專利名稱：丁苯酞及其衍生物在制備治療帕金森病的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及3-正丁基苯酞(簡稱丁苯酞)及其衍生物的新用途，更具體而言是涉 及該化合物在制備治療帕金森病的藥物中的應用。
背景技術：
帕金森病(Parkinson disease,PD)是一種常見的慢性進展性神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病， 其特征性的病理改變?yōu)楹谫|(zhì)致密部多巴胺(Dopamine，DA)能神經(jīng)元變性缺失。目前PD病 因不明，有關PD發(fā)病機制的學說主要包括氧化應激、線粒體功能障礙、鈣超載、興奮性氨基 酸毒性作用、細胞凋亡等。60歲以上人群患病率超過1%，并隨年齡增長而增高。以左旋多巴為代表的替代治療是目前PD的金標準，不但無法阻止疾病的自然進 程，而且長期使用后藥效漸減，并伴有嚴重的副作用。因此，延緩PD變性過程的神經(jīng)保護治 療成為目前研究和探索的重點，目前較為公認的潛在神經(jīng)保護劑包括司來吉蘭、雷沙吉蘭、 利魯唑(Riluzole)、輔酶QlO (CoQlO)和神經(jīng)營養(yǎng)因子等，但均未得到臨床研究的證實。迄 今為止，所有的PD治療均為對癥治療，無法阻止疾病的進展。尋找一種能減少DA能神經(jīng)元 丟失，阻斷或延緩疾病進程的藥物，是目前亟需解決的難題。概括介紹一下丁苯酞及其衍生物的研究進展。丁苯酞又名芹菜甲素，是從芹菜籽 中分離出來的一種有效成分，已作為一種多靶點抗腦缺血藥，它還具有改善線粒體功能，抗 氧自由基，降低細胞內(nèi)鈣水平以及抑制細胞凋亡等作用。中國專利CN03137457. 3公開了 左旋正丁基苯酞的預防和治療癡呆的用途；中國專利CN200480029409. 0公開了左旋丁基 苯酞在制備預防和治療腦梗塞的藥物中的應用；氨丁苯酞對血小板聚集功能的影響(馬軼 濤，中國藥理學通報200(Feb ；16(1) 72 4)。但是現(xiàn)有技術沒有教導丁苯酞及其衍生物 可以用于制備治療帕金森病的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一個目的是提供了丁苯酞及其衍生物在制備治療帕金森病的藥物中 的應用。其中丁苯酞及其衍生物的劑量占制備出的藥物組合物的重量百分含量為 0. 001% -30%。優(yōu)選 0.01-25 %，更優(yōu)選 0. 1-15%。本發(fā)明的另一個目的是提供了一種用于治療帕金森病的藥物組合物，其特征在于 含有治療有效量的丁苯酞及其衍生物以及藥學可接受的載體。其中丁苯酞及其衍生物的劑 量占藥物組合物的重量百分含量為0.001% -30%。優(yōu)選0.01-25%，更優(yōu)選0. 1-15%。本發(fā)明中所指的丁苯酞及其衍生物是指dl-3-n-丁基苯酞、l-3-n-丁基苯酞、氨 丁苯酞(GZ-02)、3-(2’ -氧代丁基)異苯并呋喃-1(3H)_酮、丙苯酞、戊苯酞、丁烯苯酞、乙 苯酞、3-(3’ -羥基)丁基苯酞等。本發(fā)明所述的含有治療有效量的丁苯酞及其衍生物的藥物組合物可以口服方法 或非腸道方法給藥，口服方法給藥可以是片劑、膠囊劑；非腸道給藥可以是注射劑等。這些 制劑均是采用本領域技術人員所熟知的方法進行制備，為了制造片劑、膠囊劑所用的輔料是常規(guī)的淀粉、環(huán)糊精等，液體制劑包括植物油、PEG等。本發(fā)明公開的用于治療帕金森病的藥物組合物具有以下較好的技術效果如能干 預魚藤酮PD大鼠模型的發(fā)病機制并改善其病理和行為學變化，具有神經(jīng)保護作用。本發(fā)明 為臨床上提供了一種療效確切的治療藥物，能阻止或延緩帕金森病的進程，同時也是丁苯 酞繼腦缺血適應癥外的又一新的適應癥。
具體實施例方式以下用具體實施例來解釋本發(fā)明，所述實施例不應被看做對本發(fā)明的限制，具體 保護范圍應以權利要求書為準。實施例1 丁苯酞在魚藤酮PD大鼠模型中進行觀察給PD大鼠腹腔注射丁苯酞，觀察丁苯酞對PD 大鼠行為學、中腦氧化應激水平和黑質(zhì)DA能神經(jīng)元的影響。一、實驗材料1.藥物丁苯酞，石藥集團恩必普藥業(yè)有限公司提供。2.試劑魚藤酮、阿撲嗎啡(APO)為Sigma公司產(chǎn)品；二甲基亞砜(DMSO)、酪氨酸 羥化酶(TH)單抗、SABC試劑盒為武漢博士德公司產(chǎn)品；GSH試劑盒、MDA試劑盒和SOD試劑 盒為南京建成公司產(chǎn)品。3.儀器大鼠腦立體定位儀，深圳瑞沃德公司；微量進樣器(5 μ 1)，上海第三分析 儀器廠；721分光光度計，上海精密科學儀器有限公司；光學顯微鏡，NikonYSlOO。4.實驗動物雌性SD大鼠體重200 MOg共50只，由華中科技大學同濟醫(yī)學院 實驗動物中心提供。二、實驗方法1.偏側(cè)PD大鼠模型的制備動物經(jīng)10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉，剪開 顱部皮膚，暴露顱骨，頭顱水平位固定在立體定位儀上，參照包新民、舒斯云《大鼠腦立體定 位圖譜》在右側(cè)黑質(zhì)致密部(SNpc)和右側(cè)中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)各注入3yg魚藤酮(溶 于0. 5 μ 1 DMS0)。SNpc坐標前囟后5. Omm,中線右側(cè)1. 8mm,顱骨平面下7. 8mm。VTA坐標 前囟后5. Omm,中線右側(cè)0. mm，顱骨平面下7. 8mm。于魚藤酮注射后3周，按0. 5mg/kg腹腔 注射APO誘發(fā)旋轉(zhuǎn)，計數(shù)在30min內(nèi)向左側(cè)旋轉(zhuǎn)的旋次。總旋次在210次以上的為合格PD 模型，共32只。2.動物分組及給藥將合格的PD模型隨機分為4組，每組8只其中1組為模型對 照組，另外3組為丁苯酞治療組。從第4周開始，分別予生理鹽水2. 0ml/kg, 丁苯酞20mg/ kg、40mg/kg、80mg/kg腹腔注射，每日一次連續(xù)14天。3.旋轉(zhuǎn)行為觀察腹腔注射給藥結(jié)束后，每組大鼠分別按0. 5mg/kg腹腔注射APO 誘發(fā)旋轉(zhuǎn)，觀察其行為學變化，記錄30min旋轉(zhuǎn)次數(shù)并與給藥前進行比較。4.中腦氧化應激水平測定旋轉(zhuǎn)行為觀察結(jié)束后，每組各取4只大鼠迅速斷頭取 腦，冰盤上分離出兩側(cè)中腦組織，吸水紙吸干稱重后置于勻漿器內(nèi)，按10%比例加入4°C生 理鹽水，冰盤上充分勻漿，低溫2000r/min離心6分鐘，留上清棄沉淀，即得10%組織勻漿 液。核酸蛋白分析儀測定組織蛋白含量。參照試劑盒說明書測定GSH、MDA含量及SOD活 力。
5. TH免疫組化旋轉(zhuǎn)行為觀察結(jié)束后，每組各取4只大鼠，麻醉后4%多聚甲醛灌 注固定，石蠟包埋切片。用TH單抗行黑質(zhì)免疫組織化學染色，觀察TH陽性細胞數(shù)量。每只 大鼠取注射點附近中腦黑質(zhì)斷面5張切片計數(shù)黑質(zhì)TH陽性細胞數(shù)。6.數(shù)據(jù)統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用均值士標準差治療前后及損毀側(cè)與損
毀對側(cè)比較用t檢驗；組間差異用單因素方差分析進行檢驗，兩兩比較用q檢驗。三、實驗結(jié)果(一 )旋轉(zhuǎn)行為觀察1.對照組和各治療組治療前旋轉(zhuǎn)行為無明顯差異(P > 0. 05)。2.與治療前相比，治療后對照組旋轉(zhuǎn)次數(shù)增加，20mg、40mg組旋轉(zhuǎn)次數(shù)減少，但 均無統(tǒng)計學意義(P >0.05)。80mg組治療后較治療前旋轉(zhuǎn)次數(shù)減少，且有顯著差異(P < 0. 05)。與對照組治療后相比，80mg組治療后旋轉(zhuǎn)次數(shù)亦明顯減少(P < 0. 01，表1)。表1各組大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)比較(&S，n=8)
權利要求
1.丁苯酞及其衍生物作為制備治療帕金森病的藥物中的應用。
2.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于丁苯酞及其衍生物的劑量占制備出的藥物 組合物的重量百分含量為0. 001% -30%。
3.根據(jù)權利要求2所述的含量，其特征在于丁苯酞及其衍生物的劑量占制備出的藥物 組合物的重量百分含量優(yōu)選0. 01-25%。
4.根據(jù)權利要求3所述的含量，其特征在于丁苯酞及其衍生物的劑量占制備出的藥物 組合物的重量百分含量更優(yōu)選0. 1-15%。
5.一種用于治療帕金森病的藥物組合物，其特征在于含有治療有效量的丁苯酞及其衍 生物以及藥學可接受的載體。
6.根據(jù)權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于丁苯酞及其衍生物的劑量占藥物組 合物的重量百分含量為0. 001% -30%。
7.根據(jù)權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于丁苯酞及其衍生物的劑量占藥物組 合物的重量百分含量優(yōu)選0.01-25%。
8.根據(jù)權利要求7所述的藥物組合物，其特征在于丁苯酞及其衍生物的劑量占藥物組 合物的重量百分含量更優(yōu)選0. 1-15%。
全文摘要
本發(fā)明涉及3-正丁基苯酞(簡稱丁苯酞)及其衍生物的新用途，更具體而言是涉及該化合物在制備治療帕金森病的藥物中的應用。采用了魚藤酮立體定向注射制作偏側(cè)帕金森病大鼠模型進行試驗，結(jié)果表明該丁苯酞及其衍生物能有效地改善帕金森所引起的癥狀，具有神經(jīng)保護作用。
文檔編號A61P25/16GK102125548SQ20101003336
公開日2011年7月20日 申請日期2010年1月13日 優(yōu)先權日2010年1月13日
發(fā)明者曹菊林, 牛鋒, 王濤, 郭海波, 黃憗, 黃金莎 申請人:石藥集團恩必普藥業(yè)有限公司