾提取物和烏梅提取物，加入吐溫-20，然后加入20wt%肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液。其中酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20占40%，水占30%。藥物由貫眾、烏梅提取物浸膏與肉桂酸按照重量比375配伍制成有效成分貫眾烏梅的藥物濃度為200mg/mL的液體。復(fù)方為深褐色液體，長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存有輕搖易散的浸膏，pH34，相對(duì)密度為1.051.08(要求應(yīng)不低于1.01)實(shí)施例8復(fù)方貫眾烏梅提取物的制備a、取360克貫眾粉碎，加入240克烏梅，用6倍體積75%乙醇浸泡8小時(shí)后，將貫眾、烏梅以及乙醇浸提液倒入三口燒瓶并放入電子調(diào)溫電熱套上，煮沸后保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；b、向倒出浸提液的貫眾、烏梅中加入4倍體積75%乙醇，煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；C、重復(fù)步驟b2次；d、合并上述步驟得到的上清液，減壓濃縮，得到144g浸膏備用，得膏率為24%。實(shí)施例9復(fù)方貫眾烏梅口服液的制備用75%酒精溶解貫眾和烏梅混合提取物，加入吐溫-20/吐溫-80，然后加入20wt%肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液。其中75%酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20/吐溫-80占40%，水占30%。藥物由貫眾烏梅混合提取物浸膏與肉桂酸按照重量比21配伍制成有效成分貫眾烏梅的藥物濃度為200mg/mL的液體。復(fù)方為深褐色液體，長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存有輕搖易散的浸膏，PH34，相對(duì)密度為1.051.08(要求應(yīng)不低于1.01)實(shí)施例10復(fù)方貫眾烏梅顆粒的制備將實(shí)施例8制得的貫眾烏梅混合提取物50g、糊精150g、蔗糖50g充分混合，制成顆粒，烘干，整粒，過(guò)16目篩，搖勻即得。實(shí)驗(yàn)例1貫眾烏梅制劑組方防治雞法氏囊病組方篩選1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20日齡雛雞隨機(jī)分為8組，每組10只。1.2藥物分組貫眾烏梅37組(實(shí)施例7)、貫眾烏梅11組(實(shí)施例6)、貫眾烏梅32組(實(shí)施例5)、貫眾烏梅73組(實(shí)施例4)、貫眾烏梅91組(實(shí)施例3)、卵黃抗體組(洛陽(yáng)普萊柯生物工程有限公司，批號(hào)080324)、感染對(duì)照組、健康對(duì)照組。1.3毒株和攻毒人工感染毒株IBDVLX株(北京市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所)，組織勻漿液每只雛雞點(diǎn)眼、滴鼻共0.2mL。(參考LiuJ,ZhouJ，KwangJ.VirusGenes.2002,24135-47)1.4給藥方式攻毒24h后開(kāi)始用藥，連續(xù)使用5天。1.5評(píng)價(jià)指標(biāo)1.5.1臨床發(fā)病特點(diǎn)和體重試驗(yàn)期間，每天觀察試驗(yàn)雞的精神、食欲、活動(dòng)及糞便情況，并做好記錄，在試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，將試驗(yàn)雞逐只稱(chēng)重，計(jì)算相對(duì)增重率。1.5.2出血評(píng)價(jià)用藥結(jié)束后第7天，剖檢，并逐個(gè)觀察法氏囊的病變與肌肉出血情況，并根據(jù)病變與出血程度進(jìn)行評(píng)分計(jì)算分值。剖檢觀察法氏囊出血程度以及是否有滲出，腎臟是否腫脹，肌胃腺胃交界處是否出血，胸肌腿肌是否條帶出血紋，最后計(jì)算病變指數(shù)減少率。試驗(yàn)分組及藥物用量情況如表1所示。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1不同組方對(duì)體重和成活率的影響在成活率方面，從表2可以看出，貫眾烏梅37組、貫眾烏梅11組、貫眾烏梅32組、貫眾烏梅73組、貫眾烏梅91組成活率分別為70%，90%，100%，80%和80%。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)貫眾烏梅37組、貫眾烏梅91組與卵黃抗體組相比，結(jié)果差異不顯著，但貫眾烏梅32組與卵黃抗體組相比差異顯著(P<0.05)。相對(duì)增重率方面，貫眾烏梅37組、貫眾烏梅11組、貫眾烏梅32組、貫眾烏梅73組、貫眾烏梅91組分別為13.5%，14.0%，46.7%，44.4%和28.7%，卵黃抗體組為50.3%。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)性檢驗(yàn)分析貫眾烏梅32組、貫眾烏梅73組與卵黃抗體組差異不顯著，但以上三組與貫眾烏梅91組、貫眾烏梅11組、貫眾烏梅37組相比差異顯著(P<0.05)。表2體重變化以及存活率<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注相對(duì)增重=試驗(yàn)后體重_試驗(yàn)前體重；相對(duì)增重率=試驗(yàn)組平均增重/空白對(duì)照組平均增重X100%；Α_Β同一列中字母標(biāo)識(shí)不同為差異顯著(P<0.05)2.2不同組方對(duì)靶器官病變、免疫器官指數(shù)的影響結(jié)果見(jiàn)表3，貫眾烏梅37組、貫眾烏梅11組、貫眾烏梅32組、貫眾烏梅73組以及貫眾烏梅91組，各組靶器官相對(duì)病變減少率分別為59.0%，58.2%，93.5%，57.4%和53.3%。貫眾烏梅32組與卵黃抗體組相比差異顯著(P<0.05)。此夕卜，法氏囊平均指數(shù)貫眾烏梅32組與卵黃抗體組差異不顯著。表3不同組方對(duì)病變和免疫器官指數(shù)影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>提取物7:381.6357.4α3.5892.514提取物9:181.7853.3α2.8341.828卵黃抗體組81.1370.5Β3.0722.839感染對(duì)照組63.8303.3971.999空白對(duì)照組10_0_L890_5.670注Α_Β同一列中字母標(biāo)識(shí)不同為差異顯著(P<0.05)；相對(duì)病變減少率=感染對(duì)照組綜合病變指數(shù)-試驗(yàn)組綜合病變指數(shù)/感染對(duì)照組綜合病變指數(shù)X100%因此，從以上成活率、相對(duì)增重率、病變減少率三個(gè)方面，可以看出貫眾烏梅32提取物具有較好的治療法氏囊效果，且優(yōu)于卵黃抗體組。因此，藥物確定貫眾與烏梅的配比關(guān)系為32ο實(shí)驗(yàn)例2貫眾烏梅不同劑量組對(duì)人工感染法氏囊病的治療驗(yàn)證效果1材料和方法1.1動(dòng)物20日齡雛雞隨機(jī)分為6組，每組15只。1.2感染毒株和劑量人工感染毒株IBDVLX株(北京市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所)，組織勻漿液每只雛雞點(diǎn)眼、滴鼻共0.2mL。24h后開(kāi)始用藥，連續(xù)使用5天。1.3藥物分組實(shí)施例5中的藥物(貫眾烏梅32組)高劑量組、中劑量組和低劑量組、卵黃抗體組(洛陽(yáng)普萊柯生物工程有限公司，批號(hào)080324)、感染對(duì)照組、健康對(duì)照組。隨機(jī)每組15只雞，具體分組情況及處理如表4所示。1.4評(píng)價(jià)指標(biāo)成活率和體重增重指標(biāo)試驗(yàn)期間，每天觀察試驗(yàn)雞的精神、食欲、活動(dòng)及糞便情況，并做好記錄，在試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，將試驗(yàn)雞逐只稱(chēng)重，計(jì)算相對(duì)增重率。病變指數(shù)評(píng)價(jià)用藥結(jié)束2天后剖檢，并逐個(gè)觀察內(nèi)臟器官病變與肌肉出血情況，并根據(jù)病變與出血程度進(jìn)行評(píng)分計(jì)算分值。剖檢觀察法氏囊出血程度以及是否有滲出，腎臟是否腫脹，肌胃腺胃交界處是否出血，胸肌腿肌是否條帶出血。表4試驗(yàn)分組情況及處理<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2實(shí)驗(yàn)結(jié)果從表5可以看出，貫眾烏梅高、中、低三個(gè)劑量組的相對(duì)增重率分別為91.7%，117.4%,79.8%，成活率分別為100%,86.6%和80%。表5貫眾烏梅提取物對(duì)雞成活率和增重的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，用藥各組的存活率高于感染對(duì)照組，其中復(fù)方高劑量組與卵黃抗體組的存活率最高。表6顯示高劑量組、中劑量組的法氏囊病變減少率顯著性高于卵黃抗體組(P<0.05)，高劑量組的法氏囊指數(shù)也顯著高于卵黃抗體組(P<0.05)。表6貫眾烏梅提取物對(duì)人工感染雞病變指數(shù)的影響存活數(shù)法氏囊指~脾臟指數(shù)~~法氏囊病變指法氏囊病變減_^_^_少率(％)高劑量組151.423.06191.6中劑量組131.203.02283.3低劑量組121.202.85375.0卵黃抗體組151.232.86558.3感染對(duì)照組91.142.53120健康對(duì)照組15_L28_136_0_注病變積分減少率=(感染對(duì)照組病變積分_試驗(yàn)組病變積分)/感染對(duì)照組病變積分；法氏囊指數(shù)=法氏囊體重/體重；脾指數(shù)=脾臟重量/體重實(shí)驗(yàn)例3貫眾烏梅對(duì)人工感染大腸桿菌的治療驗(yàn)證試驗(yàn)1材料和方法1.1動(dòng)物20日齡海蘭褐雛雞隨機(jī)分為6組，每組15只。1.2.藥物和分組實(shí)施例5的藥物高劑量組(400mg/Kg)、中劑量組(200mg/Kg)、低劑量組(100mg/Kg)、利好組(作為陽(yáng)性對(duì)照組，20%復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉可溶性粉，四川拜耳動(dòng)物保健有限公司，批號(hào)2008102409)、感染對(duì)照組(感染不給藥)、空白對(duì)照組(不感染，不給藥)，每組15只。1.3攻毒腹腔注射大腸桿菌臨床分離株015(半數(shù)致死量為8XIO8CFU)，0.5mL/只，攻毒后立即給藥，按表7所示口服灌胃，連續(xù)給藥5天，分上、下午兩次給藥。停藥觀察3天后剖檢。(參考張發(fā)明，李應(yīng)超，李樹(shù)梅，斯建勇，何誠(chéng).科技導(dǎo)報(bào)，2008，26，71-74)1.4評(píng)價(jià)指標(biāo)死亡率凡在試驗(yàn)期間，出現(xiàn)大腸桿菌病癥狀并死亡，剖檢后氣囊、肝臟、心臟有典型病變特征，病料能分離出大腸桿菌，判斷為大腸桿菌感染死亡，計(jì)算死亡率。相對(duì)增重率根據(jù)試驗(yàn)開(kāi)始及結(jié)束時(shí)每只雞的體重，計(jì)算增重及每組雞的平均增重，并以健康對(duì)照組增重為100%，各組增重與之相比得到各組相對(duì)增重率。大腸桿菌檢出率實(shí)驗(yàn)結(jié)束后剖檢存活雞，觀察心包炎、肝周炎等情況，并取肝臟，無(wú)菌取材后分離培養(yǎng)大腸桿菌，統(tǒng)計(jì)肝臟大腸桿菌檢出率情況。表7試驗(yàn)分組及給藥情況分組_M_剣量/Kg體重_給藥次數(shù)高劑量組15400mg2次/天中劑量組15200mg2次/天低劑量組15IOOmg2次/天利好對(duì)照組1540.0mg2次/天感染對(duì)照組.15感染，不給藥空白對(duì)照組_15_不感染，不給藥_2結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表8所示，在成活率方面，復(fù)方高、中、低三個(gè)劑量組成活率分別為60%，53.3%和46.6%，利好對(duì)照組為80%，中劑量組、低劑量組與利好組差異顯著。相對(duì)增重率分別為49.3%,68.8%和26.7%，利好對(duì)照組為67.3%，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，中劑量組與利好對(duì)照組差異不顯著。表8對(duì)雞生產(chǎn)性能和成活率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>可見(jiàn)，貫眾烏梅提取物按400mg/Kg口服，連續(xù)5天可以降低人工感染雞大腸桿菌引起的死亡率，具有一定的療效，可以部分替代抗菌素治療大腸桿菌。實(shí)驗(yàn)例4貫眾烏梅提取物對(duì)臨床衣原體與大腸桿菌混合感染的療效觀察1材料和方法1.1動(dòng)物28日齡發(fā)病的肉雞，根據(jù)臨床癥狀、剖檢病變和實(shí)驗(yàn)室診斷為該病是由衣原體引起的呼吸道疾病，并繼發(fā)大腸桿菌病。1.2測(cè)試藥物和分組實(shí)施例3、5、6所配制的藥物。從發(fā)病雞群隨機(jī)挑選病雞分成4組，每組20只，分別為復(fù)方貫眾烏梅11口服液、復(fù)方貫眾烏梅32口服液、復(fù)方貫眾烏梅91口服液以及5%鹽酸強(qiáng)力霉素(商品名為恒基普救康，天津恒基利德有限公司，批號(hào)20090305)對(duì)照組。各組采用飲水給藥，連續(xù)使用5天，分組及用藥方法如表9所示。用藥完畢后再觀察5天。1.3臨床療效指標(biāo)評(píng)價(jià)1.3.1成活率根據(jù)存活雞數(shù)計(jì)算成活率和相對(duì)成活率。1.3.2相對(duì)增重率根據(jù)試驗(yàn)開(kāi)始及結(jié)束時(shí)每只雞的體重，計(jì)算增重及每組雞的平均增重，并以不用藥物對(duì)照組增重為100%，各組增重與之相比得到各組相對(duì)增重率。表9實(shí)驗(yàn)分組及給藥劑量__只數(shù)藥物濃度_潮量/Kg體重貫眾鳥(niǎo)梅1:1口月艮液20600mg/mL400mg貫眾烏梅3:2口月艮液20600mg/mL400mg貫眾烏梅9:1口月艮液20430mg/mL400mg鹽酸強(qiáng)力霉素對(duì)照組2050mg/g0.2g/Kg飲水_不用藥對(duì)照組_20_-_-_2.1臨床病癥的診斷用衣原體熒光抗體(ImageChlamydiaOxoidLtd,UK)染色從感染氣囊中觀察到大量的鸚鵡熱衣原體包含體存在，從感染雞群肝臟中分離到G-細(xì)菌，生化試驗(yàn)鑒定為致病性大腸桿菌。2.2療效評(píng)價(jià)臨床癥狀用藥結(jié)束后觀察雞群，發(fā)現(xiàn)貫眾烏梅32口服液組、鹽酸強(qiáng)力霉素對(duì)照組采食量明顯上升，且“青蛙叫”的呼吸困難聲消失，死亡減少。剖檢評(píng)價(jià)將存活雞只進(jìn)行剖檢，發(fā)現(xiàn)貫眾烏梅32口服液組心包炎、氣囊炎、肝周炎等癥狀減輕，內(nèi)臟病變較輕。成活率、增重率的評(píng)價(jià)復(fù)方貫眾烏梅11口服液、復(fù)方貫眾烏梅32口服液、復(fù)方貫眾烏梅91口服液以及5%鹽酸強(qiáng)力霉素相對(duì)增重率分別為135.4%，213.7%，175.7%和230.8%。相對(duì)成活率方面分別為13.3%,26.6%,6.7%和20.0%。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，復(fù)方貫眾烏梅32口服液無(wú)論是在增重率還是在死亡率，與鹽酸強(qiáng)力霉素相比差異不顯著。但與貫眾烏梅11口服液、貫眾烏梅91口服液二組相比，差異顯著(P<0.05)。以上臨床應(yīng)用結(jié)果顯示貫眾烏梅32口服液治療臨床家禽衣原體大腸桿菌混合感染具有一定的療效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表10。表10臨床試驗(yàn)結(jié)果組別實(shí)驗(yàn)前均重實(shí)驗(yàn)后均重(g)相對(duì)增重率成活率(％)相對(duì)成活率00_UJ_OO_貫眾烏梅1:1口服液723.51033.5135.485.013.3貫眾烏梅3:2口服液721.31210.5213.795.026.6貫眾烏梅9:1口服液704.31106.4175.780.06.7鹽酸強(qiáng)力霉素對(duì)照組714.11242.6230.890.O20.O不用藥對(duì)照組_718.4_947.3_1^0_75_0_100實(shí)驗(yàn)例5貫眾烏梅提取物對(duì)臨床高峰期產(chǎn)蛋感染禽流感H9亞型的療效觀察1實(shí)驗(yàn)分組情況1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物選擇180日齡海藍(lán)褐蛋種雞21000只，試驗(yàn)組每組11000只，黃芪多糖對(duì)照組5000只和不用藥對(duì)照組5000只。1.2試驗(yàn)分組分為3個(gè)組，含2個(gè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。受試藥物為實(shí)施例5所述貫眾烏梅口服液，對(duì)照組含53%黃芪多糖(河北瑞高動(dòng)物藥業(yè)有限公司，批號(hào)200901116)，使用劑量見(jiàn)表11。表11不同分組和用藥方法處理組數(shù)量劑量/Kg體重給藥途徑貫眾烏梅口服液組11000200mg黃芪多糖組5000125mg飲水不用藥對(duì)照組_5000_不用藥_1.3禽流感H9亞型感染診斷發(fā)病后分別從病理學(xué)剖檢、病變組織PCR檢測(cè)。病理學(xué)剖檢發(fā)現(xiàn)氣管、喉頭粘膜充血、出血，有黃色的干酪樣滲出物；單側(cè)性肺臟出血，胸部氣囊有干酪樣滲出物，個(gè)別出現(xiàn)心包炎。根據(jù)Genbank登錄的H9亞型禽流感引物，設(shè)計(jì)引物；取病變器官、肺臟組織提取RNA，進(jìn)行特異性擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)H9亞型特異性條帶。依據(jù)臨床病變和PCR結(jié)果診斷為H9亞型禽流感感染。1.4考察指標(biāo)考察期為15天。試驗(yàn)蛋雞自由采食和飲水，飼料為粉料，按照養(yǎng)殖場(chǎng)常規(guī)管理進(jìn)行。每天觀察雞群采食情況、糞便形狀、健康狀況，觀察指標(biāo)如下蛋畸形率、產(chǎn)蛋率、死淘率、初期產(chǎn)蛋和期末產(chǎn)蛋水平，計(jì)算產(chǎn)蛋增加水平。2試驗(yàn)結(jié)果和分析從表12可知，貫眾烏梅口服液給藥后連續(xù)觀察10天，雞蛋的合格率從78.1%提高到89%，提高了10.9%，而黃芪多糖組提高了3.8%。在增加產(chǎn)蛋性能方面，貫眾烏梅口服液和黃芪多糖分別提高了15%和10%，不用藥對(duì)照組減少了7%。由表13可知，貫眾烏梅口服液組、黃芪多糖組和對(duì)照組期末死淘率分別為0.02%，0.和0.9%。相對(duì)死淘汰減少率分別為370%、275%和100%。表12給藥后產(chǎn)蛋水平變化<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注產(chǎn)蛋相對(duì)增加率=期末產(chǎn)蛋率-初始產(chǎn)蛋率表13不給藥后死亡、淘汰變化處理組初始死淘率(%)期末死淘率(%)相對(duì)7=，少率~貫眾烏梅口服液組10023700黃芪多糖組1.20.1275.0不用藥對(duì)照組__03_100-0注相對(duì)死淘減少率=實(shí)驗(yàn)組相對(duì)死淘率/不用藥組相對(duì)死淘率3結(jié)論從貫眾烏梅口服液組10天治療觀察期內(nèi)可以看出，貫眾烏梅口服液組以200mg/Kg進(jìn)行口服，連續(xù)5天，可以有效治療禽流感H9亞型流感散發(fā)所造成的產(chǎn)蛋性能下降、死淘率增加的病癥，有望代替黃芪多糖防治禽流感。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。權(quán)利要求一種貫眾烏梅中藥組合物，其特征在于，由下述重量份的原料藥制成貫眾20～70、烏梅20～40和肉桂酸10～40。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，由下述重量份的原料藥制成貫眾3060、烏梅2040和肉桂酸2030。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物，其特征在于，貫眾和烏梅的重量比為32。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的中藥組合物，其特征在于，其還包括無(wú)水乙醇以及吐溫-20或吐溫-80。5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的中藥組合物，其特征在于，其還包括淀粉、糊精、乳糖、甜菊苷、蔗糖、甘草甜素、果葡糖漿、三氯蔗糖、木糖醇、山梨糖醇、葡萄糖、預(yù)膠化淀粉和/或羧甲基淀粉鈉。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的中藥組合物，其為片劑、顆粒劑、口服液、注射劑或凍干粉針劑。7.—種權(quán)利要求6所述的貫眾烏梅中藥組合物口服液的制備方法，其特征在于，其包括方法I貫眾烏梅提取物口服液的單獨(dú)制備方法，其包括步驟1)貫眾提取物的制備a、稱(chēng)取適量貫眾，粉碎，用48倍體積6080%乙醇浸泡8小時(shí)后，將貫眾以及乙醇浸提液煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；b、向倒出浸提液的貫眾中加入4倍體積60%80%乙醇，煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；c、重復(fù)步驟b2次；d、合并上述步驟得到的上清液，減壓濃縮，得到浸膏備用；2)烏梅提取物的制備梅以及乙醇浸提液煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；b、向倒出浸提液的烏梅中加入4倍體積60%80%乙醇，煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；c、重復(fù)步驟b2次；d、合并上述步驟得到的上清液，減壓濃縮，得到浸膏備用；3)貫眾烏梅復(fù)方口服液的制備分別用75%酒精溶解貫眾、烏梅提取物浸膏，加入吐溫-20，然后加入20襯％肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液，搖勻即得；其中，75%酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20的用量為終體積的40%，貫眾、烏梅提取物與肉桂酸按照重量比645配伍。8.—種權(quán)利要求6所述的貫眾烏梅中藥組合物口服液的制備方法，其特征在于，其包括步驟1)貫眾烏梅提取物的制備a、按照貫眾和烏梅的重量比為32分別稱(chēng)取原料藥，用48倍體積6080%乙醇浸泡8小時(shí)后，將貫眾、烏梅以及乙醇浸提液煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；b、向倒出浸提液的貫眾、烏梅中加入4倍體積60%80%乙醇，煮沸，保持沸騰狀態(tài)持續(xù)1小時(shí)，將浸提液倒出并抽濾得上清液備用；c、重復(fù)步驟b2次；d、合并上述步驟得到的上清液，減壓濃縮，得到浸膏備用；2)貫眾烏梅口服液的制備用75%酒精溶解貫眾、烏梅混合提取物浸膏，加入20wt%肉桂酸的無(wú)水乙醇溶液，然后加入吐溫-20，搖勻即得；其中，75%酒精的用量為終體積的30%，吐溫-20的用量為終體積的40%，貫眾、烏梅混合提取物與肉桂酸按照重量比21配伍。9.權(quán)利要求1-6所述的貫眾烏梅中藥組合物在制備用于預(yù)防和治療家禽細(xì)菌性疾病和病毒性疾病的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，按照每天200400mg/Kg體重的方式對(duì)家禽喂藥，連續(xù)4-5天飲水或拌料給藥。10.根據(jù)權(quán)利要求9的應(yīng)用，其特征在于，所述的家禽細(xì)菌性疾病包括大腸桿菌、衣原體所致疾病，所述的家禽病毒性疾病包括法氏囊病毒、禽流感病毒所致疾病。全文摘要本發(fā)明提供了一種貫眾烏梅中藥組合物，其是由貫眾的醇提物和烏梅的醇提物以及肉桂酸按照一定比例組成的混合物或者是烏梅和貫眾按照一定比例混合后進(jìn)行醇提的提取物，其還包括常規(guī)的藥用輔料及賦形劑。本發(fā)明還提供了上述貫眾烏梅中藥組合物的制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明的貫眾烏梅中藥組合物對(duì)家禽細(xì)菌性疾病和病毒性疾病，特別針對(duì)大腸桿菌、衣原體所致家禽疾病以及法氏囊病毒、禽流感所致家禽疾病具有良好的預(yù)防和治療效果；另外，本發(fā)明貫眾烏梅中藥組合物，其原料易得且成本較低，制備工藝方便易行。文檔編號(hào)A61K9/00GK101804112SQ20101013355公開(kāi)日2010年8月18日申請(qǐng)日期2010年3月25日優(yōu)先權(quán)日2010年3月25日發(fā)明者何誠(chéng),張?jiān)Ｏ?李國(guó)清,李國(guó)祥,李樹(shù)梅,歐長(zhǎng)波,陳寶玉申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);廣東省天寶生物制藥有限公司