專利名稱：鬼臼毒素醇質體及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬制藥領域，涉及一種鬼白毒素醇質體；本發(fā)明還涉及該醇質體的制備方 法。
背景技術：
鬼臼毒素(Podophyllotoxin，PPT)是從小檗科植物桃耳七、八角蓮或六角蓮的根 及根莖中提取分離得到的木脂素類化合物，它是世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦使用治療尖銳濕 疣(CA)的一線藥物，它的主要作用機理是通過其細胞毒作用使受人類乳頭瘤(HPV)感染的 細胞死亡，常用的是0.5%的鬼臼毒素酊劑。CA占我國性傳播疾病的第二位，其病因是HPV感染人體后寄居于基底細胞等角質 層形成細胞的細胞核內，其DNA可整合到宿主細胞的DNA中并進行表達，因而出現表皮的過 度增生甚至癌變。目前CA的治療主要由冷凍、激光、微波、免疫療法及外用藥物等，臨床主 要使用的就是鬼臼毒素酊劑。鬼臼毒素酊劑雖然能去除肉眼可見的病變，但過量大面積的 使用會產生嚴重的毒副作用，而脂質體雖然能夠減少不良反應，但是其作用也僅限于皮膚 表層，所以難以消除皮膚深部的HPV潛伏感染而導致其復發(fā)。2000年，以色列Touitou等的研究小組對另一種新型脂質體——醇質體 (Ethosomes)進行了報道，其是在常規(guī)脂質體中添加高濃度的醇制備的含醇脂質體。醇質體 不僅能夠滲入皮膚深部，還能夠與細胞膜脂質融合，滲入細胞內部，因此將鬼白毒素制成醇 質體可以達到減少用藥量，增加療效減少復發(fā)及毒副作用的目的，具有一定的臨床意義。

發(fā)明內容
針對現有臨床常用的鬼白毒素酊劑在治療尖銳濕疣(CA)存在的、會產生嚴重毒 副作用的不足，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種鬼白毒素醇質體，以提高鬼白毒素 在皮膚內的滯留量，減少全身毒副作用及局部刺激性；本發(fā)明所要解決的技術問題還包括 提出鬼白毒素醇質體的制備方法。為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供的載藥醇質體的活性組分為鬼白毒素，鬼臼 毒素包封于醇質體中，所用載藥脂質材料為磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺或者二棕櫚酰磷脂 酰膽堿，鬼臼毒素醇質體粒徑范圍為50 300nm。優(yōu)選地，本發(fā)明上述鬼臼毒素醇質體的含醇量為20 50%，脂質含量為2 5%， 載藥量為0. 1 1.0%，包封率為30 90%。本發(fā)明上述鬼白毒素醇質體可通過下述兩種方法制備一、注入法將鬼白毒素與載藥脂質材料置于密閉容器中，在磁力攪拌狀態(tài)下加入 乙醇使其溶解，恒速緩慢滴入2 5倍量的水繼續(xù)恒速攪拌0. 5 lh，于冰水浴中探頭超聲 后過孔徑為0. 22 0. 5 μ m的微孔濾膜，即得鬼臼毒素醇質體。二、薄膜超聲法將鬼臼毒素與磷脂類溶于甲醇與氯仿的體積比為(3-5) 1的混 合溶液中，溶解后加入茄型瓶中，在25 50°C下使用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，
3使脂質在器壁上形成均勻薄膜，加入一定體積的乙醇水溶液，旋轉水合，與冰水浴中探頭超 聲0. 5 Ih后過孔徑為0. 22 0. 5 μ m的微孔濾膜，即得鬼臼毒素醇質體。本發(fā)明鬼白毒素醇質體性質穩(wěn)定，可以按照常規(guī)方法將其制成貼劑、凝膠劑等多 種外用劑型。目前臨床常用的0. 5%鬼臼毒素酊劑含有60 80%的乙醇，高濃度的乙醇對皮膚 有強烈的刺激作用，且用藥面積過大會帶來全身毒性，且臨床實驗證明該制劑由于不能作 用到皮膚深部而極其容易復發(fā)。隨后的實施例將證明，本發(fā)明含鬼白毒素醇質體的局部刺激性較小，與酊劑及脂 質體相比增加了皮膚內的滯留量而減少了透過量，且醇質體與細胞膜具有良好的生物相容 性，可以滲入細胞內部，這對降低疾病的復發(fā)具有重要的意義。


圖1是鬼臼毒素醇質體的脂質囊泡的電鏡掃描圖。圖2是鬼臼毒素醇質體的粒徑分布圖。圖3是鬼白毒素醇質體與其他給藥系統(tǒng)24h大鼠皮膚體外累積滲透量。
具體實施例方式下面結合附圖和具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。這些實施例應理解為僅用于說 明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內容之后，本領域技術 人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發(fā)明權利要求所限 定的范圍。本發(fā)明以下實施例對制備得到的鬼白毒素醇質體的粒徑、包封率和載藥量等指標 采用以下措施進行如下評價和表征1、鬼臼毒素醇質體的透射電鏡(TEM)照片樣品加適量乙醇水溶液稀釋，滴加在覆蓋碳膜的銅網上，用2.0%磷鎢酸負染，于 透射電鏡下觀察，放大10萬倍拍攝透射電鏡照片，如圖1所示。2、測定鬼臼毒素醇質體的粒徑將鬼白毒素醇質體用激光粒度分析儀(Mcomp 380/ZLS)測定鬼白毒素醇質體的 粒徑，如圖2所示。3、測定鬼白毒素醇質體的包封率采用微柱離心法分離鬼白毒素醇質體和游離藥物，HPLC法測定游離藥物濃度，根 據公式計算其包封率。4、鬼白毒素醇質體體外經皮滲透特性考察采用Tp-5智能透皮擴散儀，離體SD大鼠腹部皮膚為滲透屏障，以累計滲透量為指 標，用HPLC測定鬼白毒素Mh的累積滲透速率及皮膚滯留量，研究鬼白毒素醇質體的體外 滲透特性。實施例1稱取35mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )置于密閉容器 中，加入3mL無水乙醇置于磁力攪拌器上，在37°C，700rpm密閉條件下邊變攪拌邊緩慢注入
42倍量的水，注完后繼續(xù)攪拌5min，然后在冰水浴條件下探頭超聲0. 5h,最后過0. 45 μ m微 孔濾膜，即得。經檢測，本實施例制得的鬼臼毒素醇質體的平均粒徑為83nm，包封率為51 %。實施例2稱取35mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于5mL甲 醇氯仿(體積比為3 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水浴 溫度下使用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質在器壁上形成均勻薄 膜，加入IOmL的30%乙醇水溶液，旋轉水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲5min，過 0. 22 μ m微孔濾膜，即得。經檢測，本實施例制得的鬼臼毒素醇質體的平均粒徑為80nm，包封率為49. 5%。實施例3稱取30mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于3mL甲 醇氯仿(體積比為4 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水浴 溫度下使用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質在器壁上形成均勻薄 膜，加入SmL的35%乙醇水溶液，旋轉水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲2min，過 0. 50 μ m微孔濾膜，即得。經檢測，本實施例制得的鬼臼毒素醇質體的平均粒徑為157nm，包封率為80. 3%。實施例4稱取35mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于IOmL甲 醇氯仿(體積比為5 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水浴 溫度下使用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質在器壁上形成均勻薄 膜，加入15mL的25%乙醇水溶液，旋轉水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲lOmin， 過0. 30 μ m微孔濾膜，即得。經檢測，本實施例制得的鬼臼毒素醇質體的平均粒徑為497nm，包封率為30. 0%。實施例5稱取30mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于5mL甲 醇氯仿(體積比為3.5 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水 浴溫度下使用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質在器壁上形成均勻 薄膜，加入IOmL的30%乙醇水溶液，旋轉水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲5min， 過0. 40 μ m微孔濾膜，即得。經檢測，本實施例制得的鬼臼毒素醇質體的平均粒徑為lMnm，包封率為42. 3%。實施例5稱取25mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于3mL甲 醇氯仿(體積比為4. 5 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水 浴溫度下使用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質在器壁上形成均勻 薄膜，加入8mL的30%乙醇水溶液，旋轉水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲2min， 過0. 35 μ m微孔濾膜，即得。經檢測，本實施例制得的鬼臼毒素醇質體的平均粒徑為57nm，包封率為89. 5%。實施例6
以SD大鼠腹部皮膚為媒介，Franza單室擴散池為體外模型，用HPLC法測定透過 皮膚及皮膚內的鬼白毒素含量，求算穩(wěn)態(tài)透皮速率，皮膚滯留量，考察不同給藥形式(鬼臼 毒素酊劑、不同劑量的鬼白毒素脂質體、鬼白毒素游離藥物與空白醇質體的物理混合物及 鬼臼毒素乙醇水混懸液)對鬼白毒素經皮滲透的影響。研究結果如表1和圖3顯示，相較 于其它給藥系統(tǒng)鬼白毒素醇質體具有較大的皮膚滯留量及較小的透皮速率。表1.鬼白毒素醇質體與其他給藥系統(tǒng)24h大鼠皮膚皮膚滯留量
權利要求
1.一種鬼白毒素醇質體，其特征在于，鬼白毒素包封于醇質體中，載藥脂質材料為磷脂 酰膽堿、磷脂酰乙醇胺或者二棕櫚酰磷脂酰膽堿，粒徑為50 300nm。
2.按權利要求1所述的鬼白毒素醇質體，其特征在于，含醇量為20 50%，脂質含量 為2 5%，載藥量為0. 1 1. 0%，包封率為30 90%。
3.權利要求1或2所述的鬼白毒素醇質體的制備方法，其特征是，將鬼白毒素與載藥脂 質材料置于密閉容器中，在磁力攪拌狀態(tài)下加入乙醇使其溶解，恒速緩慢滴入2 5倍量的 水繼續(xù)恒速攪拌0. 5 lh，于冰水浴中探頭超聲后過孔徑為0. 22 0. 5 μ m的微孔濾膜，即 得鬼白毒素醇質體。
4.權利要求1或2所述的鬼白毒素醇質體的制備方法，其特征是，將鬼白毒素與載藥脂 質材料溶于甲醇與氯仿體積比為(3-5) 1的混合溶液中，溶解后加入茄型瓶中，在25 50°C下使用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，使脂質在器壁上形成均勻薄膜，加入處方 量的乙醇水溶液，旋轉水合，于冰水浴中探頭超聲0. 5 Ih后過孔徑為0. 22 0. 5 μ m的 微孔濾膜，即得鬼白毒素醇質體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鬼臼毒素醇質體，鬼臼毒素包封于醇質體中，載藥脂質材料為磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺或者二棕櫚酰磷脂酰膽堿，粒徑為50～300nm。本發(fā)明鬼臼毒素醇質體可制成貼片、凝膠等外用劑型，能減少用藥量，達到增加療效減少復發(fā)及毒副作用的目的。本發(fā)明還公開了上述鬼臼毒素醇質體的兩種制備方法。
文檔編號A61P31/20GK102144972SQ20101010801
公開日2011年8月10日 申請日期2010年2月9日 優(yōu)先權日2010年2月9日
發(fā)明者于燕燕, 馮年平, 施曉琴, 翁海挺, 趙繼會 申請人:上海中醫(yī)藥大學